基于年橘為載體的柑橘木虱優(yōu)勢(shì)寄生蜂亮腹釉小蜂規(guī)模化生產(chǎn)技術(shù)

黃承志，陳玲玲，修寶林，孫笠維，高 晶，王朝紅，葉鳳嫻，MUBASHER Hussain，申寶營(yíng)，邱棟梁，毛潤(rùn)乾*

（1.福建農(nóng)林大學(xué)園藝學(xué)院，福州 350002；2.廣東省科學(xué)院動(dòng)物研究所/廣東省動(dòng)物保護(hù)與資源利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/廣東省野生動(dòng)物保護(hù)與利用公共實(shí)驗(yàn)室/廣東省礦物油農(nóng)藥工程技術(shù)研究中心，廣州 510260）

亮腹釉小蜂Tamarixiaradiata(Waterston)是柑橘木虱Diaphorinacitri(Kuwayama)優(yōu)勢(shì)寄生蜂，寄生4～5齡的柑橘木虱若蟲(chóng)[1,2]。一頭亮腹釉小蜂通過(guò)取食和寄生的方式殺滅柑橘木虱若蟲(chóng)多達(dá)500頭[3]。1998年美國(guó)佛羅里達(dá)州引進(jìn)亮腹釉小蜂進(jìn)行釋放，到2006年，該蜂已遍及佛羅里達(dá)的所有橘園，通過(guò)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，亮腹釉小蜂在佛羅里達(dá)州春夏季寄生率相對(duì)較低，秋季最高，平均寄生率達(dá)60%以上，防治效果良好[4]。在巴西，寄生率為43.3%～88.8%[5]。在墨西哥西部的城市地區(qū)，寄生率達(dá)60.58%[6]。在美國(guó)得克薩斯州，釋放亮腹釉小蜂使柑橘木虱種群數(shù)量降低91.2%[7]。

亮腹釉小蜂已成功地引入法國(guó)留尼汪[8]、中國(guó)臺(tái)灣[9]、印度尼西亞[10]、菲律賓[11]、沙特阿拉伯[8]、哥倫比亞瓜達(dá)盧普[12]、美國(guó)加利福尼亞州[13]和佛羅里達(dá)州[14]，已經(jīng)在美國(guó)蔓延[4]。在巴西[15]、阿根廷[16]、委內(nèi)瑞拉[17]、墨西哥[18]也能發(fā)現(xiàn)亮腹釉小蜂。

產(chǎn)業(yè)化方面，亮腹釉小蜂已在巴西[5]、墨西哥[19]、美國(guó)加利福尼亞州[20]、美國(guó)得克薩斯州[7]和美國(guó)佛羅里達(dá)州[21]規(guī)?；a(chǎn)。目前，我國(guó)已有多個(gè)高校及科研單位對(duì)亮腹釉小蜂展開(kāi)了發(fā)育、形態(tài)學(xué)及寄生行為等相關(guān)研究，但都集中于基礎(chǔ)研究，對(duì)于該寄生蜂生產(chǎn)與應(yīng)用尚未見(jiàn)報(bào)道[22,23]，為填補(bǔ)我國(guó)在該領(lǐng)域中的空白，加強(qiáng)天敵生物的綠色防控，減少化學(xué)農(nóng)藥的使用，廣東省科學(xué)院動(dòng)物研究所與廣州市農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣中心合作，建立國(guó)內(nèi)首個(gè)亮腹釉小蜂規(guī)?；a(chǎn)工廠，借鑒國(guó)外生產(chǎn)經(jīng)驗(yàn)和結(jié)合我國(guó)華南地區(qū)特有的環(huán)境情況，開(kāi)發(fā)出一套適合本地寄生蜂規(guī)?；a(chǎn)的新技術(shù)[24,25]。2020年開(kāi)始寄生蜂的規(guī)?；a(chǎn)，于7月完成養(yǎng)蟲(chóng)廠地改造，截止到12月，已生產(chǎn)寄生蜂12萬(wàn)頭，并分別在廣州從化區(qū)、黃埔區(qū)、白云區(qū)柑橘果園進(jìn)行釋放，在隨后調(diào)查中發(fā)現(xiàn)各地區(qū)果園內(nèi)柑橘木虱數(shù)量明顯下降。經(jīng)過(guò)1年來(lái)的生產(chǎn)并提供用戶試用，目前該產(chǎn)品的生產(chǎn)工藝穩(wěn)定，產(chǎn)品質(zhì)量符合標(biāo)準(zhǔn)。本文對(duì)生產(chǎn)中關(guān)鍵技術(shù)研究進(jìn)行報(bào)道。

1 材料與方法

1.1 載體植物與供試蟲(chóng)源

年橘：購(gòu)自廣州，此后種植于廣州農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣中心溫室內(nèi)，保證室內(nèi)陽(yáng)光充足，定時(shí)澆水，定期施肥，根據(jù)生產(chǎn)需要對(duì)其進(jìn)行修剪，讓其有充足的嫩梢和嫩枝供試驗(yàn)使用。

柑橘木虱：初始種群采自廣東省科學(xué)院動(dòng)物研究所實(shí)驗(yàn)室，以年橘為植物載體飼養(yǎng)于網(wǎng)室內(nèi)，繁殖后代種群作為試驗(yàn)用蟲(chóng)。

亮腹釉小蜂：初始采集于廣東省科學(xué)院動(dòng)物研究所實(shí)驗(yàn)室，然后種群飼養(yǎng)于廣州農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣中心寄生蜂室。

1.2 主要設(shè)備

恒溫恒濕培養(yǎng)箱（天津賽得利斯實(shí)驗(yàn)分析儀器制造廠）、吸蟲(chóng)器（湖北廣之應(yīng)科技有限公司）、LED燈、60目養(yǎng)殖籠（110 cm×90 cm×100 cm）、收集瓶、枝剪刀。

1.3 年橘新芽修剪方法試驗(yàn)

用整體修剪、半側(cè)修剪、內(nèi)部修剪3種修剪方式，各修剪5株年橘，觀察新芽生長(zhǎng)，記錄新芽長(zhǎng)至3 cm以上時(shí)的時(shí)間和數(shù)量。培養(yǎng)條件：溫度25～30 ℃，RH 50%～70%，光周期14L:10D，相同水肥管理。

1.3.1 整體修剪 頂部，剪去所有離地面85 cm以上枝條；底部，剪去離盆里土面15 cm內(nèi)枝條；中部，剪去延伸到花盆外的枝條、花枝、果枝、弱樹(shù)和枯枝，保留筷子粗細(xì)枝條15～20個(gè)，每個(gè)枝條保留1～2個(gè)葉片。

1.3.2 半側(cè)修剪 按照整體修剪，只修剪縱向一半樹(shù)體。

1.3.3 內(nèi)部修剪 按照整體修剪，只修剪樹(shù)體內(nèi)部。

1.4 柑橘木虱接種數(shù)量試驗(yàn)

每個(gè)養(yǎng)殖籠中放入6株年橘（共有240個(gè)新芽），按照柑橘木虱:新芽數(shù)為1:1、2:1、3:1、4:1的比例，分別往每個(gè)養(yǎng)殖籠中接入待產(chǎn)卵的柑橘木虱240、480、720、960頭，待其產(chǎn)卵3 d后通過(guò)吸蟲(chóng)器移除。在移除柑橘木虱的第 15 d后通過(guò)吸蟲(chóng)器收獲新羽化的柑橘木虱，記錄每個(gè)養(yǎng)殖籠中羽化后的柑橘木虱數(shù)量。培養(yǎng)條件：溫度25～30 ℃，RH 50%～70%，光周期14L:10D，相同水肥管理。試驗(yàn)4個(gè)處理，每個(gè)處理6株年橘，重復(fù)3次。

1.5 亮腹釉小蜂接種數(shù)量試驗(yàn)

每個(gè)養(yǎng)殖籠中放入5株年橘（共有1200頭4齡末柑橘木虱若蟲(chóng)）。按照亮腹釉小蜂:柑橘木虱若蟲(chóng)為1:5、1:10、1:15和1:20的比例，分別往每個(gè)養(yǎng)殖籠接入240頭、120頭、80頭和60頭亮腹釉小蜂（雌雄比為4:1）。在接入亮腹釉小蜂第9 d后通過(guò)吸蟲(chóng)器收獲新羽化的亮腹釉小蜂，可持續(xù)收獲8～10 d，每天收獲1次。記錄每籠收獲亮腹釉小蜂雌蜂數(shù)量和每籠收獲亮腹釉小蜂總數(shù)量，并根據(jù)下列公式分別計(jì)算雌蜂比例、每籠凈收獲亮腹釉小蜂數(shù)量、每籠凈收獲亮腹釉小蜂雌蜂數(shù)量。培養(yǎng)條件：溫度 25～30 ℃，RH 50%～70%，光周期14L:10D，提供蜂蜜為食物，相同水肥管理。試驗(yàn)4個(gè)處理，每個(gè)處理5株年橘，重復(fù) 3次。雌蜂比例（%）＝每籠收獲雌蜂數(shù)量/每籠收獲亮腹釉小蜂總數(shù)量×100%；每籠凈收獲亮腹釉小蜂數(shù)量＝每籠收獲亮腹釉小蜂數(shù)量—每籠接種亮腹釉小蜂數(shù)量；每籠凈收獲亮腹釉小蜂雌蜂數(shù)量＝每籠收獲雌蜂數(shù)量—每籠接種雌蜂數(shù)量。

1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

修剪方法下年橘生產(chǎn)新芽的時(shí)間和數(shù)量、不同木虱接種比例下收獲木虱的數(shù)量、不同接入亮腹釉小蜂比例下產(chǎn)出亮腹釉小蜂的數(shù)量等數(shù)據(jù)分析采用IBM SPSS 20.0進(jìn)行單因素方差分析（One-way ANOVA），應(yīng)用Duncan氏新復(fù)極差法進(jìn)行差異顯著性檢驗(yàn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同修剪方法對(duì)年橘生產(chǎn)新芽的時(shí)間和數(shù)量的影響

新芽長(zhǎng)至3 cm所需時(shí)間，整體修剪法從修剪到大部分新芽長(zhǎng)至3 cm所需的時(shí)間最短，僅為12.6 d，顯著低于半側(cè)修剪法和內(nèi)部修剪法。在生產(chǎn)新芽長(zhǎng)至3 cm數(shù)量上，用整體修剪生產(chǎn)新芽數(shù)量多，為39.6個(gè)，顯著高于半側(cè)修剪、內(nèi)部修剪。表明在修剪后會(huì)誘導(dǎo)在該枝條上萌發(fā)出新芽，未修剪的枝條則不萌發(fā)或少萌發(fā)新芽。所以，選用整體修剪對(duì)年橘進(jìn)行修剪（表1）。

表1 不同修剪方法下年橘生產(chǎn)新芽所需的時(shí)間和數(shù)量Table 1 The time and number of sprouts produced under different pruning methods

2.2 不同柑橘木虱接種比例對(duì)收獲木虱數(shù)量的影響

在接種比例柑橘木虱:年橘新芽為2:1和3:1中，每籠收獲木虱的數(shù)量分別為1513.33頭和1583.00頭，差異不顯著（P＞0.05），但均顯著高于接種比例為1:1和4:1每籠收獲木虱的數(shù)量（P＜0.05）?？紤]到接種木虱會(huì)對(duì)年橘造成傷害，在每籠收獲木虱數(shù)量沒(méi)有顯著差異的情況下，選擇較小接種比率有利于年橘的生長(zhǎng)，所以選擇接種比例2:1為最佳（表2）。

表2 不同柑橘木虱接種比例下收獲柑橘木虱的數(shù)量Table 2 The number of D.citri harvested under different inoculation ratios

2.3 不同亮腹釉小蜂接種比例對(duì)收獲亮腹釉小蜂數(shù)量的影響

接種比例（亮腹釉小蜂:柑橘木虱若蟲(chóng)）為1:5時(shí)，每籠收獲亮腹釉小蜂數(shù)量最多，平均為810.67頭，但每籠收獲亮腹釉小蜂的雌蜂比、每籠凈收獲亮腹釉小蜂的雌蜂數(shù)量最少，分別為61.55%、310.67頭。按接種比例 1:10時(shí)，每籠凈收獲亮腹釉小蜂數(shù)量、每籠收獲亮腹釉小蜂的雌蜂數(shù)量、每籠凈收獲亮腹釉小蜂的雌蜂數(shù)量最多，分別為646.67頭、565.00頭和469.00頭。所以選擇接種比例1:10為最佳（表3）。

表3 不同接種比例下每籠收獲亮腹釉小蜂的情況Table 3 The number of T.radiata harvested under different inoculation ratios per cage

3 討論

近年來(lái)，柑橘黃龍病給世界范圍內(nèi)的柑橘產(chǎn)業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失[26,27]，作為柑橘黃龍病的重要傳播媒介，柑橘木虱的有效防治顯得極其重要。隨著對(duì)柑橘木虱天敵昆蟲(chóng)資源調(diào)查與利用研究的不斷深入，包括寄生性天敵和捕食性天敵在內(nèi)的多個(gè)類群資源都受到了關(guān)注，而亮腹釉小蜂因其寄生效率高、寄主專一性等特點(diǎn)[28]，成為柑橘木虱寄生性天敵研究利用的重點(diǎn)對(duì)象。目前，在巴西[5]、墨西哥[19]、美國(guó)加利福尼亞州[20]、美國(guó)得克薩斯州[7]和美國(guó)佛羅里達(dá)州[21]以九里香為植物載體建立了亮腹釉小蜂的規(guī)?；a(chǎn)體系。在我國(guó)已有多個(gè)高校及科研單位對(duì)亮腹釉小蜂展開(kāi)了基礎(chǔ)研究，但未建立亮腹釉小蜂的規(guī)?；a(chǎn)體系[26,27]。

在巴西，按照柑橘木虱:九里香新芽數(shù)為（2.5～3.3）:1的比例接種待產(chǎn)卵雌性柑橘木虱，待柑橘木虱若蟲(chóng)生長(zhǎng)至4～5齡時(shí)，按照柑橘木虱若蟲(chóng):亮腹釉小蜂為10:1的比例接種亮腹釉小蜂[5]。在美國(guó)佛羅里達(dá)州，按照柑橘木虱:九里香新芽數(shù)為（5～20）:1的比例接種待產(chǎn)卵雌性柑橘木虱，待柑橘木虱若蟲(chóng)生長(zhǎng)至4齡時(shí)，每個(gè)養(yǎng)殖籠（含10株九里香）接入350～450頭亮腹釉小蜂[21]。在美國(guó)得克薩斯州，將3株不同齡期的九里香苗（18月、2年、4年）修剪3 d后搬至一個(gè)養(yǎng)殖籠中，分別在第1、4、7 d接入200頭、100頭、50頭柑橘木虱成蟲(chóng)。大約第12 d出現(xiàn)4～5齡柑橘木虱若蟲(chóng)，每個(gè)養(yǎng)殖籠中接種18頭（15頭雌蜂，3頭雄蜂）亮腹釉小蜂，此后分別在第14、16 d再次加入18頭亮腹釉小蜂[7]。在美國(guó)加利福尼亞州，每個(gè)養(yǎng)殖籠中放入15株九里香苗（苗齡6個(gè)月），在養(yǎng)殖籠接入300頭柑橘木虱成蟲(chóng)，5 d內(nèi)將產(chǎn)完卵的成蟲(chóng)移除，在10～11 d大部分若蟲(chóng)為3～4齡。每個(gè)籠子含有1800～2000頭柑橘木虱若蟲(chóng)，按照亮腹釉小蜂:柑橘木虱若蟲(chóng)為1:30接入亮腹釉小蜂雌蜂（60～65頭每籠）和每籠10～15頭亮腹釉小蜂雄蜂[20]。本研究按接種比例柑橘木虱:新芽數(shù)為2:1接入柑橘木虱時(shí)為最佳，每籠收獲木虱數(shù)量為1513.33頭。按接種比例亮腹釉小蜂數(shù):柑橘木虱若蟲(chóng)為1:10接入亮腹釉小蜂時(shí)為最佳，每籠凈收獲646.67頭亮腹釉小蜂且每籠凈收獲亮腹釉小蜂的雌蜂數(shù)量為469.00頭。

國(guó)外通過(guò)九里香為植物載體規(guī)?；a(chǎn)亮腹釉小蜂，但是隨著九里香重復(fù)使用次數(shù)的提高，生產(chǎn)柑橘木虱若蟲(chóng)的能力會(huì)降低[29]。本生產(chǎn)體系與國(guó)外不同的是采用年橘為植物載體生產(chǎn)亮腹釉小蜂，相比之下，年橘嫩芽數(shù)量更多，年橘在12.6 d長(zhǎng)出3 cm以上的新芽39.6個(gè)，因此，采用整體修剪法修剪年橘為最佳，生產(chǎn)能力更大，苗木恢復(fù)也較快，循環(huán)利用率高。

亮腹釉小蜂生產(chǎn)體系中一些環(huán)節(jié)仍在優(yōu)化和提高。轉(zhuǎn)移已產(chǎn)卵的柑橘木虱方面，美國(guó)佛羅里達(dá)州采用光誘和吸蟲(chóng)器的方式收集柑橘木虱[21]，而單獨(dú)采用吸蟲(chóng)器收集柑橘木虱，相對(duì)而言耗費(fèi)時(shí)間較多；另外，生產(chǎn)寄生蜂的運(yùn)輸時(shí)間過(guò)長(zhǎng)會(huì)導(dǎo)致存活率較低，在美國(guó)佛羅里達(dá)州，對(duì)已包裝的亮腹釉小蜂采用夜間運(yùn)輸、次日送達(dá)的方式保證寄生蜂的存活率[21]，或許還可考慮剪下帶有寄生蜂蛹的枝條，連蛹帶枝一起運(yùn)輸，解決運(yùn)輸中寄生蜂存活率低的問(wèn)題；田間釋放寄生蜂方面，目前采用直接釋放成蟲(chóng)的方式，沈祖樂(lè)[22]采用蜂卡與蜂盒進(jìn)行釋放的方法值得借鑒，能夠使寄生蜂在田間釋放前積累足夠的產(chǎn)品數(shù)量，并能定量、定時(shí)的對(duì)其種群數(shù)量做到精準(zhǔn)的掌控。本研究通過(guò)建立優(yōu)化規(guī)模化生產(chǎn)亮腹釉小蜂的體系，實(shí)現(xiàn)亮腹釉小蜂周年生產(chǎn)，從而進(jìn)一步推動(dòng)柑橘木虱生物防治的研究與應(yīng)用。