一種快速判定燙狗脊飲片炮制程度的評價方法

陳敬然，杜微波，張志強，沈建梅

(北京康仁堂藥業(yè)有限公司中藥配方顆粒關(guān)鍵技術(shù)國家地方聯(lián)合工程研究中心/北京市中藥配方顆粒工程技術(shù)研究中心，北京101301)

狗脊為蚌殼蕨科植物金毛狗脊Cibotiumbarometz(L.)J.Sm.的干燥根莖[1]，是傳統(tǒng)的祛風(fēng)濕中藥，臨床上根據(jù)癥狀的差異分別使用狗脊、燙狗脊，中醫(yī)理論認為生狗脊以祛風(fēng)濕、利關(guān)節(jié)為主，燙狗脊以補肝腎、強腰膝為主，現(xiàn)代研究認為化學(xué)成分的變化是生熟異治的原因，恰當?shù)呐谥瞥潭仁侵兴庯嬈饔糜谂R床的重要保障，而關(guān)于飲片炮制程度是否合適的判別方法研究鮮有報道[2]，目前大多數(shù)的研究更多的是關(guān)注于炮制機理、炮制后成分差異及炮制工藝的確定，如解世全等[3]通過對燙狗脊炮制工藝的研究，發(fā)現(xiàn)燙狗脊飲片，其砂燙時間不同、飲片鼓起程度不同，對原兒茶酸含量也存在影響，鼓起程度高的原兒茶酸含量相對較高[4]；袁葉飛等[5]通過狗脊膨化實驗研究，發(fā)現(xiàn)體積增大前后的狗脊飲片，體積變化大的醇溶性浸出物的含量明顯增加，而且鎮(zhèn)痛功效明顯增強。通過以上研究可知，燙狗脊炮制過程中發(fā)生了表面鼓脹的情況，《中國藥典》2020版也將燙狗脊的炮制描述為“砂燙至鼓起”，但應(yīng)鼓脹到什么程度，法定標準和現(xiàn)代研究均沒有給出明確的標準。對于市場上應(yīng)用的燙狗脊的質(zhì)量評估只能以《中國藥典》2020版“燙狗脊”項下的原兒茶酸含量限度標準進行判斷，但原兒茶酸的含量與炮制程度的相關(guān)性研究卻未見報道，因此采用法定標準不能判斷燙狗脊是否炮制到位。本研究從燙狗脊燙制后體積膨脹出發(fā)，將炮制前后其飲片密度差異與專家判別結(jié)果相關(guān)聯(lián)，明確燙狗脊炮制到位的密度限值，建立了一種快速準確的判定燙狗脊飲片炮制程度的方法，以彌補現(xiàn)有技術(shù)的空白。

1 儀器與材料

1.1 儀器

Waters ACQUITY UPLC?H-Class超高效液相色譜儀，PDA Detector紫外檢測器，Empower 3色譜工作站；ME104E電子天平(梅特勒·托利多)，JY2002電子天平(梅特勒·托利多)，BSA124S電子天平(賽多利斯科技儀器(北京)有限公司)，BT25S電子天平(賽多利斯科技儀器(北京)有限公司)，KQ-500DB超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。

1.2 試劑與試藥

原兒茶酸對照品(批號：110809-201906，中國食品藥品檢定研究院)；甲醇、磷酸為色譜純，水為屈臣氏蒸餾水，其他試劑均為分析純。

試驗所用生狗脊片、燙狗脊分別產(chǎn)于廣西、廣東、云南等地，共21批，購自安徽亳州藥材市場，飲片經(jīng)北京康仁堂藥業(yè)有限公司于立偉老師鑒定為蚌殼蕨科植物金毛狗脊(Cibotiumbarometz(L.) J.Sm.)的干燥根莖。詳情見表1。

表1 材料來源

2 方法與結(jié)果

2.1 燙狗脊飲片炮制程度判定法

根據(jù)文獻調(diào)研，解世全等[3]通過正交實驗優(yōu)選出了燙狗脊最佳工藝，得出砂燙時間對狗脊中成分影響最大，砂燙溫度影響較小，砂量幾乎無影響，最終工藝為：180～190 ℃，砂燙6 min，用砂量為8倍量。白桐菲、許枬等[6-7]也驗證了該工藝的可行性，還發(fā)現(xiàn)飲片的規(guī)格和炮制工藝有很大關(guān)系，當飲片為厚度30 mm及以上的飲片，炮制時間應(yīng)在12～15 min，用砂量為10倍量，且砂燙溫度應(yīng)增加至200～220 ℃，由于本研究所使用的狗脊飲片厚度均在10～30 mm，因此將砂燙溫度設(shè)定為200～220 ℃，砂量控制為8～10倍，對砂燙時間進行考察。

2.1.1 燙狗脊飲片的制備 將河砂置于熱鍋內(nèi)，加熱至200～220 ℃，取不同批次大小均勻的生狗脊片約100 g，置熱鍋內(nèi)，翻炒，分別炒制5、8、11、14、17、20 min時取出，放涼，除去殘存絨毛，即得燙狗脊飲片。

2.1.2 飲片檢測 將不同炮制時間的燙狗脊飲片，按《中國藥典》中燙狗脊飲片含量測定方法進行檢測。結(jié)果狗脊飲片炮制5 min后，飲片中水分受熱蒸發(fā)，且燙狗脊飲片原兒茶酸含量均符合《中國藥典》規(guī)定，在狗脊飲片炮制8 min后，飲片中水分已基本恒定。見表2。

2.1.3 燙狗脊飲片炮制程度判定方法的建立 取河砂400 g，置于燒杯中，震蕩，保證砂面水平，測定高度，記錄。取生狗脊飲片及不同炮制時間的燙狗脊飲片各30 g，置同一燒杯中，倒入400 g河砂，震蕩，保證砂面水平，測定高度，計算密度值；重復(fù)上述操作3次，計算密度值的平均值，作為最終密度值；并請從事飲片鑒定的專家進行鑒定，保證結(jié)果的準確性。見表2。

表2 炮制程度密度值

由以上結(jié)果可知，當燙狗脊飲片的密度為0.43～0.60 g·cm-3時，原兒茶酸含量符合藥典規(guī)定，且專家鑒定為合格炮制品；當燙狗脊飲片的密度>0.60 g·cm-3或<0.43 g·cm-3時，為不合格炮制品。

2.1.4 方法學(xué)考察 (1)重復(fù)性考察：由同一個分析人員在同一個實驗室內(nèi)，對同一燙狗脊飲片均按照“2.1.3”項下方法進行測定，在1天之內(nèi)重復(fù)測試6次，并計算RSD。結(jié)果燙狗脊飲片平均密度值為0.56，RSD為0.73%。

(2)精密度考察：選擇6名不同的實驗人員，在同一實驗室內(nèi)，對同一燙狗脊飲片均按照“2.1.3”項下方法進行測定，并計算RSD。結(jié)果不同實驗人員測定燙狗脊飲片平均密度值為0.56，RSD為0.73%。

(3)穩(wěn)定性考察：由同一個分析人員在同一個實驗室內(nèi)，對同一燙狗脊飲片按照“2.1.3”項下方法分別在0、2、4、6、8、12、18、25 h進行測定，并計算RSD。結(jié)果不同時間測定燙狗脊飲片平均密度值為0.56，RSD為0.83%。

(4)方法驗證：將隨機在市場中采購的18批燙狗脊飲片，按照“2.1.3”項下方法進行測定；并參照《中國藥典》中“燙狗脊含量測定”項下的檢測方法進行原兒茶酸的含量檢測；同時請專業(yè)從事飲片鑒定10年的專家進行判定，結(jié)果表明本判定方法針對燙狗脊飲片炮制程度的判斷結(jié)果與專家鑒定的燙狗脊飲片炮制方法一致。見表3。

表3 不同批次燙狗脊密度值驗證結(jié)果

3 結(jié)語

根據(jù)文獻調(diào)研，燙狗脊在炮制過程中其化學(xué)成分原兒茶酸-3-O-糖苷受到加熱的影響可分解成原兒茶酸和糖[8-10]，《中國藥典》2020版也采用原兒茶酸的含量限值對燙狗脊進行質(zhì)量控制，要求燙狗脊中原兒茶酸的含量不得少于0.02%，在本實驗研究過程中發(fā)現(xiàn)，采用該方法檢測時，燙狗脊飲片中原兒茶酸和其同分異構(gòu)體在炮制未合格的情況下，特征峰分離效果較差，易造成原兒茶酸含量測定不準確，因此采用《中國藥典》方法檢測原兒茶酸含量增加了判別錯誤的風(fēng)險。

2020版《中國藥典》中規(guī)定燙狗脊的炮制方法為：照燙法(通則0213)用砂燙至鼓起，放涼后除去殘存絨毛。目的是使狗脊藥材高溫處理后質(zhì)地疏松，利于煎出有效成分，但砂炒至藥材呈疏松鼓起狀，并不易把握火候，往往因為以砂為媒介導(dǎo)致受熱不均勻，出現(xiàn)一部分藥材已發(fā)生炭化而另一部分藥材卻炮制不徹底的現(xiàn)象[11]，因此造成大量偽劣飲片混入市場，市售燙狗脊飲片質(zhì)量參次不齊，無法判斷，嚴重影響了中藥的臨床功效。

本實驗證明，采用密度測定法對燙狗脊飲片炮制程度進行了判定，該方法有利于本實驗采用密度值測定法對燙狗脊飲片炮制程度進行判定，密度值法基于燙狗脊受熱體積增大，通過對燙狗脊飲片體積增大前后密度的變化，以密度客觀數(shù)據(jù)代替主觀經(jīng)驗判斷，因此使燙狗脊炮制程度“可視化”。本實驗通過對比專家鑒定法對市售燙狗脊飲片判斷準確率的方式進行驗證，密度值法的準確率可達到90%，因此本方法具有方便快捷、成本低廉、準確性高的特點。

本研究提供的燙狗脊飲片炮制程度判斷方法，脫離了常規(guī)采用色譜研究對炮制程度進行判斷的方法，是一種更為簡便的方法，可在不損壞樣品的情況下，進行快速測定；并將飲片炮制前后體積的變化以密度值作為表現(xiàn)形式，實現(xiàn)燙狗脊炮制狀態(tài)的量化，將砂燙過程中飲片性狀的變化以數(shù)據(jù)形式展示，更加透明和簡單易懂，并為其他品種的炮制判斷方法提供了一種新思路。