2型糖尿病患者miR-375、miR-126表達(dá)水平及與胰島素抵抗關(guān)系

翟倩倩 覃艷 朱云峰 王濤

2 型糖尿?。╰ype 2 diabetes mellitus，T2DM）是全球范圍內(nèi)流行的慢性非傳染性疾病，以胰島素抵抗和胰島素敏感性下降導(dǎo)致的慢性血糖水平進(jìn)行性升高為特征［1］。數(shù)據(jù)顯示，我國(guó)糖尿病患者約1.8 億，預(yù)計(jì)至2040年將增至4.15 億，糖尿病患病狀況不容樂(lè)觀，對(duì)其防治至關(guān)重要［2］。T2DM 病因和發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明，胰島β 細(xì)胞功能受損、胰島素抵抗是目前已知T2DM 發(fā)生、發(fā)展的重要機(jī)制，但二者的具體分子調(diào)控機(jī)制仍不清楚［3］。隨著分子水平研究的不斷發(fā)展，最新研究顯示，多種微小核糖核酸（microRNA，miRNA）在胰島細(xì)胞發(fā)育、β 細(xì)胞分化及胰島素分泌中發(fā)揮著重要作用，參與T2DM 的發(fā)生發(fā)展，有望為T(mén)2DM 發(fā)病機(jī)制研究及臨床診斷、治療新靶點(diǎn)提供新的方向［4-5］。miR-375 是在胰島細(xì)胞中特異性表達(dá)的miRNA，在維持正常的α 細(xì)胞和β 細(xì)胞數(shù)量、調(diào)節(jié)胰腺發(fā)育等方面發(fā)揮重要作用，與胰島素分泌相關(guān)［6］。miR-126 是多功能miRNA，可通過(guò)調(diào)控胰島素受體底物1 的表達(dá)，參與胰島素抵抗［7］。本研究旨在分析T2DM 患者血漿miR-375、miR-126 表達(dá)水平及其與胰島素抵抗關(guān)系，為臨床T2DM 發(fā)生機(jī)制和診療提供參考。報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2019年1月至2019年12月新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院收治80 例T2DM 患者為研究對(duì)象，分為T(mén)2DM 前期組32 例和T2DM 組48 例，T2DM標(biāo)準(zhǔn)：存在口渴多飲、多尿、多食等典型癥狀和/或FPG≥7.0 mmol/L 和/或餐后2h 血糖（2 hour plasma glucose，2hPG）≥11.1 mmol/L；T2DM 前期標(biāo)準(zhǔn)：包括空腹血糖受損（6.1 mmol/L≤FPG＜7.0 mmol/L 和/或2hPG≥7.8 mmol/L）和糖耐量異常（FPG＜7.0 mmol/L 和/或7.8 mmol/L≤2hPG＜11.1 mmol/L）［8］。納入標(biāo)準(zhǔn)：①T2DM 組符合《中國(guó)2 型糖尿病防治指南》［8］中的T2DM 診斷標(biāo)準(zhǔn)，T2DM 前期組符合《中國(guó)2 型糖尿病防治指南》［8］中T2DM 前期標(biāo)準(zhǔn)；②年齡18～80 歲；③可配合研究進(jìn)行相關(guān)指標(biāo)檢測(cè)。排除標(biāo)準(zhǔn)：①存在惡性腫瘤；②存在嚴(yán)重心、腦、肝等重要臟器功能障礙；③存在甲狀腺功能紊亂等其他內(nèi)分泌疾?。虎艽嬖诿庖咝约膊。虎莺喜⒓甭愿腥?；⑥凝血功能異常。另選取同期行健康體檢的40例健康人作為對(duì)照組。各組一般資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)意義（P＞0.05），見(jiàn)表1。研究納入對(duì)象均已簽署知情同意書(shū)，研究經(jīng)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

表1 三組研究對(duì)象一般資料比較（±s）Table 1 Comparison of general data among the three groups of study subjects（±s）

表1 三組研究對(duì)象一般資料比較（±s）Table 1 Comparison of general data among the three groups of study subjects（±s）

組別對(duì)照組T2DM 前期組T2DM 組χ2/t 值P 值n 40 32 48性別（男/女）23/17 18/14 28/20 0.034 0.983年齡（歲）54.37±6.52 56.28±7.16 55.73±7.84 0.773 0.464 BMI（kg/m2）23.12±2.72 23.58±4.21 22.79±3.24 0.518 0.597收縮壓（mmHg）122.62±16.24 126.32±15.37 125.87±14.21 0.697 0.500舒張壓（mmHg）80.46±11.18 79.17±10.86 80.22±12.37 0.143 0.867

1.2 方法

1.2.1 血糖、血脂檢測(cè)及胰島素抵抗評(píng)估

受試者均采集空腹8 h 的晨起外周靜脈血標(biāo)本及餐后2 h 靜脈血標(biāo)本各3 mL，3 000 r/min 離心處理15 min，取上清液，使用全自動(dòng)生化分析儀以葡萄糖氧化酶法測(cè)定血糖（FPG、2hPG）水平及血脂［血清總膽固醇（total cholesterol，TC）、三酰甘油（triglyceride，TG）、高密度脂蛋白膽固醇（high-density lipoprotein cholesterol，HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（low density lipoprotein cholesterol，LDL-C）］，以電化學(xué)發(fā)光法測(cè)定空腹胰島素（fasting serum lisulin，F(xiàn)Ins）水平；以穩(wěn)態(tài)模型評(píng)估胰島素抵抗指數(shù)（homeostasis model assessment of insulin resistance，HOMA-IR），HOMA-IR=FPG×FIns/22.5。

1.2.2 血漿miR-375、miR-126 表達(dá)水平檢測(cè)

采集受試者空腹清晨靜脈血標(biāo)本2 mL，以Trizol 法提取血清總RNA，采用miR cDNA 第一鏈合成試劑盒反轉(zhuǎn)錄合成cDNA，采用熒光實(shí)時(shí)反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈法檢測(cè)miR-375、miR-126 表達(dá)水平，擴(kuò)增程序：95℃15 min，94℃15 s，55℃30 s，70℃30 s（收集熒光信號(hào)），擴(kuò)增40 個(gè)循環(huán)，擴(kuò)增完畢后以U6為內(nèi)參分析數(shù)據(jù)，計(jì)算Δ 循環(huán)閾值（Ct），miR-375、miR-126 的相對(duì)表達(dá)量以2-ΔΔCt表示。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 19.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以（±s）形式表示，組間比較行t檢驗(yàn)，多組間比較行方差分析；計(jì)數(shù)資料以n（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用Pearson 相關(guān)分析法，以logistics 回歸分析識(shí)別影響HOMA-IR 的風(fēng)險(xiǎn)因素，以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三組研究對(duì)象血糖、血脂及胰島素抵抗水平比較

FPG、2hPG、HOMA-IR、TG、TC、LDL-C、FIns水平：對(duì)照組＜T2DM 前期組＜T2DM 組，HDL-C 水平：對(duì)照組＞T2DM 前期組＞T2DM 組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表2。

表2 三組研究對(duì)象血糖、血脂及胰島素抵抗水平比較（±s）Table 2 Comparison of blood glucose，blood lipids and insulin resistance among the three groups of study subjects（±s）

表2 三組研究對(duì)象血糖、血脂及胰島素抵抗水平比較（±s）Table 2 Comparison of blood glucose，blood lipids and insulin resistance among the three groups of study subjects（±s）

注：與對(duì)照組比較，aP＜0.05；與T2DM 前期組比較，bP＜0.05。

組別對(duì)照組T2DM 前期組T2DM 組F 值P 值n 40 32 48 FPG（mmol/L）5.02±0.79 6.13±1.54a 9.68±3.28ab 51.694＜0.001 2hPG（mmol/L）5.78±0.82 9.03±1.67a 18.64±5.32ab 168.931＜0.001 TC（mmol/L）3.78±0.92 4.11±1.06a 4.86±1.12ab 11.399＜0.001 TG（mmol/L）1.31±0.94 1.74±1.03a 2.03±1.11ab 4.958 0.009 HDL-C（mmol/L）1.57±0.38 1.23±0.32a 0.96±0.29ab 33.883＜0.001 LDL-C（mmol/L）1.89±0.83 2.27±0.82a 3.89±0.94ab 60.304＜0.001 FIns（μU/mL）4.92±3.12 8.61±4.92a 9.63±6.54ab 9.605＜0.001 HOMA-IR 1.10±0.56 2.34±1.32a 4.14±2.08ab 43.931＜0.001

2.2 3 組研究對(duì)象血漿miR-375、miR126 表達(dá)水平比較

血漿miR-375 表達(dá)水平：對(duì)照組＜T2DM 前期組＜T2DM 組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；T2DM前期組、T2DM 組miR126 表達(dá)水平低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），但T2DM 前期組、T2DM 組miR126 表達(dá)水平比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見(jiàn)表3。

表3 3組研究對(duì)象血漿miR-375、miR126表達(dá)水平比較（±s）Table 3 Comparison of expression levels of plasma miR-375 and miR126 among 2 groups of study subjects（±s）

表3 3組研究對(duì)象血漿miR-375、miR126表達(dá)水平比較（±s）Table 3 Comparison of expression levels of plasma miR-375 and miR126 among 2 groups of study subjects（±s）

注：與對(duì)照組比較，aP＜0.05；與T2DM 前期組比較，bP＜0.05。

組別對(duì)照組T2DM 前期組T2DM 組F 值P 值n 40 32 48 miR-375 1.00±0.23 3.03±0.64a 3.58±0.79ab 203.935＜0.001 miR126 3.16±0.48 1.15±0.26a 1.00±0.24a 490.900＜0.001

2.3 T2DM 患者血漿miR-375、miR126 表達(dá)水平與血糖、HOMA-IR 的相關(guān)性

相關(guān)性分析顯示，T2DM 患者血漿miR-375 表達(dá)與FPG、2hPG、FIns、HOMA-IR 呈正相關(guān)（r=0.461，0.523，0.506，0.624，均P＜0.05），miR126 表達(dá)與FPG、2hPG、FIns、HOMA-IR 負(fù)相關(guān)（r=-0.349，-0.457，-0.423，-0.439，均P＜0.05）。

2.4 影響T2DM 患者HOMA-IR 的logistics 回歸分析

Logistics 回歸分析顯示，血漿miR-375 表達(dá)上調(diào)、miR126 表達(dá)下調(diào)是影響T2DM 患者HOMA-IR的危險(xiǎn)因素（P＜0.05）。見(jiàn)表4。

表4 影響2 型糖尿病HOMA-IR 的logistics 回歸分析Table 4 Logistics regression analysis affecting HOMA-IR in type 2 diabetes mellitus

3 討論

胰島通過(guò)β 細(xì)胞和α 細(xì)胞分泌的胰島素和胰高血糖素發(fā)揮維持葡萄糖穩(wěn)態(tài)的核心作用，胰島素抵抗即胰島素敏感性和反應(yīng)性下降，會(huì)使胰島素水平無(wú)法維持葡萄糖穩(wěn)態(tài)，是T2DM 的主要發(fā)病機(jī)制之一［9-10］。此外，T2DM 患者血糖代謝異常的同時(shí)也往往存在血脂代謝異常，且與胰島素抵抗密切相關(guān)。本研究結(jié)果說(shuō)明隨著T2DM 發(fā)生、發(fā)展，患者糖脂代謝異常和胰島素抵抗逐步加重，與既往研究結(jié)果一致［11］。miRNA 是與代謝疾病密切相關(guān)的微小非編碼RNA，通過(guò)轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控基因表達(dá)能夠調(diào)節(jié)胰腺β 細(xì)胞的生存、凋亡、增殖和分化等，影響胰島素分泌和胰島素抵抗?fàn)顟B(tài)，作為葡萄糖動(dòng)態(tài)平衡的調(diào)節(jié)器，間接地控制葡萄糖和脂質(zhì)代謝，參與T2DM 及其并發(fā)癥的發(fā)生、發(fā)展［12］。

miR-375 是在胰島細(xì)胞檢測(cè)到的最豐富的miRNA，可直接作用于靶蛋白重組胰島素樣生長(zhǎng)因子1的表達(dá)，從而抑制葡萄糖介導(dǎo)的β 細(xì)胞胰島素分泌；還可通過(guò)調(diào)控相關(guān)通路，抑制其蛋白質(zhì)表達(dá)，促進(jìn)胰島β 細(xì)胞凋亡等；miR-375 可通過(guò)調(diào)控多個(gè)靶基因發(fā)揮調(diào)節(jié)胰腺發(fā)育、胰腺細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖、胰島素分泌的作用，但目前其精準(zhǔn)調(diào)控T2DM 的機(jī)制仍有待深入研究［13］。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)顯示，miR-375 能夠調(diào)控胰島α和β 細(xì)胞的生長(zhǎng)，影響血糖穩(wěn)態(tài)［14］。本研究結(jié)果說(shuō)明miR-375 與T2DM 患者糖脂代謝水平密切相關(guān)，參與T2DM 的進(jìn)展。logistics 回歸分析也顯示血漿miR-375 上調(diào)是影響HOMA-IR 的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，提示miR-375 可能通過(guò)影響血糖代謝調(diào)節(jié)胰島素抵抗?fàn)顟B(tài)，促進(jìn)T2DM 的發(fā)生、發(fā)展。

miR-126 是糖尿病中最廣泛研究的miRNA，可通過(guò)減少趨化因子配體2 分泌抑制脂肪組織胰島素抵抗，但其還會(huì)抑制胰島素受體底物-1、磷酸肌醇3 激酶調(diào)節(jié)亞單位、蛋白激酶B 的表達(dá)，調(diào)控胰島β 細(xì)胞的增殖，調(diào)節(jié)胰島的生長(zhǎng)發(fā)育，并使肝組織對(duì)胰島素的反應(yīng)性下降，胰島素代償性增多，出現(xiàn)肝細(xì)胞胰島素抵抗［15］。此外，miR-126 在血管形成、重塑及血管炎性反應(yīng)等方面還具有重要作用［16］。本研究結(jié)果表明miR-126 與T2DM 發(fā)生、發(fā)展有關(guān)。本研究還顯示，miR126 表達(dá)下調(diào)是影響HOMA-IR 水平的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，說(shuō)明血漿miR126表達(dá)可能受糖脂代謝的調(diào)控，參與T2DM 的胰島素抵抗。

綜上所述，T2DM 患者血漿miR-375 表達(dá)上調(diào)、miR-126 表達(dá)下調(diào)，二者均與T2DM 糖脂代謝調(diào)控機(jī)制有關(guān)，是影響患者HOMA-IR 水平的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。