• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    基于UPLC指紋圖譜和黃酮醇苷含量的不同來(lái)源銀杏葉的質(zhì)量比較

    2022-07-07 08:20:02張巧艷林榴芬尤金玲蒙雄裕張泉龍秦路平
    中草藥 2022年13期
    關(guān)鍵詞:黃酮醇居群銀杏葉

    黃 申,朱 波,張巧艷,林榴芬,尤金玲,蒙雄裕,張泉龍,秦路平

    基于UPLC指紋圖譜和黃酮醇苷含量的不同來(lái)源銀杏葉的質(zhì)量比較

    黃 申,朱 波,張巧艷,林榴芬,尤金玲,蒙雄裕,張泉龍,秦路平*

    浙江中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院,浙江 杭州 310053

    比較不同產(chǎn)地、性別、樹(shù)齡銀杏葉在同一采收期的質(zhì)量,為其資源評(píng)價(jià)提供依據(jù)。收集5個(gè)產(chǎn)地共36批的銀杏單株葉樣品,采用超高效液相色譜法測(cè)定蘆丁、槲皮素、異鼠李素和山柰素含量。用國(guó)家藥典委員會(huì)中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)軟件處理分析,建立銀杏葉藥材UPLC指紋圖譜。結(jié)合主成分分析及偏最小二乘判別分析探討不同性別銀杏葉的質(zhì)量差異。各組樣品相似度均大于0.85,雌株之間相似度低于雄株;產(chǎn)地、性別和樹(shù)齡對(duì)銀杏葉的化學(xué)成分組成和比例有一定的影響,成熟植株指紋圖譜相似度變化幅度大于苗期植株;HM居群與其它居群樣品的物候期不同。不同產(chǎn)地雌雄株銀杏葉的性狀特征存在差異。LT居群銀杏葉質(zhì)量較佳且更穩(wěn)定;苗期植株穩(wěn)定性高于成熟植株;不同性別銀杏葉質(zhì)量差異標(biāo)志物有所差異。為控制銀杏葉內(nèi)在質(zhì)量建立了UPLC指紋圖譜快速檢測(cè)方法,并進(jìn)行指紋圖譜相似度評(píng)價(jià),結(jié)合主成分分析及偏最小二乘判別分析方法用于分析不同性別銀杏葉的質(zhì)量,為銀杏葉的質(zhì)量比較和資源評(píng)價(jià)提供了科學(xué)依據(jù)。

    銀杏葉;UPLC指紋圖譜;黃酮醇苷;質(zhì)量差異;蘆??;槲皮素;異鼠李素;山柰素

    銀杏葉為銀杏科植物銀杏L.的干燥葉,具的化濁降脂、活血化瘀、斂肺平喘、通絡(luò)止痛等功效,主治中風(fēng)偏癱、胸痹心痛、瘀血阻絡(luò)、肺虛咳喘、高脂血癥[1]?,F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明,銀杏葉提取物具有抗腦缺血、抗炎等作用,能夠改善心腦血管循環(huán)、保護(hù)肝臟、舒張動(dòng)脈、抗炎、抗過(guò)敏[2-3]。銀杏葉主要活性成分包括黃酮類、萜類內(nèi)酯等。其中銀杏黃酮具有擴(kuò)張血管、抑制血小板活化因子、抗氧化、調(diào)血脂等藥理作用,可用于治療心腦血管疾病、腎病綜合征、糖尿病、血管性癡呆等,對(duì)心腦血管和神經(jīng)系統(tǒng)具有保護(hù)作用,應(yīng)用前景廣闊[4-7]。銀杏葉中黃酮類成分復(fù)雜,各成分含有量和極性差異大,故其質(zhì)量控制具有一定困難。目前,針對(duì)黃酮類成分的分析方法,通常是針對(duì)水解后形成的苷元,間接地反映原型苷?!吨袊?guó)藥典》該藥材的含量測(cè)定項(xiàng)下對(duì)總黃酮醇的規(guī)定,亦是通過(guò)水解后苷元槲皮素、異鼠李素和山柰素的含量為指標(biāo),通過(guò)轉(zhuǎn)換系數(shù)計(jì)算得出。而實(shí)際生產(chǎn)過(guò)程中無(wú)法有效監(jiān)控指標(biāo)成分實(shí)際情況[8-9]。指紋圖譜分析可以使中藥所含多種化學(xué)成分整體可視化,在藥品質(zhì)量定性監(jiān)控中具有優(yōu)勢(shì)[10]。由于栽培方式和采收年限不同,銀杏葉中主要化學(xué)成分的結(jié)構(gòu)類型和含量存在差異,其藥理作用的特點(diǎn)和質(zhì)量一致性也存在明顯的不同[11-13]。銀杏葉藥材價(jià)格在市場(chǎng)上差異很大,如何通過(guò)性狀特征和質(zhì)量差異進(jìn)行快速準(zhǔn)確區(qū)分,對(duì)于藥材的準(zhǔn)確鑒定、合理應(yīng)用和流通銷售具有重要的意義。研究雌雄異株植物藥材質(zhì)量差異,分析不同性別樣品質(zhì)量差異標(biāo)志物,深入探索性別差異及調(diào)控機(jī)制對(duì)提升雌雄異株藥用植物的藥效價(jià)值及實(shí)現(xiàn)性別調(diào)控和轉(zhuǎn)變具有一定的意義。目前對(duì)銀杏葉中黃酮苷含量測(cè)定分析主要采用HPLC技術(shù),利用外標(biāo)法測(cè)定槲皮素、異鼠李素、山柰素含量的一種或多種,通過(guò)轉(zhuǎn)化因子,計(jì)算出黃酮苷的含量[14]。

    銀杏作為裸子植物門銀杏綱唯一現(xiàn)存物種,為多年生落葉大喬木,是世界著名的“活化石”植物,原產(chǎn)自中國(guó)[15]。天目山是地球上銀杏的幸存地,將其作為典型的自然銀杏居群(TMP),與周邊村落移栽銀杏居群(TMV)及高校園區(qū)內(nèi)銀杏居群(ZAFUD)共同作為研究對(duì)象。此外,中國(guó)有六處“銀杏之鄉(xiāng)”最具盛名,它們分別是江蘇省邳州市、廣東省南雄市、江蘇省泰興市、湖北省安陸市、山東省郯城縣、浙江省湖州市長(zhǎng)興縣宋店。其中江蘇邳州是國(guó)內(nèi)最大的銀杏資源地,邳州與郯城銀杏基地相連,土地相同、種苗互發(fā);安陸、貴州等地銀杏種苗大部分由江蘇邳州引入。2010年“邳州銀杏”獲批國(guó)家地理標(biāo)志產(chǎn)品[16]。因此選取江蘇邳州2個(gè)典型葉用銀杏栽培基地(LT、HM)作為研究對(duì)象。

    本研究通過(guò)收集比較不同產(chǎn)地雌雄株銀杏葉的性狀特征,建立UPLC指紋圖譜快速檢測(cè)技術(shù),其色譜峰的保留時(shí)間全部在18 min內(nèi),極大地提高了分析效率。測(cè)定分析總黃酮醇苷含量差異,并以樣品生成的共有模式作為對(duì)照?qǐng)D譜進(jìn)行指紋圖譜相似度評(píng)價(jià),結(jié)合主成分分析及偏最小二乘判別分析,綜合比較不同供試樣品質(zhì)量差異,以期為不同產(chǎn)地雌雄株銀杏葉的鑒別及應(yīng)用提供參考資料。

    1 材料和試劑

    1.1 材料

    GPS定位儀,卷尺,Waters ACQUITY H-Class 超高效液相色譜儀(美國(guó)Waters公司),配置四元高壓泵、PDA檢測(cè)器;KQ-500B型超聲波清洗儀(昆山市超聲儀器有限公司);FA22C4B電子天平(上海天關(guān)天平儀器有限公司);MILLI-Q型超純水儀(法國(guó)密理博公司),高速冷凍離心機(jī)(賽默飛世爾科技有限公司)。

    1.2 試劑

    乙腈為色譜純(華東醫(yī)藥股份有限公司器材化劑分公司,德國(guó)Merck公司);甲酸為色譜純(杭州悅耳科技有限公司,美國(guó),aladdin公司);對(duì)照品槲皮素(批號(hào)C01J10Y91727)、異鼠李素(批號(hào)P14O11L124051)、山柰素(批號(hào)Y14M11H109733)、蘆?。ㄅ?hào)Y24F11Y17051),均購(gòu)自上海源葉生物科技有限公司,質(zhì)量分?jǐn)?shù)均≥98%。

    1.3 樣品的采集

    選擇銀杏葉主要栽培地區(qū)共計(jì)5個(gè)居群,每個(gè)居群采集雌雄單株各5株及以上(不足5株則按最大量采集),居群間隔大于50 km,植株間距20 m。胸徑大于20 cm的大樹(shù)認(rèn)為成年個(gè)體,成年個(gè)體具有性別分化特征,否則認(rèn)定為苗期植株,無(wú)兩性特征。樣品來(lái)源信息見(jiàn)表1,均于2020年9月采收,采集后統(tǒng)一洗凈,低溫烘干。所有樣品均經(jīng)浙江中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院秦路平教授鑒定為銀杏科植物銀杏L.的完整葉。

    2 方法

    2.1 色譜條件

    ACQUITY UPLC BEHC18(100 mm×2.1 mm,1.7 μm)色譜柱和ACQUITYBEHC18(5 mm×2.1 mm,1.7 μm)MVANGUARD預(yù)柱[沃特世科技(上海)有限公司]。流動(dòng)相乙腈(A)-0.1%甲酸水(B),梯度洗脫(0~6 min,15%~23% A;6~11.0 min,23%~35% A;11~11.1 min,35%~41% A;11.1~14 min,41% A;14~14.1 min,41%~51% A;14.1~18 min,51% A);柱溫25 ℃;檢測(cè)器:PDA;檢測(cè)波長(zhǎng)360 nm;體積流量0.25 mL/min;進(jìn)樣體積3 μL,平衡時(shí)間30 min。

    表1 銀杏葉樣品采集信息

    Table 1 Collection information of G. biloba leavescollected from Zhejiang and Jiangsu provinces

    編號(hào)采集號(hào)性別經(jīng)度(E)緯度(N)海拔/m編號(hào)采集號(hào)性別經(jīng)度(E)緯度(N)海拔/m S1LT-M1M117°99′34°63′ 24S19HM-F3F118°05′34°44′ 18 S2LT-M2M117°99′34°63′ 24S20HM-F4F118°05′34°44′ 18 S3LT-M3M117°99′34°63′ 24S21TMP-F1F119°25′30°02′1176 S4HM-M1M118°05′34°44′ 18S22TMP-F2F119°25′30°02′1176 S5HM-M2M118°05′34°44′ 18S23TMP-F3F119°25′30°02′1176 S6HM-M3M118°05′34°44′ 18S24TMP-F4F119°25′30°02′1176 S7TMP-M1M119°25′30°02′1176S25TMV-F1F119°27′30°17′ 340 S8TMV-M1M119°27′30°17′ 340S26TMV-F2F119°27′30°17′ 340 S9TMV-M2M119°27′30°17′ 340S27ZAFUD-F1F119°73′30°25′ 31 S10TMV-M3M119°27′30°17′ 340S28ZAFUD-F2F119°73′30°25′ 31 S11TMV-M4M119°27′30°17′ 340S29ZAFUD-F3F119°73′30°25′ 31 S12LT-F1F117°99′34°63′ 24S30ZAFUD-F4F119°73′30°25′ 31 S13LT-F2F117°99′34°63′ 24S31ZAFUD-F5F119°73′30°25′ 31 S14LT-F3F117°99′34°63′ 24S32LT-S1NA117°99′34°63′ 24 S15LT-F4F117°99′34°63′ 24S33LT-S2NA117°99′34°63′ 24 S16LT-F5F117°99′34°63′ 24S34LT-S3NA117°99′34°63′ 24 S17HM-F1F118°05′34°44′ 18S35ZAFUD-S1NA119°73′30°25′ 31 S18HM-F2F118°05′34°44′ 18S36ZAFUD-S2NA119°73′30°25′ 31

    M-雄株 F-雌株 NA-無(wú)兩性特征

    M-male F-female NA-no gender characteristics

    2.2 對(duì)照品溶液的制備

    精密稱定對(duì)照品適量,加甲醇制成含槲皮素、山柰素、異鼠李素、蘆丁均為0.1 mg/mL的混合對(duì)照品溶液,4 ℃保存,備用。

    2.3 供試品溶液的制備

    精密稱定銀杏葉干燥粉末1 g,加入甲醇10 mL,超聲溶解,冷卻至室溫,用甲醇定容到10 mL,濾過(guò),搖勻,過(guò)0.45 μm濾膜,即得。

    2.4 方法學(xué)考察

    2.4.1 精密度試驗(yàn) 取同一供試品(S1)溶液,按“2.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定6次,記錄指紋圖譜。用中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)2012版軟件進(jìn)行相似度分析,以蘆丁峰為參照,多點(diǎn)校正后全峰匹配,結(jié)果表明,6個(gè)供試品色譜圖與其共有模式的相似度分別為0.957、0.994、0.993、0.996、0.995、0.995,說(shuō)明該方法精密度較好。

    2.4.2 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品(S1)溶液,分別在0、2、4、8、16、24 h進(jìn)樣,按上述色譜條件記錄指紋圖譜。用中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)2012版軟件進(jìn)行相似度分析,以蘆丁峰為參照,多點(diǎn)校正后全峰匹配,計(jì)算結(jié)果表明,6個(gè)供試品色譜圖與其共有模式的相似度分別為0.992、0.989、0.992、0.994、0.992、0.993,表明該溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

    2.4.3 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一供試品,照“2.3”項(xiàng)下方法平行制備供試品溶液6份,記錄指紋圖譜。用中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)2012版軟件進(jìn)行相似度分析,以蘆丁峰為參照,多點(diǎn)校正后全峰匹配,計(jì)算結(jié)果表明,6個(gè)供試品色譜圖與其共有模式的相似度分別為0.998、0.999、0.999、0.999、0.998、0.993,說(shuō)明該方法重復(fù)性較好。

    2.5 樣品測(cè)定

    將供試品溶液按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定,采用中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)2012版軟件,多點(diǎn)校正后全峰匹配,計(jì)算相似度。依《中國(guó)藥典》2020年版規(guī)定方法分別測(cè)定槲皮素、山柰素和異鼠李素的含量,并按下式換算成總黃酮醇苷的含量。

    總黃酮醇苷含量=(槲皮素含量+山柰素含量+異鼠李素含量)×2.51

    2.6 數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計(jì)分析

    采用Microsoft Office 2020軟件和SPSS(26.0)對(duì)數(shù)據(jù)結(jié)果進(jìn)行整理匯總和方差分析,中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)2012版軟件進(jìn)行相似度分析,SIMCA-P 13.0軟件進(jìn)行主成分分析(principal component analysis,PCA),GraphPad Prism 7.00軟件進(jìn)行圖表繪制。

    3 結(jié)果與分析

    3.1 雌雄異株銀杏葉性狀特征的比較分析

    在實(shí)際工作中一般應(yīng)用如下方法初步區(qū)分銀杏雌雄植株:雌株主枝在主干上著生角度大,向四面展開(kāi),有時(shí)下垂;雄株主枝在主干上著生角度小、挺直向上。雌株葉裂較少、較淺,不達(dá)葉之中部;雄株葉裂較深、缺刻超過(guò)葉的中部[17]。現(xiàn)代銀杏有長(zhǎng)、短枝之分,短枝上的葉是短柄、簇生的;銀杏葉由枝端的幼葉開(kāi)始向下發(fā)育過(guò)程呈規(guī)律性變化。銀杏葉裂片由窄變寬,向著利于光合作用的方向發(fā)展[18]。見(jiàn)圖1。由于不同產(chǎn)地銀杏實(shí)生植株及葉片形態(tài)存在一定差異,為精準(zhǔn)鑒別植株性別,采集樣品前均與種植養(yǎng)護(hù)或?qū)I(yè)人員進(jìn)行性別確認(rèn)。

    1、2-成熟雄株 3、4-成熟雌株 5、6-苗期植株

    3.2 指紋圖譜分析及含量測(cè)定結(jié)果

    在優(yōu)化的色譜條件下,對(duì)5個(gè)居群36份銀杏葉樣品進(jìn)行UPLC指紋圖譜分析。將采集的數(shù)據(jù)按植株性別分類,導(dǎo)入中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)2004A版軟件,經(jīng)數(shù)據(jù)剪切、等長(zhǎng)處理、數(shù)據(jù)平移,計(jì)算生成對(duì)照指紋圖譜(RFP)。圖2為對(duì)照品色譜峰圖,相似度評(píng)價(jià)結(jié)果見(jiàn)表2。

    由表2可知,5個(gè)居群11份雄株銀杏葉片樣品相似度在0.879~0.966;20份雌株銀杏葉片樣品相似度在0.865~0.930;5份苗期銀杏葉片樣品相似度在0.917~0.978。樣品指紋圖譜相似度變化范圍較大,與文獻(xiàn)一致[11]。各組樣品相似度均大于0.85,雌株之間相似度低于雄株,成熟植株相似度變化幅度大于苗期植株。性別和樹(shù)齡對(duì)銀杏葉的化學(xué)成分組成和比例有一定的影響;2~5年生銀杏葉的化學(xué)成分組成和比例較一致,質(zhì)量穩(wěn)定。

    1-蘆丁 2-槲皮素 3-異鼠李素 4-山柰素

    表2 銀杏葉樣品指紋圖譜相似度測(cè)定結(jié)果

    Table 2 Fingerprint similarity in leaves

    編號(hào)相似度編號(hào)相似度編號(hào)相似度 S10.900S130.905S250.891 S20.928S140.908S260.892 S30.957S150.927S270.907 S40.894S160.896S280.871 S50.931S170.895S290.887 S60.958S180.905S300.930 S70.908S190.915S310.922 S80.966S200.928S320.935 S90.942S210.917S330.917 S100.879S220.922S340.949 S110.879S230.921S350.976 S120.865S240.910S360.978

    對(duì)各供試品中蘆丁、槲皮素、異鼠李素和山柰素含量進(jìn)行測(cè)定,計(jì)算總黃酮醇苷含量,結(jié)果見(jiàn)表3。供試銀杏葉片樣品總黃酮醇苷含量變幅為0.11~1.86 mg/g,平均含量為0.43 mg/g。雄株銀杏葉片樣品總黃酮醇苷含量變幅為0.21~1.86 mg/g,平均含量為0.55 mg/g。雌株銀杏葉片樣品總黃酮醇苷含量變幅為0.11~0.93 mg/g,平均含量為0.39 mg/g。雄株銀杏葉片中黃酮苷含量高于雌株,與文獻(xiàn)結(jié)論一致[19]。

    表3 銀杏葉樣品總黃酮醇苷含量()

    Table 3 Determination of total flavonol glucoside ()

    編號(hào)總黃酮醇苷/(mg·g?1)編號(hào)總黃酮醇苷/(mg·g?1)編號(hào)總黃酮醇苷/(mg·g?1) S10.29±0.00S130.55±0.04S250.18±0.00 S20.23±0.01S140.57±0.00S260.38±0.01 S30.27±0.01S150.59±0.01S270.38±0.00 S41.86±0.01S160.46±0.02S280.31±0.02 S50.92±0.03S170.45±0.00S290.32±0.01 S60.63±0.02S180.63±0.02S300.18±0.01 S70.29±0.02S190.93±0.01S310.11±0.00 S80.54±0.03S200.38±0.00S320.56±0.04 S90.38±0.01S210.21±0.00S330.26±0.00 S100.21±0.01S220.18±0.01S340.61±0.01 S110.43±0.02S230.35±0.00S350.13±0.00 S120.33±0.02S240.34±0.02S360.23±0.01

    3.3 PCA

    PCA是從多個(gè)數(shù)值變量之間的相互關(guān)系入手,利用降維的思想,將多個(gè)變量化為少數(shù)幾個(gè)互不相關(guān)的綜合變量的統(tǒng)計(jì)方法。記分圖是帶有二維記分圖的觀察圖,顯示了數(shù)據(jù)中可能存在的異常值、組、相似性和其他模式。將36批次銀杏葉樣品測(cè)得黃酮醇苷類成分原始數(shù)據(jù)導(dǎo)入SIMCA-P 13.0軟件,進(jìn)行PCA,確定不同樣品之間的差異,結(jié)果見(jiàn)圖3。

    5個(gè)居群雌雄樣品不能明顯分開(kāi),各組間差異較小,HM居群樣品S4與其他樣品差異顯著,與“3.2”項(xiàng)下結(jié)果一致。全部樣品采集在一周之內(nèi)完成,樣品采集時(shí)該居群植株已處于落葉階段,認(rèn)為該居群與其他居群的物候期存在差異。

    圖3 PCA分析得分圖

    3.4 PLS-DA

    PLS-DA負(fù)荷權(quán)重散點(diǎn)圖顯示了變量和變量之間的關(guān)系VIP(variable importance for the projection)圖匯總了變量對(duì)解釋和與相關(guān)的重要性,通常選VIP>1的變量為特征變量。為具體分析雌雄株銀杏黃酮苷含量差異性,本研究對(duì)雌株、雄株和未進(jìn)行性別分化的苗期銀杏葉樣品進(jìn)行PLS-DA比較分析(圖4~6),首先對(duì)雄株樣品進(jìn)行有監(jiān)督模式的識(shí)別分析,結(jié)果顯示雌雄株銀杏葉中總黃酮醇苷、槲皮素、異鼠李素VIP值均大于1;山柰素存在差異,雄株中山柰素可作為質(zhì)量差異標(biāo)志物,雌株中山柰素VIP值小于1,不能作為質(zhì)量差異標(biāo)志物。雄株樣品中LT居群樣品與TMP居群樣品差異較??;HM居群樣品存在異常離群。雌株樣品居群間差異較小,且存在異常離群值S19,為HM居群樣品。與主成分分析結(jié)果一致。苗期質(zhì)量差異標(biāo)志物包括山柰素和槲皮素;ZAFUD居群樣品組內(nèi)差異較小,苗期樣品均無(wú)異常離群。

    4 討論

    有研究表明,雌雄異株藥用植物在生理生化以及某些活性成分的含量上有顯著差異[20]。也有研究表明一些雌雄異株藥用植物某些次生代謝產(chǎn)物的含量與性別無(wú)明顯關(guān)系[21]。銀杏雌雄株葉片的生理差異較大。與雄株相比,雌株抗鹽脅迫能力強(qiáng)[22]。由本研究結(jié)果可知,不同地區(qū)栽培技術(shù)及采收時(shí)間對(duì)銀杏葉性狀特征有一定的影響。已有文獻(xiàn)中對(duì)銀杏葉植株性別的表觀性狀鑒別僅可作為參考依據(jù),并不能完全保證鑒定結(jié)果的可靠性,還需結(jié)合資料記載和分子生物學(xué)手段進(jìn)行進(jìn)一步分析。

    圖4 雄株樣品PLS-DA分析得分圖及VIP圖

    圖5 雌株樣品PLS-DA分析得分圖及VIP圖

    圖6 苗期樣品PLS-DA分析得分圖及VIP圖

    本研究通過(guò)對(duì)銀杏葉道地產(chǎn)區(qū)進(jìn)行實(shí)地深入考察,以典型樣品為質(zhì)量評(píng)價(jià)對(duì)象,通過(guò)數(shù)據(jù)化分析進(jìn)一步明確了道地產(chǎn)區(qū)銀杏葉藥材和野生銀杏葉以及觀賞用銀杏葉質(zhì)量的差異,采用UPLC技術(shù)建立了銀杏葉藥材中4種主要黃酮苷類成分的含量測(cè)定方法,以外標(biāo)法精確定量,準(zhǔn)確真實(shí)地揭示銀杏葉藥材中黃酮苷類成分的內(nèi)在質(zhì)量。建立了以指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)結(jié)合PCA及PLS-DA的銀杏葉藥材質(zhì)量評(píng)價(jià)方法,為銀杏葉的藥材生產(chǎn)和快速鑒定及其質(zhì)量控制提供參考。

    銀杏產(chǎn)業(yè)相關(guān)公司主要經(jīng)營(yíng)銀杏種苗收購(gòu)及供應(yīng),銀杏樹(shù)價(jià)格從上萬(wàn)元降至千元,持續(xù)走低;銀杏葉單價(jià)從幾十元降至一元,低廉的收成價(jià)格嚴(yán)重打擊了銀杏種植戶的栽培積極性??茖W(xué)評(píng)價(jià)銀杏藥材質(zhì)量,發(fā)展銀杏系列產(chǎn)品,提高銀杏市場(chǎng)價(jià)值,對(duì)于促進(jìn)產(chǎn)學(xué)研的有機(jī)結(jié)合具有重要意義。

    志謝:浙江中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)藥科學(xué)院醫(yī)學(xué)科研中心公共平臺(tái)提供技術(shù)協(xié)助。

    利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

    [1] 中國(guó)藥典[S]. 一部. 2020: 329-330.

    [2] Goh L M, Barlow P J, Yong C S. Examination of antioxidant activity ofleaf infusions [J]., 2003, 82(2): 275-282.

    [3] 丁東, 張展鵬, 權(quán)美平. 銀杏葉提取物的化學(xué)成分、生物活性及應(yīng)用研究進(jìn)展 [J]. 江蘇調(diào)味副食品, 2015, 32(3): 5-8.

    [4] Gagné B, Gélinas S, Bureau G,. Effects of estradiol, phytoestrogens, andextracts against 1-methyl-4-phenyl-pyridine-induced oxidative stress [J]., 2003, 21(1): 89-95.

    [5] Horáková L, Licht A, Sandig G,. Standardized extracts of flavonoids increase the viability of PC12 cells treated with hydrogen peroxide: Effects on oxidative injury [J]., 2003, 77(1): 22-29.

    [6] Kubota Y, Tanaka N, Umegaki K,.extract-induced relaxation of rat aorta is associated with increase in endothelial intracellular calcium level [J]., 2001, 69(20): 2327-2336.

    [7] van Beek T A, Montoro P. Chemical analysis and quality control ofleaves, extracts, and phytopharmaceuticals [J]., 2009, 1216(11): 2002-2032.

    [8] 劉國(guó)雄, 李華, 張軍. UPLC指紋圖譜快速評(píng)價(jià)銀杏葉提取物及制劑的質(zhì)量 [J]. 中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志, 2017, 23(1): 64-68.

    [9] 劉建莊. 銀杏黃酮類化合物的NMR指紋圖譜分析及定量研究 [D]. 長(zhǎng)沙: 湖南師范大學(xué), 2004.

    [10] 王德偉, 朱紅, 高爾. 銀杏黃酮的藥理作用和臨床應(yīng)用 [J]. 食品與藥品, 2006, 8(6): 7-9.

    [11] 鞠建明, 段金廒, 錢大瑋, 等. 不同樹(shù)齡邳州銀杏葉在不同采收期指紋圖譜比較 [J]. 中草藥, 2005, 36(9): 1388-1391.

    [12] 周昊, 王成章. 銀杏資源加工利用產(chǎn)業(yè)發(fā)展現(xiàn)狀 [J]. 生物質(zhì)化學(xué)工程, 2021, 55(1): 10-14.

    [13] 劉小允. 邳州市銀杏產(chǎn)業(yè)發(fā)展新思路 [J]. 安徽農(nóng)學(xué)通報(bào), 2020, 26(24): 99-101.

    [14] 楊偉麗, 馬媛媛. 甘肅不同產(chǎn)地及不同季節(jié)銀杏葉中總黃酮苷的含量測(cè)定 [J]. 甘肅醫(yī)藥, 2013, 32(3): 169-171.

    [15] 殷平平. 基于基因組重測(cè)序的銀杏種群進(jìn)化歷史研究 [D]. 杭州: 浙江大學(xué), 2019.

    [16] 張衛(wèi)東. 中醫(yī)藥“五種資源”視角下的邳州銀杏 [J]. 產(chǎn)業(yè)與科技論壇, 2021, 20(4): 42-44.

    [17] 王建國(guó), 韓小英, 景麗, 等. 銀川市銀杏樹(shù)雌雄同株形態(tài)特征調(diào)查研究 [J]. 寧夏農(nóng)林科技, 2011, 52(12): 89.

    [18] 周興文. 銀杏 () 葉的形態(tài)發(fā)育與演化 [J]. 沈陽(yáng)大學(xué)學(xué)報(bào), 2006, 18(4): 83-86.

    [19] 范怡梅, 王勇, 譚仁祥, 等. 銀杏葉黃酮甙含量與生長(zhǎng)季節(jié)和植株性別的相關(guān)性研究 [J]. 中國(guó)中藥雜志, 1998, 23(5): 267-269.

    [20] 劉海萍, 巢志茂, 譚志高, 等. 雌雄異株藥用植物的物質(zhì)基礎(chǔ)分析及其研究技術(shù) [J]. 中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志, 2012, 19(4): 104-107.

    [21] 葉東旭, 李欽, 杜紅巖, 等. 杜仲雌雄株葉高效液相色譜指紋圖譜和次生代謝產(chǎn)物的含量比較 [J]. 時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥, 2014, 25(5): 1077-1079.

    [22] 蔣雪梅, 胡進(jìn)耀, 戚文華, 等. 銀杏幼苗雌雄株對(duì)鹽脅迫響應(yīng)的差別 [J]. 云南植物研究, 2009, 31(5): 447-453.

    Quality comparison ofleaves from different sources based on UPLC fingerprint and flavonoid glycosides content

    HUANG Shen, ZHU Bo, ZHANG Qiao-yan, LIN Liu-fen, YOU Jin-ling, MENG Xiong-yu, ZHANG Quan-long, QIN Lu-ping

    School of Pharmaceutical Sciences, Zhejiang Chinese Medical University, Hangzhou 310053, China

    To compare the quality of Yinxingye (leaves) from different producing areas, sexes, and tree ages in the same harvest period to provide the basis for resource evaluation.The samples offrom five areas were investigated and collected, and the contents of rutin, quercetin, isorhamnetin and kaempferol were determined by ultra-high performance liquid chromatography (UPLC). The UPLC fingerprint ofwas established by using the software of similarity evaluation system of chromatographic fingerprint of traditional Chinese medicine of National Pharmacopoeia Committee. The quality differences ofleaves of different sexes were discussed by principal component analysis and partial least square discriminant analysis.The similarity of samples in each group was greater than 0.85, and the similarity between female plants was lower than that between male plants. The origin, sex, and tree age had certain effects on the chemical composition and proportion ofleaves, and the similarity of fingerprint of mature plants was larger than that of seedling plants. Phenophase differences between HM population was different from other populations.There are differences in the characters and characteristics ofleaves of male and female plants from different areas. The quality ofleaves in LT population is better and more stable. The stability of seedling plants is higher than mature plants. Besides, the quality differential markers ofleaves of different sexes are different. In this paper, UPLC fingerprint rapid detection method was established, and fingerprint similarity evaluation was carried out. Principal component analysis and partial least squares discriminant analysis were used to analyze the quality ofleaves with different genders, which provided a scientific basis for the quality comparison and resource evaluation ofleaves.

    leaves; UPLC fingerprint; flavonoid glycoside; quality differences; rutin; quercetin; isorhamnetin; kaempferol

    R286.2

    A

    0253 - 2670(2022)13 - 4125 - 07

    10.7501/j.issn.0253-2670.2022.13.026

    2021-12-06

    浙江省重點(diǎn)研發(fā)項(xiàng)目(2021C04029)

    黃 申(1995—),女,博士研究生,研究方向?yàn)橹兴幤焚|(zhì)評(píng)價(jià)及資源開(kāi)發(fā)利用。Tel: 17326085210 E-mail: 202011014011079@zcmu.edu.cn

    秦路平(1966—),男,教授,博士生導(dǎo)師,研究方向?yàn)橹兴幤焚|(zhì)評(píng)價(jià)和資源開(kāi)發(fā)利用研究。Tel: (0571)61768167 E-mail: lpqin@zcmu.edu.cn

    [責(zé)任編輯 時(shí)圣明]

    猜你喜歡
    黃酮醇居群銀杏葉
    會(huì)跳舞的銀杏葉
    燕山地區(qū)不同居群白頭翁種子萌發(fā)的初步評(píng)價(jià)
    黃酮醇在果樹(shù)中的功能的研究進(jìn)展
    銀杏葉(外一首)
    鴨綠江(2021年35期)2021-11-11 15:25:02
    基于簡(jiǎn)單重復(fù)序列間擴(kuò)增分子標(biāo)記的金釵石斛遺傳多樣性研究
    銀杏葉(外一首)
    鴨綠江(2021年35期)2021-04-19 12:23:46
    3個(gè)居群野生草地早熟禾耐鹽性比較研究
    芍藥黃色花瓣中黃酮醇及其糖苷類化合物組成分析
    與銀杏葉的約會(huì)
    歲月(2018年2期)2018-02-28 20:51:50
    UPLC法同時(shí)測(cè)定香椿芽中8種黃酮醇苷
    中成藥(2017年9期)2017-12-19 13:34:37
    欧美最新免费一区二区三区 | 日韩欧美一区二区三区在线观看| 又爽又黄无遮挡网站| 国产成+人综合+亚洲专区| 中国美女看黄片| 欧美日韩国产亚洲二区| 国产不卡一卡二| 成人性生交大片免费视频hd| 身体一侧抽搐| 观看免费一级毛片| 午夜精品久久久久久毛片777| 欧美+亚洲+日韩+国产| 国产免费男女视频| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 国产精品一区二区免费欧美| 欧美丝袜亚洲另类 | 国产精品国产高清国产av| 亚洲成av人片免费观看| 中文字幕人成人乱码亚洲影| 少妇高潮的动态图| 99久久成人亚洲精品观看| 国产淫片久久久久久久久 | 日韩欧美国产一区二区入口| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 麻豆一二三区av精品| 999久久久精品免费观看国产| 性色av乱码一区二区三区2| 久久久久九九精品影院| 免费一级毛片在线播放高清视频| 最近视频中文字幕2019在线8| 搡老岳熟女国产| 国产精品1区2区在线观看.| 亚洲国产色片| 乱人视频在线观看| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区 | 天堂动漫精品| 欧美激情久久久久久爽电影| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 午夜日韩欧美国产| 日本a在线网址| 日韩欧美 国产精品| 日韩欧美国产在线观看| 精品一区二区三区人妻视频| 叶爱在线成人免费视频播放| 三级国产精品欧美在线观看| 老师上课跳d突然被开到最大视频 久久午夜综合久久蜜桃 | 日本与韩国留学比较| 中亚洲国语对白在线视频| 中文字幕人成人乱码亚洲影| h日本视频在线播放| 日韩欧美在线二视频| 一个人免费在线观看电影| 精品人妻偷拍中文字幕| 淫妇啪啪啪对白视频| 男女之事视频高清在线观看| 欧美日韩黄片免| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 精品久久久久久,| 国模一区二区三区四区视频| 好男人电影高清在线观看| 99久久综合精品五月天人人| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 亚洲国产色片| 一个人免费在线观看电影| 国产三级中文精品| 怎么达到女性高潮| 亚洲国产精品久久男人天堂| 久久久久久久精品吃奶| 在线观看av片永久免费下载| 一本精品99久久精品77| 操出白浆在线播放| 国产精品爽爽va在线观看网站| 美女免费视频网站| 人人妻人人澡欧美一区二区| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 午夜激情欧美在线| 日韩欧美精品免费久久 | 在线观看美女被高潮喷水网站 | 欧美日韩黄片免| 少妇的逼水好多| 亚洲成人久久爱视频| 深夜精品福利| 亚洲成人免费电影在线观看| 级片在线观看| 日本免费a在线| 搡女人真爽免费视频火全软件 | 亚洲人与动物交配视频| 久久性视频一级片| 亚洲国产色片| 国产视频内射| 精品午夜福利视频在线观看一区| www.熟女人妻精品国产| 一本久久中文字幕| 欧美性猛交黑人性爽| 村上凉子中文字幕在线| 一个人看的www免费观看视频| 久久久久精品国产欧美久久久| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 日韩人妻高清精品专区| 欧美一区二区精品小视频在线| 岛国在线观看网站| 国产精品98久久久久久宅男小说| www日本在线高清视频| 99久久九九国产精品国产免费| 波野结衣二区三区在线 | 男女那种视频在线观看| 色综合欧美亚洲国产小说| 久久草成人影院| 欧美色欧美亚洲另类二区| 亚洲欧美激情综合另类| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 亚洲欧美激情综合另类| 国内精品久久久久精免费| 日韩大尺度精品在线看网址| 制服人妻中文乱码| 国产av一区在线观看免费| 日韩大尺度精品在线看网址| 亚洲avbb在线观看| 国产三级中文精品| av福利片在线观看| 看片在线看免费视频| 韩国av一区二区三区四区| 成人欧美大片| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 国产成人啪精品午夜网站| 美女高潮的动态| 欧美成人免费av一区二区三区| 高潮久久久久久久久久久不卡| 特级一级黄色大片| 免费在线观看影片大全网站| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 欧美性猛交黑人性爽| 一本一本综合久久| 又爽又黄无遮挡网站| 日韩大尺度精品在线看网址| 舔av片在线| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 国产黄色小视频在线观看| 亚洲激情在线av| 亚洲成人中文字幕在线播放| 91字幕亚洲| 午夜福利18| 午夜a级毛片| 亚洲内射少妇av| 国产成人影院久久av| 国内精品久久久久精免费| 日韩免费av在线播放| 我要搜黄色片| 国产色婷婷99| 亚洲成人中文字幕在线播放| 中国美女看黄片| 中文字幕久久专区| 在线视频色国产色| 久9热在线精品视频| 一区二区三区国产精品乱码| 97碰自拍视频| 色综合站精品国产| 色综合欧美亚洲国产小说| 国产探花极品一区二区| 国产不卡一卡二| 免费看美女性在线毛片视频| 久久亚洲真实| 久久99热这里只有精品18| 色播亚洲综合网| 黄色日韩在线| 青草久久国产| 亚洲国产精品成人综合色| 日韩免费av在线播放| 国产成人a区在线观看| 老司机深夜福利视频在线观看| av天堂中文字幕网| 中文亚洲av片在线观看爽| 亚洲精品一区av在线观看| 香蕉av资源在线| 岛国视频午夜一区免费看| 欧美激情在线99| 99热6这里只有精品| 精品99又大又爽又粗少妇毛片 | 91av网一区二区| 一二三四社区在线视频社区8| 啪啪无遮挡十八禁网站| 操出白浆在线播放| 日本三级黄在线观看| 国内精品久久久久久久电影| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 久久精品国产清高在天天线| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 国产伦精品一区二区三区四那| 久久欧美精品欧美久久欧美| 国产av不卡久久| a在线观看视频网站| 日韩欧美在线二视频| 午夜免费男女啪啪视频观看 | 99久久精品国产亚洲精品| 无限看片的www在线观看| 午夜福利欧美成人| 国内揄拍国产精品人妻在线| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 欧美乱妇无乱码| 亚洲精品乱码久久久v下载方式 | 搡女人真爽免费视频火全软件 | 内射极品少妇av片p| 国产午夜福利久久久久久| 免费av毛片视频| av视频在线观看入口| 桃色一区二区三区在线观看| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 激情在线观看视频在线高清| 成人国产一区最新在线观看| 国产黄a三级三级三级人| 俄罗斯特黄特色一大片| e午夜精品久久久久久久| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 精品国产亚洲在线| 久久精品国产清高在天天线| 免费看十八禁软件| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美 | 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 亚洲专区国产一区二区| 他把我摸到了高潮在线观看| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 俺也久久电影网| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 岛国在线观看网站| 久久精品国产自在天天线| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 免费观看人在逋| 欧美日韩一级在线毛片| 人妻久久中文字幕网| 色综合婷婷激情| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 久久久久久大精品| 国产亚洲欧美98| 18+在线观看网站| 久久久久免费精品人妻一区二区| 国产野战对白在线观看| 免费人成视频x8x8入口观看| 国产精品永久免费网站| 99视频精品全部免费 在线| 男女午夜视频在线观看| 最近最新中文字幕大全免费视频| 婷婷丁香在线五月| 老司机在亚洲福利影院| 欧美一区二区精品小视频在线| 欧美黑人欧美精品刺激| 欧美一级毛片孕妇| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 桃红色精品国产亚洲av| 国产探花极品一区二区| 99精品欧美一区二区三区四区| 亚洲欧美激情综合另类| 小说图片视频综合网站| 免费看美女性在线毛片视频| 午夜精品一区二区三区免费看| 亚洲美女黄片视频| 国产欧美日韩一区二区精品| 99久久九九国产精品国产免费| 国产精品一区二区三区四区久久| 亚洲一区高清亚洲精品| 久久久久久九九精品二区国产| 性色av乱码一区二区三区2| 国产色爽女视频免费观看| av中文乱码字幕在线| 久久精品91无色码中文字幕| 一本综合久久免费| 床上黄色一级片| 欧美成人免费av一区二区三区| 我的老师免费观看完整版| 国产伦人伦偷精品视频| 99精品在免费线老司机午夜| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 亚洲人成电影免费在线| 午夜两性在线视频| 亚洲七黄色美女视频| 午夜精品一区二区三区免费看| 国产成人系列免费观看| 操出白浆在线播放| 在线天堂最新版资源| 九九热线精品视视频播放| 99久久成人亚洲精品观看| 久久精品人妻少妇| 毛片女人毛片| 国内精品一区二区在线观看| 听说在线观看完整版免费高清| 国产高清videossex| 午夜福利在线在线| 好男人在线观看高清免费视频| 亚洲国产精品合色在线| or卡值多少钱| 国内精品久久久久精免费| 少妇人妻一区二区三区视频| 久99久视频精品免费| 欧美日韩精品网址| 天美传媒精品一区二区| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 最近最新中文字幕大全免费视频| 在线播放无遮挡| 91麻豆精品激情在线观看国产| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 日韩中文字幕欧美一区二区| 免费搜索国产男女视频| 国产探花极品一区二区| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 亚洲人成网站高清观看| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 夜夜夜夜夜久久久久| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 成人午夜高清在线视频| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 国产欧美日韩精品亚洲av| 亚洲国产精品久久男人天堂| 国产熟女xx| 亚洲18禁久久av| www国产在线视频色| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 啪啪无遮挡十八禁网站| 国产精品乱码一区二三区的特点| 国产精品精品国产色婷婷| 两个人看的免费小视频| 国内揄拍国产精品人妻在线| 亚洲一区高清亚洲精品| 神马国产精品三级电影在线观看| 欧美色视频一区免费| 国产乱人伦免费视频| 我要搜黄色片| 久久久久免费精品人妻一区二区| 90打野战视频偷拍视频| 免费人成在线观看视频色| 欧美午夜高清在线| 日本在线视频免费播放| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区 | 成人特级av手机在线观看| 久久人妻av系列| 精品国产三级普通话版| 亚洲av电影不卡..在线观看| 一级a爱片免费观看的视频| 在线免费观看不下载黄p国产 | 成年版毛片免费区| 69av精品久久久久久| 特级一级黄色大片| 性色av乱码一区二区三区2| 在线观看舔阴道视频| 亚洲熟妇熟女久久| 国产精品一区二区免费欧美| 精品国产美女av久久久久小说| 国产成人啪精品午夜网站| 少妇人妻一区二区三区视频| 国产精品久久久久久久久免 | 少妇丰满av| 日本黄色片子视频| 国产三级在线视频| 国产成人av教育| 欧美最新免费一区二区三区 | 亚洲精华国产精华精| 国产成+人综合+亚洲专区| 欧美性猛交黑人性爽| 国产探花在线观看一区二区| 岛国视频午夜一区免费看| 欧美大码av| 热99在线观看视频| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 国产真人三级小视频在线观看| 亚洲成a人片在线一区二区| 亚洲 国产 在线| 久久久色成人| 成人特级黄色片久久久久久久| www.www免费av| h日本视频在线播放| 狠狠狠狠99中文字幕| 成人永久免费在线观看视频| 免费看美女性在线毛片视频| 日本熟妇午夜| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 黄色日韩在线| 日本一二三区视频观看| 麻豆久久精品国产亚洲av| tocl精华| 成人av一区二区三区在线看| 在线观看免费午夜福利视频| ponron亚洲| 麻豆国产av国片精品| 国产99白浆流出| 午夜福利视频1000在线观看| 国产免费一级a男人的天堂| 美女cb高潮喷水在线观看| 国产视频一区二区在线看| 69av精品久久久久久| 亚洲av五月六月丁香网| 嫩草影院入口| 日本黄色视频三级网站网址| 亚洲av免费高清在线观看| 身体一侧抽搐| 成人av在线播放网站| 午夜福利高清视频| 午夜激情福利司机影院| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 中出人妻视频一区二区| 午夜a级毛片| 精品99又大又爽又粗少妇毛片 | 日本五十路高清| 精品无人区乱码1区二区| 搡老妇女老女人老熟妇| 看黄色毛片网站| 九九热线精品视视频播放| 午夜日韩欧美国产| 欧美一区二区亚洲| 国产免费男女视频| 夜夜爽天天搞| 亚洲av二区三区四区| www.www免费av| 国产极品精品免费视频能看的| av视频在线观看入口| 国语自产精品视频在线第100页| 最近最新免费中文字幕在线| 国产视频一区二区在线看| 毛片女人毛片| 亚洲 国产 在线| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 色在线成人网| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 搡女人真爽免费视频火全软件 | 国产极品精品免费视频能看的| 麻豆国产av国片精品| 精品人妻偷拍中文字幕| 欧美色欧美亚洲另类二区| 午夜福利高清视频| 亚洲一区高清亚洲精品| 国产高清激情床上av| 亚洲第一电影网av| 国产成年人精品一区二区| 国产精品电影一区二区三区| 俄罗斯特黄特色一大片| 白带黄色成豆腐渣| 18美女黄网站色大片免费观看| 一级黄色大片毛片| 国产精品嫩草影院av在线观看 | 中国美女看黄片| 欧美日韩国产亚洲二区| 免费搜索国产男女视频| 成年女人看的毛片在线观看| 成人av在线播放网站| 午夜福利在线在线| 亚洲av电影不卡..在线观看| 宅男免费午夜| 国产成人a区在线观看| 国产亚洲欧美在线一区二区| 免费av观看视频| 亚洲av第一区精品v没综合| 少妇高潮的动态图| 男插女下体视频免费在线播放| 国产一级毛片七仙女欲春2| 日韩有码中文字幕| 国产野战对白在线观看| 亚洲avbb在线观看| 国产精品免费一区二区三区在线| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 亚洲无线在线观看| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看| 最近最新中文字幕大全免费视频| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 嫩草影院入口| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 久久久久性生活片| 啦啦啦免费观看视频1| 特大巨黑吊av在线直播| 91麻豆精品激情在线观看国产| 免费在线观看日本一区| 叶爱在线成人免费视频播放| 成人一区二区视频在线观看| 黄色视频,在线免费观看| 一个人看视频在线观看www免费 | 老熟妇仑乱视频hdxx| 国产亚洲欧美98| 热99在线观看视频| www.熟女人妻精品国产| 国产精品免费一区二区三区在线| 免费观看精品视频网站| 日本免费a在线| 中文字幕av在线有码专区| 超碰av人人做人人爽久久 | 久久久精品欧美日韩精品| 日韩国内少妇激情av| 搡老妇女老女人老熟妇| 中文亚洲av片在线观看爽| 99精品久久久久人妻精品| 好男人电影高清在线观看| 国产单亲对白刺激| 国产私拍福利视频在线观看| 国产探花在线观看一区二区| 午夜亚洲福利在线播放| 九九在线视频观看精品| x7x7x7水蜜桃| avwww免费| 99热这里只有是精品50| 久久久精品欧美日韩精品| 免费无遮挡裸体视频| 好男人在线观看高清免费视频| 日本五十路高清| 亚洲国产精品久久男人天堂| 变态另类丝袜制服| 少妇熟女aⅴ在线视频| 免费观看的影片在线观看| 亚洲 国产 在线| 国产精品久久久久久久久免 | 亚洲av日韩精品久久久久久密| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 久久久久国内视频| 成人国产一区最新在线观看| 亚洲不卡免费看| 少妇的逼好多水| 欧美+日韩+精品| 久久久久九九精品影院| 欧美+亚洲+日韩+国产| 婷婷丁香在线五月| 长腿黑丝高跟| 亚洲最大成人中文| 1024手机看黄色片| 丁香欧美五月| 免费观看精品视频网站| 最近最新中文字幕大全免费视频| 人妻夜夜爽99麻豆av| 国产精品亚洲av一区麻豆| 丰满的人妻完整版| 99久久精品一区二区三区| 两个人视频免费观看高清| 国产一区二区三区视频了| 欧美中文日本在线观看视频| 88av欧美| 又黄又粗又硬又大视频| 嫁个100分男人电影在线观看| 日本五十路高清| 亚洲天堂国产精品一区在线| av在线天堂中文字幕| 亚洲专区国产一区二区| x7x7x7水蜜桃| 国产精品一及| 国产伦一二天堂av在线观看| 男插女下体视频免费在线播放| 男女午夜视频在线观看| 黑人欧美特级aaaaaa片| 欧美一区二区亚洲| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 首页视频小说图片口味搜索| 男女床上黄色一级片免费看| 亚洲最大成人中文| 99精品久久久久人妻精品| 一级a爱片免费观看的视频| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 超碰av人人做人人爽久久 | 欧美成人性av电影在线观看| 日本黄大片高清| 夜夜夜夜夜久久久久| 99热只有精品国产| 日本熟妇午夜| 十八禁人妻一区二区| 神马国产精品三级电影在线观看| 中文在线观看免费www的网站| 欧美性感艳星| 成人特级黄色片久久久久久久| 女人被狂操c到高潮| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 免费看光身美女| 久久久色成人| 午夜a级毛片| 成人精品一区二区免费| 久久久久国内视频| 无遮挡黄片免费观看| 国产 一区 欧美 日韩| 精品久久久久久久毛片微露脸| 少妇高潮的动态图| 少妇人妻精品综合一区二区 | 国产成人系列免费观看| 最新美女视频免费是黄的| 中文字幕熟女人妻在线| 手机成人av网站| 操出白浆在线播放| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 国产探花在线观看一区二区| 亚洲av第一区精品v没综合| 动漫黄色视频在线观看| 免费在线观看亚洲国产| 岛国视频午夜一区免费看| 国内精品一区二区在线观看| 热99re8久久精品国产| 国产精品,欧美在线| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| tocl精华| 亚洲美女视频黄频| 欧美乱码精品一区二区三区| 亚洲五月婷婷丁香| 国产一区二区在线观看日韩 | 日韩欧美一区二区三区在线观看| 真人做人爱边吃奶动态| 午夜福利在线观看吧| 99国产极品粉嫩在线观看| 日本一本二区三区精品| 久久久久久久精品吃奶| 大型黄色视频在线免费观看| 中文在线观看免费www的网站| 日本免费a在线| 精品电影一区二区在线| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 午夜亚洲福利在线播放| 精品电影一区二区在线| 国产 一区 欧美 日韩| 最近最新中文字幕大全免费视频| 97碰自拍视频| 精品一区二区三区av网在线观看| 欧美成人性av电影在线观看| 波多野结衣高清无吗| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 亚洲七黄色美女视频| 亚洲av成人不卡在线观看播放网|