種鴿感染毛滴蟲對乳鴿生長性能、胴體性能和免疫功能的影響

邊世雄，李云雷，倪愛心，葛平壯，王園美，宗云鶴，韓鵬敏，趙金蒙，袁經(jīng)緯，孫研研，麻 慧，陳繼蘭

（1.中國農(nóng)業(yè)科學院北京畜牧獸醫(yī)研究所，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部動物遺傳育種與繁殖（家禽）重點實驗室，北京 100193；2.山西農(nóng)業(yè)大學動物科學學院，太谷 030801）

鴿毛滴蟲病是由禽毛滴蟲寄生引起的寄生性原蟲病[1]。禽毛滴蟲是由鞭毛、波動膜、細胞核、氫化酶體和軸柱等組成的單細胞寄生性鞭毛原蟲[2]，能感染鴿、火雞和隼形目鳥類等，其主要宿主是鴿[3]。鴿毛滴蟲主要寄生于口腔、咽喉、嗉囊等上消化道，在部分病鴿的肝臟和脾臟等內臟器官及腸道中也能觀測到蟲體[4]。鴿群可通過直接接觸蟲體或間接接觸被污染的飼料和水源等感染毛滴蟲[5]。鴿毛滴蟲病在世界范圍內廣泛流行，英國、伊朗、美國、加拿大、西班牙和澳大利亞等國均有報道，感染率在22%～74%[6-9]；在中國，北京、山東、河北、貴州、山西、安徽、上海和四川等地，感染率為14.9%～77.8%[10-13]。

鴿毛滴蟲病的臨床癥狀與蟲株的致病性和宿主對蟲株的抗性密切相關[14]。蟲株的致病性取決于其毒力和感染方式，蟲株毒力強的，宿主可能出現(xiàn)寄生部位炎癥、潰瘍和組織壞死等病變，導致宿主進食困難、生產(chǎn)性能下降和免疫機能降低，嚴重時導致死亡[5]；根據(jù)寄生部位和臨床癥狀，可將毛滴蟲病分為咽型、內臟型和臍型[3]。不同年齡階段的肉鴿對毛滴蟲的抗性不同，成年鴿感染后，無明顯臨床癥狀，常表現(xiàn)為終身帶蟲[3]。乳鴿主要通過鴿乳感染，對毛滴蟲的抵抗力較弱，易引發(fā)其他疾病的繼發(fā)感染，死亡率較高[1]。目前對于鴿毛滴蟲病的臨床癥狀及病理變化的研究較多[4-7]，但種鴿感染后對乳鴿的影響鮮見相關報道。本試驗探究種鴿感染毛滴蟲后對乳鴿生長性能、胴體性能和免疫功能的影響，旨在為生產(chǎn)中鴿毛滴蟲病的防治提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗動物

試驗在山西省某肉鴿場開展。分別選擇18對未感染和18對感染毛滴蟲的種鴿為對照組和試驗組，采用2+2的飼養(yǎng)模式，每對種鴿哺育2只乳鴿。

1.2 飼養(yǎng)管理

鴿舍為密閉式，采取機械通風換氣，每天光照16 h。種鴿自由采食和飲水，種鴿基礎飼糧由50%原糧（玉米∶豌豆∶高粱∶小麥=4∶3∶1.5∶1.5）和50%顆粒料（寧達飼料518，購自河北寧達飼料有限公司，為玉米豆粕型顆粒料）組成。

1.3 檢測指標

1.3.1 毛滴蟲檢測 以咽拭子標本法采集種鴿和乳鴿口腔毛滴蟲，利用光學顯微鏡觀察毛滴蟲的形態(tài)，以血球計數(shù)板法統(tǒng)計毛滴蟲數(shù)量[1-2]。

1.3.2 生長性能 分別在乳鴿1、3、7、14、21和28日齡對乳鴿稱重，稱重前乳鴿空腹12 h;統(tǒng)計乳鴿平均日增重（ADG）和死亡率。

1.3.3 胴體性能 試驗第28天時，在試驗組和對照組分別隨機選取6只乳鴿（公母各半），空腹12 h 后稱重、屠宰。 屠宰方法和測定指標依據(jù)《家禽生產(chǎn)性能名詞術語和度量計算方法》（NY/T 823-2020）[15]進行，計算屠宰率、全凈膛率、胸肌率、腿肌率及腹脂率；采集胸腺、肝臟、脾臟和法氏囊稱重，并計算器官指數(shù)[16]，公式如下：

屠宰率（%）=屠體重/活重×100%

半凈膛率（%）=半凈膛重/屠體重×100%

全凈膛率（%）=全凈膛重/屠體重100%

胸肌率（%）=胸肌重/全凈膛重×100%

器官指數(shù)=器官重/活重×100

1.3.4 組織病理學切片 采集乳鴿的口腔黏膜、胸腺、肝臟和脾臟，用4%組織固定液固定組織樣本，委托北京雪邦科有限公司制作石蠟切片，并參照《實驗動物病理學檢測DB53/T 293.3-2009》[17]標準，對石蠟切片進行蘇木精-伊紅（HE）染色，鏡檢觀察。4%組織固定液和蘇木精-伊紅（HE）染色液均購自北京索萊寶科技有限公司。

1.3.5 血清生化指標 試驗第28天利用促凝管和采血針采集乳鴿血液，制備血清。利用全自動生化分析儀（CLS880）檢測血清樣本中總膽固醇（TC）、高密度脂蛋白（HDL）、低密度脂蛋白（LDL）、白蛋白（ALB）水平、谷丙轉氨酶（ALT）和谷草轉氨酶（AST）活性；采用ELISA法測定血清中可溶性抗原CD4（sCD4）、可溶性抗原CD8（sCD8）、免疫球蛋白A（IgA）和免疫球蛋白G（IgG）（委托北京萊博泰瑞科技發(fā)展有限公司測定）。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

采用SAS 8.1統(tǒng)計軟件對乳鴿口腔內毛滴蟲數(shù)量、乳鴿體重、胴體性能和乳鴿血清生化指標等數(shù)據(jù)進行單因素方差分析，結果以平均值±標準差表示；乳鴿死亡率采用卡方檢驗分析。P<0.05表示差異顯著。

2 結 果

2.1 種鴿和乳鴿口腔毛滴蟲數(shù)量

由表1可知，試驗組種鴿在哺育期開始時，口腔毛滴蟲平均數(shù)量為7.78×104/mL，整個哺育期無顯著變化（P>0.05），對照組種鴿口腔毛滴蟲數(shù)量始終為0。試驗組乳鴿口腔毛滴蟲數(shù)量均顯著高于對照組（P<0.01），且隨乳鴿日齡的增加而顯著增多（P<0.05）（表2）。

表1 種鴿口腔毛滴蟲數(shù)量Table 1 The number of Trichomonas gallinae in the oral cavity of breeding pigeon ×104/mL

表2 乳鴿口腔毛滴蟲數(shù)量Table 2 The number of Trichomonas gallinae in the oral cavity of squabs ×104/mL

2.2 毛滴蟲對乳鴿生長性能的影響

由圖1可知，乳鴿感染毛滴蟲后，死亡率顯著升高。試驗全期試驗組乳鴿死亡率為26.92%，對照組為8.33%，試驗組死亡率顯著高于對照組（P<0.05）。

與對照組相比，*，差異顯著（P<0.05）Compare with control group,*,Significant difference （P<0.05）圖1 毛滴蟲對不同階段乳鴿死亡率的影響Fig.1 Effects of Trichomonas gallinae on death rate of squab at different stages

試驗組和對照組乳鴿生長階段體重及平均日增重變化見表3和表4。試驗組乳鴿在1～7 d的平均日增重顯著低于對照組（P<0.05），在乳鴿21日齡前，試驗組乳鴿體重均小于對照組，但試驗組和對照組乳鴿體重差異不顯著（P>0.05）。

表3 乳鴿不同生長階段的平均體重Table 3 Average body weight of squab at different growth stages g

表4 乳鴿不同生長階段的平均日增重Table 4 Average daily gain of squab at different growth stages g/d

2.3 毛滴蟲對乳鴿胴體性能的影響

由表5可知，試驗組和對照組乳鴿的屠宰率、半凈膛率、全凈膛率、胸肌率、腿肌率均無顯著差異（P>0.05）。

表5 乳鴿胴體性能Table 5 Slaughter performance of squab %

2.4 毛滴蟲對乳鴿器官指數(shù)的影響

由表6可知，試驗組和對照組乳鴿的胸腺、法氏囊和肝臟指數(shù)無顯著差異（P>0.05），但試驗組乳鴿脾臟指數(shù)顯著低于對照組（P<0.05）。

表6 乳鴿器官指數(shù)Table 6 Organ index of squab

2.5 乳鴿組織病理學觀察

組織病理切片表明，試驗組乳鴿口腔黏膜上皮異常增生，上皮層次紊亂，基底層細胞空泡變形和細胞極性消失，棘層部分細胞角化不良，炎性細胞浸潤（圖2A）；胸腺和脾臟組織中，炎性細胞浸潤，淋巴細胞變性壞死，數(shù)量減少，胸腺中小葉皮質區(qū)出血和部分組織壞死（圖2C、2G）；肝臟細胞空泡變性和異嗜性粒細胞浸潤（圖2E）。對照組乳鴿口腔黏膜上皮層次紊亂，處于快速增殖階段（圖2B）；胸腺、肝臟和脾臟無明顯病變（圖2D、2F、2H）。

2.6 毛滴蟲對乳鴿血液指標的影響

由表7可知，試驗組乳鴿血清中谷丙轉氨酶、谷草轉氨酶活性及白蛋白水平顯著提高（P<0.05），sCD8水平顯著降低（P<0.05）,試驗組和對照組血清中總膽固醇、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、IgA、IgG和sCD4水平均差異不顯著（P>0.05）。

表7 乳鴿血清生化指標Table 7 Serum biochemical index of squab

續(xù)表

3 討 論

3.1 種鴿感染毛滴蟲對乳鴿的影響

鴿毛滴蟲病是嚴重影響肉鴿養(yǎng)殖的一種寄生蟲病，在鴿群中流行較廣[18-22]。研究表明，種鴿毛滴蟲陽性率和乳鴿陽性率兩者呈顯著正相關[21]，目前對毛滴蟲感染率調查較多，但對鴿群中口腔毛滴蟲數(shù)量的調查研究較少。本研究分別統(tǒng)計了不同哺育時期試驗組和對照組種鴿和乳鴿口腔毛滴蟲數(shù)量。試驗組種鴿口腔毛滴蟲數(shù)量無顯著差異，乳鴿口腔毛滴蟲數(shù)量隨著乳鴿日齡的增加而增多，并大于種鴿口腔內蟲株數(shù)量，表明乳鴿對毛滴蟲的抵抗能力弱于種鴿。試驗組乳鴿口腔毛滴蟲數(shù)量統(tǒng)計結果顯示個體間差異較大，可能與乳鴿對毛滴蟲的天然抗性存在差異有關，倪愛心[1]在其研究中也證實了乳鴿個體間天然免疫力的差異，并篩選出參與調控鴿毛滴蟲抗性的基因FAAH和DDIT4，可進一步揭示其抗病遺傳機理，有助于選育抗鴿毛滴蟲病品系，從遺傳學上提高鴿的抗病力。毛滴蟲蟲株主要存在于病鴿的口腔黏膜和口腔分泌的黏液中[23]，口腔中毛滴蟲的數(shù)量能在一定程度上反映毛滴蟲在鴿群中的流行情況和感染程度，定期檢測鴿群中口腔毛滴蟲數(shù)量，對防治鴿毛滴蟲病具有指導意義。

3.2 毛滴蟲對乳鴿免疫功能的影響

毛滴蟲入侵乳鴿后，首先在口腔內生存、繁殖并破壞口腔黏膜層的上皮細胞和棘層細胞使其凋亡脫落，造成黏膜層損傷，引發(fā)口腔流涎，出現(xiàn)壞死性潰瘍或干酪樣沉積物，造成飲食和呼吸困難；蟲體從病灶部位進入體液循環(huán)系統(tǒng)，隨血液到達肝臟和脾臟等器官，引起宿主肝臟、脾臟等內臟器官干酪樣結節(jié)和細胞壞死[22]，導致乳鴿免疫功能下降，最終死亡[5-9]。

胸腺、脾臟和法氏囊為鴿體內的主要免疫器官，是機體免疫功能發(fā)揮的重要基礎[24-28]。其中，脾臟是機體主要的外周免疫器官，是T、B淋巴細胞的定居場所，參與機體體液免疫和細胞免疫，在免疫過程中發(fā)揮重要作用[28-31]；胸腺是T淋巴細胞分化成熟的重要場所，主要參與機體內細胞免疫[29-30]。本研究結果表明，毛滴蟲侵染乳鴿后，引起乳鴿口腔黏膜上皮空泡變形和炎性細胞浸潤，肝臟表面有干酪樣結點，肝臟細胞空泡變性，部分細胞壞死，胸腺和脾臟淋巴細胞變性壞死，異嗜性粒細胞在脾臟和胸腺中聚集，異嗜性粒細胞的聚集表明脾臟和胸腺中均有炎癥反應發(fā)生[32]。此外，乳鴿感染毛滴蟲后，脾臟指數(shù)顯著低于對照組，據(jù)報道，脾臟指數(shù)一定程度上能夠反映機體的免疫功能，脾臟指數(shù)降低為免疫抑制所致[31]，因此，乳鴿感染毛滴蟲后，能夠引起胸腺、肝臟和脾臟免疫器官內的炎癥反應，抑制脾臟發(fā)育，降低乳鴿的免疫水平。

免疫球蛋白是體液免疫系統(tǒng)的重要組成成分，IgA主要參與機體內黏膜免疫過程，能夠在非特異性免疫防護機制協(xié)助下減少病原微生物[33]；IgG是血清中主要的免疫球蛋白，參與機體內體液免疫反應[28]。sCD4和sCD8是輔助性T細胞（CD4+）和細胞毒性T細胞（CD8+）釋放的可溶性抗原，體液中sCD4和sCD8水平與CD4+和CD8+細胞激活密切相關，是體內細胞免疫激活的標志之一[34]。本研究中乳鴿感染毛滴蟲后，血液中sCD8水平顯著降低，而sCD4、IgA和IgG水平與對照組無顯著差異，這一結果與Mercer等[23]報道結果一致。因此，推測機體主要通過細胞免疫途徑識別并消除體內毛滴蟲，但乳鴿免疫器官發(fā)育并不完善，免疫力水平較低，毛滴蟲侵入機體后抑制血液中sCD8的表達，對乳鴿免疫器官中肝臟和脾臟影響更為顯著，在治療鴿毛滴蟲病的同時，可添加保肝健脾的藥物或保健品提高治療效果。

3.3 毛滴蟲對乳鴿生長性能和胴體性能的影響

毛滴蟲可感染各日齡的肉鴿，但對乳鴿的影響最為嚴重[23]。不同日齡的乳鴿感染毛滴蟲后表現(xiàn)的癥狀不同，剛出生的乳鴿可從鴿乳中獲得母源抗體，從而對毛滴蟲有一定抗性，但6～15日齡乳鴿多發(fā)生急性感染，體重下降或變成僵鴿，大量死亡，嚴重降低乳鴿的生產(chǎn)性能[3-6]。本研究中，乳鴿口腔毛滴蟲數(shù)量與乳鴿死亡率和體重存在顯著相關，乳鴿感染毛滴蟲后，死亡率逐漸升高，1～7日齡的平均日增重顯著低于試驗組，平均體重在21日齡前均低于對照組乳鴿體重，因此毛滴蟲感染可使乳鴿體重下降、死亡率升高。

相關報道表明，毛滴蟲侵染乳鴿，對乳鴿的肝臟造成損傷，乳鴿腹脂減少[23]，而腹脂的沉積與體內脂類代謝水平呈顯著相關[35-37]。血液中AST和ALT活性能反映肝臟功能的受損程度[35]，總膽固醇、低密度脂蛋白和高密度脂蛋白水平在一定程度上反映了體內脂類代謝狀況[36]。血液中膽固醇主要來自于肝臟合成和食物中獲取的膽固醇。血液中膽固醇的水平通常保持恒定，肝臟病變會降低膽固醇水平[38]；低密度脂蛋白和高密度脂蛋白主要參與運輸內源性膽固醇酯，低密度脂蛋白促進脂肪沉積，而高密度脂蛋白減少沉積作用。本研究中試驗組和對照組乳鴿腹脂率差異不顯著，試驗組乳鴿血液中AST和ALT活性顯著升高，而總膽固醇、低密度脂蛋白和高密度脂蛋白水平與對照組差異不顯著，可能是肝臟參與脂質代謝的功能尚未被毛滴蟲侵害損傷，但目前關于乳鴿感染毛滴蟲后體內脂類代謝水平的變化尚不清晰，有關毛滴蟲對乳鴿血清生化指標影響的報道較少，需要進一步探究。

毛滴蟲對乳鴿胴體性能影響的報道較少，本研究中試驗組和對照組胴體性能差異均不顯著，這可能與乳鴿生長期較短、生長迅速以及感染毛滴蟲的水平較低有關，但毛滴蟲的感染會導致乳鴿死亡率升高，降低毛滴蟲免疫水平，且有降低乳鴿體重的趨勢，應及時對鴿場中毛滴蟲病進行防治，避免對肉鴿養(yǎng)殖生產(chǎn)造成嚴重的經(jīng)濟損失。

4 結 論

在本試驗中，種鴿感染毛滴蟲導致乳鴿被感染，乳鴿口腔毛滴蟲數(shù)量逐漸增加，28日齡時達到30.67×104/mL，死亡率可達26.92%。毛滴蟲可對乳鴿口腔黏膜造成損傷并侵入機體，造成肝臟、脾臟的病理損傷和免疫功能下降。在生產(chǎn)實踐中應及時對鴿場的毛滴蟲病進行流行病學調查，避免其大規(guī)模流行，并根據(jù)感染情況進行綜合防治。