質(zhì)量控制對(duì)免疫組化病理技術(shù)制片質(zhì)量的影響

馬改玲

(登封市人民醫(yī)院 病理科，河南 鄭州 452470)

免疫組化病理技術(shù)是檢驗(yàn)科重要診斷方法，具有廣泛且深遠(yuǎn)的運(yùn)用，目前已成為檢驗(yàn)科操作人員工作過(guò)程中必不可缺的主要內(nèi)容。免疫組化病理技術(shù)包括固定﹑切片﹑抗原及抗體選擇﹑抗原修復(fù)﹑顯色等諸多步驟，而若其中某一環(huán)節(jié)出現(xiàn)問(wèn)題，則會(huì)影響整體檢驗(yàn)結(jié)果。因此，加強(qiáng)免疫組化病理技術(shù)質(zhì)量控制，對(duì)病理檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性的保障具有重要意義。鑒于此，為驗(yàn)證質(zhì)量控制對(duì)免疫組化病理技術(shù)制片質(zhì)量的影響，現(xiàn)對(duì)登封市人民醫(yī)院病理科2019年9月至2020年9月收集的120例肺部組織標(biāo)本展開(kāi)探討，具體如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019年9月至2020年9月登封市人民醫(yī)院病理科120例肺部組織標(biāo)本，根據(jù)隨機(jī)摸球法分成傳統(tǒng)組與質(zhì)控組，每組60例。傳統(tǒng)組男性﹑女性標(biāo)本各34例﹑26例，肺部疾病類(lèi)型：肺癌﹑肺結(jié)核﹑慢阻肺各20例；質(zhì)控組男性﹑女性標(biāo)本各35例﹑25例，肺部疾病類(lèi)型：肺癌﹑肺結(jié)核﹑慢阻肺各18例﹑21例﹑21例。兩組病理樣本均來(lái)自于病理活檢，性別﹑疾病類(lèi)型等資料具有同質(zhì)性(＞0.05)，具有可比性。

兩組標(biāo)本檢測(cè)過(guò)程均由同一批檢驗(yàn)團(tuán)隊(duì)完成，團(tuán)隊(duì)共包15名成員，在檢驗(yàn)及臨床質(zhì)控期間，所有成員無(wú)離職﹑中途退出情況。

納入標(biāo)準(zhǔn)：患者知曉此次研究，簽署知情同意書(shū)；符合肺部相關(guān)疾病的金標(biāo)準(zhǔn)；患者精神狀態(tài)正常，能配合檢驗(yàn)工作。

排除標(biāo)準(zhǔn)：拒絕參與者；意識(shí)模糊或昏迷患者；對(duì)檢驗(yàn)不耐受者；合并高血壓﹑糖尿病等基礎(chǔ)性疾病者；合并血液系統(tǒng)疾病者。

1.2 方法

傳統(tǒng)組：運(yùn)用傳統(tǒng)方法制作病理組織切片，方法如下：常規(guī)固定病理組織標(biāo)本，于組織標(biāo)本離體約30 min之內(nèi)，將其置于事先準(zhǔn)備好的固定液內(nèi)或者實(shí)施低溫保存。而后，把組織標(biāo)本置入10%中性緩沖甲醛溶液(上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司)中實(shí)施固定處理，時(shí)間控制為8～24 h，固體液量需超過(guò)組織塊體積的5～10倍。以熱修復(fù)法對(duì)經(jīng)固定后的組織標(biāo)本實(shí)施抗原修復(fù)，借助熱效應(yīng)對(duì)抗原進(jìn)行引導(dǎo)，抗原修復(fù)溫度需超過(guò)100℃，修復(fù)時(shí)間控制為4～10 min，修復(fù)液酸堿值為7.5～8.5。依照操作流程對(duì)經(jīng)修復(fù)后的標(biāo)本實(shí)施切片處理。充分脫蠟，均勻增加足量試劑，確保試劑面積集超過(guò)切面組織界限0.10～0.35 cm，以避免邊緣效應(yīng)的發(fā)生?？茖W(xué)掌控標(biāo)本于浸液內(nèi)的溫度與烘烤切片時(shí)溫度。

質(zhì)控組：實(shí)施優(yōu)質(zhì)的免疫組化質(zhì)控管理方案，具體措施如下：

(1)材料選擇的質(zhì)量管理：①組織固定。在標(biāo)本離體后半小時(shí)內(nèi)，低溫保存或剖開(kāi)內(nèi)固定，固定時(shí)間控制在24h以?xún)?nèi)即可，保持固定均勻，抗原保存良好。②選取合適玻片：若遵循價(jià)格﹑適用范圍廣的原則，選擇聚賴(lài)氨酸硅膠片。在經(jīng)費(fèi)允許的情況下，選擇陽(yáng)離子免疫組化玻片能夠取得更為理想的效果。③組織切片：切片厚度均勻且薄，以3～4 μm，保證切片無(wú)缺損﹑皺紋及折疊，溫度控制在65～68℃左右，確保脫蠟干凈。切片烘烤禁止反復(fù)烘烤，避免抗原擴(kuò)散。

(2)試劑質(zhì)控管理：①合理分類(lèi)。將吉姆薩染色劑﹑DNA﹑RNA等類(lèi)型的染色劑分類(lèi)，避免造成使用混亂。②采購(gòu)﹑配置工作合理管理：合理制定采購(gòu)方案，并通過(guò)正軌渠道購(gòu)買(mǎi)試劑，確保試劑原材料過(guò)關(guān)，避免發(fā)生染色不佳﹑制片不良等情況發(fā)生。

通過(guò)信息化的手段，完善科研經(jīng)費(fèi)的內(nèi)部控制。所有項(xiàng)目經(jīng)費(fèi)和收支及預(yù)算情況，包括科研經(jīng)費(fèi)支出情況，均應(yīng)納入科研經(jīng)費(fèi)管理系統(tǒng)。在論證階段，就將預(yù)算上傳至相關(guān)的管理系統(tǒng)進(jìn)行審批；經(jīng)費(fèi)支出時(shí)，需選擇對(duì)應(yīng)的預(yù)算項(xiàng)目進(jìn)行支付；項(xiàng)目結(jié)題時(shí)，系統(tǒng)可以自行反映項(xiàng)目資金執(zhí)行情況。實(shí)施科研經(jīng)費(fèi)的全面、全過(guò)程、全方位的控制。

(3)規(guī)范化切片制作流程：室溫條件下，對(duì)標(biāo)本實(shí)施脫蠟﹑切片處理，將其置入3%雙氧水(重慶華東化工有限公司)內(nèi)浸泡約20 min，以磷酸鹽緩沖液(PBS)(上海江萊生物科技有限公司)對(duì)切片實(shí)施沖洗3次，每隔5 min實(shí)施1次沖洗操作，連續(xù)開(kāi)展15 min。在100 mL燒杯內(nèi)加入700 mL檸檬酸緩沖液(pH=6.0)(上海研謹(jǐn)生物科技有限公司)，給予加熱處理，待溶液沸騰后，添加標(biāo)記有HBsAg抗體﹑HBcAg抗體﹑Ki-67抗體﹑CK19抗體，加熱約15 min，在每個(gè)切片上加入1滴一抗，將其放置于冰箱內(nèi)(40℃)孵育。以PBS(pH=7.4)反復(fù)沖洗切片3次，每隔5 min，連續(xù)沖洗約15 min。室溫條件下，于每個(gè)切片上加入1滴二抗，孵育約15 min，再以PBS(pH=7.4)反復(fù)沖洗3次，每隔5 min沖洗1次，操作連續(xù)15 min。把切片置入顯色劑內(nèi)顯色10 min，以蘇木精對(duì)切片實(shí)施襯染及水洗，然后，以脫水透明中型樹(shù)膠給予切片封固處理。

1.3 觀察指標(biāo)

觀察兩組制片質(zhì)量﹑診斷結(jié)果﹑制片時(shí)間與出報(bào)告時(shí)間。

(1)病理切片質(zhì)量分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)：優(yōu)：鏡下觀察容易，對(duì)比明確，色彩鮮亮，無(wú)刀痕，無(wú)氣泡，無(wú)皺褶，無(wú)污染，貼附端正，薄厚均勻平坦，編號(hào)清晰；良：鏡下觀察較為容易，對(duì)比較為明確，色相較鮮亮，無(wú)刀痕，無(wú)氣泡，少量皺褶，無(wú)污染，貼附較端正，薄厚均勻，編號(hào)清晰；差：鏡下觀察困難，對(duì)比不明確，色彩不清晰，有刀痕，有氣泡，有皺褶，有污染，貼附不端正，薄厚不均勻，編號(hào)不清晰。制片優(yōu)良率=優(yōu)率+良率。

(2)記錄兩組對(duì)疾病的確診情況，確診率=確診例數(shù)/總計(jì)數(shù)×100%。

(3)統(tǒng)計(jì)兩組制片時(shí)間﹑出報(bào)告時(shí)間。

(4)統(tǒng)計(jì)兩組不良制片結(jié)果，包括組織脫片﹑染色信號(hào)不均﹑背景非特異性染色和染色信號(hào)弱，總發(fā)生率=發(fā)生例數(shù)/總例數(shù)×100%。

(5)檢驗(yàn)人員對(duì)兩組檢驗(yàn)結(jié)果的滿(mǎn)意度評(píng)估，從制片質(zhì)量﹑準(zhǔn)確性﹑不良事件﹑制片過(guò)程(是否簡(jiǎn)便﹑完善)四個(gè)維度進(jìn)行評(píng)估，每個(gè)維度按照0～25分標(biāo)準(zhǔn)，評(píng)分越高提示檢驗(yàn)人員的自我滿(mǎn)意度越高，總分0～100分。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié) 果

2.1 兩組制片質(zhì)量比較

質(zhì)控組制片優(yōu)良率顯著高于傳統(tǒng)組比(＜0.05)。見(jiàn)表1。

表1 兩組制片質(zhì)量比較[n(%)]

2.2 兩組疾病確診率比較

與傳統(tǒng)組比，質(zhì)控組疾病確診率明顯較高(＜0.05)。見(jiàn)表2。

表2 兩組疾病確診率比較[n(%)]

2.3 兩組制片時(shí)間、出報(bào)告時(shí)間比較

兩組制片時(shí)間﹑出報(bào)告時(shí)間相比，均無(wú)顯著差異(＞0.05)。見(jiàn)表3。

表3 兩組制片時(shí)間、出報(bào)告時(shí)間比較(± s )

2.4 兩組不良制片結(jié)果發(fā)生率比較

兩組不良制片結(jié)果發(fā)生率比較，質(zhì)控組明顯低于傳統(tǒng)組(＜0.05)。見(jiàn)表4。

表4 兩組不良制片結(jié)果發(fā)生率比較[n(%)]

2.5 檢驗(yàn)人員滿(mǎn)意度評(píng)估評(píng)分比較

兩組檢驗(yàn)人員自我滿(mǎn)意度評(píng)分相比，質(zhì)控組評(píng)分明顯高于傳統(tǒng)組(＜0.05)。見(jiàn)表5。

表5 檢驗(yàn)人員滿(mǎn)意度評(píng)估評(píng)分比較(± s ) 單位：分

3 討 論

免疫組化學(xué)技術(shù)又稱(chēng)免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)，為實(shí)施病理學(xué)診斷的重要手段之一，即指經(jīng)對(duì)特異性抗原或抗體于組織細(xì)胞原位實(shí)施標(biāo)記，借助抗原抗體免疫反應(yīng)與組織化學(xué)顯色反應(yīng)，對(duì)相應(yīng)抗原或抗體進(jìn)行定位及定性分析。在實(shí)際病理診斷過(guò)程中，若想獲取理想診斷效果，需首先確保免疫組化制片質(zhì)量能有效滿(mǎn)足檢驗(yàn)需要。但在免疫組化病理組織操作過(guò)程中，易受到諸多因素影響，導(dǎo)致整體診斷質(zhì)量下降。因此，臨床在實(shí)施病理制片操作時(shí)，應(yīng)嚴(yán)格遵守相關(guān)操作準(zhǔn)則，規(guī)范化免疫組化流程，以提升免疫組化技術(shù)準(zhǔn)確性及疾病確診率。

檢測(cè)材料的選擇直接關(guān)系到制片優(yōu)良率，病理組織檢驗(yàn)選取的病變位置﹑體積不適宜(如：組織壞死或變形﹑薄厚不均等)是取材環(huán)節(jié)常見(jiàn)問(wèn)題，這將會(huì)對(duì)最終診斷結(jié)果產(chǎn)生一定影響。為解決這一問(wèn)題，本次在免疫組化檢測(cè)技術(shù)管理中，需做好組織固定﹑組織切片管理工作，同時(shí)選擇材料良好的玻片，防止材料選擇不當(dāng)導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果失真。本研究中，質(zhì)控組制片優(yōu)良率和傳統(tǒng)率比，明顯較高(＜0.05)，提示免疫組化病理技術(shù)制片質(zhì)量控制的運(yùn)用能優(yōu)化病理組織標(biāo)本制片質(zhì)量。

質(zhì)控組不良制片結(jié)果發(fā)生率顯著低于傳統(tǒng)組，檢驗(yàn)人員自我滿(mǎn)意評(píng)分高于傳統(tǒng)組(＜0.05)，由此可見(jiàn)質(zhì)量控制措施的實(shí)施，能夠有效提升制片質(zhì)量，減少不良制片結(jié)果，提升檢驗(yàn)者的自我滿(mǎn)意度?？梢?jiàn)本研究制片的選材精準(zhǔn)，除材料選擇準(zhǔn)確外，制片質(zhì)量提升﹑不良制片結(jié)果還與嚴(yán)格把控試劑質(zhì)量有關(guān)。每一種試劑質(zhì)量對(duì)病理檢驗(yàn)結(jié)果存在著直接影響，如果試劑在使用期間發(fā)生揮發(fā)問(wèn)題，可造成其純度下降，進(jìn)而影響制片質(zhì)量及病理檢驗(yàn)結(jié)果。本次在免疫組化檢測(cè)期間，對(duì)不同試劑分門(mén)別類(lèi)，有效防止檢測(cè)期間試劑混用情況的發(fā)生，管理人員還定期更換新的試劑，防止試劑過(guò)期。試劑采購(gòu)﹑配置過(guò)程流程化，進(jìn)而杜絕不合格試劑的使用，保證制片質(zhì)量。

質(zhì)控組疾病確診率顯著高于傳統(tǒng)組(＜0.05)，說(shuō)明免疫組化病理技術(shù)制片質(zhì)量控制的使用可提高疾病確診率。分析原因：制片過(guò)程嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)室操作流程逐一實(shí)施檢測(cè)，控制檢測(cè)室溫，染色過(guò)程確保核漿分化明顯﹑對(duì)比清晰，控制染色試劑劑量，防止染色過(guò)紅﹑過(guò)藍(lán)的情況發(fā)生。為防止染色劑影響到染色效果，及時(shí)更新染色實(shí)際，根據(jù)不同試劑性質(zhì)，合理控制染色劑調(diào)制時(shí)間，有效提升制片準(zhǔn)確率，為后期疾病確診率精準(zhǔn)化做出貢獻(xiàn)。

質(zhì)控組制片時(shí)間﹑出報(bào)告時(shí)間和傳統(tǒng)組比，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(＞0.05)，表示免疫組化病理技術(shù)制片質(zhì)量控制不會(huì)造成制片時(shí)間和出報(bào)告時(shí)間的延長(zhǎng)，具有較好實(shí)踐價(jià)值。本研究選取的指標(biāo)較為豐富，從各個(gè)角度分析質(zhì)量控制用于免疫組化病理技術(shù)的效果，有效證實(shí)質(zhì)量控制與病理檢驗(yàn)結(jié)合的臨床價(jià)值。本研究選取120例肺部標(biāo)本，是不同類(lèi)型疾病的標(biāo)本，這給免疫組化檢驗(yàn)的鑒別帶來(lái)難度，同時(shí)更能證明質(zhì)量控制在檢驗(yàn)過(guò)程中實(shí)施的重要意義。除以上優(yōu)勢(shì)，本研究也有缺陷，即選取樣本量較少，研究結(jié)果不足以在臨床上大面積推廣應(yīng)用。因此在后續(xù)的研究中，可從增加樣本量這方面入手，不斷深化臨床研究，進(jìn)而將質(zhì)量控制措施推廣到整個(gè)檢驗(yàn)行業(yè)。

綜上所述，質(zhì)量控制在免疫組化病理技術(shù)制片過(guò)程中的運(yùn)用，可優(yōu)化制片質(zhì)量，提高疾病確診率，提升檢驗(yàn)人員的自我滿(mǎn)意度，減少制片不良事件的發(fā)生，且對(duì)制片時(shí)間﹑出報(bào)告時(shí)間無(wú)明顯影響。因此，在臨床檢驗(yàn)中，不僅要實(shí)施免疫組化技術(shù)，還需配合質(zhì)控措施，才能快速提升檢驗(yàn)質(zhì)量。