公英翹蘆散對靶動物奶牛的安全性試驗

潘康鎖，侯佳琪，辛怡霖，唐 熙，李青云，張 欣，祁會彩，代德華，李引乾*

(1.陜西省農(nóng)業(yè)檢驗檢測中心，陜西西安 710016；2.西北農(nóng)林科技大學動物醫(yī)學院，陜西楊陵 712100；3.西安市農(nóng)業(yè)綜合執(zhí)法支隊未央大隊，陜西西安 710016；4.陜西省動物衛(wèi)生與屠宰管理站，陜西西安 710016)

靶動物安全性試驗是新藥研究中至關重要的內(nèi)容之一，旨在了解動物對受試藥物推薦劑量及多倍劑量使用下其臨床反應、生理生化指標、病理變化等特征變化，為受試藥物臨床使用過程中可能出現(xiàn)的不良反應及注意事項提供科學依據(jù)。公英翹蘆散由蒲公英、連翹、黃芩、當歸等12味中藥組成，具有清熱解毒、消癰下乳、通經(jīng)活血之功效，臨床上常用于奶牛乳房炎的治療。為進一步評價公英翹蘆散在臨床使用中的安全性，本試驗參照農(nóng)業(yè)部《獸藥研究技術指導原則匯編》和《中華人民共和國農(nóng)業(yè)部公告第442號》[1-2]，對治療奶牛乳房炎的公英翹蘆散進行奶牛的靶動物安全性試驗，對受試動物給予推薦劑量的1、3、5倍劑量的藥物，連續(xù)7 d[3]，觀察動物給藥后14 d內(nèi)的臨床反應及生理生化指標變化，以考察公英翹蘆散使用于靶動物奶牛的安全性及安全劑量范圍，為進一步臨床試驗給藥方案的制定提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗用動物 健康成年奶牛40頭，由眉縣首善曉峰奶牛場提供。試驗期間常規(guī)飼養(yǎng)。

1.1.2 試驗藥品 公英翹蘆散，內(nèi)蒙古華天制藥有限公司，批號：191201。

1.1.3 主要試劑 尿素氮(BUN)試劑盒(批號：191201)、丙氨酸氨基轉移酶(ALT)試劑盒(批號：191020)、天門冬氨酸氨基轉移酶(AST)試劑盒(批號：191101)、肌酐(SCr)測定試劑盒(批號：190901)、總蛋白(TP)測定試劑盒(批號：191201)、白蛋白(ALB)測定試劑盒(批號：191101)，中生北控生物科技股份有限公司產(chǎn)品。

1.1.4 主要儀器 MTN-81全自動血細胞分析儀，長春曼特諾醫(yī)療器械公司產(chǎn)品；BS-210S型電子分析天平，德國賽多利斯Sartorius股份公司產(chǎn)品；QL-901漩渦振蕩器，其林貝爾儀器制造公司產(chǎn)品；1-15K低溫高速離心機，德國Sigma公司產(chǎn)品。

1.2 方法

1.2.1 試驗動物的分組與處理 將試驗奶牛分為3個試驗組(試驗Ⅰ組、試驗Ⅱ組和試驗Ⅲ組)和對照組，每組10頭。試驗Ⅰ組、試驗Ⅱ組和試驗Ⅲ組每頭奶牛每次分別經(jīng)胃管灌服“公英翹蘆散” 300、900、1 500 g，1日1次，連用7 d。對照組灌服飲用水600 mL，1日1次，連用7 d。

1.2.2 檢測指標

1.2.2.1 奶牛生理指標測定 于給藥前和給藥后對試驗動物的精神、食欲及糞尿情況進行觀察。糞尿觀察主要包括排糞排尿動作、次數(shù)及糞尿顏色、氣味、黏稠度等異常情況。同時，測量給藥前及給藥后試驗奶牛的呼吸頻率、心率及體溫。

1.2.2.2 血液學指標檢測 試驗前試驗組和對照組采空白抗凝血各1次；給藥后7 d、14 d各采抗凝血1次。用全自動血細胞分析儀檢測血液學指標。檢測指標主要有：紅細胞計數(shù)(RBC)、白細胞計數(shù)(WBC)及血紅蛋白(HGB)。

1.2.2.3 血液生化指標檢測 試驗前試驗組和對照組采空白血各1次；分別于給藥后7 d、14 d采非抗凝血，4 000 r/min在4 ℃條件下離心30 min分離，取未溶血的血清作為測定樣本，用于血液生化指標的測定。檢測指標主要有：血清丙氨酸氨基轉移酶(ALT)、血清門冬氨酸氨基轉移酶(AST)、尿素氮(BUN)、肌酐(SCr)、總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)。

2 結果

2.1 公英翹蘆散對奶牛生理指標的影響

連續(xù)給藥14 d后，試驗組奶牛未出現(xiàn)精神異常、食欲廢止、嘔吐、便秘或腹瀉等異常反應，排糞排尿次數(shù)、排泄物顏色、氣味、黏稠度等均正常。由表1可知，各對照組奶牛的呼吸頻率、心率、體溫在試驗前后均未出現(xiàn)明顯變化，各組與對照組相比均無顯著性差異(P>0.05)。

表1 公英翹蘆散對奶牛呼吸頻率、心率、體溫的影響

2.2 公英翹蘆散對奶牛血液學指標的影響

連續(xù)給藥14 d后，7 d、14 d各組奶牛血液學指標檢測結果見表2。由表2可知，各組的血液學指標參數(shù)無明顯變化，同時間比較，對照組與試驗組間的紅細胞數(shù)(RBC)、白細胞數(shù)(WBC)、血紅蛋白(HGB)含量差異均不顯著(P>0.05)。結果表明，公英翹蘆散對受試奶牛的血液學指標無不良影響

表2 公英翹蘆散對奶牛血液學指標的影響

2.3 公英翹蘆散對奶牛血液生化指標的影響

由表3可知，連續(xù)給藥14 d后，奶牛血清門冬氨酸氨基轉移酶(AST)、血清丙氨酸氨基轉移酶(ALT)、尿素氮(BUN)、肌酐(SCr)、總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)活性與給藥前相比均無顯著變化(P>0.05)，試驗組與對照組相比較，各血液生化指標活性差異不顯著(P>0.05)。表明公英翹蘆散對靶動物的肝、腎功能及物質(zhì)代謝無不良影響。

表3 公英翹蘆散對奶牛血液生化指標的影響

3 討論

近年來，隨著抗生素長期使用不當帶來的耐藥性、菌群失調(diào)、不良反應、藥物殘留等問題的疊出及一系列限制抗生素使用的政策出臺，中獸藥以其副作用少、藥性溫和、來源廣泛、不易產(chǎn)生耐藥性及殘留問題而得到廣泛關注。此外，中獸藥還具有抗病毒、抗菌抑菌、抗應激、抗氧化、調(diào)節(jié)免疫力等多種優(yōu)勢[4]，具有良好的發(fā)展前景。公英翹蘆散是由蒲公英、連翹、黃芩等12味中藥組成，其中，蒲公英味甘，平，無毒，《本草綱目》中記載其可化熱毒，消惡腫，研究發(fā)現(xiàn)，蒲公英具有抑菌、抗氧化、抗炎[5]等多種藥理作用，且安全性較高，制成藥物的副作用小[6]。張城達等[7]研究表明，3.8 g/kg復方蒲公英制劑對幼齡大鼠無明顯毒性，安全性良好。連翹味苦，性微寒，主寒熱、主治癰腫、惡瘡，具有良好的抗炎作用[8-10]，連翹果實水提物對大鼠的急性毒性和基因毒性的研究表明，連翹對其均是安全的，可證明連翹作為藥物開發(fā)的安全性[11]。黃芩具有清熱燥濕、瀉火解毒的功效[12]，臨床上常用于治療各類炎癥相關性疾病，研究表明，單次口服黃芪水提取物2 000 mg/kg的劑量范圍內(nèi)，小鼠無任何臨床體征及病理異常，證明其有一定的安全性，可用作臨床治療[13]。

靶動物安全性試驗是確定藥物能否投入臨床使用的重要指標之一，同時，可為臨床制定用藥方案提供重要依據(jù)。本研究結合前期試驗，設置1、3、5倍推薦劑量組及對照組，連續(xù)7 d給藥，評價公英翹蘆散對靶動物奶牛的安全性。在奶牛灌服公英翹蘆散后，經(jīng)對奶牛神經(jīng)意識、行為、飲食、排糞等進行觀察并對奶牛體溫、呼吸頻率、心率進行測定，奶牛無異常臨床表現(xiàn)，健康狀況良好，用藥前后體溫、呼吸頻率、心率均無顯著性變化(P>0.05)，表明公英翹蘆散對奶牛臨床體征無不良影響。而血液學參數(shù)是反應動物機體是否健康的重要指標，若紅細胞(RBC)、白細胞(WBC)等出現(xiàn)數(shù)量或形態(tài)變化，則提示藥物存在毒性，血紅蛋白(HGB)含量可指示血液運輸氧氣的能力，該些指標在正常范圍內(nèi)，可表明動物機體機能處于正常狀態(tài)，本試驗中，給藥7 d與14 d后血常規(guī)指標均在正常參考值范圍內(nèi)，與用藥前指標對比無顯著性差異(P>0.05)，表明公英翹蘆散在推薦劑量的5倍劑量內(nèi)，對奶牛的血常規(guī)指標無不良影響。血液生化指標中，血清丙氨酸氨基轉移酶(ALT)、血清門冬氨酸氨基轉移酶(AST)、白蛋白(ALB)、總蛋白(TP)是評價肝臟功能的重要標志，尿素氮(BUN)、肌酐(SCr)是評價腎臟功能的重要指標，若出現(xiàn)異常，可反映機體肝臟、腎臟及總體代謝功能的異常[14]。本試驗中，用藥后靶動物奶牛血液生化指標變化均處于參考值正常范圍內(nèi)，與用藥前血液生化指標對比無顯著性差異(P>0.05)，表明公英翹蘆散對奶牛的肝、腎功能及機體物質(zhì)代謝能力無不良影響。說明公英翹蘆散的安全性高，可用于奶牛乳房炎的治療。