植物油基魚(yú)罐頭中礦物油污染物高靈敏檢測(cè)方法的建立

楊夢(mèng)奇，劉玲玲，李冰寧，武彥文

（北京市科學(xué)技術(shù)研究院分析測(cè)試研究所（北京市理化分析測(cè)試中心），北京市食品安全測(cè)試工程技術(shù)研究中心，北京 100094）

礦物油是碳數(shù)范圍C10～C50的各種烴類化合物的總稱，可分為飽和烴礦物油（mineral oil saturated hydrocarbons, MOSH）和芳香烴礦物油（mineral oil aromatic hydrocarbons, MOAH）兩類[1]；其中MOSH容易在人體中蓄積，引發(fā)炎癥，MOAH則有潛在的致癌和致畸毒性[1-2]。礦物油來(lái)源于石油、合成油及其各類精煉產(chǎn)品，能通過(guò)多種途徑遷移至食品導(dǎo)致污染[1]。研究發(fā)現(xiàn)，食品中普遍存在礦物油，其中以植物油的污染最為嚴(yán)重[3-7]，目前出臺(tái)的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)和規(guī)范均與植物油相關(guān)[8-10]。此外，由于水質(zhì)污染，魚(yú)類容易在養(yǎng)殖過(guò)程中富集礦物油（石油烴）[11-14]；同時(shí)，幾乎所有食品會(huì)通過(guò)生產(chǎn)過(guò)程接觸到污染的容器或生產(chǎn)線而產(chǎn)生礦物油遷移[15-17]。因此，植物油基的魚(yú)類罐頭中很可能存在比較嚴(yán)重的礦物油污染。然而，由于礦物油組成復(fù)雜且易受基質(zhì)干擾嚴(yán)重，高靈敏分析困難[18]。

本文借鑒標(biāo)準(zhǔn)方法DIN EN16995:2017[9]建立了植物油基魚(yú)罐頭中礦物油的高靈敏度測(cè)定方法，該方法推薦使用在線聯(lián)用高效液相色譜-氣相色譜（HPLC-GC）技術(shù)。該技術(shù)的核心是通過(guò)Y形件、保留間隙柱（retention gap, RG）和溶劑揮發(fā)出口（solvent vapor exit, SVE）組成HPLC-GC接口，該接口可以將HPLC分離的MOSH和MOAH全部轉(zhuǎn)移至GC，然后GC以大體積進(jìn)樣方式實(shí)現(xiàn)礦物油的高靈敏度測(cè)定[18-19]。不過(guò)，該技術(shù)也存在缺點(diǎn)，即HPLCGC接口限定了HPLC餾分的體積不能高于450 μL，因而HPLC硅膠柱的規(guī)格僅為25 cm×2.1 mm i.d.，只能吸附20 mg甘油三酯[18-19]，過(guò)量油脂將導(dǎo)致色譜柱過(guò)載，嚴(yán)重干擾礦物油的測(cè)定。因此，對(duì)于油脂含量高的植物油基魚(yú)罐頭，需要事先去除油脂才能達(dá)到礦物油的高靈敏度測(cè)定[9]。

目前，去除油脂的方法有DIN EN16995:2017推薦的硅膠柱吸附法[9]和皂化法兩種[9,20]。然而，硅膠柱法存在吸附容量有限、溶劑消耗大、濃縮倍數(shù)高等缺點(diǎn)，因此，本文采用皂化法去除油脂。方法建立流程是：首先確定皂化反應(yīng)條件，經(jīng)液液萃取得到礦物油提取液；接著采用環(huán)氧化反應(yīng)去除樣品基質(zhì)中的天然烯烴干擾物，然后吸取凈化液注入HPLC-GC分析，從而建立了植物油基魚(yú)罐頭中的MOSH和MOAH的高靈敏測(cè)定方法；應(yīng)用該方法本文調(diào)查了北京地區(qū)10個(gè)市售產(chǎn)品的礦物油污染情況，并且結(jié)合譜圖和數(shù)據(jù)，分析了礦物油與植物油種類、魚(yú)的品種、脂肪含量、包裝材料以及產(chǎn)品來(lái)源的關(guān)聯(lián)性，探討了這類產(chǎn)品的污染來(lái)源。

1 材料和方法

1.1 材料與儀器

植物油基魚(yú)罐頭產(chǎn)品 10個(gè)，購(gòu)于北京地區(qū)，其中5個(gè)國(guó)產(chǎn)品牌、5個(gè)進(jìn)口產(chǎn)品。表1給出了這些產(chǎn)品的信息，包括魚(yú)的種類、脂肪含量、包裝材料。所有產(chǎn)品（表1）均在其標(biāo)示的保質(zhì)期內(nèi)完成了分析測(cè)試；正己烷（色譜純）、無(wú)水乙醇（色譜純）、硅膠0.063～0.200 mm 德國(guó)Merck公司；氫氧化鉀 分析純，美國(guó)Aladdin公司；硫代硫酸鈉、無(wú)水硫酸鈉（分析純）、堿性氧化鋁0.075～0.150 mm（100～200目） 國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；3-氯過(guò)氧苯甲酸（m-CPBA） 分析純，賽默飛世爾科技（中國(guó)）有限公司；硅膠和氧化鋁使用前均在馬弗爐中于400 ℃烘烤6h，冷卻后置于干燥器，一周內(nèi)使用。兩種混合標(biāo)準(zhǔn)溶液：①含有9個(gè)化合物的MOSH/MOAH混合標(biāo)準(zhǔn)溶液 北京壇墨質(zhì)檢科技有限公司，其中正十一烷（n-undecane，n-C11）、環(huán)己基環(huán)己烷（bicyclohexyl，Cycy）、戊基苯（amylbenzene，5B）、1-甲基萘（1-methylnaphthalene，1-MN）、2-甲基萘（2-methylnaphthalene，2-MN）、1,3,5-三叔丁基苯（1,3,5-tri-tert-butylbenzene，TBB）的濃度均為300 mg/L，正十三烷（ntridecane，n-C13）的濃度為150 mg/L，膽甾烷（5-alphacholestane，Cho）和苝（perylene，Per）的濃度為600 mg/L。②配制n-C10～ n-C50碳數(shù)保留時(shí)間混合標(biāo)準(zhǔn)溶液 正構(gòu)烷烴標(biāo)準(zhǔn)品購(gòu)自美國(guó)Restek公司。

表1 植物油基魚(yú)罐頭產(chǎn)品標(biāo)簽上的信息Table 1 Information on the labels of the vegetable oil-based canned fish products

LC 20AD液相色譜儀（配備紫外檢測(cè)器）、2010 plus氣相色譜儀（配備FID檢測(cè)器） 日本島津公司； LC-GC接口 德國(guó)Axel Semrau公司；SHZ-B水浴恒溫振蕩器 上海博迅醫(yī)療生物儀器股份有限公司；Biofuge primo R低溫高速離心機(jī) 賽默飛世爾科技公司；R-100旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 瑞士步琦有限公司；TUS-200P振蕩型恒溫金屬浴 上海一恒科技有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 兩種混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制及其應(yīng)用 兩種混合標(biāo)準(zhǔn)溶液：①含有9個(gè)化合物的MOSH/MOAH混合標(biāo)準(zhǔn)溶液：9個(gè)化合物用作考察提取、分離的性能與定量，其中n-C11和5B分別用于監(jiān)測(cè)MOSH和MOAH的揮發(fā)損失情況，Cho是HPLC洗脫MOSH部分的末端標(biāo)記物、TBB和Per則分別是MOAH部分的前端和末端標(biāo)記物；MOSH和MOAH的定量?jī)?nèi)標(biāo)分別為Cycy和2-MN，n-C13和1-MN用于考察定量?jī)?nèi)標(biāo)物的含量是否準(zhǔn)確。②配制n-C10～ n-C50碳數(shù)保留時(shí)間混合標(biāo)準(zhǔn)溶液：溶液中含有n-C10、n-C11、n-C13、n-C16、n-C20、n-C24、n-C25、n-C35、n-C40、n-C50各100 mg/L，用于考察儀器性能并劃分碳數(shù)范圍。

1.2.2 皂化反應(yīng) 將整罐樣品全部倒出、搗碎并均質(zhì)；準(zhǔn)確稱取均質(zhì)樣品5 g（精確至0.0001 g）于100 mL離心瓶中，加入10 μL的MOSH/MOAH混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，再加入20 mL的氫氧化鉀-乙醇水溶液（25 g氫氧化鉀溶于50 mL去離子水中，冷卻后加入90 mL無(wú)水乙醇），振蕩混勻；放入水浴恒溫振蕩器，于60 ℃下皂化反應(yīng)[20]30 min。反應(yīng)結(jié)束后取下，冷卻至室溫。加入15 mL正己烷，萃取、離心，取上層液體置于雞心瓶中；再加入10 mL正己烷重復(fù)上述步驟；將兩次提取液合并，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮至約1 mL。

1.2.3 環(huán)氧化反應(yīng) 取1.2.2濃縮液，加入500 μL的m-CPBA乙醇溶液（200 mg/mL），以40 ℃振蕩反應(yīng)20 min；然后加入500 μL乙醇、2 mL硫代硫酸鈉溶液（0.1 g/mL）終止反應(yīng)，取正己烷層用于HPLCGC分析[21]。

1.2.4 氧化鋁凈化 將10 g活化氧化鋁和3 g硅膠依次裝入玻璃管（內(nèi)徑為28 mm），制備成上層為硅膠、下層為氧化鋁的凈化小柱，輕輕敲實(shí)，用于凈化1.2.2得到的濃縮液。首先用20 mL正己烷淋洗凈化柱，當(dāng)淋洗液接近柱床時(shí)將1.2.2制備的全部濃縮液上樣，當(dāng)液體流至接近柱床時(shí)，加入25 mL正己烷洗脫，棄去先行流出的5 mL洗脫液，收集后續(xù)的25 mL，減壓濃縮至近1 mL用于HPLC-GC分析[9]。

1.2.5 HPLC-GC分析 HPLC色譜柱為Restek Allure Si（250 mm×2.1 mm，5 μm），流動(dòng)相為正己烷（A），二氯甲烷（B）；采用梯度洗脫程序：0～0.1 min，100%A（流速為0.3 mL/min）；0.1～6.2 min，70%A（流速為0.3 mL/min）；6.2～15.2 min，100% B（反沖，流速為0.5mL/min）；15.2～25.2 min，100% A（流速為0.5 mL/min）；25.2～30 min，100% A（流速為0.3 mL/min）。進(jìn)樣量為100 μL；以紫外檢測(cè)器（230 nm）監(jiān)測(cè)HPLC的流動(dòng)相與MOAH的流出情況。在此條件下，MOSH部分于2.0～3.5 min、MOAH于4.5～6.0 min流出，通過(guò)閥切換全部導(dǎo)入GC，GC的柱溫箱中配備RG、三通和SVE[9]。

GC儀器配置兩套完全相同的通道，每個(gè)通道均采用Restek MXT（10 m×0.53 mm）無(wú)涂層RG柱和Restek MXT-1（15 m×0.25 mm×0.25 μm）分析柱，RG柱與分析柱之間通過(guò)三通與SVE連接；程序升溫為初始溫度60 ℃，保持6 min，以15 ℃/min升溫至120 ℃，再以25 ℃/min升溫至370 ℃，保持6 min；FID溫度為380 ℃；載氣為氫氣（純度≥99.995%），MOSH和MOAH通道的初始?jí)毫Ψ謩e為80和79 kPa；輔助氣、燃燒氣和助燃?xì)夥謩e為氮?dú)?、氫氣和空氣，流速分別為30、40和400 mL/min。

1.2.6 數(shù)據(jù)處理 MOSH和MOAH的GC譜圖呈跨越一定沸程范圍的駝峰，定量計(jì)算時(shí)，MOSH或MOAH的含量通過(guò)積分計(jì)算基線與駝峰上輪廓線之間的面積得到，基線通過(guò)空白實(shí)驗(yàn)得到[9]，駝峰上方的尖峰需要扣除。本文采用Lab solution 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理?；趦?nèi)標(biāo)中的Cycy 和2-MN 定量計(jì)算MOSH 和MOAH 的含量，采用Excel 2016、Origin 8.5進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。所有實(shí)驗(yàn)均重復(fù)做兩次平行，計(jì)算平均值給出測(cè)定結(jié)果。

2 結(jié)果與分析

2.1 樣品前處理

2.1.1 皂化反應(yīng) 由表1可知，植物油基魚(yú)罐頭中含有大量油脂（脂肪含量為9.6%～35.6%）。由于油脂與礦物油互溶，提取礦物油的同時(shí)油脂也被一并提?。蝗绻怀ビ椭?，將干擾后續(xù)礦物油的測(cè)定。聯(lián)用儀器的HPLC硅膠柱雖然可以吸附油脂，但其吸附量?jī)H有20 mg[18]，如果直接將含有油脂的礦物油提取液注入HPLC-GC分析，則方法定量限只能達(dá)到10 mg/kg[9]。為了降低定量限、提高靈敏度，必須除去油脂，讓更多的礦物油進(jìn)入HPLC-GC分析，從而實(shí)現(xiàn)高油脂食品中微量礦物油的測(cè)定[9]。

皂化反應(yīng)是很好的油脂去除方法，其原理是將甘油三酯被強(qiáng)堿分解為極性更高的脂肪酸和甘油，這些反應(yīng)產(chǎn)物溶于強(qiáng)極性溶劑，如水和乙醇；而礦物油為非皂化物，不參與反應(yīng)，其極性不變，仍然為弱極性物質(zhì)。因此，皂化反應(yīng)的作用是增大了礦物油與油脂的極性差異，從而可通過(guò)溶劑萃取達(dá)到去除油脂的目的。

通常，皂化反應(yīng)需要考慮樣品（底物）與氫氧化鉀堿液的濃度、溶劑體系、反應(yīng)溫度和時(shí)間等條件。考慮到礦物油涉及的碳數(shù)范圍（C10～C50）較寬，為了避免低沸點(diǎn)目標(biāo)物的損失，皂化反應(yīng)的溫度和時(shí)間被限定為60 ℃和30 min[20]。因此，本文僅需要考察以下三個(gè)條件，即樣品用量、強(qiáng)堿濃度與反應(yīng)溶劑。

樣品取樣量與分析靈敏度直接相關(guān)。礦物油檢測(cè)采用具有等碳響應(yīng)的氫火焰離子化檢測(cè)器（FID），原因是只有FID才能反映礦物油的全貌，并且不需要標(biāo)準(zhǔn)參照定量。因此，GC-FID成為分析礦物油的理想方法[8-9,18]。由于礦物油化學(xué)結(jié)構(gòu)復(fù)雜、數(shù)量巨大，其GC譜圖呈無(wú)法分離的鼓包峰形狀（hump），而鼓包峰的靈敏度僅為常規(guī)尖峰的1/100[18]，一般只有進(jìn)入FID的礦物油達(dá)到50～100 ng才能滿足分析不確定度要求[18]。2019年歐洲聯(lián)合中心（JRC）出臺(tái)指導(dǎo)意見(jiàn)，規(guī)定高油脂食品中礦物油的分析方法定量限不得高于0.5 mg/kg[21]，由此推算，植物油基魚(yú)罐頭的取樣量須達(dá)到5 g左右才能滿足其靈敏度要求。

強(qiáng)堿濃度需要根據(jù)取樣量確定。理論上，皂化反應(yīng)的甘油三酯與堿的摩爾比為1:3。為了反應(yīng)完全，堿的濃度通常是過(guò)量的。實(shí)驗(yàn)表明：氫氧化鉀濃度達(dá)到3 mol/L以上油脂才能反應(yīng)完全；此外，由于水-油兩相分離，本文加入乙醇以促進(jìn)化學(xué)反應(yīng)。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)：當(dāng)反應(yīng)體系的水:醇的比例接近于1:2時(shí)，反應(yīng)效果最優(yōu)。因此，確定皂化反應(yīng)條件為：稱取5 g罐頭樣品，加入20 mL的3～4 mol/L的氫氧化鉀溶液（其中水:乙醇≈1:2），于60 ℃下反應(yīng)30 min。反應(yīng)后采用正己烷提取兩次，低于40 ℃減壓濃縮至1 mL左右，供后續(xù)凈化。

2.1.2 環(huán)氧化反應(yīng) 植物油中含有大量天然烯烴，如角鯊烯、胡蘿卜素和甾烯等[22]，這些烯烴的極性與MOAH相似，在HPLC硅膠柱的吸附行為幾乎完全一致，即天然烯烴與MOAH流經(jīng)HPLC色譜柱時(shí)產(chǎn)生共流出，一起進(jìn)入GC分析[18,22]。由于礦物油的GC譜圖呈寬沸程的鼓包峰，天然烯烴的存在會(huì)嚴(yán)重覆蓋或干擾MOAH分析。

目前，環(huán)氧化反應(yīng)是去除烯烴干擾的最可行方法[9,21]。該方法由Biedermann等首先提出，其原理是采用過(guò)氧化物m-CPBA將烯烴氧化為極性較大的環(huán)氧化物，從而被硅膠吸附、除去[22]。Biedermann等采用二氯甲烷作溶劑，反應(yīng)方法需要控制低溫、轉(zhuǎn)換溶劑等操作[22]；Nestola等則改進(jìn)了方法，將溶劑替換為乙醇，不僅減緩了反應(yīng)速率，將反應(yīng)溫度升至常溫，而且無(wú)需轉(zhuǎn)換溶劑，簡(jiǎn)化了操作步驟[23-24]。本文采用改進(jìn)后的環(huán)氧化方法（1.2.3）進(jìn)行樣品凈化。

2.1.3 氧化鋁凈化 一些植物油中含有大量碳數(shù)高于C21的奇數(shù)碳正構(gòu)烷烴，其GC譜圖呈位于MOSH駝峰上方的一系列尖峰[18]。通常，如果這些尖峰不影響礦物油駝峰輪廓的辨認(rèn)與積分計(jì)算，則無(wú)需凈化去除。本課題組對(duì)植物油中正構(gòu)烷烴的干擾情況進(jìn)行了前期研究[25-26]，發(fā)現(xiàn)并非所有樣品都需要去除正構(gòu)烷烴，只要MOSH的輪廓不受影響或可以辨認(rèn)就無(wú)需增加這個(gè)實(shí)驗(yàn)步驟。原因是正構(gòu)烷烴的去除方法采用氧化鋁吸附，而氧化鋁的吸附能力很弱，一方面會(huì)成倍地增加溶劑用量，另一方面氧化鋁對(duì)MOSH約有20%的吸附，降低了結(jié)果的可靠性[18,25-26]。

因此，本文選取MOSH鼓包峰上方尖峰干擾較明顯的樣品（如A1）進(jìn)行了氧化鋁凈化考察，比較了凈化前后的譜圖特征與積分結(jié)果（圖1）。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：凈化后MOSH鼓包峰上方的沸點(diǎn)高于n-C25以上的尖峰幾乎全部去除。但是凈化前后的MOSH鼓包峰的積分面積卻沒(méi)有顯著差異。說(shuō)明天然烷烴形成的尖峰不影響MOSH積分，因而可以省略氧化鋁凈化步驟。本文建立了植物油基魚(yú)罐頭的提取凈化步驟：首先按照1.2.2提取礦物油并去除油脂，然后去除烯烴干擾物，取上層凈化液注入HPLC-GC分析，觀察MOSH輪廓干擾情況，如果沒(méi)有受到嚴(yán)重影響，則無(wú)需進(jìn)行氧化鋁凈化操作（1.2.4），否則需采用1.2.4步驟進(jìn)行凈化。

圖 1 氧化鋁凈化前后的MOSH譜圖Fig.1 Chromatograms of MOSH before and after alumina oxide purification

2.2 方法學(xué)考察

2.2.1 定量限 礦物油的實(shí)驗(yàn)步驟包括提取、凈化、濃縮、最后注入HPLC-GC進(jìn)行測(cè)定。由于HPLCGC技術(shù)的接口和HPLC處理量的限制，不可能有大量礦物油進(jìn)入GC，而FID的線性范圍非常寬，最高可達(dá)到7個(gè)數(shù)量級(jí)。因此，礦物油測(cè)定方法往往無(wú)需考慮其上限，只需考慮其下限（即定量限），因此，相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)和JRC指導(dǎo)意見(jiàn)僅規(guī)定了方法的定量限，而沒(méi)有規(guī)定考察方法的線性范圍[9,21]。

由于礦物油是數(shù)以萬(wàn)計(jì)化合物的集合，其譜圖呈駝峰形狀，為了滿足分析不確定度要求，駝峰必須距基線有足夠高度。然而，駝峰高度受到碳數(shù)范圍影響較大，即同樣面積的駝峰，碳數(shù)范圍越寬，其高度越低，即與基線越靠近；此外，基線波動(dòng)與樣品處理步驟和溶劑純度等密切相關(guān)。因此，礦物油駝峰的定量限計(jì)算方法與常規(guī)尖峰的有很大差異，目前公認(rèn)采用Biedermann和Grob提出的經(jīng)驗(yàn)方法計(jì)算，即以進(jìn)入GC的礦物油質(zhì)量達(dá)到50～100 ng來(lái)計(jì)算定量限[18]。為了保證結(jié)果的準(zhǔn)確可靠，本文方法定量限以進(jìn)樣量為100 ng計(jì)算。計(jì)算方法如下：5 g樣品經(jīng)過(guò)皂化、提取、濃縮、環(huán)氧化后得到約1 mL試液，其中100 μL注入HPLC-GC分析，相當(dāng)于0.5 g的樣品進(jìn)入FID檢測(cè)，以100 ng為最低的礦物油進(jìn)樣量，對(duì)應(yīng)的定量限為0.2 mg/kg；考慮到基線波動(dòng)因素：①實(shí)驗(yàn)過(guò)程中溶劑濃縮、微量雜質(zhì)富集導(dǎo)致的基線波動(dòng)；②不同碳數(shù)范圍目標(biāo)物帶來(lái)的鼓包峰高度差異；③不同實(shí)驗(yàn)室間的重現(xiàn)性。本方法的定量限定為是0.5 mg/kg。

2.2.2 加標(biāo)回收率和重復(fù)性 回收率的添加依據(jù)定量限添加，本文按照定量限的1倍、2倍（近似）和4倍添加（表2）。具體方法是任意選取一個(gè)樣品（A6），分別添加含有0.5和2.0 mg/kg的MOSH和0.5、0.9 mg/kg的MOAH礦物油溶液，每個(gè)試樣及空白分別平行測(cè)定6次（重復(fù)性），計(jì)算平均加標(biāo)回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）。由表2可知，加標(biāo)回收率在90.0%～106.0%之間，RSD在1.6%～12.7%之間，均符合JRC指導(dǎo)意見(jiàn)的分析檢測(cè)要求[21]。

2.3 樣品分析

應(yīng)用上述方法分別測(cè)定了市售的10個(gè)植物油基魚(yú)罐頭產(chǎn)品中MOSH和MOAH的含量，并且按照J(rèn)RC要求[21]分別計(jì)算了不同碳段的相應(yīng)含量，結(jié)果見(jiàn)表3。

盡管此次調(diào)查的樣品為隨機(jī)購(gòu)買，但結(jié)果發(fā)現(xiàn)植物油基魚(yú)罐頭存在較為嚴(yán)重的礦物油污染。由表3發(fā)現(xiàn)：所有樣品均檢出含有MOSH，其所有碳段（C10～C50）的總含量為2.6～53.7 mg/kg，即污染最高的MOSH含量為53.7 mg/kg，并且污染主要集中在C20～C25、C25～C35、C35～C40三個(gè)碳段。毒理學(xué)研究表明C16～C35的MOSH最容易在人體蓄積[1,27-29]；同時(shí)，本次調(diào)查的5個(gè)樣品，即一半樣品檢出含有MOAH，含量為0.7～5.5 mg/kg，主要集中在C16～C25、C25～C35兩個(gè)碳段。

進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)：表3中以A5、A8和A9的MOSH含量最高，分別為33.9、53.7、32.3 mg/kg，其中A5和A8中的MOAH含量高達(dá)5.5、3.0 mg/kg；而其他產(chǎn)品中的MOSH均低于10 mg/kg，其含量范圍集中在2.6～6.7 mg/kg；這些樣品相應(yīng)的MOAH含量也普遍低于1.0 mg/kg，即樣品的污染情況呈現(xiàn)出“兩級(jí)分化”情況。

結(jié)合表1和表3的數(shù)據(jù)，我們可以粗略推測(cè)樣品的污染來(lái)源。由于礦物油與植物油的溶解度相似，油脂含量高的食品往往容易受到礦物油污染。表1中A1、A5、A8和A9的脂肪含量均高于30%，其中有3個(gè)（A5、A8和A9）的MOSH含量最高。說(shuō)明脂肪含量高的樣品容易受到污染。

表3 植物油基魚(yú)罐頭中的礦物油含量*Table 3 Contents of MOSH and MOAH in the canned fish products

植物油中礦物油的污染與其生產(chǎn)加工過(guò)程密切相關(guān)，同時(shí)加工工藝又與植物油品種有關(guān)。前期的調(diào)查發(fā)現(xiàn)，特級(jí)初榨橄欖油、葵花籽油、大豆油等的污染較低，而橄欖果渣油、芝麻油?；ㄉ秃陀筒枳延偷奈廴酒毡檩^高[2,25,30]。然而，此次收集的一些魚(yú)罐頭產(chǎn)品并沒(méi)有標(biāo)明其植物油種類，僅憑幾個(gè)標(biāo)明種類的樣品，也難以找到其與礦物油污染之間的規(guī)律，例如同為橄欖油基的金槍魚(yú)罐頭（A8和A10）的污染差別很大，而橄欖油基與葵花籽油基的金槍魚(yú)罐頭（A8和A9）的污染則幾乎同樣嚴(yán)重。類似地，我們也沒(méi)有發(fā)現(xiàn)魚(yú)的種類、包裝材質(zhì)與礦物油污染的關(guān)聯(lián)性。

結(jié)合表1和表3發(fā)現(xiàn)，來(lái)自相同廠家的A2和A3（圖2）、A6和A7（圖3）、A8和A9（圖4）的MOSH和MOAH污染程度幾乎相同，這一點(diǎn)也可以通過(guò)對(duì)比它們的譜圖發(fā)現(xiàn)。通常認(rèn)為，相同的譜峰形狀意味著污染來(lái)源相同。由圖2可知：A2和A3的MOSH均呈雙駝峰，中心位置也基本一致，MOSH的中心位置在n-C27和n-C43，MOAH的中心位置在n-C18；同時(shí)它們的MOAH的形狀和位置也完全相同，說(shuō)明這兩個(gè)樣品的污染來(lái)源完全相同。由于這兩個(gè)產(chǎn)品的魚(yú)的品種不同，因而其污染很可能來(lái)源于植物油。

圖 2 植物油基魚(yú)罐頭的礦物油分析譜圖Fig.2 Chromatograms of MOSH and MOAH in two canned vegetable oil-based fish products

圖 3 植物油基魚(yú)罐頭的礦物油分析譜圖Fig.3 Chromatograms of MOSH and MOAH in the canned vegetable oil-based fish products

圖 4 植物油基魚(yú)罐頭的礦物油分析譜圖Fig.4 Chromatograms of MOSH and MOAH in the canned vegetable oil-based fish products

A6和A7（圖3）為同一廠家的兩個(gè)樣品，他們除了脂肪含量不同，魚(yú)類、植物油種類和包裝材料相同；但其譜圖表明：這兩種樣品MOSH的駝峰形狀不一樣，MOAH譜圖基本一致。對(duì)照這兩個(gè)產(chǎn)品的標(biāo)簽，A7樣品中添加了濃縮大豆蛋白，而A6沒(méi)有。因此，這兩個(gè)產(chǎn)品的礦物油污染來(lái)源可能是魚(yú)肉和添加的濃縮大豆蛋白。

樣品A8和A9也來(lái)自同一個(gè)生產(chǎn)廠家，但其污染情況與上述兩個(gè)廠家略有不同。由表3可知，A8和A9的礦物油污染含量差別較大。由圖4也可看出兩個(gè)樣品的MOSH的駝峰形狀類似，但MOAH譜圖不完全一致。因此，這兩個(gè)產(chǎn)品的礦物油來(lái)源可能不止一個(gè)，這兩個(gè)樣品均為金槍魚(yú)罐頭，只是植物油種類不同，因而，其礦物油污染很可能來(lái)自魚(yú)肉和植物油，并且魚(yú)肉的污染來(lái)源占比更大一些。

綜上，我國(guó)市售的植物油基魚(yú)罐頭存在較為嚴(yán)重的礦物油污染，有一半的收集樣品含有毒性較大的MOAH，其污染與生產(chǎn)廠家高度相關(guān)，污染來(lái)源主要是植物油和魚(yú)肉原料。

3 結(jié)論

本文基于國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)DIN EN16995:2017的環(huán)氧化反應(yīng)和HPLC-GC技術(shù)，通過(guò)實(shí)驗(yàn)確定了植物油基魚(yú)罐頭的皂化反應(yīng)條件，達(dá)到高效、便捷提取礦物油和去除油脂的目的，從而建立了市售植物油基魚(yú)罐頭中MOSH和MOAH的高靈敏度分析方法，方法定量限達(dá)到0.5 mg/kg，回收率為90.0%～106.0%，滿足了JRC指導(dǎo)意見(jiàn)中的分析要求。本文應(yīng)用該方法調(diào)查分析了北京地區(qū)市售的10個(gè)植物油基魚(yú)罐頭產(chǎn)品，結(jié)果發(fā)現(xiàn)所有樣品均含有MOSH，范圍2.6～53.7 mg/kg，其中一半樣品含MOAH，范圍為0.7～5.5 mg/kg。由于礦物油對(duì)人體健康有危害，特別是MOAH有潛在的致癌致畸毒性，因此希望相關(guān)部門加強(qiáng)監(jiān)管，以保障魚(yú)罐頭等產(chǎn)品的質(zhì)量安全。