天津七里海珍稀野生葦蘑批量栽培條件優(yōu)化*

左 鑫，趙雪如，劉 江，王雨青，王瑜玥，劉西周，2**

（1.天津師范大學生命科學學院，天津 300387；2.天津市動植物抗性重點實驗室，天津 300387）

天津七里海位于中國天津市寧河區(qū)，域內(nèi)自然生態(tài)資源多樣性豐富[1-2]，該濕地區(qū)域內(nèi)分布有一種俗稱“葦蘑”的蘑菇，隸屬于蠟傘科（Hygrophoropsidaceae）擬蠟傘屬（Hygrophoropsis）[3]。近年來，因一些自然因素，再加上人們無節(jié)制地采摘，野生葦蘑產(chǎn)量和品質(zhì)逐年下降，幾乎絕跡。經(jīng)查閱國內(nèi)外相關(guān)資料，目前僅見葦蘑多糖提取工藝、不同活性物質(zhì)的抗氧化活性作用[4-5]、系統(tǒng)分類[3]、液體培養(yǎng)基優(yōu)化[6-7]、人工馴化初步成功等相關(guān)報道[8]，未見葦蘑批量化栽培方面研究。

通過對天津七里海野生葦蘑批量栽培料配方及出菇方式進行系統(tǒng)研究，旨在篩選出最佳的培養(yǎng)料配方及出菇方式，為葦蘑批量化栽培提供有力支持。研究可為天津七里海野生葦蘑生態(tài)環(huán)境修復與人工批量化栽培提供一定參考，生態(tài)、經(jīng)濟、社會效益顯著，同時對天津七里海珍稀野生葦蘑特色種質(zhì)資源進一步開發(fā)、保護和利用具有積極意義。

1 材料與方法

1.1 供試菌株

野生葦蘑菌株，分離自天津市寧河區(qū)七里海濕地保護區(qū)，現(xiàn)保藏于天津師范大學蕈菌研究所。

1.2 培養(yǎng)基

1.2.1 葦蘑母種培養(yǎng)基的制作

采用PDA綜合培養(yǎng)基：馬鈴薯（浸提液）20%、瓊脂粉2%、葡萄糖2%、KH2PO40.3%、MgSO4·7H2O 0.15%、VB10.001%，pH自然，于121℃滅菌30 min。

1.2.2 原種的制作

原種：90%稻草+10%麥粒，含水量60%，稱料、拌料，并及時裝入聚丙烯袋中，于121℃滅菌2 h。滅菌后，將原種培養(yǎng)料轉(zhuǎn)移到無菌室中，冷卻到約30℃時接種。

1.2.3 栽培種的制作

批量栽培種配方：52%稻草、24%麥粒、24%蘆葦腐殖質(zhì)。選用2 cm～4 cm稻草，浸水12 h預濕，瀝干水分，控制含水量在56%左右。拌料均勻后裝入聚丙烯袋（300 mm×150 mm×0.05 mm），袋裝濕料150 g，于121℃滅菌2 h，冷卻后接種[7]。

1.3 批量栽培培養(yǎng)料配方的研究

1.3.1 袋裝量梯度單因素試驗

以最優(yōu)培養(yǎng)料配方（52%稻草、24%麥粒、24%蘆葦腐殖質(zhì)）為基礎[8-9]，分別設置袋料濕重為100 g/袋、150 g/袋、200 g/袋、250 g/袋、300 g/袋、350 g/袋6個梯度，每個處理10袋。121℃滅菌2 h，冷卻后接入栽培種，于29℃溫箱恒溫培養(yǎng)，根據(jù)菌絲和原基生長情況，確定最佳裝袋量。

1.3.2 稻草比例梯度單因素試驗

以最優(yōu)培養(yǎng)料配方為基礎，分別設置2%、12%、22%、32%、42%、52%稻草6個梯度，不足部分以蛭石（僅作為填充材料，不提供營養(yǎng)）補充，每個處理10袋。121℃滅菌2 h，冷卻后接入栽培種，于29℃溫箱恒溫培養(yǎng)，根據(jù)菌絲和原基形成情況，確定最佳稻草比例。

1.3.3 麥粒比例單因素試驗

以最優(yōu)培養(yǎng)料配方為基礎，分別設置4%、8%、12%、16%、20%、24%麥粒6個梯度，不足部分以蛭石（僅作為填充材料，不提供營養(yǎng)）補充，每個處理10袋。121℃滅菌2 h，冷卻后接入栽培種，于29℃溫箱恒溫培養(yǎng)，根據(jù)菌絲和原基生長情況，確定最佳麥粒比例。

1.3.4 蘆葦腐殖質(zhì)比例梯度單因素試驗

以最優(yōu)培養(yǎng)料配方為基礎，分別設置4%、8%、12%、16%、20%、24%蘆葦腐殖質(zhì)6個梯度，不足部分以蛭石（僅作為填充材料，不提供營養(yǎng)）補充，每個處理10袋。121℃滅菌2 h，冷卻后接入栽培種，于29℃溫箱恒溫培養(yǎng)，根據(jù)菌絲和原基形成情況，確定最佳蘆葦腐殖質(zhì)比例。

1.3.5 麥麩代替麥粒比例梯度單因素試驗

由于麥粒需要提前預煮，操作工藝比較繁瑣，以最優(yōu)培養(yǎng)料配方為基礎，以麥麩替代麥粒，分別設置4%、8%、12%、16%、20%、24%6個麥麩梯度，每個處理10袋。121℃滅菌2 h，冷卻后接入栽培種，于29℃溫箱恒溫培養(yǎng)，根據(jù)菌絲和原基形成情況，確定最佳麥麩比例。

1.4 不同出菇方式對葦蘑批量栽培產(chǎn)量的影響

1.4.1 覆土與不覆土對比處理

將出菇菌棒于最優(yōu)基礎培養(yǎng)料最適條件下培養(yǎng)滿袋后，袋內(nèi)覆土含水量18%，厚度2 cm蘆葦腐殖土；覆土處理50袋，不覆土處理50袋；以不做處理組作為對照，對比覆土前后原基形成與污染情況[9]。

1.4.2 覆土材料滅菌與不滅菌對比處理

覆土操作同上，但將覆土材料滅菌[10]處理50袋，不滅菌處理50袋；按照最佳出菇條件，以不做處理組作為對照，對比覆土滅菌處理前后，生物因素（有益微生物）對葦蘑原基形成情況與污染情況。

1.4.3 頂端與側(cè)面出菇對比處理

出菇菌棒培養(yǎng)滿袋后，分別做上端開口出菇、側(cè)壁劃口出菇2種處理，每組處理50袋，對比原基和子實體形成情況[11-12]。

1.4.4 淺盤式出菇與袋裝批量栽培出菇對比處理

出菇菌棒經(jīng)統(tǒng)一接種后，于25℃條件下培養(yǎng)滿袋后，無菌條件下將滿袋后的菌絲體掰碎后分別置于無菌淺盤（50 cm×40 cm×10 cm），加蓋通氧透氣封膜模擬淺盤出菇。于25℃恒溫條件下，濕度85%～90%，1 000 lx～1 500 lx散射光，光照處理12 h，黑暗處理12 h，連續(xù)處理10 d～12 d即可獲得子實體。以不做處理組作為對照，每組處理50個，對比淺盤出菇與袋栽出菇處理下的原基和子實體形成情況[13]。

2 結(jié)果與分析

2.1 培養(yǎng)料配方對葦蘑出菇的影響

2.1.1 不同袋裝量對葦蘑菌絲體、原基形成的影響

不同袋裝量對葦蘑菌絲生長的影響結(jié)果見表1。

表1 不同裝袋量對葦蘑菌絲體、原基生長的影響Tab.1 Effects of different bag contents on the growth of the mycelium and primordium of Hygrophoropsis sp.

由表1可知，在袋裝量為100 g、150 g時，菌絲較少，少量原基出現(xiàn)。在袋裝量為200 g時，菌絲長勢旺盛，菌絲鋪滿，有大量原基出現(xiàn)，整體松軟。在袋裝量為250 g、300 g、350 g時，菌絲長勢良好，菌絲較多并且呈白色。但原基形成數(shù)量不及袋裝量為200 g處理組，在袋裝量為350 g時，菌袋整體較硬。因此最佳袋裝量為200 g。

2.1.2 不同稻草含量對葦蘑菌絲、原基生長的影響

不同稻草含量對葦蘑菌絲生長的影響結(jié)果見表2。

表2 不同稻草含量對葦蘑菌絲、原基生長的影響Tab.2 Effects of different straw contents on the growth of the mycelium and primordium of Hygrophoropsis sp.

由表2可知，在2%稻草含量配方中菌絲幾乎不萌發(fā)，在12%稻草含量配方中菌絲長勢弱，且不形成原基。在為22%、32%、42%稻草含量配方中菌絲長勢一般，原基數(shù)量少。在52%稻草含量配方中菌絲長勢旺盛，菌絲鋪滿、潔白致密且原基數(shù)量較多。因此選擇最佳稻草含量為52%配方。

2.1.3 不同麥粒含量對葦蘑菌絲、原基生長的影響

不同麥粒含量對葦蘑菌絲生長的影響結(jié)果見表3。

表3 不同麥粒含量對葦蘑菌絲、原基生長的影響Tab.3 Effects of different grain contents on the growth of the mycelium and primordium of Hygrophoropsis sp.

由表3可知，在4%、8%、12%麥粒含量配方中，幾乎無葦蘑原基形成，12%菌絲長勢相對較好。在16%麥粒配方和24%麥粒配方中菌絲長勢良好，菌絲鋪滿，形成原基，但在24%麥粒配方中，污染情況較嚴重。而20%麥粒配方菌絲長勢旺盛，菌絲鋪滿且呈白色、致密，整體松軟，原基數(shù)目較多。因此配方中最佳麥粒含量為20%。

2.1.4 不同蘆葦腐殖質(zhì)含量對葦蘑菌絲、原基生長的影響

不同蘆葦腐殖質(zhì)含量對葦蘑菌絲生長的影響結(jié)果見表4。

由表4可知，在4%蘆葦腐殖質(zhì)含量配方中，菌絲長勢較弱，無原基產(chǎn)生。在8%、12%蘆葦腐殖質(zhì)含量配方中，菌絲長勢一般，有少量原基產(chǎn)生。在16%、20%蘆葦腐殖質(zhì)含量配方中，菌絲長勢優(yōu)良，并且長出了原基，12%的原基形成較少。在24%蘆葦腐殖質(zhì)含量配方中，菌絲長勢旺盛，菌絲鋪滿，原基數(shù)目較多。因此配方中最佳蘆葦腐殖質(zhì)含量為24%。

表4 不同蘆葦腐殖質(zhì)含量對葦蘑菌絲、原基生長的影響Tab.4 Effects of different reed humus contents on the growth of the mycelium and primordium of Hygrophoropsis sp.

2.1.5 不同麥麩含量對葦蘑菌絲、原基生長的影響

不同麥麩含量含量對葦蘑菌絲生長的影響結(jié)果見表5。

表5 不同麥麩含量對葦蘑菌絲體、原基生長的影響Tab.5 Effects of different content of wheat bran on the growth of the mycelium and primordium of Hygrophoropsis sp.

由表5可知，在4%麥麩含量配方中，菌落稀疏、長勢弱，幾乎無原基生成。在8%麥麩配方和12%麥麩含量配方中，菌絲長勢較差，有少量原基產(chǎn)生。在16%麥麩配方和24%麥麩配方中，菌絲長勢良好，形成原基。在20%麥麩配方中，菌絲長勢旺盛，原基數(shù)目較多。因此配方中最佳麥麩含量為20%。

2.2 不同出菇方式對葦蘑批量栽培產(chǎn)量的影響

2.2.1 覆土與不覆土對比處理

覆土情況對葦蘑菌絲生長的影響見表6。

由表6可知，覆土處理培養(yǎng)后，出菇袋無原基形成，試驗結(jié)果表明，覆土對原基的形成有一定影響。另外，由于覆土反而導致試驗過程中出現(xiàn)了大量的菌包污染，而不覆土對照組污染率明顯降低，且原基形成數(shù)量較多，因此覆土處理并不是適用于袋栽方式葦蘑人工批量化出菇。

表6 覆土與不覆土處理結(jié)果Tab.6 The results of soil-covered and uncovered treatments

2.2.2 覆土材料滅菌與不滅菌對比處理

覆土材料滅菌情況對葦蘑菌絲生長的影響見表7。

表7 覆土材料滅菌與不滅菌處理結(jié)果Tab.7 Sterilization and non-sterilization treatment results of covering materials

由表7可知，用滅菌后的覆土材料處理培養(yǎng)后，菌棒并未出現(xiàn)原基，而未滅菌處理的對照組也無原基出現(xiàn)。試驗結(jié)果表明，覆土材料是否滅菌對原基的形成出現(xiàn)無太大影響，但是覆土材料經(jīng)滅菌后，菌袋污染數(shù)量有所減少。

2.2.3 頂端與側(cè)面出菇對比處理

頂端與側(cè)面開口對葦蘑菌絲生長情況的影響見表8，其出菇情況見圖1。

由表8和圖1可知，經(jīng)頂端出菇、側(cè)面出菇2種處理培養(yǎng)14 d后，頂端組開始大量出菇，有畸形菇出現(xiàn)。側(cè)面出菇生長較慢，一直呈現(xiàn)大量原基的狀態(tài)，后期開始出菇，無畸形菇出現(xiàn)。

表8 頂端與側(cè)面出菇處理結(jié)果Tab.8 Results of top and side fruiting

圖1 培養(yǎng)14 d后的頂端與側(cè)面出菇情況Fig.1 Condition of top and side fruiting after 14 days of cultivation

2.2.4 淺盤式出菇與袋栽出菇對比處理

淺盤式出菇與袋栽出菇方式對葦蘑菌絲生長的影響見表9，其出菇情況見圖2。

表9 淺盤出菇與袋栽出菇處理結(jié)果Tab.9 Results of fruiting in shallow tray and fruiting in bags

圖2 培養(yǎng)10 d后淺盤出菇的情況Fig.2 Situation of fruiting after 10 days in shallow plate

由表9、圖2所示，淺盤培養(yǎng)10 d后開始出菇，且無畸形菇出現(xiàn)。袋栽出菇生長較慢，一直呈現(xiàn)大量的原基狀態(tài)，開袋后2 d～3 d被大量污染，僅個別菌袋仍然保持大量原基出現(xiàn)的狀態(tài)。淺盤出菇相較袋栽出菇出菇周期短、污染少且畸形菇少，經(jīng)測算淺盤方式出菇轉(zhuǎn)化率為20%左右。

3 討論與結(jié)論

試驗結(jié)果表明，最適合葦蘑生長的批量栽培料配方為52%稻草、20%麥麩、24%蘆葦腐殖質(zhì)、4%蛭石，最佳袋裝重量為200 g，不適宜覆土；淺盤出菇是最佳的出菇方式，轉(zhuǎn)化率約為20%，試驗為葦蘑批量化栽培提供了理論和實踐支持。

對于適合葦蘑批量栽培培養(yǎng)料配方，在前期工作基礎上進行了系統(tǒng)單因素優(yōu)化試驗，但由于葦蘑生長周期較長，后期試驗開展需要花費一定的時間。應在通過單因素試驗得出結(jié)論的基礎上進一步通過正交試驗綜合優(yōu)化適合葦蘑生長的批量栽培料配方及比例。

人工馴化批量栽培獲得的子實體略小，菌肉較厚，顏色呈淡黃色，革質(zhì)化程度較低，具有較高的商品價值。在對不同出菇方式的研究過程中，發(fā)現(xiàn)覆土處理時培養(yǎng)料易被污染；另外，高溫高濕環(huán)境也容易使已形成的子實體污染；上述不足，需要在后續(xù)的研究中進一步改進。

要改變天津七里海葦蘑瀕危狀態(tài)或恢復其生境，探索適宜的批量栽培料配比和出菇方式具有重要意義。試驗為推進葦蘑的工廠化批量栽培，為保護濕地生態(tài)系統(tǒng)物種多樣性、拯救瀕危野生蕈菌種質(zhì)資源、實現(xiàn)野生葦蘑的合理有序開發(fā)利用提供了有力支持，具有極高的開發(fā)、推廣價值，經(jīng)濟、生態(tài)效益顯著。