阿魏菇粗多糖體外脾細(xì)胞調(diào)節(jié)功能及體內(nèi)疫苗佐劑功能的研究

史 茜，胡都斯·艾爾肯，龍志新，王科珂，蔣剛強(qiáng)，史向向，張富春

(1.新疆大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，新疆烏魯木齊 830046；2.烏魯木齊海關(guān)技術(shù)中心，新疆烏魯木齊 830063；3.吐?tīng)栨靥睾ｊP(guān)，新疆吐?tīng)栨靥?845452

隨著中醫(yī)藥學(xué)研究的進(jìn)展，對(duì)藥食用途的真菌中活性成分如多糖[1]、生物堿[2]、萜類(lèi)化合物[3]等研究正深入開(kāi)展。國(guó)內(nèi)外學(xué)者通過(guò)體內(nèi)、體外試驗(yàn)揭示了藥食用途真菌中的生物活性物質(zhì)具有抗菌[4]、抗炎[5]、抗病毒[6]、抗腫瘤[7]和調(diào)節(jié)免疫[8]等生物學(xué)功能。

阿魏側(cè)耳(Pleurotusferulae)也稱(chēng)阿魏菇，是生長(zhǎng)在藥用植物阿魏上的一種藥食同源的大型真菌。研究表明，阿魏菇富含蛋白質(zhì)、氨基酸、多糖、生物堿等多種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，具有調(diào)節(jié)機(jī)體免疫、抗衰老、抗疲勞、抗輻射、抗腫瘤、降血脂等功效[9]。阿魏菇多糖(Pleurotusferulaepolysaccharide，PFP)的研究顯示，其在增強(qiáng)免疫和抑制腫瘤方面具有良好的效果[10-11]，應(yīng)用前景廣闊。

多糖屬于一類(lèi)天然聚合物，由糖化連接的碳水化合物單體組成[12]。多糖作用很多，如具有激活巨噬細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞、NK細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞的能力，也可促進(jìn)細(xì)胞分泌細(xì)胞因子、抗體和補(bǔ)體等免疫相關(guān)分子[13-14]。多種天然多糖能增強(qiáng)機(jī)體的體液免疫、細(xì)胞免疫和黏膜免疫功能，可以作為疫苗的候選佐劑，如川明參多糖、肉蓯蓉多糖等都可以作為口蹄疫疫苗的佐劑，發(fā)揮很好的效果[15-16]。

本研究將阿魏菇粗多糖(Pleurotusferulaecrude polysaccharide，PFCP)體外作用于小鼠脾細(xì)胞，檢測(cè)其對(duì)小鼠脾細(xì)胞增殖能力和細(xì)胞因子分泌的影響。同時(shí)將PFCP與口蹄疫滅活抗原(Foot-and-mouth disease virus inactivated antigen,iFMDV)共同免疫小鼠，檢測(cè)其對(duì)免疫后小鼠體液免疫和細(xì)胞免疫的影響，為PFCP作為新型疫苗佐劑的研制提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SPF級(jí)ICR小鼠，雌性，6周齡～8周齡，購(gòu)自新疆醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心，證書(shū)編號(hào)：SCXK(新)2018-0002。研究中涉及的所有操作均符合動(dòng)物福利指導(dǎo)規(guī)則。

1.1.2 材料及試劑 PFCP由新疆生物資源與基因工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室李金玉提純。體外試驗(yàn)所用PFCP用RPMI1640培養(yǎng)基溶解為20 mg/mL的溶液，體內(nèi)試驗(yàn)所用PFCP用9 mg/mL的NaCl溶解為16 mg/mL的溶液，除菌分裝，冷凍保存。O型口蹄疫病毒滅活抗原(O/MYA98/BY/2010株)，中農(nóng)威特生物科技有限公司惠贈(zèng)。蒙大拿ISA 206 VG佐劑，SEPPIC特殊化學(xué)品有限公司(中國(guó)上海)惠贈(zèng)。IgG羊抗鼠HRP-酶標(biāo)二抗，Southern Biotechnology公司產(chǎn)品；APC Anti-Mouse CD3e Antibody、FITC Anti-Mouse CD4 Antibody、PE Anti-Mouse CD8a Antibody流式細(xì)胞檢測(cè)用單克隆抗體，IFN-γ和IL-4細(xì)胞因子ELISA檢測(cè)試劑盒，武漢伊萊瑞特生物科技股份有限公司產(chǎn)品；胎牛血清、RPMI1640培養(yǎng)基、PBS，Gbico公司產(chǎn)品；噻唑藍(lán)(MTT)、刀豆蛋白 A(ConA)、脂多糖(LPS)與二甲基亞砜(DMSO)，Sigma公司產(chǎn)品。紅細(xì)胞裂解液，北京鼎國(guó)生物科技有限公司產(chǎn)品；其他化學(xué)試劑均為分析醇，天津市北聯(lián)精細(xì)化學(xué)品開(kāi)發(fā)有限公司產(chǎn)品。

1.1.3 主要儀器 高速冷凍離心機(jī)，日本Hitachi公司產(chǎn)品；超凈工作臺(tái)，美國(guó)Thermo公司產(chǎn)品；倒置顯微鏡，日本Olympus公司產(chǎn)品；CO2培養(yǎng)箱，美國(guó)Nuaire公司產(chǎn)品；SpectraMax Plus 384酶標(biāo)儀，美國(guó)Molecular Devices公司產(chǎn)品；流式細(xì)胞儀，美國(guó)BD公司產(chǎn)品。

1.2 方法

1.2.1 阿魏菇粗多糖中多糖含量測(cè)定 以干燥至恒重的D-葡萄糖為標(biāo)準(zhǔn)品，用苯酚-硫酸法繪制葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品的標(biāo)準(zhǔn)曲線，以葡萄糖濃度(C)為橫坐標(biāo)，吸光度(A)為縱坐標(biāo)，得到回歸曲線方程y=0.026 1x-0.003 3，R2=0.999(n=3)。精確稱(chēng)取干燥后恒重的PFCP 10 mg，以蒸餾水稀釋至100 μg/mL和50 μg/mL。吸取PFCP溶液1 mL至反應(yīng)管，每個(gè)濃度設(shè)置重復(fù)對(duì)照，向每個(gè)反應(yīng)管中加入0.5 mL 60 mg/mL苯酚溶液，振蕩混勻，向每管加入2.5 mL濃硫酸并混勻，靜置20 min，取100 μL加入到96孔板中，測(cè)定OD 490 nm值。代入回歸曲線方程計(jì)算多糖含量。

1.2.2 小鼠脾細(xì)胞制備 處死ICR小鼠，無(wú)菌獲取脾臟，置于銅網(wǎng)上研磨至RPMI-1640完全培養(yǎng)基中，收集懸液，1 500 r/min，離心5 min，棄上清。加入紅細(xì)胞裂解液1 mL，裂解3 min，1 500 r/min，離心5 min，棄上清，收集細(xì)胞。重懸細(xì)胞，臺(tái)盼藍(lán)染色計(jì)數(shù)，活細(xì)胞數(shù)>95%時(shí)，用于后續(xù)試驗(yàn)。

1.2.3 阿魏菇粗多糖對(duì)脾細(xì)胞毒性檢測(cè) 取1.2.2制備的脾細(xì)胞懸液，調(diào)整濃度至5×106個(gè)/mL。將細(xì)胞懸液100 μL/孔加入96孔板，試驗(yàn)組加入100 μL/孔PFCP溶液(終濃度為50、100、200、400、800、1 600、3 200 μg/mL)，以RPMI-1640完全培養(yǎng)基為細(xì)胞對(duì)照孔，加入LPS(10 μg/mL)和ConA(5 μg/mL)組為陽(yáng)性對(duì)照，各組設(shè)5個(gè)重復(fù)。于37 ℃、體積分?jǐn)?shù)為5%的CO2培養(yǎng)箱中分別培養(yǎng)20、44、68、92 h后，加入MTT 10 μL/孔，繼續(xù)培養(yǎng)4 h，1 500 r/min離心5 min，棄上清，加入100 μL/孔DMSO，室溫振蕩混合，酶標(biāo)儀檢測(cè)OD 570 nm值。以加入多糖孔OD值不顯著低于細(xì)胞對(duì)照孔OD值的最高濃度作為最大細(xì)胞安全濃度。

1.2.4 阿魏菇粗多糖協(xié)同刺激脾臟淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn) 取1.2.2制備的脾細(xì)胞懸液，調(diào)整細(xì)胞數(shù)量至2.5×106個(gè)/mL。將細(xì)胞懸液100 μL/孔加入 96 孔板，試驗(yàn)組每孔加入10 μL ConA(10 μg/mL)或 LPS(5 μg/mL)及90 μL/孔PFCP溶液(終濃度為50、100、200、400、800 μg/mL)，以RPMI-1640完全培養(yǎng)基為細(xì)胞對(duì)照，于37 ℃、體積分?jǐn)?shù)為5%的CO2培養(yǎng)箱中分別培養(yǎng)44 h后，加入MTT 10 μL/孔，繼續(xù)培養(yǎng)4 h，1 500 r/min離心5 min，棄上清，加入100 μL/孔DMSO，室溫振蕩混合，酶標(biāo)儀檢測(cè)OD 570 nm值。各組設(shè)5個(gè)重復(fù)。并按公式計(jì)算淋巴細(xì)胞增殖率[8]:增殖率=(藥物組OD 570 nm-細(xì)胞或LPS對(duì)照組OD 570 nm)/細(xì)胞或LPS對(duì)照組OD 570 nm× 100%(OD為平均值)

1.2.5 細(xì)胞因子含量檢測(cè) 按1.2.2制備脾細(xì)胞，將脾細(xì)胞調(diào)整至1×106個(gè)/mL，1 mL/孔細(xì)胞懸液加入24孔板，每組設(shè)置3個(gè)復(fù)孔，加入1 mL/孔含PFCP溶液(終濃度為50、100、200、400、800 μg/mL)，以RPMI-1640完全培養(yǎng)基為細(xì)胞對(duì)照，于37 ℃、體積分?jǐn)?shù)為5%的CO2的條件培養(yǎng)48 h，10 000 r/min離心5 min，收集上清，按照ELISA試劑盒說(shuō)明書(shū)檢測(cè)樣品中IFN-γ和IL-4含量。

1.2.6 免疫分組及免疫策略 試驗(yàn)分為6組，每組6只小鼠，每只按100 μL劑量，以皮下注射方式免疫接種小鼠，免疫2次，兩次免疫間隔14 d。具體分組如下：9 mg/mL的NaCl對(duì)照組、iFMDV組(滅活抗原15 μL/只+9 mg/mL的NaCl 85 μL/只)、100 μg/mL PFCP+iFMDV組(滅活抗原15 μL/只+9 mg/mL的NaCl 75.5 μL/只+PFCP 9.5 μL/只)、200 μg/mL PFCP+iFMDV組(滅活抗原15μL/只+9 mg/mL的NaCl 66μL/只+PFCP 19 μL/只)、400 μg/mL PFCP+iFMDV組(滅活抗原15 μL/只+9 mg/mL的NaCl 37 μL/只+PFCP 38 μL/只)、ISA 206+iFMDV組(滅活抗原15 μL/只+9 mg/mL的NaCl 35 μL/只+ISA 206 50 μL/只)。

1.2.7 特異性IgG抗體水平檢測(cè) 在小鼠初次免疫后的14、21、28 d，利用眼眶靜脈叢采血方法獲取全血并分離血清。將100 μL/孔滅活抗原包被酶標(biāo)板，4 ℃過(guò)夜孵育。徹底清洗后，以50 mg/mL的脫脂奶粉封閉液，37 ℃封閉1 h。加入1∶200稀釋的被檢血清，37 ℃孵育1 h。加入1∶2 000稀釋的羊抗鼠HRP-酶標(biāo)二抗，37 ℃孵育1 h。加入TMB顯色液，室溫避光孵育15 min；加入終止液，在酶標(biāo)儀上讀取OD 450 nm/OD 630 nm值。

1.2.8 T淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè) 第二次免疫14 d后，處死小鼠，摘取脾臟組織。按1.2.2制備脾臟細(xì)胞，取100 μL(約1×106細(xì)胞)脾臟細(xì)胞懸液，加入10 μL CD3e-APC、CD4-FITC、CD8a PE抗體，旋渦振蕩，室溫暗孵15 min。終止反應(yīng)，離心棄上清液，加入500 μL PBS重新懸浮細(xì)胞，上機(jī)檢測(cè)。

2 結(jié)果

2.1 阿魏菇粗多糖中多糖含量測(cè)定

利用苯酚-硫酸法對(duì)PFCP的多糖含量進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果顯示,PFCP的多糖含量為63.3%。

2.2 阿魏菇粗多糖對(duì)脾細(xì)胞毒性檢測(cè)

最大無(wú)毒濃度試驗(yàn)是體外檢測(cè)藥物毒性的重要指標(biāo)。將PFCP加入脾細(xì)胞中使其終濃度為50、100、200、400、800、1 600、3 200 μg/mL，分別培養(yǎng)24、48、72、96 h，檢測(cè)其最大無(wú)毒濃度。當(dāng)多糖濃度在50 μg/mL～1 600 μg/mL時(shí)，OD值均未顯著低于細(xì)胞對(duì)照，說(shuō)明在該濃度范圍內(nèi)PFCP對(duì)脾細(xì)胞毒性不明顯(P>0.05)，最大無(wú)毒濃度為1 600 μg/mL(表1)。

表1 PFCP對(duì)脾細(xì)胞毒性檢測(cè)結(jié)果

2.3 阿魏菇粗多糖體外對(duì)脾臟淋巴細(xì)胞增殖的影響

PFCP與ConA或LPS協(xié)同刺激脾臟淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)結(jié)果顯示，與ConA組比較，PFCP濃度在50 μg/mL～800 μg/mL時(shí)，均可協(xié)同ConA顯著促進(jìn)脾臟淋巴細(xì)胞的增殖(P<0.01)；與LPS組比較，PFCP在50 μg/mL可協(xié)同LPS顯著促進(jìn)脾臟淋巴細(xì)胞的增殖(P<0.05)。結(jié)果說(shuō)明，PFCP可協(xié)同ConA和LPS促進(jìn)脾臟淋巴細(xì)胞的增殖(圖1)。

A.ConA;B.LPS

2.4 阿魏菇粗多糖體外對(duì)脾細(xì)胞分泌細(xì)胞因子能力的影響

不同濃度的PFCP與脾臟細(xì)胞共培養(yǎng)48 h，ELISA檢測(cè)培養(yǎng)上清中IL-4和IFN-γ細(xì)胞因子表達(dá)。結(jié)果顯示，PFCP濃度在50 μg/mL～400 μg/mL時(shí)，IFN-γ表達(dá)量顯著或極顯著地高于對(duì)照組(P<0.05，P<0.01)。當(dāng)PFCP濃度在50 μg/mL～200 μg/mL時(shí)，IL-4表達(dá)量極顯著地高于對(duì)照組(P<0.01)(圖2)。結(jié)果表明，PFCP體外可顯著促進(jìn)小鼠脾細(xì)胞分泌IFN-γ與IL-4。

圖2 PFCP刺激脾細(xì)胞對(duì)產(chǎn)生IFN-γ(A)和IL-4(B)細(xì)胞因子的影響

2.5 阿魏菇粗多糖對(duì)特異性抗體產(chǎn)生的影響

低(100 μg/mL)、中(200 μg/mL)、高劑量(400 μg/mL)PFCP分別與iFMDV混合后皮下注射免疫接種小鼠，在第1次免疫后14、21、28 d，分別采集小鼠血樣，分離血清，間接ELISA測(cè)定iFMDV特異性抗體水平，用以評(píng)估PFCP的佐劑特性。結(jié)果顯示，與抗原對(duì)照組(iFMDV)比較，PFCP中劑量組的抗體水平在免疫后21 d和28 d，差異顯著(P<0.05)，高劑量組在免疫后21 d(P<0.05)和28 d(P<0.01)均具有顯著性差異，ISA 206佐劑組和PFCP高劑量組之間差異不顯著(圖3)。表明PFCP能有效增強(qiáng)iFMDV刺激的特異性抗體的產(chǎn)生。

圖3 PFCP對(duì)iFMDV特異性抗體產(chǎn)生的影響

2.6 阿魏菇粗多糖對(duì)T淋巴細(xì)胞亞群的影響

為了檢測(cè)PFCP對(duì)T淋巴細(xì)胞亞群的影響，在第2次免疫接種后14 d，無(wú)菌摘取小鼠脾臟，通過(guò)流式細(xì)胞檢測(cè)CD3+CD4+T和CD3+CD8+T淋巴細(xì)胞亞群比例。結(jié)果可知，PFCP低、中劑量組與iFMDV組比較差異不顯著(P>0.05)，ISA 206佐劑組、PFCP高劑量組與iFMDV組比較均能夠顯著增加CD3+CD4+T淋巴細(xì)胞的數(shù)量(P<0.05)(圖4)，極顯著增加CD3+CD8+T淋巴細(xì)胞的數(shù)量(P<0.01)，且ISA 206佐劑組與PFCP高劑量組之間無(wú)顯著差異(P>0.05)(圖5)。結(jié)果說(shuō)明，PFCP高劑量組可以顯著提升CD3+CD4+T和CD3+CD8+T淋巴細(xì)胞亞群的細(xì)胞數(shù)量。

圖4 PFCP對(duì)脾臟CD3+CD4+ T淋巴細(xì)胞亞群的影響

圖5 PFCP對(duì)脾臟CD3+CD8+ T淋巴細(xì)胞亞群的影響

3 討論

研究表明，多糖具有復(fù)雜多樣的生物學(xué)活性，如抗病毒、抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)等[17]。許多藥食同源的真菌多糖都具有促進(jìn)淋巴細(xì)胞增殖的活性，這是其發(fā)揮免疫增強(qiáng)作用的主要機(jī)制。如猴頭菇多糖能有效促進(jìn)免疫健全小鼠T、B淋巴細(xì)胞的增殖，顯著促進(jìn)淋巴細(xì)胞分泌IL-2、IL-4以及INF-γ，顯著提高免疫缺陷小鼠的外周血白細(xì)胞及骨髓有核細(xì)胞數(shù)量，促進(jìn)ConA和LPS誘導(dǎo)的T、B脾淋巴細(xì)胞增殖，提高脾臟NK細(xì)胞的殺傷活性，并能提高血清中IL-2的分泌水平[18]。姬松茸多糖能夠顯著提高小鼠脾臟和胸腺指數(shù)，極顯著促進(jìn)D-半乳糖誘導(dǎo)的衰老小鼠脾細(xì)胞增殖，增加衰老小鼠血清中TNF-α、IL-6含量[19]。阿魏菇粗多糖可以明顯促進(jìn)ConA刺激的小鼠脾T淋巴細(xì)胞的增殖反應(yīng)，阿魏側(cè)耳胞外多糖可顯著提高巨噬細(xì)胞對(duì)IL-1和IL-6的分泌量及脾淋巴細(xì)胞對(duì)IL-2和INF-γ的分泌量[20-21]。

脾臟是機(jī)體重要的外周免疫器官，由大量的淋巴細(xì)胞組成的，是產(chǎn)生免疫應(yīng)答和發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用的重要器官。多糖對(duì)脾臟細(xì)胞的刺激效應(yīng)主要通過(guò)誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞的增殖以及刺激細(xì)胞因子的分泌等方式進(jìn)行[22-23]。淋巴細(xì)胞增殖水平是反映機(jī)體免疫最直接的指標(biāo)，PFCP體外直接對(duì)脾細(xì)胞具有濃度依賴(lài)性的增殖作用，證明其是一種有絲分裂原，可刺激淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化[24]。脾臟淋巴細(xì)胞中含有T淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞，T淋巴細(xì)胞具有介導(dǎo)細(xì)胞免疫和調(diào)節(jié)性免疫的功能。B淋巴細(xì)胞主要參與體液免疫，釋放特異性抗體[25]。ConA主要刺激T淋巴細(xì)胞增殖，LPS則主要誘導(dǎo)B淋巴細(xì)胞增殖。PFCP體外可同時(shí)促進(jìn)ConA和LPS誘導(dǎo)的脾淋巴細(xì)胞增殖，表明其對(duì)T、B淋巴細(xì)胞均有促進(jìn)作用。說(shuō)明PFCP通過(guò)促進(jìn)淋巴細(xì)胞增殖，達(dá)到增強(qiáng)機(jī)體免疫能力的目的。

多糖刺激脾細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的水平也能反映其免疫調(diào)節(jié)活性。PFCP在50 μg/mL～400 μg/mL時(shí)可顯著誘導(dǎo)Th1型細(xì)胞因子IFN-γ的分泌，IFN-γ 能夠增強(qiáng)NK細(xì)胞和巨噬細(xì)胞溶酶體的活性，從而起到免疫調(diào)節(jié)作用[26]。PFCP在50 μg/mL～200 μg/mL時(shí)可顯著誘導(dǎo)Th2型細(xì)胞因子IL-4的分泌，IL-4 能夠刺激B細(xì)胞的增殖和分化，促進(jìn)免疫球蛋白的合成和分泌[27]。Th1細(xì)胞主要促進(jìn)細(xì)胞介導(dǎo)的免疫，而Th2細(xì)胞以促進(jìn)抗體產(chǎn)生為主，良好的免疫佐劑應(yīng)可同時(shí)誘導(dǎo)Th1和Th2型免疫應(yīng)答[28]，PFCP能活化T淋巴細(xì)胞，并同時(shí)增強(qiáng)Th1和Th2型免疫反應(yīng)，說(shuō)明其具有作為免疫佐劑的潛能。

報(bào)道顯示，阿魏菇多糖能提高脾臟NK細(xì)胞的免疫活性，提高脾臟指數(shù)及T、B淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化率，對(duì)改善機(jī)體免疫功能起重要作用[29]，可以作為宮頸癌疫苗和犬卵透明帶3 DNA不孕疫苗的佐劑[30-31]，但未見(jiàn)有將其作為滅活病毒疫苗佐劑的研究的報(bào)道。鑒于PFCP在體外試驗(yàn)中具有良好的佐劑潛能，將其與iFMDV疫苗混合后免疫接種小鼠，進(jìn)一步研究其佐劑功能。IgG含量高低可以反映機(jī)體的防御能力[32]。由體內(nèi)試驗(yàn)結(jié)果可知，與iFMDV組比較，PFCP中、高劑量組均可顯著促進(jìn)小鼠特異性IgG抗體的產(chǎn)生，且與商品化口蹄疫滅活疫苗的佐劑ISA 206比較，產(chǎn)生的抗體水平無(wú)顯著性差異，說(shuō)明其作為滅活病毒疫苗佐劑，能夠提高體液免疫反應(yīng)，具有免疫增強(qiáng)作用。

疫苗佐劑除了具有誘導(dǎo)特異性抗體生成的能力，還要能夠有效地誘導(dǎo)T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答，它在清除病毒和持續(xù)抗感染方面發(fā)揮重要作用。CD3+存在于所有成熟T淋巴細(xì)胞的表面，是鑒定和區(qū)別T淋巴細(xì)胞的主要標(biāo)志[33]。CD4+和CD8+是T淋巴細(xì)胞的重要亞群，CD4+是輔助性T淋巴細(xì)胞，能夠刺激細(xì)胞因子的分泌，具有誘導(dǎo)和增強(qiáng)免疫應(yīng)答的作用用來(lái)調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)，而CD8+是細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞，能夠介導(dǎo)免疫反應(yīng)，防御進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)的病原體，這是兩種對(duì)適應(yīng)性免疫至關(guān)重要的常見(jiàn)T淋巴細(xì)胞[34]。試驗(yàn)結(jié)果表明，PFCP作為iFMDV疫苗佐劑能夠提升CD3+CD4+和CD3+CD8+T淋巴細(xì)胞的數(shù)量，這也證實(shí)了PFCP具有較強(qiáng)的促進(jìn)細(xì)胞免疫的能力。

綜上所述，PFCP體外能夠單獨(dú)或者協(xié)同ConA和LPS促進(jìn)脾細(xì)胞的增殖，并且促進(jìn)小鼠脾細(xì)胞分泌細(xì)胞因子IFN-γ和IL-4。PFCP體內(nèi)作為iFMDV疫苗佐劑促進(jìn)小鼠IgG抗體的產(chǎn)生，并促進(jìn)CD3+CD4+和CD3+CD8+T淋巴細(xì)胞的增殖，其抗體水平及CD3+CD4+和CD3+CD8+T淋巴細(xì)胞百分率含量與ISA 206佐劑相比較無(wú)顯著差異，具有較好的淋巴細(xì)胞增殖能力和疫苗佐劑作用，值得深入研究。