不同條件儲存制備新鮮冰凍血漿對質(zhì)量的影響*

梁佩賢，招淑文，卓創(chuàng)近，溫麗玲，余卓麗

（廣東，佛山市中心血站，佛山，528000）

根據(jù)《全血及成分血質(zhì)量要求》（GB 18469?2012）新鮮冰凍血漿的制備需將采集后儲存于冷藏環(huán)境中的全血，最好在6?8 h 內(nèi)，但不超過18 h 將血漿分離出并速凍成固態(tài)［1］；然而，血液從采集到制備過程要控制在6?8 h 內(nèi)的話，需要在非正常上班時間內(nèi)完成制備，本血站以街頭采血為主，血液采集時間集中在下午和晚上，導(dǎo)致能在正常上班時間內(nèi)制備的新鮮冰凍血漿（Fresh Frozen Plasma，F(xiàn)FP） 約占制備總量的20%，約80%的FFP 是在非正常上班時間內(nèi)制備的，因此，能有效延長制備時間將會大大提高FFP 的制備效率。 本文通過實驗分析對不同條件儲存制備FFP的凝血因子Ⅷ（Factor Ⅷ，F(xiàn)Ⅷ）活性變化進(jìn)行分析。

1 材料與方法

1.1 血液的采集和分組使用帶旁路留樣系統(tǒng)的去白細(xì)胞采血袋采集40 名獻(xiàn)血者的全血，血液在采集后室溫放置，1 h 內(nèi)完成白細(xì)胞的過濾操作，并對血液進(jìn)行以下分組：A 組：儲存在20?24℃條件下，在儲存的8 h、12 h、24 h 在22℃條件下離心制備FFP；B 組：儲存在2?6℃條件下，在儲存的8 h、12 h、24 h 采用血液加溫儀復(fù)溫（37℃，2 min）后在22℃條件下離心制備FFP；C 組：儲存在2?6℃條件下（血袋垂直），在儲存的8 h、12 h 和24 h 在4℃條件下離心制備FFP；D 組，儲存在2?6℃條件下，在儲存的8 h、12 h 和24 h 血液經(jīng)充分混勻后在4℃條件下離心制備FFP。

1.2 方法

1.2.1 制備方法 新鮮冰凍血漿制備采用大容量低溫離心機(jī)，相對離心力4276 g，離心時間12 min，離心溫度根據(jù)實驗要求進(jìn)行調(diào)整（選擇4℃或者22℃）。

1.2.2 儀器與試劑CR7 大容量低溫離心機(jī)（日本HITCHI 公司）；SYSMEX CA?530 全自動血凝儀（日本SYSMEX CORPORATION 公 司）； 血液加溫儀Plasmatherm（德國Barkey）；因子Ⅷ活性測定試劑盒：SIEMENS Healthcare Diagnostics Products GmbH（批號：547679）。 所有檢測均為隨機(jī)工作人員操作，相關(guān)制備及檢測儀器均未按組別指定。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理運(yùn)用SPSS 19.0 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，不同組之間和不同儲存時間之間的比較采用重復(fù)測量方差分析和獨立樣本t檢驗，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 FFP 的FⅧ活性組內(nèi)不同制備時間的分析情況（表1，圖1）。

表1 FⅧ組內(nèi)因素的方差分析檢驗結(jié)果

圖1 凝血因子FⅧ活性與時間的關(guān)系

2.2 各組間FⅧ活性比較（表2，3，4）。

表2 各組不同儲存時間點制備FFP 的FⅧ（IU／mL）

2.3 比較各組制備的FFPFⅧ含量的合格情況。

表4 各組FⅧ檢測合格率（%）

3 討 論

新鮮冰凍血漿是臨床常用的一種血液制劑，幾乎含有所有正常水平的凝血因子，對預(yù)防和治療出血性疾病及凝血功能疾病起著非常重要的作用，主要用于失血過多、肝病或者血友病等具有凝血功能障礙患者的治療中，并取得較好的成效，國內(nèi)外對新鮮冰凍血漿的使用越來越廣泛［2］。 盡管絕大多數(shù)輸注新鮮冰凍血漿的患者不存在Ⅷ因子缺乏的現(xiàn)象，但是當(dāng)前新鮮冰凍血漿的質(zhì)量控制，基本上是基于凝血因子Ⅷ（FⅧ）活性的檢測，如歐盟委員會指南要求新鮮冰凍血漿的平均FⅧ水平高于0.7 IU／mL；英國指南要求75%的血漿中FⅧ高于0.7 IU／mL，而我國同樣要求75%受檢血漿中FⅧ高于0.7 IU／mL［3］。

本文對不同條件儲存、不同儲存時間制備FFP 的FⅧ活性進(jìn)行研究分析，同一組別不同儲存時間制備FFP 的FⅧ活性變量之間的差異有統(tǒng)計學(xué)意義，F(xiàn)Ⅷ活性隨著制備時間的延長而降低，但不同組別不同儲存時間制備FFP 的FⅧ活性變量之間的差異無統(tǒng)計學(xué)意義，并與文獻(xiàn)報道一致［4］，結(jié)果見表1。 本課題的研究有一定的局限性，如FFP 制備后沒有速凍和融解過程，直接進(jìn)行FⅧ活性的檢測，與常規(guī)抽檢的方式不同，因此也出現(xiàn)了與其他文獻(xiàn)報道結(jié)果不相符的情況［5］，需要我們做更深入的研究。

FⅧ在4℃保存1?3 d 后活性并不是下降50%，而是由于4℃時凝血因子Ⅷ被沉淀在紅細(xì)胞當(dāng)中，所以離心后檢測上清血漿，不能將部分凝血因子Ⅴ、Ⅷ檢出，所以誤認(rèn)為活性降低50%［6］。 本文對2?6℃條件下儲存的全血制備FFP 前是否進(jìn)行充分混勻?qū)FP制備質(zhì)量的影響進(jìn)行了分析，C 組是制備前沒有充分混勻血液，D 組是制備前充分混勻血液（即C 組和D組比較），兩者差異無統(tǒng)計學(xué)意義，見表2?1。 與文獻(xiàn)［7］報道結(jié)果不一致，這可能與我們儲存全血的容量有關(guān)。 枸櫞酸抗凝的全血在4℃下長期儲存會導(dǎo)致FⅧ和vWF 活性的顯著降低，通過在加工前對試管進(jìn)行再加熱，可以完全逆轉(zhuǎn)損失。 本文對2?6℃條件下儲存的全血制備FFP 前將全血放置在血液加溫儀中復(fù)溫（37℃，2 min）后再制備，并與未復(fù)溫制備的FFP 進(jìn)行比較（即B 組和C 組比較），兩者差異無統(tǒng)計學(xué)意義，見表2?1。

FFP 的FⅧ活性合格率≥75%時可認(rèn)為制備過程受控［8］，因此通過計算各組FⅧ活性的合格率來評估制備過程的有效性，結(jié)果見表3。 儲存8 h 和12 h 的各組制備FFP 的FⅧ活性合格率均為100%，儲存24 h 后各組制備FFP 的FⅧ活性合格率分別為A 組100%，B 組75%，C 組80%，D 組65%，從統(tǒng)計結(jié)果來看，儲存24 h 后D 組制備FFP 的FⅧ活性合格率不符合控制要求，與文獻(xiàn)報道結(jié)果一致［8］，儲存24 h 后A組、B 組和C 組制備FFP 的FⅧ活性合格率均≥75%，且A 組＞C 組＞B 組。 國外學(xué)者的研究認(rèn)為全血室溫過夜后進(jìn)行血液成分制備在工作流程上具有一定的合理性，可以解決采血點距離遠(yuǎn)及采血時間長以及采血不集中等問題；有利于降低細(xì)菌污染風(fēng)險，因為在此期間白細(xì)胞可以很好地吞噬細(xì)菌［9］，本課題組正在進(jìn)行全血室溫過夜對細(xì)菌污染風(fēng)險性的相關(guān)研究。筆者認(rèn)為將采集的全血室溫放置24 h 內(nèi)制備FFP，既可以延長FFP 的制備時間，也大大提高了FFP 的制備效率，但由于本課題研究的樣本量有限，因此還應(yīng)加大研究的樣本量，并結(jié)合全血室溫過夜對細(xì)菌污染風(fēng)險性的相關(guān)研究結(jié)果，對全血室溫放置24 h 內(nèi)制備FFP 的制備流程加以驗證［10］。

表3 相同儲存時間的不同分組之間比較

綜上，本文研究結(jié)果表明不同條件儲存制備FFP的FⅧ活性隨著制備時間的延長而下降，全血儲存24 h 內(nèi)制備FFP 的合格率室溫條件（20?24℃）優(yōu)于低溫條件（2?6℃），因此，在滿足新鮮冰凍血漿制備質(zhì)量的前提下，進(jìn)行血液的采集流程和血液制備流程的優(yōu)化將更有利于提升FFP 的制備效率。