利用表面增強(qiáng)拉曼光譜定量檢測植物激素脫落酸

張燕燕 李燦 蘇睿 李林澤 位文濤 李保磊 胡建東

摘要：植物激素脫落酸（Abscisic Acid ，ABA ）在調(diào)控植物生長和發(fā)育方面具有重要作用。然而，ABA 在植物組織中含量較低，迫切需要快速靈敏的檢測方法。本研究建立了一種基于適配體識別和表面增強(qiáng)拉曼光譜（ Surface-Enhanced Raman Spectroscopy ，SERS ）檢測的 ABA 快速、定量檢測方法。ABA 適配體修飾的納米金顆粒兼具 SERS信號增強(qiáng)和選擇性識別等特點(diǎn)，實(shí)現(xiàn)了復(fù)雜植物樣品基質(zhì)中痕量 ABA 的快速、靈敏檢測。當(dāng) ABA 分子出現(xiàn)時(shí)，適配體將與 ABA 分子特異性結(jié)合，結(jié)合后的適配體折疊成 G-四聚體結(jié)構(gòu)，將 ABA 分子包裹在四聚體結(jié)構(gòu)內(nèi)，拉近 ABA 分子與金納米顆粒之間的距離，獲得增強(qiáng)并穩(wěn)定的 ABA 分子 SERS 信號。在適配體濃度優(yōu)化的條件下，該方法檢測限為0.1?mol/L ，線性相關(guān)系數(shù) R2=0.9855，重復(fù)性相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（Relative Standard Deviation ，RSD ）≤6.71%，且 SERS 增強(qiáng)基底的穩(wěn)定性良好（>6個(gè)月）。特別是，該方法用于小麥葉片中 ABA 的檢測，檢測結(jié)果與酶聯(lián)免疫吸附劑測定（Enzyme Linked Immunosorbent Assay， ELISA ）具有良好的吻合度（相對誤差≤9.13%）。該研究為植物激素快速檢測提供了有效的解決方案。

關(guān)鍵詞：脫落酸;適配體識別;表面增強(qiáng)拉曼光譜;金納米顆粒;生物傳感器

中圖分類號：Q946.885;O657.37?????? 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A?????????????? 文章編號：SA202202001

引用格式：張燕燕， 李燦， 蘇睿， 李林澤， 位文濤， 李保磊， 胡建東.利用表面增強(qiáng)拉曼光譜定量檢測植物激素脫落酸[J].智慧農(nóng)業(yè)（中英文）， 2022， 4（1）：121-129.

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1 引言

脫落酸（ Abscisic Acid ，ABA ）是小麥體內(nèi)的一種內(nèi)源激素，是小麥生長發(fā)育代謝產(chǎn)生的一種有機(jī)信號小分子，在極低濃度下，對小麥的生長具有顯著的生理效應(yīng)，在小麥生長過程中起著至關(guān)重要的作用[1]。小麥生長的不同階段不同部位 ABA 的濃度含量不同，這直接關(guān)系到小麥種子的活力、抗倒伏能力、光合性能和抗旱性[2]。由于小麥的 ABA 濃度較低，大概在0.038～13.2 nmol/L [3]，因此為了定量或監(jiān)測不同發(fā)育期的 ABA 濃度，實(shí)時(shí)監(jiān)測小麥的生長發(fā)育狀況，惡劣環(huán)境對小麥生長的影響，靈敏快速的 ABA檢測方法非常重要。

截至目前，用于 ABA 的檢測技術(shù)主要有比色法（ Colorimetric Method ）[4]、局部表面等離子體共振 （ Local? Surface? Plasmon? Resonance， LSPR ）[5]、高效液相色譜儀（High Performance Liquid? Chromatography ， HPLC ）[6]、電化學(xué)法（ Electrochemical Method ）等[7]。這些方法雖然具有足夠的準(zhǔn)確性，但仍存在樣品前處理繁瑣、檢測成本高、時(shí)間長、需要專業(yè)操作人員等缺點(diǎn)[8]。因此，有必要建立一種簡單、高靈敏度的植物樣品中 ABA的微量檢測方法。

表面增強(qiáng)拉曼光譜（ Surface-Enhanced Ra‐ man Spectroscopy ， SERS ）是一種強(qiáng)大的分子振動(dòng)光譜技術(shù)，它可以提供目標(biāo)分子的特定指紋信息[9-12]。隨著傳感技術(shù)與激光技術(shù)的發(fā)展，SERS 技術(shù)已廣泛應(yīng)用于化學(xué)分析[13-15]、生物醫(yī)學(xué)成像[16]、環(huán)境和食品檢測[17]等領(lǐng)域。然而，由于 SERS 產(chǎn)生“熱點(diǎn)”的波動(dòng)，定量的 SERS 仍面臨一些挑戰(zhàn)。產(chǎn)生均勻熱點(diǎn)的關(guān)鍵在于利用納米金或銀基底盡可能穩(wěn)定地增強(qiáng) SERS信號，除了可以通過合成高質(zhì)量的貴金屬納米顆粒以外，借助于對分析物分子有特殊捕獲能力的抗體或者適配體來增強(qiáng)拉曼信號的方法也越發(fā)常見[18]。Man 等[19]構(gòu)建了一個(gè)通用的生物分子檢測平臺，將Schizotype適配體與光誘導(dǎo)增強(qiáng)拉曼光譜效應(yīng)相結(jié)合，用于超靈敏檢測三磷酸腺苷、可卡因和凝血酶。該研究表明適配體在生物傳感方面可以代替抗體來捕獲目標(biāo)分子，適配體結(jié)合 SERS方法具有較高的靈敏度。Hu等[5]利用適配體結(jié)合局域表面等離子共振 （ Localized Surface Plasmon Resonance ，LSPR ）的方法對 ABA進(jìn)行了定量研究，結(jié)果證明，ABA 的適配體對 ABA 分子有較好的識別能力，可以作為構(gòu)建 ABA 生物傳感器的識別單元。另外，利用 SERS法對 ABA的定量研究還處于起步階段，目前還未發(fā)現(xiàn) SERS方法結(jié)合適配體的相關(guān)文獻(xiàn)。

當(dāng)檢測體系中有脫落酸存在時(shí)，適配體與脫落酸分子特異性結(jié)合，適配體的構(gòu)象轉(zhuǎn)變?yōu)?G四聚體樣結(jié)構(gòu)，將 ABA 分子包裹在四聚體結(jié)構(gòu)之間，拉近并固定脫落酸分子與納米金顆粒之間的距離，使得脫落酸分子的拉曼信號強(qiáng)度穩(wěn)定且增加。基于這一原理，本研究主要以基于 SERS的植物激素 ABA定量檢測生物傳感器為研究對象，以納米金粒子作為拉曼探針，適配體作為捕獲探針修飾在納米金顆粒上，構(gòu)建了一種靈敏、快速的適配體傳感器并實(shí)現(xiàn)對植物激素 ABA 定量檢測。

2 材料與試驗(yàn)方法

2.1材料和儀器

本試驗(yàn)所用的四氯金酸四水合物（ HAuCl4·4H2O ）、硝酸銀（AgNO3）、 L-抗壞血酸（ AA ）購買于阿拉丁試劑有公司（中國上海）;脫落酸粉末（ ABA ）、檸檬酸二水合鈉 （ C6H5Na3O7·2H2O ）、聚乙二醇山梨糖單月金酸酯（ Tween20）購自 Sigma-Aldrich （美國）。試驗(yàn)中 ABA溶液的配置需要注意，分析天平取0.264 g的 ABA 粉末用0.5 mL 的無水乙醇完全融化，加水定容至10 mL作為母液，密封冷藏;定容后 ABA溶液的濃度為100 mmol/L ，試驗(yàn)中使用的 ABA 溶液采用母液加水稀釋到使用濃度。脫落酸適配體購買于生工生物工程（上海）股份有限公司，序列號為： HS-5'-ATG GGT TAG GTG GAG GTG GTT ATT? CCG? GGA ATT? CGC? CCT AAA TAC GAG CAA C-3'[20]。所有溶液制劑均采用超純水，使用的玻璃器皿均采用王水[ HCl：HNO3=3：1（v/v）] 清洗，試驗(yàn)前用超純水多次沖洗。

合成納米金顆粒的紫外-可見光譜用紫外可見分光光度計(jì)（南京菲勒儀器有限公司，南京，中國）記錄。利用透射電子顯微鏡（ JEOL JEM-1400 Plus ，Tokyo ，Japan）在120 kV加速電壓下獲得納米金顆粒的透射電子顯微鏡（ Transmis‐sion Electron Microscope ， TEM ）圖像。離心前用0.05% TWeen20溶液沖洗所有離心管，以防止納米顆粒吸附在管壁上。SERS 信號由共焦拉曼顯微系統(tǒng)（先鋒科技有限公司，北京，中國）采集。

2.2納米金顆粒合成

將裝有100 mL 、0.01%氯金酸溶液的錐形燒杯置于磁力加熱攪拌器上，輕輕攪拌，加熱溫度設(shè)置為120°C 。溶液煮沸后，調(diào)節(jié)攪拌器為劇烈攪拌模式，同時(shí)快速加入1 mL 、1%的檸檬酸三鈉溶液，10 s 后溶液的顏色依次變色為灰、黑、藍(lán)，最后逐漸穩(wěn)定在紫紅色， 10 min 后關(guān)閉熱源，繼續(xù)攪拌溶液至室溫，冰箱冷藏待進(jìn)一步利用。

2.3適配體修飾納米金顆粒

將 ABA 適配體包裹在納米金顆粒表面制備捕獲探針。將濃度為0.12μmol/L ，3μL 活化后的巰基適配體 SH-Apt 加入到3 mL Au NPs 溶液中，室溫（25℃）孵育12 h 。以10，000 r/m離心10 min 去除未結(jié)合的適配體，將沉淀物分散在3 mL的超純水中備用。

2.4適配體濃度優(yōu)化

核酸適配體濃度的大小與捕捉到 ABA 分子的多少以及檢測靈敏度、檢測限密切相關(guān)，因此，研究了適配體濃度分別在0.04、0.08、0.12和0.16μmol/L ， ABA 的濃度分別在1、5 和10 mmol/L 的條件下， ABA 拉曼光譜強(qiáng)度的變化，從而優(yōu)化出最佳的適配體濃度。

2.5 ABA 檢測

以適配體修飾的納米金顆粒為表面增強(qiáng)拉曼的活性捕獲基底檢測來 ABA ，將50μL不同濃度的 ABA 溶液（1×10?7～1×10?4 mol/L ）與50μL 的適配體修飾的納米金顆粒溶液混勻靜置30 min 后，將10μL的混合物滴在干凈的硅片上，室溫干燥后進(jìn)行 SERS檢測。拉曼儀器入射激光的功率設(shè)置為65 mW，曝光時(shí)間為10 s 。SERS 信號由共焦拉曼顯微系統(tǒng)（先鋒科技有限公司，北京，中國）采集。拉曼系統(tǒng)包括一個(gè)高穩(wěn)定的暗場顯微鏡（ BX41，奧林巴斯，美國），一個(gè)共焦拉曼模塊和一個(gè)配備 CCD （1024×256像素傳感器，德國）的高分辨率光譜儀（安道爾科技，英國）。本研究中所有的拉曼光譜均在532nm激光輻射的10倍物鏡下采集。

2.6方法驗(yàn)證

使用適配體 SERS傳感器檢測 ABA的真實(shí)樣品并與 ELISA 檢測結(jié)果做對比。ABA 的真實(shí)樣品提取方法為：取新鮮凍干的小麥葉片1.0 g ，液氮研磨后，用2 mL甲醇-水-甲酸（15：4：1，v/v/v）超聲提取20 min 后放入冰箱冷凍避光24 h ，在4℃條件下10，000 r/min離心10 min ，取上清液于4 mL 棕色瓶中避光;再次用1 mL 甲醇-水-甲酸重復(fù)提取2次，合并上清液，30℃條件下減壓蒸發(fā)致干，用 500μL 甲醇-水-乙酸（1800：200：1，v/v/v）復(fù)溶，4℃條件下10，000 r/min離心10 min后取上清液，待用。

3 結(jié)果與討論

3.1檢測原理

利用 SERS結(jié)合適配體修飾的納米金顆粒檢測植物激素脫落酸的原理如圖1所示，將納米金顆粒上修飾植物激素脫落酸的巰基適配體（ SH-Apt），巰基適配體與納米金顆粒之間形成Au-S 共價(jià)鍵結(jié)合。結(jié)合在納米金顆粒外部的適配體隨意自然伸長。當(dāng)體系中有脫落酸存在時(shí)，任意分布的脫落酸適配體與 ABA 結(jié)合，伸長的適配體隨即折疊為 G 四聚體，將 ABA 分子包圍在 G 四聚體中間，這時(shí) ABA 與納米金顆粒之間的距離拉近并且距離固定，ABA 分子不會(huì)隨意從納米金顆粒上脫落下來。離心后，將含有ABA 分子的納米金顆粒溶液進(jìn)行拉曼檢測，由于 ABA 分子與納米金顆粒之間距離固定，那么ABA分子所產(chǎn)生的 SERS信號也將穩(wěn)定，從而建立 ABA的濃度與 SERS強(qiáng)度之間的定量關(guān)系。

3.2納米金顆粒的表征

合成的納米金顆粒的 TEM 圖像如圖2（a）所示，從 TEM 圖中可知，合成的納米金顆粒大小一致，分布均勻，且紫外可見峰位于525 nm 左右，峰曲線窄而光滑，說明納米金顆粒的大小均勻。結(jié)合圖2（b）可知納米金顆粒的平均粒徑在60nm左右。

3.3適配體修飾納米金顆粒表征

將合成的納米金顆粒做 zeta 電勢表征，如圖3所示。檸檬酸三鈉還原的氯金酸溶液生成的納米金顆粒中含有帶負(fù)電的檸檬酸根離子，所以納米金顆粒帶負(fù)電。Zeta電勢表征納米金顆粒的電勢為-26 mW，帶巰基的適配體帶正電，將適配體修飾在納米金顆粒上之后，電勢為-10.7 mW，說明適配體成功修飾在納米金顆粒之上。

3.4適配體濃度優(yōu)化

當(dāng) ABA溶液的濃度分別為1、5和10 mmol/L時(shí)，未結(jié)合適配體的裸金作為增強(qiáng)基底測得的 ABA溶液的 SERS強(qiáng)度平均值分別為1000、1400和2500。當(dāng) ABA 的濃度為1 mmol/L時(shí)，不同濃度的適配體修飾金納米顆粒后作為增強(qiáng)基底測得的 SERS強(qiáng)度的平均值分別為1400、2000、4500和2800;當(dāng) ABA 的濃度為5 mmol/L時(shí)，不同濃度適配體修飾納米金顆粒后作為增強(qiáng)基底測得的SERS強(qiáng)度的平均值分別為2030、3500、6020和4480;當(dāng) ABA的濃度為10 mmol/L時(shí)，不同濃度適配體修飾納米金顆粒后作為增強(qiáng)基底測得的SERS強(qiáng)度的平均值分別為2520、4680、6120和6300。將不同濃度的核酸適配體修飾納米金顆粒后結(jié)合 ABA分子所得的 SERS強(qiáng)度與未修飾適配體的納米金顆粒作為增強(qiáng)基底所得的 SERS強(qiáng)度比值做圖（圖4）。

由圖4可見，含有適配體的增強(qiáng)基底所測 SERS 值與不含適配體的裸金基底所測 SERS 值的比值逐漸增大，說明隨著適配體濃度的增大，捕獲的 ABA 分子增多，相應(yīng)的 SERS 信號增強(qiáng)。當(dāng)適配體濃度達(dá)到0.12?mol/L 時(shí)，含有適配體的增強(qiáng)基底所測 SERS值與不含適配體裸金基底所測 SERS值的比值達(dá)到最大。當(dāng)適配體濃度達(dá)到0.16?mol/L 時(shí)，比值卻減小，說明隨著適配體濃度的進(jìn)一步增大，捕獲的 ABA 分子卻沒有增多，相應(yīng)的 SERS信號也沒有增強(qiáng)。這是因?yàn)楫?dāng)適配體的濃度大于0.12?mol/L 時(shí)，體系中存在多余的適配體會(huì)競爭系統(tǒng)中的 ABA 分子，導(dǎo)致結(jié)合在納米金顆粒上的 ABA 分子減少，從而 SERS 強(qiáng)度降低。因此，本試驗(yàn)需用最佳的核酸適配體濃度為0.12?mol/L。

3.5 ABA 的檢測

為確認(rèn) ABA 拉曼峰的位置，取購買的 ABA 粉末在沒有增強(qiáng)的情況下的直接采集其拉曼光譜，圖5為 ABA 粉末的拉曼光譜及 ABA 的分子結(jié)構(gòu)?？梢?ABA分子信號較強(qiáng)的拉曼峰有4個(gè)，分別是1637、1237、1050、615 cm-1，分別對應(yīng)于 ABA 分子結(jié)構(gòu)中碳碳雙鍵的伸縮振動(dòng)、碳碳單鍵的伸縮振動(dòng)、甲基的非平面擺動(dòng)、碳碳單鍵的外扭式振動(dòng)[21]。 1637 cm-1相對于其他特征峰相對較強(qiáng)，結(jié)合 ABA 分子的結(jié)構(gòu)，1637 cm-1主要來自于碳碳雙鍵和碳碳單鍵的運(yùn)動(dòng)[22]，其中碳碳雙鍵的伸縮振動(dòng)引起的拉曼散射最為劇烈，所以1637 cm-1可以作為 ABA 的拉曼特征峰用于植物激素 ABA的定性和定量檢測。

將不同濃度的 ABA 標(biāo)準(zhǔn)溶液與適配體修飾的納米金顆?；旌虾?，滴在硅片上干燥后進(jìn)行SERS檢測，檢測光譜結(jié)果如圖6（a）所示。此檢測方法可以用來檢測 ABA的濃度，當(dāng) ABA的濃度為0.1μmol/L 時(shí)，也可以很清楚得看到1637 cm-1的特征峰，說明適配體修飾的納米金顆粒具有很好的檢測靈敏度。將 ABA 的濃度與1637 cm-1特征峰處的 SERS強(qiáng)度作出線性關(guān)系如圖6（b）所示，在0.1～100μmol/L 范圍內(nèi)，R2=0.9855。

3.6重復(fù)性試驗(yàn)

增強(qiáng)基底的重現(xiàn)性是 SERS檢測的關(guān)鍵，因此，研究了 SERS信號的重復(fù)性。在 ABA濃度為60μmol/L 條件下，隨機(jī)在基底上取20個(gè)點(diǎn)的SERS強(qiáng)度作為研究對象。在1637 cm-1處的20個(gè)隨機(jī)點(diǎn)的拉曼強(qiáng)度在1575到1608之間波動(dòng)，拉曼光譜圖如圖7（a）所示，相應(yīng)的柱狀圖如圖7（b）所示，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（ Relative Stan-dard Deviation ， RSD ）值為6.71%。一般認(rèn)為，一個(gè)新的或現(xiàn)有的 SERS定量測量體系的重現(xiàn)性 RSD 應(yīng)小于20%[23]。說明該適配體修飾的納米金顆粒 SERS生物傳感器可作為定量測量脫落酸含量的一種分析方法，且為后期研發(fā)更為靈敏的、特異性更強(qiáng)的 SERS生物傳感器奠定基礎(chǔ)。

3.7增強(qiáng)基底穩(wěn)定性試驗(yàn)

納米顆粒增強(qiáng)基底的穩(wěn)定性是適配體 SERS 傳感器能夠用于實(shí)際檢測的關(guān)鍵，因此，對納米顆粒的穩(wěn)定性進(jìn)行試驗(yàn)。制備好的適配體修飾的納米金顆粒在冰箱里4℃保存，分別在1、3、6和8個(gè)月后檢測其紫外可見光譜。如圖8（a）可知，適配體修飾的納米金顆粒在放置1個(gè)月和3個(gè)月時(shí)，LSPR 峰的位置幾乎不變，只是吸光度相應(yīng)降低。在放置6個(gè)月之后，LSPR 峰發(fā)生紅移，但是移動(dòng)量很小，且吸光度值也發(fā)生減小。

但是放置8個(gè)月之后，適配體修飾的納米金顆粒的 LSPR峰繼續(xù)紅移，紫外可見光譜變寬，說明納米金顆?？赡苡幸欢ǔ潭染奂?/p>

將放置不同時(shí)間的適配體修飾的納米金顆粒作為增強(qiáng)基底檢測10 mmol/L的脫落酸溶液，檢測結(jié)果如8（b）所示。在放置1個(gè)月時(shí)，ABA的SERS 強(qiáng)度幾乎不變;放置3個(gè)月時(shí)， ABA 的SERS 強(qiáng)度減小很小，大約為初始值的96%;放置6個(gè)月時(shí)，所測得的 ABA 強(qiáng)度的平均值為5000，大約是初始值的70%;放置8個(gè)月時(shí)，ABA的 SERS強(qiáng)度跟沒有修飾適配體的納米金顆粒的增強(qiáng)性差不多，大約為初始值的50%。由此可知，適配體修飾的納米金顆粒作為增強(qiáng)基底檢測脫落酸具有較長的保質(zhì)期，其穩(wěn)定性超過6個(gè)月。

3.8真實(shí)樣品檢測

為驗(yàn)證所構(gòu)建的 SERS傳感器對真實(shí)樣品的檢測能力，提取成熟期小麥葉片中的 ABA ，對提取液中 ABA 含量進(jìn)行檢測，并將其檢測結(jié)果與酶聯(lián)免疫吸附測定（Enzyme Linked Immuno‐ sorbent Assay ，ELISA ）檢測結(jié)果進(jìn)行對比分析，對比結(jié)果如表1所示。將 ELISA 法與 SERS 法進(jìn)行比較，ABA含量的最大相對誤差為9.16%，說明兩種方法測試的結(jié)果具有一致性。

4 結(jié)論

合成高質(zhì)量的納米金顆粒，對納米金顆粒進(jìn)行紫外和 TEM 表征。在納米金顆粒上修飾 ABA 的巰基適配體作為 SERS 基底對 ABA 進(jìn)行檢測，適配體與納米金顆粒之間形成 Au-S共價(jià)鍵結(jié)合。

優(yōu)化適配體的濃度為0.12?mol/L ，在優(yōu)化的條件下，該生物傳感器對 ABA 的檢測濃度可達(dá)0.1μmol/L ，在0.1～100μmol/L 范圍內(nèi)，R2=0.9925，說明該方法的靈敏度較好。對基底上隨機(jī)選取的20個(gè)點(diǎn)進(jìn)行基底的重現(xiàn)性分析，其RSD 值為6.71%，說明該基底的信號重現(xiàn)性較好。另外，該適配體修飾的納米金顆粒具有良好的穩(wěn)定性，其壽命超過6個(gè)月。最后，提取 ABA的真樣樣品，利用該方法對 ABA真實(shí)樣品試驗(yàn)，并與 ELISA檢測結(jié)果相對比，檢測結(jié)果最大相對誤差為9.16%。

該生物傳感器是利用 SERS對植物激素檢測的探索性研究，研究的結(jié)果將對 ABA 的后續(xù)定量和現(xiàn)場檢測，以及其他植物激素的檢測具有重要的參考價(jià)值。

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Quantitative Determination of Plant Hormone Abscisic Acid Using Surface Enhanced Raman Spectroscopy

ZHANG Yanyan1，2 ， LI Can1，2 ， SU Rui1，2 ， LI Linze1，2 ， WEI Wentao1，2 ，LI Baolei1，2 ， HU Jiandong1，2，3*

（1. College of Mechanical and Electrical Engineering， Henan Agricultural University， Zhengzhou 450002， China;

2. Henan International Joint Laboratory of Agricultural Laser Technology， Zhengzhou 450002， China;

3. State Key Laboratory of Wheat and Corn Crop Science， Zhengzhou 450002， China ）

Abstract： Plant hormone Abscisic Acid （ABA） plays an important role in regulating plant growth. However， the content of ABA in plant tissues is very low， and rapid and sensitive detection methods are urgently needed. In this study， a rapid and quantitative ABA detection method was established based on aptamer recognition and surface-enhanced Raman spectroscop （SERS）. The gold nanoparticles modified by ABA aptamer had the characteristics of SERS signal enhancement and selective recognition， re‐alizing the rapid and sensitive detection of trace ABA in complex plant sample matrix. When ABA molecules appeared in detect system， the aptamer would specifically bind with ABA molecules， and the aptamer folded into G-tetrad structure at same time， which wrapped ABA molecules in the tetrad structure， shortened the distance between ABA molecules and gold nanoparticles， and the enhanced and stable ABA molecules SERS signal were obtained. Under the condition of optimized aptamer concentra‐tion at 0.12?mol/L， different concentrations of ABA solutions in the detection system were detected. Within the concentration range of 0.1-100?mol/L， the SERS intensity of ABA presented a good linear relationship with the concentration. The detec‐tion limit of this method was 0.1?mol/L and the linear correlation coefficient R2 was 0.9855. The repeatability test of 20 points randomly on SERS substrate showed that the relative standard deviation （RSD） was 6.71%， indicating the stability of SERS sub‐strate was well. Furthermore， the substrate of gold nanoparticles modified by the ABA aptamer terminal with sulfhydryl group （SH-Apt） could be stored in the refrigerator for more than half a year， indicating that the substrate has good stability. Once the preparation of the synthesized SH-Apt modified gold nanoparticles was completed. It could be used on demand without the need to prepare SERS substrate for every detection. In this sense， the constructed aptamer SERS biosensor could realize the rap‐ id and quantitative detection of ABA. The method was used for the determination of ABA in wheat leaves， and the result was in good agreement with the Enzyme Linked Immunosorbent Assay （ELISA）（The max relative error was 9.13%）. This biosensor is an exploratory study on the detection of plant hormones by SERS， and the results of the study will have important reference val‐ue for the subsequent quantitative and on-site detection of ABA， as well as the detection of other plant hormones.

Key words： abscisic acid; aptamer recognition; surface-enhanced Raman spectroscopy; gold nanoparticles; biosensor