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    柴胡疏肝散對(duì)乙酰氨基酚(APAP)致小鼠急性肝損傷的治療研究

    2022-05-30 10:48:04劉詩(shī)語(yǔ)李振坤張慧敏李朝一李麗娟
    畜牧獸醫(yī)科學(xué) 2022年2期
    關(guān)鍵詞:柴胡疏肝散小鼠

    劉詩(shī)語(yǔ) 李振坤 張慧敏 李朝一 李麗娟

    摘要:為探究柴胡疏肝散對(duì)APAP引起的急性肝損傷是否有治疔作用,試驗(yàn)將36只ICR小鼠隨機(jī)分為6組,每組6只。分別為空白組、APAP(300 mg/kg)模型組、柴胡疏肝散(40 mg/kg)對(duì)照組、APAP+柴胡疏肝散10 mg/kg組、APAP+柴胡疏肝散20 mg/kg組、APAP+柴胡疏肝散40 mg/kg組。試驗(yàn)結(jié)束后采血檢查指標(biāo)。結(jié)果:40 mg/kg柴胡疏肝散對(duì)于治疔APAP引起的急性肝損傷有明顯效果,使得升高的ALT、AST活性明顯降低。結(jié)論:40 mg/kg柴胡疏肝散對(duì)APAP引起的小鼠急性肝損傷有良好的抗炎、抗氧化作用。

    關(guān)鍵詞:柴胡疏肝散;APAP急性肝損傷;小鼠;抗炎作用

    中圖分類(lèi)號(hào):R285文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:Bdoi:10.3969/j.issn.2096-3637.2022.02.009

    Study on the Treatment of Acute Liver Injury Induced by APAP in Mice by ChaihuShugan Powder

    LIU Shiyu,LI Zhenkun,ZHANG Huimin,LI Zhaoyi,LI Lijuan

    (Jinzhong College of Information,Taigu Shanxi,030800)

    Abstract:To investigate whether chaihu hepatic dispersion has a therapeutic effect on acute liver injury caused by APAP. Methods:36 ICR mice were randomly divided into 6 groups of 6 mice in each group. They were the blank group,apap(300 mg/kg)model group,the control group of saihuhu hepatic dispersion (40 mg/kg),the APAP + chaihu hepatic dispersion 10mg/kg group,the APAP + chaihuhu liver dispersion 20mg/kg group,and the APAP + chaihuhu liver dispersion 40mg/kg group. Blood collection after the test is completed to check the indicators. Results:40mg/kg of chaihu hepatic dispersion had obvious effects in the treatment of acute liver injury caused by APAP,resulting in a significant decrease in the activity of elevated ALT and AST. Conclusion:40mg/kg chaihu hepatic dispersion has good anti-inflammatory and antioxidant effects on acute liver injury caused by

    APAP.

    Keywords:ChaihuShugan SAN,APAP acute liver injury,Mice,anti-inflammatory effects

    0引言

    藥物性肝損害(DILI)是一種較為常見(jiàn)的肝病,近年來(lái)發(fā)病率呈逐年遞增趨勢(shì),僅次于病毒性肝炎和脂肪性肝病。藥物性肝損傷是由藥物本身或其代謝物在一定劑量后引起的不同程度的肝臟損傷。其中最常見(jiàn)的是急性肝損傷,也可導(dǎo)致慢性肝損傷,嚴(yán)重時(shí)可導(dǎo)致肝衰竭甚至死亡。

    1文獻(xiàn)綜述

    1.1柴胡疏肝散概述

    柴胡疏肝散由陳皮、柴胡、川芎、香附、枳殼、芍藥、甘草7味藥組成。柴胡疏肝散疏能夠疏肝理氣,行氣止痛,是一種很好的治療方法。

    柴胡疏肝散的主要有效成分有皂甘類(lèi)、黃酮類(lèi)、酚酸類(lèi)及萜類(lèi)成分,而皂甘類(lèi)、黃酮類(lèi)、酚酸類(lèi)成分具有明顯的抗氧化活性。柴胡疏肝散已被證明有促進(jìn)肝臟血液循環(huán)、增加肝動(dòng)脈血流、保肝利膽、抗肝纖維化的藥理作用[1-2]。

    1.2急性肝損傷與獸醫(yī)臨床

    RDJones的報(bào)告列出了240只貓和狗使用非甾體抗炎藥的中毒記錄,以及嘔吐、腹瀉,中樞神經(jīng)系統(tǒng)和循環(huán)系統(tǒng)疾病的常見(jiàn)臨床表現(xiàn),當(dāng)寵物過(guò)量服用對(duì)乙酰氨基酚(APAP)會(huì)引起急性中毒,主要損傷的是肝臟和紅細(xì)胞。貓對(duì)APAP的毒性似乎更敏感,10mg的APAP會(huì)對(duì)貓紅細(xì)胞造成損傷,但是高劑量時(shí)就會(huì)出現(xiàn)肝損傷,對(duì)犬來(lái)說(shuō),APAP的毒性一般大于100 mg/kg時(shí)才會(huì)中毒。

    1.3研究目的及意義

    初步探討了柴胡疏肝散在解熱、消炎、增強(qiáng)免疫力、抗肝損害等方面的作用,旨在通過(guò)建立APAP所致的小鼠急性肝損傷動(dòng)物模型,探討其在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中的保護(hù)和治療效果。

    2材料與方法

    2.1材料與設(shè)備

    對(duì)乙酰氨基酚,純度≥99.0%;二甲苯;10%福爾馬林;70%~90%乙醇;生理鹽水;石蠟等。電子分析天平;全自動(dòng)生化分析儀;臺(tái)式離心機(jī);電子顯微鏡等。

    2.2試驗(yàn)方法

    將36只體重為20±2gICR小鼠,隨機(jī)分為6組,每組6只。分別為空白組、APAP(300 mg/kg)模型組、柴胡疏肝散(40 mg/kg)對(duì)照組、APAP+柴胡疏肝散10 mg/kg組、APAP+柴胡疏肝散20 mg/kg組、APAP+柴胡疏肝散40 mg/kg組。模型組于染毒4 h后迅速眼球取血用于測(cè)定血清生化指標(biāo)??瞻捉M給予與模型組等量的生理鹽水。造模成功后,各組每天灌胃1次,觀察并記錄小鼠的毛發(fā)、精神狀態(tài)及體重、體溫的變化。連續(xù)治療7 d后,脫頸處死全部小鼠。

    2.3柴胡疏肝散對(duì)急性肝損傷影響的指標(biāo)檢測(cè)

    2.3.1血清ALT、AST檢測(cè)

    將從采集的血液在4 ℃下靜置4 h,放在臺(tái)式離心機(jī)中以3 000 r/min的速度離心10 min,分離的血清用生化分析儀來(lái)測(cè)定ALT和AST的水平。

    2.3.2小鼠肝臟病理切片制作及HE染色

    小鼠處死后取出肝臟,用生理鹽水漂洗,修剪肝組織。將處理過(guò)的肝臟組織放在固定液中。固定后放入由低到高濃度酒精中梯度脫水。脫水后在二甲苯中浸泡透明。用石蠟包埋透明組織塊,凝固后固定在切片機(jī)上切片。將切片放入二甲苯中脫去石蠟。將切片HE染色后,用低到高的酒精脫水,干燥、密封并觀察。

    2.3.3小鼠肝組織織中GSH水平的測(cè)定

    將用于組織勻漿的小鼠肝臟樣品從--80 ℃冰箱中取出,實(shí)驗(yàn)步驟完全按照GSH試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。

    3結(jié)果

    3.1柴胡疏肝散對(duì)小鼠血清中ALT、AST水平的影響

    與空白組相比,模型組APAP小鼠的血清ALT和AST水平明顯升高(P<0.05),表明小鼠接觸APAP后可能會(huì)引起肝臟損傷;與模型組相比,柴胡疏肝散各劑量組均能降低小鼠血清中ALT和AST的表達(dá)水平(P<0.05),3個(gè)劑量組中柴胡疏肝散40 mg/kg劑量組的降幅最為明顯,見(jiàn)表1。

    3.2柴胡疏肝散對(duì)小鼠肝組織中GSH水平的影響

    APAP模型組的GSH水平顯著低于空白組(P<0.05);與APAP模型組比較,10 mg/kg柴胡疏肝散組GSH含量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),而20 mg/kg和40 mg/kg柴胡疏肝散組GSH含量有明顯差異則有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。該結(jié)果表明柴胡疏肝散在20 mg/kg或40 mg/kg的劑量下,可對(duì)APAP引起的肝損傷造成的GSH 消耗產(chǎn)生抑制作用,見(jiàn)表2。

    3.3柴胡疏肝散對(duì)小鼠肝臟病理切片的影響

    不同劑量組對(duì)小鼠肝臟病理變化的影響見(jiàn)圖1。空白組的肝臟組織結(jié)構(gòu)良好,肝小葉結(jié)構(gòu)完整,肝臟細(xì)胞呈放射狀排列,核形清晰。模型組肝臟出現(xiàn)了較多的炎癥細(xì)胞浸潤(rùn),肝細(xì)胞索結(jié)構(gòu)紊亂,肝細(xì)胞出現(xiàn)大量壞死。在柴胡疏肝散20 mg/kg和40 mg/kg的劑量作用下,小鼠肝臟的組織結(jié)構(gòu)變得更加清楚,排列變整齊,炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)和壞死的數(shù)目也顯著降低。

    4結(jié)論

    40 mg/kg的柴胡疏肝散能顯著降低肝功能損傷小鼠血清ALT和AST水平,并能增強(qiáng)肝損傷小鼠肝組織中抗氧化劑GSH活力。表明柴胡疏肝散在APAP所致小鼠急性肝損傷中發(fā)揮了良好的抗氧化作用,并能明顯改善肝臟損傷。

    參考文獻(xiàn)

    [1]匡子禹.中醫(yī)藥治療藥物性肝損傷的系統(tǒng)評(píng)價(jià)及用藥規(guī)律分析[D].北京:北京中醫(yī)藥大學(xué),2021.

    [2]任鵬,王林林,許飛虹,等.柴胡疏肝散醇提物的抗氧化活性[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2014,20(10):161-164.

    [3]鄭惠星.對(duì)乙酰氨基酚誘導(dǎo)小鼠急性肝損傷模型機(jī)理研究[D]. 延邊:延邊大學(xué),2020.

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