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      TSLP、Bach2及IL-9在嗜酸性粒細(xì)胞浸潤鼻息肉中的表達(dá)及臨床意義

      2022-06-21 03:41:32魏鑫鑫李曉玲黃維平尹中普
      分子診斷與治療雜志 2022年5期
      關(guān)鍵詞:鼻息肉陽性細(xì)胞陽性率

      魏鑫鑫 李曉玲 黃維平 尹中普

      鼻息肉(Nasal polyps,NP)是一種常見的鼻腔或黏膜組織的良性增生,可形成于鼻竇或鼻腔粘膜的任何部位中,多見于慢性鼻竇炎鼻息肉(Chronic rhinosinusitis with nasal polyps,CRSwNPs)[1]。既往研究顯示,CRSwNPs 的主要特征是以嗜酸性粒細(xì)胞浸潤增多為主,且細(xì)胞因子在其發(fā)病機制中發(fā)揮著重大作用[2-3]。胸腺基質(zhì)淋巴細(xì)胞生成素(Thymic stromal lymphopoietin,TSLP)是一種類似IL-7 的細(xì)胞因子,能介導(dǎo)輔助性T 細(xì)胞2(T helper 2 cell,Th2)炎性反應(yīng),促進(jìn)Th2 的產(chǎn)生。BTB 與CNC 同源基因2(BTB and CNC homology 2,Bach2)是一類大分子的轉(zhuǎn)錄抑制因子,定位于人的6 號染色體長臂中,能調(diào)節(jié)和維持Th2 免疫反應(yīng),促進(jìn)Treg 細(xì)胞的分化,有效避免致死性的炎癥反應(yīng)。白細(xì)胞介素-9(Interleukin-9,IL-9)是一種促炎癥因子,在微生物感染、免疫應(yīng)答、腫瘤發(fā)生等病理過程中發(fā)揮著重要作用。本研究就TSLP、Bach2、IL-9 在嗜酸性粒細(xì)胞浸潤鼻息肉(Eosinophilic infiltrating nasal polyps,Eos NPs)中的表達(dá)及臨床意義進(jìn)行探討,現(xiàn)研究報告如下。

      1 資料與方法

      1.1 一般資料

      收集2017年2月至2019年2月于南陽市中心醫(yī)院行鼻內(nèi)鏡手術(shù)的85 例Eos NPs 患者(共85 份下鼻甲組織)設(shè)為實驗組,其中男49 例,女36 例,平均年齡(43.59±9.26)歲。根據(jù)Eos NPs 分期標(biāo)準(zhǔn)[4]分為:Ⅱ型2 期37 例,Ⅱ型3 期48 例。納入標(biāo)準(zhǔn):①Eos NPs 均符合《中國慢性鼻竇炎診斷和治療指南》標(biāo)準(zhǔn)[5];②所有入組患者均無鼻部手術(shù)史;③術(shù)前1 個月未用抗生素、糖皮質(zhì)激素等藥物;④慢性鼻竇炎伴多發(fā)性鼻息肉。排除標(biāo)準(zhǔn):①精神病史者;②過敏性鼻炎患者;③合并其他惡性腫瘤患者。

      收集同一時期在本院行單純鼻中隔矯正術(shù)的52 例患者(共52 份下鼻甲組織)設(shè)為對照組。其中男28 例,女24 例,平均年齡(43.07±8.59)歲。兩組患者基本資料比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。本研究經(jīng)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)通過,受試者均簽署知情同意書。

      1.2 實驗方法

      1.2.1 TSLP、Bach2 檢測方法

      采用SP 免疫組化染色檢測TSLP、Bach2 表達(dá)情況。每例組織蠟塊均切片4 張,厚度約4 μm。所有標(biāo)本均經(jīng)甲醛溶液固定,石蠟包埋、載玻片泡酸、高溫滅菌及多聚賴氨酸涂片等處理。DAB 顯色劑顯色,蘇木精復(fù)染,乙醇脫水,二甲苯透明,中性樹膠封固。免疫組織化學(xué)染色試劑盒TSLP、Bach2 兔多克隆抗體采購自上海優(yōu)寧維生物科技公司,嚴(yán)格按照試劑盒說明進(jìn)行操作。

      1.2.2 TSLP、Bach2 判定標(biāo)準(zhǔn)[6]

      TSLP 主要表達(dá)于粘膜上皮細(xì)胞和間質(zhì)炎癥細(xì)胞的細(xì)胞漿或細(xì)胞核上,其陽性表達(dá)組織染色較深,呈棕黃色或者棕褐色。Bach2 主要表達(dá)于粘膜上皮層細(xì)胞核內(nèi),其陽性表達(dá)組織染色較淺,且染色顆粒較少。每個標(biāo)本隨機選取5 個高倍(×400)視野,結(jié)果由兩位高年資醫(yī)師采用雙盲法閱片得到。以細(xì)胞漿或細(xì)胞核中出現(xiàn)黃色顆粒者設(shè)為陽性。根據(jù)陽性細(xì)胞的百分比及顯色程度分級:①陽性細(xì)胞百分比:無細(xì)胞顯色者為0 分;陽性細(xì)胞的百分比1%~25%時為1 分;陽性細(xì)胞的百分比26%~50%時為2 分;陽性細(xì)胞的百分比>50%時為3 分。②顯色程度:無著色或顯色不清楚為0 分;淡黃色者為1 分;棕黃色者為2 分;黃褐色或棕褐色為3 分。將兩種評分綜合作為切片的最終評分,>3 分為陽性。

      1.2.3 IL-9 檢測方法

      采集兩組患者空腹靜脈血樣10 mL,常溫靜置10 min 后,經(jīng)3 500 r/min(r=10 cm)離心10 min 處理,分離血清置于-20℃冰箱內(nèi)待檢。采用ELISA檢測血清中IL-9 水平,ELISA 試劑盒采購自美國Elabscience 公司,嚴(yán)格按照試劑盒說明進(jìn)行操作。

      1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

      采用SPSS 21.0 統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析。計量資料以(±s)表示,采用t檢驗;計數(shù)資料以n(%)表示,采用χ2檢驗;相關(guān)性采用Pearson相關(guān)性分析;采用受試者工作特征曲線(Receiver operating c haracterist ic curve,ROC)評估診斷價值,計算曲線下面積(Area under curve,AUC),AUC 值越高,診斷價值越高,以P<0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

      2 結(jié)果

      2.1 兩組TSLP、Bach2、IL-9 表達(dá)情況比較

      實驗組TSLP 的陽性率及IL-9 水平均高于對照組,Bach2 的陽性率低于對照組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義P<0.05)。見表1、圖1。

      表1 兩組TSLP、Bach2、IL-9 表達(dá)情況比較[n(%),(±s)]Table 1 Comparison of the expression of TSLP,Bach2,and IL-9 between the two groups[n(%),(±s)]

      表1 兩組TSLP、Bach2、IL-9 表達(dá)情況比較[n(%),(±s)]Table 1 Comparison of the expression of TSLP,Bach2,and IL-9 between the two groups[n(%),(±s)]

      組別對照組實驗組t/χ2值P 值n 52 85 TSLP陽性11(21.15)72(84.71)54.567<0.001陰性41(78.85)13(15.29)Bach2陽性42(80.77)27(31.76)30.993<0.001陰性10(19.23)58(68.24)IL-9(pg/mL)3.58±0.26 6.97±1.19 20.211<0.001

      圖1 TSLP、Bach2 免疫組化染色圖(SP,×500)Figure 1 TSLP,Bach2 immunohistochemical dyeing map(SP,×500)

      2.2 不同分期Eos NPs 的TSLP、Bach2、IL-9 表達(dá)情況比較

      Ⅱ型2 期的TSLP 陽性率、IL-9 水平低于Ⅱ型3 期,Bach2 陽性率高于Ⅱ型3 期,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),見表2。

      表2 不同分期Eos NPs 的TSLP、Bach2、IL-9 表達(dá)情況比較[n(%),(±s)]Table 2 Comparison of TSLP,Bach2,and IL-9 expression of Eos NPs in different stages[n(%),(±s)]

      表2 不同分期Eos NPs 的TSLP、Bach2、IL-9 表達(dá)情況比較[n(%),(±s)]Table 2 Comparison of TSLP,Bach2,and IL-9 expression of Eos NPs in different stages[n(%),(±s)]

      類別Eos NPs 分型nⅡ型2 期Ⅱ型3 期37 48 TSLP陽性26(70.27)46(95.83)10.539<0.001陰性11(29.73)2(41.67)陰性16(43.24)42(87.50)t/χ2值P 值Bach2陽性21(56.76)6(12.50)18.881<0.001 IL-9(pg/mL)6.34±0.82 7.45±1.48 4.099<0.001

      2.3 三項指標(biāo)與不同分期Eos NPs 的相關(guān)性分析

      Pearson相關(guān)性顯示,TSLP、IL-9與Eos NPs分期呈正相關(guān)(R=0.625,P=0.036;R=0.893,P=0.027),Bach2與Eos NPs分期呈負(fù)相關(guān)(R=-0.875,P=0.027)。

      2.4 三項指標(biāo)對Eos NPs 患者的診斷價值

      聯(lián)合TSLP、Bach2、IL-9 檢測診斷Eos NPs 的靈敏度(0.945)、特異度(0.907)、AUC(0.926)均顯著高于單一指標(biāo)檢測(P<0.05)。見表3、圖2。

      圖2 ROC 曲線圖Figure 2 ROC curve

      表3 三項指標(biāo)對Eos NPs 患者的診斷價值Table 3 The diagnostic value of three indicators for Eos NPs patients

      3 討論

      Eos NPs 是慢性鼻竇炎伴鼻息肉的一種,在東亞發(fā)生率較低,但近年來相關(guān)研究數(shù)據(jù)顯示,亞洲Eos NPs 比例在未來仍有繼續(xù)增加的趨勢[7]。探討相關(guān)細(xì)胞因子在Eos NPs 中的表達(dá),對于Eos NPs的發(fā)生機制和診斷價值有著至關(guān)重要的意義。

      TSLP是一種主要來源于上皮細(xì)胞、肥大細(xì)胞的細(xì)胞因子,能夠促進(jìn)Th2型炎癥反應(yīng)的發(fā)生。TSLP與樹突狀細(xì)胞的受體結(jié)合,通過表達(dá)CD4+的T細(xì)胞,促進(jìn)白介素-4(Interleukin-4,IL-4)等因子的產(chǎn)生,增強Th2的免疫應(yīng)答作用[8]。IL-9作為一種炎性因子,可作用于多種炎癥細(xì)胞,參與氣道炎癥反應(yīng)[9]。Bach2主要表達(dá)于T細(xì)胞及B細(xì)胞中,近年研究顯示,Bach2可維持細(xì)胞免疫穩(wěn)態(tài),促進(jìn)Th2型免疫應(yīng)答[10]。本次研究結(jié)果顯示:實驗組TSLP的陽性率及IL-9水平均高于對照組,Bach2 的陽性率低于對照組,提示TSLP、Bach2、IL-9在CRSwNP發(fā)病過程中發(fā)揮重要作用,與張佩珊等[11]研究中Eos NPs患者IL-9、TSLP升高及吳君等[12]研究中Eos NPs患者Bach2低表達(dá)結(jié)果一致。

      研究發(fā)現(xiàn),IL-9 表達(dá)于人外周血中的嗜酸性粒細(xì)胞表面,參與過敏性疾病的炎癥反應(yīng),IL-9 水平升高可促進(jìn)機體全身和鼻腔局部的免疫炎癥反應(yīng),使各種炎癥細(xì)胞和炎癥因子向炎癥部位遷移,加重鼻腔局部組織損傷和粘膜重塑,促進(jìn)Eos NPs 的發(fā)展[13]。大量的細(xì)胞類型已經(jīng)被證明能夠在體內(nèi)和體外對TSLP 產(chǎn)生反應(yīng),如T 細(xì)胞被TSLP 刺激時可促進(jìn)CD4+T 細(xì)胞向Th2 細(xì)胞分化,從而促進(jìn)Th2 的免疫應(yīng)答作用[14]。吳君等[12]研究表明:Eos NPs 疾病發(fā)展中,Bach2基因可負(fù)向調(diào)節(jié)嗜酸性炎癥機制。氣道上皮細(xì)胞在接觸到病原體或過敏原后能夠產(chǎn)生眾多炎癥介質(zhì),在黏膜炎癥的發(fā)生中起著重要的作用。本次研究發(fā)現(xiàn):Ⅱ型2期的TSLP陽性率、IL-9水平低于Ⅱ型3期,Bach2陽性率高于Ⅱ型3期,與既往研究結(jié)果[15]一致,說明TSLP、Bach2、IL-9Eos NPs 患者疾病程度有關(guān)。疾病愈發(fā)嚴(yán)重,浸潤程度增多,TSLP、IL-9及Bach2在促進(jìn)Th2型炎癥反應(yīng)中均發(fā)揮重要作用,對NP的發(fā)展與病情進(jìn)展有著重要影響。

      Pearson相關(guān)性顯示,TSLP、IL-9 與Eos NPs 分期呈正相關(guān),Bach2 與CRSwNP 分期呈負(fù)相關(guān),與Sidwell 等[16]研究結(jié)果一致??梢婋S著Eos NPs 患者疾病嚴(yán)重程度的增加,TSLP 陽性率、IL-9 水平會逐漸升高,Bach2 陽性率逐漸下降。這一研究結(jié)果證實TSLP、Bach2、IL-9 均與Eos NPsP 患者病情進(jìn)展存在關(guān)聯(lián),臨床可通過檢測TSLP、Bach2、IL-9 評估Eos NPs 患者病變損害程度。進(jìn)一步繪制ROC 曲線結(jié)果顯示:聯(lián)合TSLP、Bach2、IL-9檢測診斷Eos NPs 的靈敏度、特異度、AUC 均顯著高于單一指標(biāo)檢測,表明三者聯(lián)合檢測對診斷CRSwNP 有重要臨床意義。

      綜上所述,TSLP、Bach2、IL-9 的表達(dá)水平與Eos NPs 疾病程度和浸潤程度有關(guān),聯(lián)合三者檢測對診斷Eos NPs、評估患者病情進(jìn)展有重大意義,可為臨床判斷提供新的理論依據(jù)。

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