4種中藥復(fù)方對長江鱘幼魚抗氧化和抗應(yīng)激指標(biāo)的影響

張建明　張德志　舒德斌　田甜　饒軍　蘇巍

摘要：【目的】探討不同中藥復(fù)方對長江鱘幼魚抗氧化和抗應(yīng)激指標(biāo)的影響，篩選能有效提高長江鱘幼魚免疫力及抗病力的中藥復(fù)方，為中藥在長江鱘養(yǎng)殖生產(chǎn)中的推廣應(yīng)用提供參考依據(jù)。【方法】將17味中藥按照中藥配伍理論設(shè)計4種中藥復(fù)方，分別是復(fù)方I（魚腥草∶金銀花∶大黃∶茯苓∶甘草︰黃芪=3∶3∶1∶2∶1∶2）、復(fù)方II（板藍根∶大黃∶五加皮∶黨參=3∶3∶4∶3）、復(fù)方III（金銀花∶杏仁∶貫眾∶大青葉∶山豆根∶桔梗=3∶2∶2∶2∶3∶2）、復(fù)方IV（黃芪∶黃柏∶甘草∶山楂∶五味子∶大黃∶黨參=3∶3∶1∶2∶2∶2∶2），以不添加中藥為對照組，按0.5 g/kg的添加量進行長江鱘幼魚飼喂試驗，并于第7和第14 d采集血樣測定各項血清生理指標(biāo)。【結(jié)果】與對照組相比，復(fù)方I組和復(fù)方II組可不同程度地提高長江鱘血清超氧化物歧化酶（SOD）、過氧化氫酶（CAT）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）、過氧化物酶（POD）、堿性磷酸酶（AKP）活性及總抗氧化能力（T-AOC）、熱休克蛋白70（HSP70）含量，降低丙二醛（MDA）含量，但僅部分指標(biāo)差異達顯著水平（P<0.05，下同）;復(fù)方III組和復(fù)方IV組可明顯提高長江鱘血清SOD、CAT、GSH-Px、POD、AKP活性及T-AOC，降低MDA和皮質(zhì)醇（COR）含量，且大部分指標(biāo)與對照組的差異達顯著水平。相關(guān)分析結(jié)果表明，SOD活性與GSH-Px活性及T-AOC、POD活性與GSH-Px活性呈極顯著正相關(guān)（P<0.01，下同），POD活性與SOD活性、CAT活性及T-AOC呈顯著正相關(guān)，SOD活性與COR含量、T-AOC與COR含量呈極顯著負(fù)相關(guān)，GSH-Px活性與COR含量、T-AOC與MDA含量呈顯著負(fù)相關(guān)?！窘Y(jié)論】在基礎(chǔ)飼料中添加適宜的中藥復(fù)方對長江鱘幼魚抗氧化和抗應(yīng)激能力有顯著促進作用，尤其以復(fù)方III（金銀花、杏仁、貫眾、大青葉、山豆根、桔梗）和復(fù)方IV（黃芪、黃柏、甘草、山楂、五味子、大黃、黨參）的效果最佳，可有效緩解長江鱘幼魚機體面臨的應(yīng)激反應(yīng)，達到保護效果。

關(guān)鍵詞： 長江鱘;中藥復(fù)方;抗氧化;抗應(yīng)激;免疫力

中圖分類號： S965.215? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?文獻標(biāo)志碼： A 文章編號：2095-1191（2022）02-0568-09

Effects of four Chinese herbal medicine compound on antio-xidation and anti-stress indexes of Acipenser dabryanus juveniles

ZHANG Jian-ming， ZHANG De-zhi， SHU De-bin， TIAN Tian， RAO Jun， SU Wei

（Institute of Chinese Sturgeon Research， China Three Gorges Project Corporation/Hubei Key Laboratory of Three

Gorges Project for Conservation of Fishes， Yichang， Hubei? 443100， China）

Abstract：【Objective】To test the effects of four different Chinese herbal medicine compound on the anti-oxidation and anti-stress physiological indexes of Acipenser dabryanus juveniles， so as to provide reference for the promotion and application of traditional Chinese medicine in the breeding and production of A. dabryanus juveniles. 【Method】Four medicin componnds were formulated from 17 sources used in traditional Chinese herbal medicines according to the theory of Chinese medicine compatibility. The formulations were∶compound I （Houttuynia cordata Thunb∶Lonicera japonica Thunb∶Rheum palmatum L.∶Poria∶Glycyrrhiza uralensis Fisch∶Astragalus mongholicus Bunge=3∶3∶1∶2∶1∶2）; compound II（Isatis tinctoria∶R. palmatum L.∶Acanthopanar gracilistμlus W. W. Smith∶Codonopsis pilosula=3∶3∶4∶3）; compound III（L. japonica Thunb∶Prunus armeniaca L.∶Cyrtomium fortunei J. Sm∶Clerodendrum cyrtophyllum Turcz∶Radix sophorae Tonkinensis：Platycodon grandiflorus=3∶2∶2∶2∶3∶2） and compound IV（A. mongholicus Bunge∶Phellodendron∶G. uralensis Fisch∶Crataegus pinnatifida Bunge∶Schisandra chinensis： R. palmatum L.∶C. pilosula=3∶3∶1∶2∶2∶2∶2）. The basic feed without any Chinese herbal medicine was used as the control group. The compound Chinese herbal medicines were fed at a dosage of 0.5 g/kg body weight during 14 days of the breeding period. Different physiological indexes of juvenile serum were detected on the 7th and 14th days. 【Result】Compared with the control group， compounds I and II enhanced the activities of superoxide dismutase（SOD）， catalase（CAT）， glutathione peroxidase（GSH-Px）， peroxidase（POD）， alkaline phosphatase（AKP）， the total antioxidant capacity（T-AOC） and content of heat shock protein 70（HSP70）. The contents of malondialdehyde （MDA） and cortisal（COR） of the juvenile serum was reduced to varying degree， but only some differences were significant （P<0.05， the same below）. Compounds III and IV clearly enhanced the activities of SOD， CAT， GSH-Px， POD and AKP， the contents of T-AOC and reduced the contents of MDA and COR. Most altered indexes were significant compared with the control. The results of correlation analysis showed that，the remarkably significant posi-tive correlation was found between SOD and GSH-Px， SOD and T-AOC， POD and GSH-Px （P<0.01， the same below）. A significant positive correlation was also found between POD and SOD， CAT and T-AOC. Furthermore， both SOD and T-AOC showed a remarkably significant negative correlation with COR. Further significant and negative correlations were observed between GSH-Px and COR， T-AOC and MDA. 【Conclusion】Adding suitable Chinese herbal medicine compounds into the basic diet can significantly promote the antioxidant and anti-stress capabilities in A. dabryanus juveniles. In particular， compound III （L. japonica Thunb， P. armeniaca L.， C. fortunei J.Sm， C. cyrtophyllum Turcz， R. sophorae Tonkinensis） and compound IV （A. mongholicus Bunge， Phellodendron， G. uralensis Fisch， C. pinnatifida Bunge， S. chinensis， R. palmatum L.， C. pilosula） have the best effect. These formulations can effectively relieve and protect A. dabryanus juveniles against stress.

Key words：Acipenser dabryanus; Chinese herbal medicine; anti-stress; anti-oxidation; immunity

Foundation items：National Key Research and Development Program（2016YFC0502210）;Science and Technology Planning Project of China Three Gorges Group Co.， Ltd（WWKY-2021-0003，JG/18001B）

0 引言

【研究意義】長江鱘（Acipenser dabryanus）又稱達氏鱘，是我國特有的淡水定居性鱘魚，主要分布在長江上游水域（胡偉等，2020;武夢斌等，2020），目前關(guān)于長江鱘的研究主要集中在人工繁殖（龔全等，2013）、營養(yǎng)需求（張磊，2016）、早期發(fā)育（何斌等，2017;劉亞等，2017）及分子生物學(xué)（李薇等，2017）等方面。近年來，由于過度捕撈、水體污染及棲息地被破壞等原因，長江鱘野生資源量急劇下降，已被列為國家I級重點保護魚類和極瀕危物種（Zhang et al.，2011），為保護好長江鱘這一珍稀特有魚種，我國實施包括禁捕、設(shè)立保護區(qū)、開展人工增殖放流在內(nèi)的一系列保護措施。傳統(tǒng)的抗生素治療在水產(chǎn)動物疾病防治方面發(fā)揮了重要作用，但同時導(dǎo)致病原菌耐藥性、魚類抗生素依賴性及免疫力下降、藥物殘留及環(huán)境污染等問題，嚴(yán)重制約著我國水產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展（冒樹泉等，2019）。我國農(nóng)業(yè)農(nóng)村部第194號公告明確規(guī)定，從2020年1月1日開始退出除中藥外的所有促生長類藥物飼料添加劑品種，獸藥生產(chǎn)企業(yè)停止生產(chǎn)、進口獸藥代理商停止進口相應(yīng)獸藥產(chǎn)品，同時注銷相應(yīng)的獸藥產(chǎn)品批準(zhǔn)文號和進口獸藥注冊證書。鑒于此，尋找能替代抗生素并有效提高魚體抗氧化和抗病能力及魚病防治效果的中藥已成為當(dāng)今水產(chǎn)養(yǎng)殖領(lǐng)域的重要研究方向之一。【前人研究進展】中藥因其資源豐富易得、效果持久、不易產(chǎn)生耐藥性的優(yōu)點，在水產(chǎn)病害防治、提高機體抗氧化和抗應(yīng)激能力等方面得到廣泛關(guān)注。中藥是目前魚類等水產(chǎn)養(yǎng)殖動物免疫增強劑的主要來源，具有毒副作用小、高效性、性能多樣化等優(yōu)點（李鵬飛等，2021）;富含多種營養(yǎng)成分，能促進機體新陳代謝和肝胰臟中消化酶分泌，同時含有多糖、有機酸及生物堿等免疫活性成分，可提高機體免疫力和抗病力;此外，作為飼料添加劑或免疫增強劑使用的中藥，在調(diào)控水質(zhì)、促進生長、提高免疫力和調(diào)節(jié)腸道菌群等方面也發(fā)揮了積極作用（蘇永騰，2007;曾本和等，2019）。中藥在漁業(yè)生產(chǎn)實踐中的應(yīng)用表明，作為混飼劑或飼料添加劑尤其適用于當(dāng)前水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)集約化、規(guī)模化生產(chǎn)的需要，不僅能解決化學(xué)藥物、抗生素等引發(fā)的耐藥性及環(huán)境污染問題，還完全符合發(fā)展綠色、無公害水產(chǎn)業(yè)的病害防治準(zhǔn)則（趙明軍等，2009）。朱莉等（2014）研究表明，中藥復(fù)方（首烏、黃芪、甘草）和穿心蓮可顯著促進羅非魚生長，并增強其抗氧化能力。齊茜等（2016）研究發(fā)現(xiàn)，飼料中添加中藥復(fù)方對閃光鱘機體內(nèi)部分血液生理生化指標(biāo)具有積極的改善作用，并初步篩選出對閃光鱘生長和生化指標(biāo)有促進作用的中藥復(fù)方。路晶晶等（2018）研究表明，中藥復(fù)方可顯著提高大菱鲆幼魚增重率、降低飼料系數(shù)，且對血脂具有調(diào)節(jié)作用，同時能顯著提高大菱鲆血清中的過氧化物酶活性。李赫等（2018）研究證實，茯苓和丁香可分別作為嗜水氣單胞菌和類志賀鄰單胞菌引起的水產(chǎn)動物疾病防治藥物，其次是小茴香、昆布、姜黃、肉桂、蛇床子、丁香、豬苓、黃柏及黃芪、牡丹皮、陳皮、肉桂、高良姜，以中藥防治魚病時可根據(jù)藥物的性質(zhì)，適當(dāng)配伍，有效發(fā)揮藥物的協(xié)同作用而提高療效。任海等（2018）研究表明，黃柏、丁香及艾葉等 9 味中藥對鯉魚源嗜水氣單胞菌有抑菌作用;赤芍、大青葉及茵陳等 12 味中藥對青魚源嗜水氣單胞菌有抑菌作用;赤芍、丁香及黃柏等 12 味中藥對草魚源嗜水氣單胞菌有抑菌作用。冒樹泉等（2019）研究指出，中藥復(fù)方可促進大鱗副泥鰍生長、消化，提高機體抗氧化能力，其中又以復(fù)方I（板藍根、大黃）和復(fù)方III（黃芪、黃柏）的效果最佳。方珍珍等（2019）研究發(fā)現(xiàn)，飼料中添加金銀花和黃芪能在一定程度上提高錦鯉過氧化氫酶（CAT）活性、總抗氧化能力（T-AOC）及谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）活性，增強機體的抗氧化和免疫能力。孫學(xué)亮等（2020）研究表明，攝食含中藥復(fù)方的飼料對白點鮭和亞東鮭血液的抗氧化性、非特異性及消化酶指標(biāo)均有促進作用。王凡等（2021）研究證實，在飼料中添加中藥復(fù)方可提高虹鱒非抗氧化和特異性免疫功能?！颈狙芯壳腥朦c】探究中藥復(fù)方對長江鱘幼魚機體抗氧化系統(tǒng)和抗應(yīng)激系統(tǒng)的影響效果，可為魚類病害防治及綠色環(huán)保漁藥的開發(fā)與應(yīng)用開辟新途徑，但目前關(guān)于中藥對鱘魚類免疫、抗氧化和抗應(yīng)激能力的影響鮮見研究報道?！緮M解決的關(guān)鍵問題】以長江鱘幼魚為研究對象，通過中藥配伍探究4種復(fù)方對長江鱘幼魚抗氧化和抗應(yīng)激指標(biāo)的影響，旨在篩選能有效提高長江鱘幼魚免疫力及抗病力的中藥復(fù)方，為中藥在長江鱘養(yǎng)殖生產(chǎn)中的推廣應(yīng)用提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1. 1 試驗材料

2020年4月在中國長江三峽集團有限公司中華鱘研究所對人工馴養(yǎng)的長江鱘親魚進行催產(chǎn)，通過擠壓腹部獲得成熟卵子和精子，干法授精獲得受精卵，流水孵化獲得長江鱘仔魚，經(jīng)人工飼養(yǎng)獲得攝食配合飼料的10月齡長江鱘幼魚。2021年2月選取魚體完整、健康無傷，以及體質(zhì)量1000±53 g的長江鱘幼魚作為試驗用魚。長江鱘基礎(chǔ)飼料營養(yǎng)成分：粗蛋白≥43%、粗脂肪≥5.0%、粗纖維≤5%、粗灰分≤18%、鈣2.0%～5.0%、磷1.0%～3.0%、賴氨酸≥2.0%，基礎(chǔ)飼料為粉料。中藥購自湖北省宜昌市益豐大藥房，藥材烘干粉碎備用。

1. 2 試驗設(shè)計

參考齊茜等（2016）、路晶晶等（2018）、王凡等（2021）的研究結(jié)果設(shè)計中藥添加劑量，按照中藥配伍理論設(shè)計4種中藥復(fù)方，具體中藥配方及添加量見表1。將中藥按組方配比混勻，添加至長江鱘基礎(chǔ)飼料中。試驗共設(shè)5個處理組，其中A組投喂復(fù)方I;B組投喂復(fù)方II;C組投喂復(fù)方III;D組投喂復(fù)方IV;E組為對照組（CK），基礎(chǔ)飼料不添加中藥成分。養(yǎng)殖試驗在玻纖缸（直徑2.0 m，水深0.6 m）內(nèi)進行，每處理組10尾魚，每組2個重復(fù)。在暫養(yǎng)階段，各處理組的長江鱘幼魚均通過灌服方式投喂基礎(chǔ)飼料（日投喂量0.5%），暫養(yǎng)7 d后開始進行正式試驗。按照試驗設(shè)計投喂量配制飼料，以水稀釋成糊狀，每天投喂1次，連續(xù)投喂14 d。

1. 3 飼養(yǎng)管理

采用流水單養(yǎng)模式，試驗用水為經(jīng)曝氣和靜止沉淀后的井水，養(yǎng)殖水溫16～18 ℃。每天監(jiān)測養(yǎng)殖水體溶氧量、氨氮及亞硝酸鹽等水質(zhì)指標(biāo)，通過換水、排污，及時清除殘餌和糞便等，保持良好的養(yǎng)殖水環(huán)境（溶氧量>6.0 mg/L、氨氮<0.2 mg/L、亞硝酸氮<0.05 mg/L）。養(yǎng)殖期間每天8：00、12：00、18：00分別監(jiān)測并記錄養(yǎng)殖池水溫和溶氧量。

1. 4 血清生理指標(biāo)檢測分析

分別在第7 d和第14 d進行采樣，從各處理組（包括重復(fù)組）中隨機取5尾長江鱘幼魚，利用非抗凝采血管尾靜脈采血，2500 r/min離心15 min制備血清，-80 ℃保存?zhèn)溆?。采用上海酶?lián)生物科技有限公司的檢測試劑盒，按說明進行各項血清生理指標(biāo)檢測，包括丙二醛（MDA）、SOD、CAT、過氧化物酶（POD）、皮質(zhì)醇（COR）、GSH-Px、堿性磷酸酶（AKP）、T-AOC、熱休克蛋白70（HSP70）及褪黑素（MT）。

1. 5 統(tǒng)計分析

采用SPASS 25.0和Excel 2020統(tǒng)計分析試驗數(shù)據(jù)，利用單因素方差分析（One-way ANOVA）和Duncan’s多重比較進行顯著性分析，并通過Pearson相關(guān)分析探究各項指標(biāo)的相關(guān)性。

2 結(jié)果與分析

2. 1 中藥復(fù)方對長江鱘血清SOD活性的影響

由表2可知，與對照組相比，至試驗第7 d復(fù)方I組長江鱘血清SOD活性高于對照組，但與對照組無顯著差異（P>0.05，下同）;復(fù)方II組、復(fù)方III組和復(fù)方IV組的長江鱘血清SOD活性顯著升高（P<0.05，下同）。至試驗第14 d，復(fù)方I組和復(fù)方II組的長江鱘血清SOD活性高于對照組，但與對照組無顯著差異;復(fù)方III組和復(fù)方IV組血清長江鱘血清SOD活性顯著升高?？梢姡詮?fù)方IV組長江鱘血清SOD活性最強。

2. 2 中藥復(fù)方對長江鱘血清CAT活性的影響

由表3可知，與對照組相比，至試驗第7 d和第14 d各中藥復(fù)方處理組長江鱘血清CAT活性均有不同程度的升高，其中以復(fù)方III組長江鱘血清CAT活性最高，顯著高于對照組。

2. 3 中藥復(fù)方對長江鱘血清GSH-Px活性的影響

由表4可知，與對照組相比，至試驗第7 d所有中藥復(fù)方處理組長江鱘血清GSH-Px活性均呈不同程度的升高趨勢，其中復(fù)方III組和復(fù)方IV組長江鱘血清GSH-Px活性顯著高于對照組。至試驗第14 d，復(fù)方I組、復(fù)方II組和復(fù)方IV組長江鱘血清GSH-Px活性雖然有所升高，但與對照組無顯著差異，僅復(fù)方III組血清GSH-Px活性顯著高于對照組。

2. 4 中藥復(fù)方對長江鱘血清POD活性的影響

由表5可知，與對照組相比，至試驗第7 d復(fù)方I組、復(fù)方II組、復(fù)方IV組長江鱘血清POD活性均有不同程度的升高，但未達顯著水平，僅復(fù)方III組長江鱘血清POD活性顯著升高。至試驗第14 d，復(fù)方I組和復(fù)方II組長江鱘血清POD活性與對照組無顯著差異，而復(fù)方III組和復(fù)方IV組長江鱘血清POD活性較對照組顯著升高。

2. 5 中藥復(fù)方對長江鱘血清AKP活性的影響

由表6可知，與對照組相比，至試驗第7 d各中藥復(fù)方處理組長江鱘血清AKP活性均有不同程度的升高，但未達顯著水平。至試驗第14 d，復(fù)方I組、復(fù)方III組和復(fù)方IV組長江鱘AKP活性較對照組均顯著升高。

2. 6 中藥復(fù)方對長江鱘血清MDA含量的影響

由表7可知，至試驗第7 d，除復(fù)方I組長江鱘血清MDA含量較對照組略有上升外，復(fù)方II組、復(fù)方III組和復(fù)方IV組長江鱘血清MDA含量均呈下降趨勢，但未達顯著水平。至試驗第14 d，復(fù)方III組和復(fù)方IV組長江鱘血清MDA含量顯著降低，復(fù)方I組和復(fù)方II組長江鱘血清MDA含量雖然有所下降但未達顯著水平。

2. 7 中藥復(fù)方對長江鱘血清T-AOC的影響

由表8可知，至試驗第7 d復(fù)方I組和復(fù)方II組長江鱘血清T-AOC與對照組無顯著差異，復(fù)方III組和復(fù)方IV組長江鱘血清T-AOC則顯著升高;至試驗第14 d，除復(fù)方I組外，其他中藥復(fù)方處理組的長江鱘血清T-AOC均顯著升高。

2. 8 復(fù)方中藥對長江鱘血清COR含量的影響

由表9可知，至試驗第7 d復(fù)方IV組長江鱘血清COR含量較對照組顯著降低，復(fù)方I組、復(fù)方II組和復(fù)方III組長江鱘血清COR含量也呈不同程度的下降趨勢，但與對照組無顯著差異。至試驗第14 d，除復(fù)方II組長江鱘血清COR含量略有升高外，其他3個中藥復(fù)方處理組長江鱘血清COR含量均有不同程度的降低，其中復(fù)方III組和復(fù)方IV組呈顯著降低趨勢。

2. 9 中藥復(fù)方對長江鱘血清HSP70含量的影響

由表10可知，至試驗第7 d，除復(fù)方IV組外，其他3個中藥復(fù)方處理組長江鱘血清HSP70含量較對照組均呈不同程度的上升趨勢，但未達顯著差異水平。至試驗第14 d，除復(fù)方I組外，復(fù)方II組、復(fù)方III組復(fù)方IV組長江鱘血清HSP70含量則呈不同程度的上升趨勢，其差異也未達顯著水平。

2. 10 中藥復(fù)方對長江鱘血清MT含量的影響

由表11可知，與對照組相比，至試驗第7 d復(fù)方I組和復(fù)方II組長江鱘血清MT含量有所上升，而復(fù)方III組和復(fù)方IV組長江鱘血清MT含量呈下降趨勢，均未達顯著差異水平。至試驗第14 d，各中藥復(fù)方處理組長江鱘血清MT含量均呈不同程度上升趨勢，但其差異未達顯著水平。

2. 11 各指標(biāo)間的相關(guān)分析結(jié)果

對各指標(biāo)間的相關(guān)性進行分析，結(jié)果（表12）顯示，SOD活性與POD活性呈顯著正相關(guān)，與GSH-Px活性及T-AOC呈極顯著正相關(guān)（P<0.01，下同），與COR含量則呈極顯著負(fù)相關(guān);CAT活性與POD活性呈顯著正相關(guān);POD活性與GSH-Px活性呈極顯著正相關(guān)、與T-AOC呈顯著正相關(guān);GSH-Px活性與COR含量呈顯著負(fù)相關(guān);T-AOC與MDA含量呈顯著負(fù)相關(guān)、與COR含量呈極顯著負(fù)相關(guān)。

3 討論

3. 1 中藥復(fù)方對長江鱘幼魚抗氧化能力的影響

為了防止自由基對生物體產(chǎn)生損害作用，在需氧生物體內(nèi)已進化形成酶促反應(yīng)抗氧化防御機制，即具有特異性的抗氧化酶系統(tǒng)（亢玉靜等，2013）。SOD、POD、CAT及GSH-Px是機體抗氧化酶系統(tǒng)的重要組成部分，具有清除活性氧的能力，在維持機體氧化與抗氧化動態(tài)平衡的過程中發(fā)揮重要作用（Klaunig et al.，2011;Jia et al.，2019）。SOD是一類含有金屬元素的氧化還原酶類，能催化超氧陰離子自由基轉(zhuǎn)化為過氧化氫和氧氣，清除體內(nèi)的超氧陰離子自由基（Yu et al.，2018）;而CAT、POD和GSH-Px可催化過氧化氫生產(chǎn)水和氧氣（吳金明等，2016;虞為等，2021）。MDA是自由基氧化后產(chǎn)生的最終產(chǎn)物，可反映組織細(xì)胞的受損程度（Mansour，2000;何勤等，2021）。T-AOC是反映機體抗氧化系統(tǒng)清除自由基的關(guān)鍵指標(biāo)（崔惟東，2009）。AKP參與魚類的免疫應(yīng)答及多種生理代謝過程，在營養(yǎng)物質(zhì)吸收利用及非特異性免疫中發(fā)揮重要作用（萬金娟等，2014）。

中藥能提高魚類機體的抗氧化能力，對其健康生長具有促進作用。齊茜等（2016）研究表明攝食中藥復(fù)方的閃光鱘血液AKP含量顯著升高;王煜恒等（2018）研究發(fā)現(xiàn)采用添加黃芪多糖的飼料投喂雜交鱧能顯著提高其SOD和CAT活性、抑制MDA合成;冒樹泉等（2019）研究證實添加中藥復(fù)方可提高大鱗副泥鰍機體抗氧化能力;孫學(xué)亮等（2020）研究表明在飼料中添加大黃、黃芪、連翹、黃苓及丹皮可顯著提高白點鮭和亞東鮭的血液抗氧化能力，且以投喂14 d的效果最佳;何勤等（2021）研究發(fā)現(xiàn)在鯉魚日糧中添加銀杏葉提取物可提高SOD、CAT、GSH-Px活性及其T-AOC。本研究結(jié)果表明，在整個試驗期間，復(fù)方III組長江鱘血清SOD、CAT、GSH-Px、POD、AKP活性呈持續(xù)上升趨勢，復(fù)方IV組在試驗第7 d長江鱘血清SOD、GSH-Px活性顯著增強，至試驗第14 d長江鱘血清SOD、POD、AKP活性顯著增強;復(fù)方III組和復(fù)方IV組長江鱘血清MDA含量在試驗第14 d顯著降低，說明復(fù)方III組和復(fù)方IV組可顯著提高長江鱘機體的T-AOC，而復(fù)方I組和復(fù)方II組對長江鱘幼魚抗氧化相關(guān)指標(biāo)影響不明顯?？梢姡瑥?fù)方III組和復(fù)方IV組的中藥配伍能增強長江鱘幼魚機體抗氧化防御能力，降低組織損傷作用，對其健康生長具有積極的促進作用。

3. 2 中藥復(fù)方對長江鱘幼魚抗應(yīng)激能力的影響

應(yīng)激是動物機體對外界不良因子刺激而產(chǎn)生的一種特異性或非特異性反應(yīng)，是動物機體用以維持內(nèi)環(huán)境平衡的適應(yīng)性生理反應(yīng)（Gwak，2003;Hoffnagle et al.，2006;韋海明，2014）。在養(yǎng)殖過程中，魚類常面臨著各種有害應(yīng)激，當(dāng)應(yīng)激過于強烈時魚體生理生化指標(biāo)發(fā)生明顯變化、機體免疫能力下降，極易受到病原體的侵襲，嚴(yán)重時可導(dǎo)致大批量死亡。COR是評價魚類應(yīng)激反應(yīng)的重要指標(biāo)（趙建華，2014）;HSP70在機體內(nèi)作為一種分子伴侶而對機體起保護作用，可調(diào)節(jié)細(xì)胞的生理功能，提高細(xì)胞對應(yīng)激反應(yīng)的耐受性（羅勝玉等，2017）。本研究結(jié)果顯示，復(fù)方III組和復(fù)方IV組可有效降低長江鱘幼魚血清COR含量，且未對血清HSP70含量產(chǎn)生影響，表明這2個中藥復(fù)方的中藥配伍對提高長江鱘幼魚機體的抗應(yīng)激能力具有促進作用。硬骨魚類松果體產(chǎn)生的MT對機體具有保護作用，將MT注射到硬骨魚體內(nèi)可有效緩解機體受到的捕撈脅迫、缺氧脅迫及密度脅迫等（Dziegiel et al.，2003;Hardeland，2005;López-Pati?o et al.，2013，2014）。在本研究中，各中藥復(fù)方處理組長江鱘幼魚的MT含量無顯著變化，說明設(shè)計的中藥復(fù)方對誘發(fā)長江鱘松果體分泌MT無顯著影響，具體原因有待進一步探究。

本研究按照中藥配伍理論設(shè)計4個復(fù)方。，復(fù)方I以黃芪為君藥，補中益氣，升陽固表，提高機體抗逆性;魚腥草、金銀花為清熱解毒藥，二者聯(lián)用祛除邪毒;茯苓配大黃利于排毒，甘草為國老調(diào)和諸藥。復(fù)方II以黨參補中益氣，五加皮祛濕補肝腎，二者聯(lián)用培元固本;板藍根清熱解毒，大黃涼血解毒、瀉熱通腸、破積行瘀。復(fù)方III以金銀花、大青葉、山豆根清熱解毒，強力祛邪為君藥，杏仁止咳平喘、潤腸通便，桔梗宣肺利咽排膿，貫眾治濕熱毒瘡;此方設(shè)計理論可治療爛鰓病、鰓腫病、潰爛病及敗血病等魚類病征。組方IV以黨參補中、黃芪實表、五味子生津固腎，三者聯(lián)用使機體抗逆性增強;山楂健脾消食降脂，黃柏瀉三焦之火，大黃瀉熱通腸、破積行瘀，甘草調(diào)和諸藥;此方有補有瀉，補而不膩，瀉而不虛，陰陽平衡?？梢?，本研究設(shè)計的4個復(fù)方均以提高長江鱘幼魚抗氧化、抗應(yīng)激及免疫力為目的，用藥以溫補祛邪、清熱解毒為主，配伍遵循“相須相使”的原則，但各中藥復(fù)方對提高長江鱘幼魚抗氧化和抗應(yīng)激能力的效果存在一定差異，其中復(fù)方I和復(fù)方II僅對個別血清生理指標(biāo)有促進作用，而復(fù)方III和復(fù)方IV對大部分抗氧化和抗應(yīng)激指標(biāo)具有顯著提升作用，說明這2個中藥復(fù)方對提高長江鱘幼魚的抗氧化和抗應(yīng)激能力具有良好的促進作用，與路晶晶等（2018）、冒樹泉等（2019）、胡斌等（2019）的研究結(jié)果相似，即不同中藥配伍組方對魚類生長、消化、抗應(yīng)激、抗氧化及免疫等指標(biāo)產(chǎn)生的效果也存在明顯差異，可能與中藥組方配伍、中藥產(chǎn)地及試驗魚種類等因素有關(guān)，因此今后應(yīng)針對不同魚類的適宜中藥組方及使用方法進行深入分析，以獲得最佳效果。

3. 3 不同中藥復(fù)方處理組各指標(biāo)的相關(guān)性

需氧生物體內(nèi)進化形成的抗氧化防御機制及抗應(yīng)激機制包括一系列復(fù)雜的酶促反應(yīng)和指標(biāo)變化反應(yīng)（亢玉靜等，2013;韋海明，2014），其中SOD、POD、CAT、GSH-Px等酶類是機體抗氧化酶系統(tǒng)的重要組成部分（Klaunig et al.，2011;Jia et al.，2019）。本研究通過對長江鱘不同抗氧化指標(biāo)及抗應(yīng)激指標(biāo)進行相關(guān)分析，結(jié)果表明各指標(biāo)間存在較復(fù)雜的相關(guān)性，其中，SOD活性與POD活性呈顯著正相關(guān)，與GSH-Px活性及T-AOC呈極顯著正相關(guān)（P<0.01，下同），與COR含量則呈極顯著負(fù)相關(guān);CAT活性與POD活性呈顯著正相關(guān);POD活性與GSH-Px活性呈極顯著正相關(guān)、與T-AOC呈顯著正相關(guān);GSH-Px活性與COR含量呈顯著負(fù)相關(guān);T-AOC與MDA含量呈顯著負(fù)相關(guān)、與COR含量呈極顯著負(fù)相關(guān)?？寡趸笜?biāo)與抗應(yīng)激指標(biāo)間存在一定關(guān)聯(lián)性，共同為調(diào)控長江鱘幼魚的抗氧化和抗應(yīng)激系統(tǒng)發(fā)揮作用。

4 結(jié)論

在基礎(chǔ)飼料中添加適宜的中藥復(fù)方對長江鱘幼魚抗氧化和抗應(yīng)激能力有顯著促進作用，尤其以復(fù)方III（金銀花、杏仁、貫眾、大青葉、山豆根、桔梗）和復(fù)方IV（黃芪、黃柏、甘草、山楂、五味子、大黃、黨參）的效果最佳，可有效緩解長江鱘幼魚機體面臨的應(yīng)激反應(yīng)，達到保護效果。

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（責(zé)任編輯 蘭宗寶）