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    膜分離蠶豆蛋白酶解產(chǎn)物的理化性質(zhì)及生物活性

    2022-07-01 06:20:18鄧永蓉韓麗娟楊希娟代云禮
    中國油脂 2022年6期
    關(guān)鍵詞:蛋白酶解膜分離蠶豆

    鄧永蓉,韓麗娟,2,楊希娟,2,黨 斌,2,周 雯,張 雪,代云禮

    (1.青海大學(xué) 農(nóng)牧學(xué)院,西寧 810016; 2.青海省農(nóng)林科學(xué)院 青海省青藏高原農(nóng)產(chǎn)品加工重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,西寧 810016)

    蠶豆(ViciafabaL.)又名胡豆、佛豆、羅漢豆等,作為一種可食性資源食用歷史悠久。我國地域遼闊,種植蠶豆品種多、范圍廣,主要分布于四川、云南、湖南、湖北、青海等省,是世界上蠶豆種植大國之一[1]。由于青海種植的蠶豆品質(zhì)優(yōu)、無蟲害,深受市場歡迎[2]。

    蠶豆的蛋白質(zhì)含量為25%~30%,是制作低脂高蛋白食品的理想原料[3]。目前國內(nèi)對蠶豆蛋白的研究主要集中在蛋白質(zhì)的提取、蠶豆蛋白酶解多肽的制備及工藝優(yōu)化方面[4-6],對于不同分子質(zhì)量蠶豆蛋白酶解產(chǎn)物的分離及生物活性研究較少。蠶豆蛋白酶解產(chǎn)物具有易吸收[4]、降膽固醇[7]、抗氧化[8-9]、抗菌[10]、降血壓[11]、抗糖尿病等作用,其分離純化有多種方法,其中膜分離原理簡單、操作方便,無化學(xué)污染[12],且可以將酶解產(chǎn)物分離成不同分子質(zhì)量的組分,從而可以進(jìn)一步研究各組分的理化性質(zhì)及生物活性,對酶解產(chǎn)物研究開發(fā)有應(yīng)用價(jià)值[13]。如:黃文凱[14]采用膜分離富集具有免疫活性的大豆肽;吳紅洋等[15]使用超濾制備的花椒籽蛋白降血壓肽ACE抑制率得到提高。

    本課題組前期研究表明,蠶豆蛋白經(jīng)不同蛋白酶處理后氨基酸的種類和含量有所增加,且酶解產(chǎn)物相對于蠶豆蛋白本身具有更高的體外抗氧化活性,在此基礎(chǔ)上,本文利用不同蛋白酶酶解蠶豆蛋白,篩選出兩種最優(yōu)的酶進(jìn)行復(fù)合酶解,再采用膜分離技術(shù)分級分離蠶豆蛋白酶解產(chǎn)物,進(jìn)一步研究酶解產(chǎn)物的抗氧化活性及α-葡萄糖苷酶抑制活性,為蠶豆的精深加工奠定理論基礎(chǔ),對深層次開發(fā)蠶豆蛋白有一定的實(shí)際應(yīng)用意義。

    1 材料與方法

    1.1 試驗(yàn)材料

    1.1.1 原料與試劑

    新鮮蠶豆,采集于青海大通;菠蘿蛋白酶(300 U/mg)、木瓜蛋白酶(800 U/mg)、胃蛋白酶(10 000 U/g)、胰蛋白酶(250 U/mg),福州飛凈生物科技有限公司;標(biāo)準(zhǔn)牛血清白蛋白,南京都萊生物科技有限公司;VC,南京奧多福尼生物科技有限公司;DPPH(1,1-二苯基-2-苦肼基自由基)、α-葡萄糖苷酶,北京索萊寶科技有限公司;ABTS(2,2-聯(lián)氮基雙(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二銨鹽,梯希愛化成工業(yè)發(fā)展有限公司;過硫酸鉀、碳酸鈉、氫氧化鈉、濃鹽酸、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀、無水乙醇、三氯乙酸等均為分析純,天津市河?xùn)|區(qū)紅巖試劑廠。

    1.1.2 儀器與設(shè)備

    HHS-4S電子恒溫不銹鋼水浴鍋,上海儀器紗篩廠;JA1003電子天平,上海良平儀器儀表有限公司;DC-350高速多功能粉碎機(jī),浙江武義鼎藏日用金屬制品廠;pHS-3C實(shí)驗(yàn)室pH計(jì),上海佑科儀器儀表有限公司;UV-2600紫外可見分光光度計(jì),島津企業(yè)管理有限公司;LR10M大容量冷凍離心機(jī),湖南赫西儀器裝備有限公司;GS55-9冷凍干燥機(jī),基因有限公司;K9840自動凱氏定氮儀,山東海能科學(xué)儀器有限公司;FlowMem-0005-PN40高壓平板膜小試設(shè)備,廈門福美科技有限公司。

    1.2 試驗(yàn)方法

    1.2.1 蠶豆蛋白的提取

    參考文獻(xiàn)[4,16]對蠶豆蛋白進(jìn)行提取,具體提取工藝為:新鮮蠶豆→去皮→冷凍干燥→粉碎過篩→堿溶(0.5 mol/L NaOH調(diào)節(jié)pH至8.0,50℃浸提1 h)→離心(3 000 r/min,20 min)→酸沉(1 mol/L HCl調(diào)節(jié)pH至4.8)→離心(3 000 r/min,20 min)→沉淀冷凍干燥→蠶豆蛋白。

    1.2.2 蠶豆蛋白酶解產(chǎn)物的制備

    參考文獻(xiàn)[4-5,17],稱取4 g蠶豆蛋白配制成質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%的溶液,90℃預(yù)處理10 min,調(diào)節(jié)pH至適宜的酶解環(huán)境,分別加入0.08 g胃蛋白酶、胰蛋白酶、菠蘿蛋白酶、木瓜蛋白酶或0.08 g胃蛋白酶+0.08 g胰蛋白酶、0.08 g菠蘿蛋白酶+0.08 g木瓜蛋白酶進(jìn)行酶解(各酶酶解條件見表1),酶解結(jié)束后取出于90℃滅酶10 min終止反應(yīng),冷卻后測定反應(yīng)體系的pH,并用0.2 mol/L NaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液調(diào)節(jié)至酶解前體系的pH,并記錄NaOH的消耗體積[18]。

    表1 蛋白酶酶解條件

    將菠蘿蛋白酶+木瓜蛋白酶酶解液于3 000 r/min離心20 min后倒出上清液。將上清液裝入透析袋脫鹽48 h,冷凍干燥后置于-80℃?zhèn)溆谩?/p>

    1.2.3 水解度及多肽得率的測定

    1.2.3.1 水解度(DH)的測定

    參考文獻(xiàn)[5]采用pH-stat法測定蠶豆蛋白的水解度。計(jì)算公式如下:

    (1)

    式中:HD為水解度;B為NaOH的消耗體積,mL;Nb為NaOH濃度,mol/L;M為蛋白質(zhì)的質(zhì)量,g;htot為蛋白質(zhì)中肽鍵總數(shù),mmol/g,本試驗(yàn)取7.75;a為蠶豆蛋白氨基的平均解離度,本試驗(yàn)取0.89。

    1.2.3.2 多肽得率的測定

    參考文獻(xiàn)[19-20],采用雙縮脲法制作標(biāo)準(zhǔn)曲線,以吸光值(y)與牛血清白蛋白質(zhì)量濃度(x)進(jìn)行線性回歸,得到回歸方程y=0.059x+0.344 8,R2=0.999。根據(jù)曲線計(jì)算得出樣品溶液中的多肽質(zhì)量濃度,按下式計(jì)算多肽得率(Y)。

    Y=cV/m×100%

    (2)

    式中:c為酶解液多肽質(zhì)量濃度;V為酶解液體積;m為蠶豆蛋白質(zhì)量。

    1.2.4 蠶豆蛋白酶解產(chǎn)物的分離

    參考文獻(xiàn)[15]并作改動,取冷凍干燥后的雙酶酶解產(chǎn)物,用超純水配制成質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%的蠶豆蛋白酶解液,于4 000 r/min離心20 min后取上清液,嚴(yán)格按照膜分離設(shè)備的操作要求,將上清液分別經(jīng)過1、3、5、10 kDa濾膜分離,得到5個(gè)不同分子質(zhì)量的酶解產(chǎn)物組分,再經(jīng)過RO膜處理得到不同分子質(zhì)量酶解產(chǎn)物組分的濃縮液,分別為BBPHs-Ⅰ(<1 kDa)、BBPHs-Ⅱ(1~3 kDa)、BBPHs-Ⅲ(3~5 kDa)、BBPHs-Ⅳ(5~10 kDa)、BBPHs-Ⅴ(>10 kDa),冷凍干燥后于-80℃保存,計(jì)算膜分離后各組分在酶解產(chǎn)物中所占比例。

    參照GB 5009.5—2016采用凱氏定氮法進(jìn)行蛋白質(zhì)含量測定。

    1.2.6 氨基酸含量測定

    按GB/T 5009.124—2003采用氨基酸自動分析儀測定未膜分離酶解產(chǎn)物與膜分離后的不同分子質(zhì)量組分的氨基酸含量。

    1.2.7 紫外光譜分析

    準(zhǔn)備0.2 mg/mL未膜分離與膜分離酶解產(chǎn)物溶液,使用紫外可見分光光度計(jì)在200~800 nm范圍內(nèi)掃描得到樣品的紫外可見光譜。

    1.2.8 紅外光譜分析

    取2 mg未膜分離與膜分離后的酶解產(chǎn)物,與0.2 g KBr粉末混合壓片,在室溫下使用紅外分光光度計(jì)掃描記錄樣品的紅外光譜,掃描范圍為500~4 000 cm-1。

    異化勞動雖然開啟了人的本質(zhì)力量,但它卻使單個(gè)的人變得愚蠢片面,把自身和自然當(dāng)作生活的手段,“一切肉體的和精神的感覺都被這一切感覺的單純異化即擁有的感覺所代替。”[1]85也就是說只有我們在使用一個(gè)東西的時(shí)候,它才被我們擁有,那么人將從內(nèi)心生出一種極度的匱乏感,只要他還沒有得到過所有的東西。人的勞動的對象化創(chuàng)造著人最全面的本質(zhì),但同時(shí)物對人的控制也使人成為最徹底的奴隸。當(dāng)這種對象化達(dá)到頂峰的時(shí)候,未來社會將具備代替它的全部材料,即“具有豐富的、全面而深刻的感覺的人”[1]88。異化勞動最終會被自身的發(fā)展所否定。

    1.2.9 蠶豆蛋白酶解產(chǎn)物抗氧化活性測定

    1.2.9.1 蠶豆蛋白酶解產(chǎn)物ABTS自由基清除能力測定

    將7 mmol/L ABTS溶液與2.45 mmol/L過硫酸鉀溶液等體積混合。吸取1 mL ABTS混合溶液,用無水乙醇稀釋,使其在734 nm處的吸光值為0.7±0.1,以此為ABTS工作液。樣品用蒸餾水稀釋至質(zhì)量濃度分別為10.0、5.0、2.5、1.25、0.625 mg/mL的溶液;分別與ABTS工作液混合后,置于室溫反應(yīng)6 min,以無水乙醇為空白調(diào)零,于734 nm處測定吸光值,以相同質(zhì)量濃度的VC為陽性對照,按下式計(jì)算樣品對ABTS自由基的清除率(Y1)。

    Y1=(1-A′/A)×100%

    (3)

    式中:A為ABTS溶液吸光值;A′為ABTS溶液加入樣品后的吸光值。

    1.2.9.2 蠶豆蛋白酶解產(chǎn)物DPPH自由基清除能力測定

    樣品用無水乙醇稀釋至質(zhì)量濃度分別為10.0、5.0、2.5、1.25、0.625 mg/mL的溶液;將不同質(zhì)量濃度樣品與0.2 mmol/L DPPH試劑混合,室溫下反應(yīng)1 h,以無水乙醇為空白調(diào)零,于517 nm處測定其吸光值,以相同質(zhì)量濃度的VC為陽性對照,按下式計(jì)算樣品對DPPH自由基的清除率(Y2)。

    Y2=(1-A′/A)×100%

    (4)

    式中:A為DPPH溶液的吸光值;A′為DPPH溶液加入樣品后的吸光值。

    1.2.10 蠶豆蛋白酶解產(chǎn)物對α-葡萄糖苷酶活性的抑制能力測定

    將不同組分的酶解產(chǎn)物用蒸餾水配制成不同質(zhì)量濃度(32、16、8、4、2 mg/mL),參考文獻(xiàn)[21]并按表2各組反應(yīng)物體積加樣,測定空白組、陰性對照組、樣品空白組、樣品組在405 nm處的吸光值,以阿卡波糖為陽性對照,按公式(5)計(jì)算樣品對α-葡萄糖苷酶的抑制率(Y3)。

    表2 α-葡萄糖苷酶的活性抑制試驗(yàn)反應(yīng)體系

    (5)

    式中:A1為樣品組吸光值;A2為樣品空白組吸光值;A3為陰性對照組吸光值;A4為空白組吸光值。

    1.2.11 數(shù)據(jù)處理

    2 結(jié)果與討論

    2.1 蛋白酶水解能力的比較(見圖1)

    注:A.菠蘿蛋白酶+木瓜蛋白酶;B.胃蛋白酶+胰蛋白酶;C.菠蘿蛋白酶;D.胃蛋白酶;E.木瓜蛋白酶;F.胰蛋白酶;G.未處理組。與未處理比較,*p<0.05,**p<0.01

    水解度(DH)是判斷酶水解能力的重要指標(biāo)。由圖1可知,與未酶解比較,菠蘿蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶處理的蠶豆蛋白水解度及多肽得率都極顯著上升(p<0.01)。其中,菠蘿蛋白酶酶解產(chǎn)物的水解度高達(dá)(9.61±0.19)%,木瓜蛋白酶酶解產(chǎn)物的多肽得率高達(dá)(1.83±0.01)%。通過復(fù)合酶解試驗(yàn)得出,菠蘿蛋白酶與木瓜蛋白酶復(fù)合酶解蠶豆蛋白的水解度最高,且所得酶解產(chǎn)物的多肽得率高達(dá)(2.18±0.01)%,與胃、胰蛋白酶復(fù)合酶解相比有極顯著差異(p<0.01)。因此,綜合考慮選用菠蘿蛋白酶和木瓜蛋白酶作為雙酶酶解最優(yōu)水解酶。

    2.2 膜分離后蠶豆蛋白酶解產(chǎn)物各組分所占比例

    取5 g蠶豆蛋白酶解產(chǎn)物按1.2.4方法進(jìn)行分離,得到的5個(gè)不同分子質(zhì)量的組分所占比例見表3。

    表3 膜分離后蠶豆蛋白酶解產(chǎn)物各組分所占比例

    由表3可知,BBPHs-Ⅰ(<1 kDa)、BBPHs-Ⅱ(1~3 kDa)、BBPHs-Ⅲ(3~5 kDa)、BBPHs-Ⅳ(5~10 kDa)、BBPHs-Ⅴ(>10 kDa)組分所占比例分別為7.6%、15.1%、17.9%、23.2%、36.2%。

    2.3 氨基酸含量

    未膜分離與經(jīng)膜分離所得不同分子質(zhì)量蠶豆蛋白酶解產(chǎn)物組分的氨基酸含量見表4。

    表4 未膜分離與膜分離后不同分子質(zhì)量蠶豆蛋白酶解產(chǎn)物組分的氨基酸含量 %

    由表4可看出,蠶豆蛋白酶解產(chǎn)物共檢出17種氨基酸,其中7種必需氨基酸。經(jīng)膜分離后10 kDa以下的蠶豆蛋白酶解產(chǎn)物的總氨基酸和必需氨基酸含量均增加。5種膜分離蠶豆蛋白酶解產(chǎn)物中,BBPHs-Ⅲ的總氨基酸、必需氨基酸、疏水氨基酸、芳香氨基酸含量均為最高,分別為65.304%、19.222%、20.762%、8.769%,明顯高于未膜分離的酶解產(chǎn)物;6種蠶豆蛋白酶解產(chǎn)物中均含有Phe、Ile、Leu、Val、Pro等疏水氨基酸,說明蠶豆蛋白酶解產(chǎn)物有較好的抗氧化活性;而對于Tyr、Phe等芳香氨基酸,BBPHs-Ⅱ中含量較少,為3.246%,BBPHs-Ⅲ中含量最高,為8.769%,芳香氨基酸可通過電子供體作用將自由基轉(zhuǎn)化為穩(wěn)定的分子,因此推斷BBPHs-Ⅲ有較高的生物活性。

    2.4 紫外光譜分析

    圖2為膜分離前后蠶豆蛋白酶解產(chǎn)物的紫外光譜。紫外吸收光譜法可以根據(jù)最大吸收峰的位置及強(qiáng)度判斷其共軛體系的類型。

    注:285 nm波長處紫外光譜由下到上依次為未膜分離、BBPHs-Ⅰ、BBPHs-Ⅱ、BBPHs-Ⅲ、BBPHs-Ⅳ、BBPHs-Ⅴ

    由圖2可看出,在200~800 nm波長范圍內(nèi),6種蠶豆蛋白酶解產(chǎn)物的紫外光譜在285 nm處都有最高吸收峰,判斷是π→π*躍遷所引起。而膜分離后酶解產(chǎn)物與未膜分離相比吸收強(qiáng)度有不同程度的升高,可能是膜分離后酶解產(chǎn)物的多肽鏈側(cè)鏈發(fā)生變化導(dǎo)致紫外吸收強(qiáng)度發(fā)生了變化。

    2.5 紅外光譜分析

    圖3為膜分離前后蠶豆蛋白酶解產(chǎn)物的紅外光譜。紅外吸收峰與化合物的官能團(tuán)有關(guān),可用于分子結(jié)構(gòu)特征分析[22]。酰胺Ⅰ帶波數(shù)范圍為1 600~1 700 cm-1,可以體現(xiàn)蛋白質(zhì)的α-螺旋、β-折疊、β-轉(zhuǎn)角和無規(guī)卷曲等二級結(jié)構(gòu)。

    圖3 膜分離前后蠶豆蛋白酶解產(chǎn)物的紅外光譜

    2.6 膜分離前后蠶豆蛋白酶解產(chǎn)物的抗氧化活性

    2.6.1 對ABTS自由基的清除能力(見圖4)

    由圖4可看出,6種蠶豆蛋白酶解產(chǎn)物具有一定的ABTS自由基清除能力。在0.625~5.0 mg/mL質(zhì)量濃度范圍內(nèi),5種膜分離組分中BBPHs-Ⅳ表現(xiàn)出較高的ABTS自由基清除能力,均大于未膜分離的;此外,BBPHs-Ⅱ和BBPHs-Ⅲ的ABTS自由基清除能力趨勢相近。當(dāng)質(zhì)量濃度為10 mg/mL時(shí),BBPHs-Ⅳ對ABTS自由基的清除率達(dá)到(27.89±0.01)%,與BBPHs-Ⅱ和BBPHs-Ⅲ相比差異極顯著(p<0.01),相較于BBPHs-Ⅴ組分其ABTS自由基清除率高出6.35百分點(diǎn)(p<0.01)。說明5種膜分離組分中BBPHs-Ⅳ的ABTS自由基清除能力強(qiáng)且具有穩(wěn)定性,但質(zhì)量濃度為10 mg/mL時(shí)低于未膜分離組分的ABTS自由基清除率,可能與未膜分離酶解產(chǎn)物中氨基酸組成有關(guān)。

    注:*p<0.05,**p<0.01,與未膜分離酶解產(chǎn)物比較。下同

    2.6.2 對DPPH自由基的清除能力(見圖5)

    圖5 蠶豆蛋白酶解產(chǎn)物的DPPH自由基清除活性

    由圖5可看出,與膜分離前比較,蠶豆蛋白酶解產(chǎn)物經(jīng)過膜分離處理后DPPH自由基清除率有所降低(除BBPHs-Ⅱ),但各組分仍表現(xiàn)出良好的DPPH自由基清除能力。5種膜分離組分中,BBPHs-Ⅱ 組分表現(xiàn)較高的DPPH自由基清除能力,而BBPHs-Ⅴ的DPPH自由基清除率最低;當(dāng)質(zhì)量濃度為10 mg/mL時(shí),BBPHs-Ⅱ組分DPPH自由基清除率為(57.70±0.00)%。研究表明,氨基酸的疏水性與酶解產(chǎn)物抗氧化活性密切相關(guān),BBPHs-Ⅰ、BBPHs-Ⅱ、BBPHs-Ⅲ、BBPHs-Ⅳ中疏水氨基酸含量較高,因此分子質(zhì)量小于10 kDa的膜分離蠶豆蛋白酶解產(chǎn)物具有較好DPPH自由基清除能力,說明小分子質(zhì)量的酶解產(chǎn)物清除自由基能力的優(yōu)勢值得進(jìn)一步研究。

    2.7 膜分離前后蠶豆蛋白酶解產(chǎn)物對α-葡萄糖苷酶活性的抑制能力

    未膜分離與膜分離后的蠶豆蛋白酶解產(chǎn)物對α-葡萄糖苷酶活性抑制結(jié)果如圖6所示。

    圖6 蠶豆蛋白酶解產(chǎn)物對α-葡萄糖苷酶活性的抑制率

    由圖6可看出,蠶豆蛋白酶解產(chǎn)物對α-葡萄糖苷酶有一定的抑制作用,且5個(gè)膜分離組分在質(zhì)量濃度4~16 mg/mL范圍內(nèi)的α-葡萄糖苷酶抑制率均顯著高于未分離酶解產(chǎn)物。在2~32 mg/mL質(zhì)量濃度范圍內(nèi),蠶豆蛋白酶解產(chǎn)物的α-葡萄糖苷酶抑制率呈劑量依賴性。在2~4 mg/mL質(zhì)量濃度下,BBPHs-Ⅱ的α-葡萄糖苷酶抑制率高于其他組分。當(dāng)質(zhì)量濃度為8~32 mg/mL時(shí),BBPHs-Ⅲ的α-葡萄糖苷酶抑制率最高,且在32 mg/mL時(shí)可達(dá)(86.56±1.23)%,與阿卡波糖的抑制率(91.38±0.931)%相近,相比于未分離酶解產(chǎn)物增長了26.83百分點(diǎn);32 mg/mL質(zhì)量濃度下BBPHs-Ⅳ的抑制率略高于BBPHs-Ⅱ的,為(77.76±0.38)%。在質(zhì)量濃度2、32 mg/mL時(shí),BBPHs-Ⅰ組分的α-葡萄糖苷酶抑制率與未膜分離相比差異均不顯著。在2 mg/mL時(shí),BBPHs-Ⅴ的α-葡萄糖苷酶抑制率顯著低于未膜分離蠶豆蛋白酶解物的。綜上,5個(gè)膜分離組分中,BBPHs-Ⅱ、BBPHs-Ⅲ、BBPHs-Ⅳ組分具有較好的α-葡萄糖苷酶抑制效果,可能與此3個(gè)組分含有較多的Ala、Val、Met、Ile、Pro等疏水氨基酸有關(guān),其機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。綜上所述,1~10 kDa的膜分離蠶豆蛋白酶解產(chǎn)物可能是治療糖尿病的良好藥物制劑。

    3 結(jié) 論

    通過比較酶解蠶豆蛋白的水解度和多肽得率,選擇菠蘿蛋白酶和木瓜蛋白酶為復(fù)合酶對蠶豆蛋白進(jìn)行酶解,通過膜分離得到不同分子質(zhì)量的酶解產(chǎn)物組分并評價(jià)其生物活性。結(jié)果表明:膜分離后得到BBPHs-Ⅰ(<1 kDa,7.6%)、BBPHs-Ⅱ(1~3 kDa,15.1%)、BBPHs-Ⅲ(3~5 kDa,17.9%)、BBPHs-Ⅳ(5~10 kDa,23.2%)、BBPHs-Ⅴ(>10 kDa,36.2%)5個(gè)不同分子質(zhì)量組分。通過氨基酸含量分析,膜分離后10 kDa以下的蠶豆蛋白酶解產(chǎn)物的總氨基酸相對于未膜分離酶解產(chǎn)物有所增加,且BBPHs-Ⅱ、BBPHs-Ⅲ、BBPHs-Ⅳ組分的疏水氨基酸含量較高。在質(zhì)量濃度為10 mg/mL時(shí),BBPHs-Ⅳ(5~10 kDa)有較高的ABTS自由基清除能力,清除率達(dá)到(27.89±0.01)%,BBPHs-Ⅱ(1~3 kDa)有較高的DPPH自由基清除能力,清除率達(dá)到(57.70±0.00)%;在2~32 mg/mL質(zhì)量濃度下,1~10 kDa酶解產(chǎn)物的α-葡萄糖苷酶抑制效果良好。因此,利用酶法水解蠶豆蛋白可以提高其生物活性,小分子質(zhì)量的蠶豆蛋白酶解產(chǎn)物有更顯著的α-葡萄糖苷酶抑制作用,可能是預(yù)防有關(guān)氧化疾病的良好藥物制劑或功能性食品添加劑,值得進(jìn)一步深入研究。

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