基于TGFβ1/Smad7 通路觀察麻黃堿對肺心病大鼠血管內(nèi)皮結(jié)構(gòu)及功能的影響

楊利萍，張友蘭，唐鳳鳴，歐 揚(yáng)，李 瑩

四川省人民醫(yī)院溫江醫(yī)院/成都市溫江區(qū)人民醫(yī)院,四川 成都 611000

肺心病即慢性肺源性心臟病，主要是由于肺組織結(jié)構(gòu)和功能病變，使肺血管的阻力和肺動脈壓力升高，從而造成右心室肥厚，并最終導(dǎo)致右心功能衰竭［1］，是一種高患病率、高死亡率的繼發(fā)性心臟病。研究［2］表明，肺血管病變誘發(fā)的肺動脈高壓（pulmonary arterial hypertension，PAH）是肺心病發(fā)病過程中的中心環(huán)節(jié)和先決條件。近年來研究發(fā)現(xiàn)，內(nèi)皮細(xì)胞損傷（endothelial cell damage，ECD）導(dǎo)致的內(nèi)皮功能失調(diào)是PAH 血管病變的基礎(chǔ)病理改變，因此尋找合適的藥物對ECD進(jìn)行干預(yù)治療，是PAH 治療領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)之一［3］。麻黃是我國寶貴的藥用植物，性味辛苦，具有宣肺平喘、發(fā)汗散寒、活血通絡(luò)等作用。研究［4］表明，麻黃堿能通過抑制炎癥減輕肺損傷和肺纖維化，有效抑制非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞的增殖。然而，麻黃堿對肺動脈高壓的保護(hù)作用及機(jī)制研究尚未報道。研究［5］表明轉(zhuǎn)化生長因子β1（transforming growth factor β1，TGFβ1）/信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子7（signal transduction molecule 7，Smad7）信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在血管平滑肌細(xì)胞遷移、動脈壁脂質(zhì)沉積、動脈的炎性細(xì)胞浸潤、血管壁的氧化應(yīng)激等血管生物學(xué)行為發(fā)揮著重要的調(diào)控作用。ZENG Z 等［6］研究發(fā)現(xiàn)，TGFβ1/Smad7 在血管內(nèi)皮損傷動物模型中表達(dá)異常。本研究通過腹腔注射野百合堿構(gòu)建肺動脈高壓模型，從TGFβ1/Smad7 信號通路出發(fā)，探討麻黃堿對PAH 血管內(nèi)皮的作用機(jī)制，從而為臨床提供新的數(shù)據(jù)支撐。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物12～13 周齡的雄性SD 大鼠60只，體質(zhì)量在200～220 g，由四川省人民醫(yī)院溫江醫(yī)院動物實(shí)驗(yàn)中心提供，實(shí)驗(yàn)動物許可證號：2019-0005A。飼養(yǎng)條件：依照實(shí)驗(yàn)動物管理辦法，室溫下標(biāo)準(zhǔn)飼料、自由飲水、分籠（4 籠）適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后用于實(shí)驗(yàn)。

1.2 試劑與儀器野百合堿（美國Sigma 公司，批號：012K7042）；鹽酸麻黃堿（赤峰制藥廠，北京中順制藥分裝，農(nóng)工藥準(zhǔn)字1996 第000116 號）；（transforming growth factorβ1，TGF-β1）特異性抑制劑SB431542（美國Selleck 公司，批號：265412m）；TGF-β1、p-Smad2、p-Smad7 探針（Santa公司，批號：0502384）；二喹啉甲酸濃度測定試劑盒（bicin-choninic acid，BCA，批號：SP256421）；3，3-二氨基聯(lián)苯胺（diaminobenzidine，DAB）化學(xué)發(fā)光試劑盒（Sigma 公司，批號：SB382415）；蘇木精-伊紅（hematoxylin eosin，HE）、丙二醛（malondialdehyde，MDA）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）檢測試劑盒（上海碧云天生物技術(shù)公司，批號：SM654388）；TGF-β1、p-Smad2、p-Smad7 抗體、兔抗3-磷酸甘油醛脫氫酶（glyceralde-hyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH）及山羊抗兔IgG（美國abcam 公司，批號：ab264432）；TUNEL、Western blot 試劑盒（德國Rebstock 公司，批號：2562224）。蘇凈Airtech 超凈工作臺（北京六一儀器廠）；LEICAEG1150 型組織包埋機(jī)（德國Leica 公司）；H-7650 型Nikon Ti-U/Ti-s 倒置熒光顯微鏡（日本三菱公司）；5810R型高速離心機(jī)（日本島津公司）；生物電鏡（美國Corning 公司）；E-Gel Imager 凝膠成像儀（美國Beckma公司）。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 造模及分組 選擇12～13周齡的SD大鼠60 只，隨機(jī)分為正常組、模型組、治療組、抑制劑組，每組15 只。除正常組外，其余各組大鼠用無水乙醇與生理鹽水（2∶3）配成1%的野百合堿溶液，腹腔一次性注射構(gòu)建肺心病大鼠模型，正常組注射等體積生理鹽水。

1.3.2 給藥方法 造模后治療組和抑制劑組大鼠分別定時以10 mg/kg 麻黃堿和SB431542 灌胃給藥；正常組和模型組給予等劑量生理鹽水，所有大鼠每日給藥1次，連續(xù)給藥4周。

1.4 觀察指標(biāo)

1.4.1 大鼠血壓及右心肥厚指數(shù) 連續(xù)給藥4周后，各組大鼠腹腔注射30 mg/kg 戊巴比妥鈉麻醉，參照文獻(xiàn)方法［7］采集記錄大鼠右心室收縮壓（right ventricular systolic pressure，RVSP）和肺動脈壓（pulmonary artery pressure，PAP），計(jì)算右心肥厚指數(shù)（right ventricular hypertrophy index，RVHI）。測量完畢后，腹動脈采血，低溫離心后，獲得血清，檢測血清中一氧化氧（nitricoxide，NO）和血漿中內(nèi)皮素1（endothelin-1，ET-1）的水平。將大鼠斷頭處死，留取各組大鼠的左側(cè)肺葉，液氮封存，轉(zhuǎn)移至深冷冰箱備用待測。

1.4.2 大鼠肺動脈病理學(xué)表現(xiàn) 從冰箱中取出各組大鼠肺動脈，制成石蠟切片，進(jìn)行蘇木素伊紅、馬松染色，光鏡下觀察各組大鼠肺動脈血管的病理改變。

1.4.3 大鼠肺動脈內(nèi)皮細(xì)胞超微結(jié)構(gòu) 從冰箱中取出各組大鼠肺動脈，分別制成0.3 cm×0.5 cm大小的超薄組織切片：采用2.5%戊二醛固定8 h，生理鹽水清洗3 次，梯度濃度乙醇脫水，維持-20℃冷凍干燥過夜，透射電鏡下觀察各組大鼠肺動脈血管的內(nèi)皮細(xì)胞超微病理結(jié)構(gòu)改變。

1.4.4 大鼠肺動脈內(nèi)皮細(xì)胞凋亡 從冰箱中取出各組大鼠肺動脈，常規(guī)方法固定，冰凍切片，二甲苯浸洗兩次，梯度酒精浸洗5 min，風(fēng)干后3%雙氧水-甲醇浸泡10 min，PBS漂洗3次，每次3 min，然后4℃預(yù)冷乙醇進(jìn)行如下操作：0.1%TritonX-100、0.1%緩沖液處理2 min，PBS 漂洗3 次，每次3 min，加入TUNNEL 反應(yīng)混合液，加封口膜在暗濕盒中反應(yīng)1 h，溫度37℃，PBS 漂洗，梯度酒精脫水，二甲苯透明，中性樹脂封片，熒光顯微鏡進(jìn)行觀察，每組切片6 個不同的視野，并通過Image-Pro 6.2 軟件處理圖像［6］，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析得到各組大鼠的肺動脈血管的內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡率。

1.4.5 氧化應(yīng)激相關(guān)底物和酶 從大鼠眼眶取血，各組血清樣本在蛋白酶抑制劑作用下超聲溶解，以離心半徑15 cm，4000 r/min 離心5 min，收集上清液進(jìn)行分析。采用蛋白測定試劑盒測定上清液蛋白濃度。參照試劑盒說明書的操作步驟，分別檢測各組血清樣本中總抗氧化能力（total antioxidant capacity，T-AOC）、SOD 水平及MDA、活性氧（reactive oxygen species，ROS）含量。

1.4.6 熒光原位雜交檢測各組大鼠肺動脈TGFβ1、Smad2、Smad7的mRNA的表達(dá) 從冰箱中取出各組大鼠肺動脈，10%甲醛固定，制成0.5μm石蠟切片，脫蠟，風(fēng)干，加入蛋白酶K 反應(yīng)液（100 mmol/l Tris-HCL，50 mmol/L EDTA 和1μg/mL 蛋白酶K，各1 mL 的混合液），在37°C 水浴中孵育20 min，用緩沖液沖洗3 次，通過酒精梯度脫水。加入1 mL 變性溶液（70%甲酰胺，2X SSC和0.1 mmol/L的EDTA，各1 mL的混合液），在75℃下孵育8 min，同時雜交含目的蛋白mRNA探針的溶液，在75℃下孵育8 min。每個載玻片區(qū)域覆蓋有50 μL 雜交混合物，將溶液置于濕箱中，并在42℃的烤箱中雜交過夜［7-8］。雜交后，幻燈片被洗脫，通過酒精梯度脫水并風(fēng)干，在顯微鏡下觀察。

1.4.7 Western blot 檢測各組大鼠肺動脈TGFβ1、p-Smad2、p-Smad7 的表達(dá)水平 從冰箱中取出各組大鼠肺動脈，PBS 緩沖液沖洗2 次，研磨勻漿，冰上裂解30 min 后，離心獲得上清，蛋白濃度采用BCA試劑盒測定，每個樣品取50μg，然后進(jìn)行SDS-PAGE 電泳、PVDF 轉(zhuǎn)膜、TBST 液封閉，維持4℃過夜孕育，然后分別加入一抗（TGFβ1，p-Smad2，p-Smad7）（1∶1500），孕育1 h，洗滌加入抗辣根過氧化物酶標(biāo)記的羊抗兔IgG（1∶10000），加入ECL顯色30 min，以GAPDH 作為內(nèi)參表示蛋白相對表達(dá)水平。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用軟件SPSS 16.0對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料采用±s進(jìn)行表示，多組間比較采用單因素方差分析，兩兩間比較采用獨(dú)立t檢驗(yàn)，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 大鼠血壓及RVHI水平與正常組比較，模型組大鼠RVSP、PAP和RVHI水平均顯著升高（P＜0.05）。與模型組比較，藥物干預(yù)后，治療組和抑制劑組RVSP、PAP 和RVHI 水平均顯著下降（P＜0.05）；兩組各項(xiàng)指標(biāo)比較，差異無統(tǒng)計(jì)意義（P＞0.05）。見表1。

表1 各組大鼠血壓及RVHI水平比較（±s）

表1 各組大鼠血壓及RVHI水平比較（±s）

注：1 mm Hg≈0.133 kPa；*表示與正常組比較，P＜0.05；#表示與模型組比較，P＜0.05

組別正常組模型組治療組抑制劑組鼠數(shù)15 15 15 15 RVSP（mm Hg）34.31±3.24 97.61±8.06*54.74±5.18*#56.16±6.09*#PAP（mm Hg）21.65±2.52 60.15±3.32*31.69±2.96*#33.31±2.12*#RVHI（%）0.29±0.02 0.69±0.08*0.42±0.04*#0.44±0.05*#

2.2 大鼠血清NO、ET-1 含量與正常組比較，模型組大鼠血清NO 含量顯著下降（P＜0.05），ET-1的含量顯著上升（P＜0.05）。經(jīng)藥物干預(yù)后，與模型組比較，治療組、抑制劑組大鼠血清NO 含量顯著上升，ET-1 含量顯著下降（P＜0.05）；兩組各項(xiàng)指標(biāo)比較，差異無統(tǒng)計(jì)意義（P＞0.05）。見表2。

表2 各組大鼠血清中NO和ET-1含量比較（±s）

表2 各組大鼠血清中NO和ET-1含量比較（±s）

注：*表示與正常組比較，P＜0.05；#表示與模型組比較，P＜0.05

組別正常組模型組治療組抑制劑組鼠數(shù)15 15 15 15 NO（μmol/L）45.38±5.12 21.60±3.07*34.21±3.26*#37.24±3.18*#ET-1（pg/L）93.27±11.29 136.19±15.74*109.87±12.87*#115.28±12.67*#

2.3 大鼠肺動脈氧化應(yīng)激指標(biāo)與正常組比較，模型組大鼠肺動脈ROS、MDA水平顯著增加，而SOD和T-AOC 水平顯著降低；與模型組比較，治療組、抑制劑組大鼠肺動脈ROS 和MDA 水平顯著降低，SOD和T-AOC水平顯著增加，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；治療組、抑制劑組大鼠肺動脈ROS、MDA、SOD 和T-AOC 水平比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見圖1。

圖1 各組大鼠氧化應(yīng)激相關(guān)指標(biāo)變化情況

2.4 大鼠肺動脈組織病理變化正常組HE 染色結(jié)果顯示，大鼠肺動脈血管壁光滑且富有彈性，血管壁厚度與血管管腔面積正常，內(nèi)膜層連續(xù)排列規(guī)整，通過Masson 染色，發(fā)現(xiàn)在視野中顯示出少量膠原纖維；模型組大鼠肺動脈血管僵硬度明顯增加，內(nèi)膜增厚明顯，管腔明顯變窄，管腔內(nèi)大量炎癥細(xì)胞填充，內(nèi)膜結(jié)構(gòu)不規(guī)則，內(nèi)皮凸起、缺損嚴(yán)重，Masson 染色顯示血管壁和周圍組織中顯示出許多無序增殖的膠原纖維；治療組和抑制劑組大鼠的肺動脈在內(nèi)皮結(jié)構(gòu)、厚度、內(nèi)膜完整性，以及膠原纖維增生方面較模型組有明顯改善。見圖2。

圖2 各組大鼠肺動脈病理變化情況（A1-D1為HE染色，×400；A2-D2為Masson染色，×400）

2.5 大鼠肺動脈超微結(jié)構(gòu)改變正常組大鼠肺動脈內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整，排列規(guī)整、連續(xù)，細(xì)胞間連接緊密，基底膜完整，無隆起與脫落現(xiàn)象，內(nèi)膜厚薄均勻，內(nèi)膜力膜平直，無彎曲，平滑肌細(xì)胞分布致密，彈力板未出現(xiàn)斷裂現(xiàn)象，胞漿內(nèi)線粒體結(jié)構(gòu)完整，性狀正常；模型組大鼠肺動脈內(nèi)皮細(xì)胞增生，形狀失去穩(wěn)定結(jié)構(gòu)，基底膜斷裂明顯，平滑肌細(xì)胞肥大，彈力板結(jié)構(gòu)不完整且斷裂，胞漿內(nèi)線粒體腫脹明顯，結(jié)構(gòu)缺損嚴(yán)重；治療組和抑制劑組大鼠肺動脈內(nèi)皮細(xì)胞扁平、較為完整，線粒體空泡樣變性明顯好轉(zhuǎn)，內(nèi)膜力膜連續(xù)，厚度趨于均勻，中膜平滑肌細(xì)胞略見增生，彈力板結(jié)構(gòu)清晰，排列較為整齊。見圖3。

圖3 各組大鼠透射電鏡下肺動脈超微結(jié)構(gòu)變化（×6000）

2.6 大鼠肺動脈中內(nèi)皮細(xì)胞凋亡率與正常組比較，模型組大鼠肺動脈內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡率顯著升高（P＜0.05）。與模型組比較，經(jīng)過藥物干預(yù)后，治療組和抑制劑組大鼠肺動脈內(nèi)皮細(xì)胞凋亡率顯著降低（P＜0.05）；治療組和抑制劑組比較，差異無統(tǒng)計(jì)意義（P＞0.05）。見圖4。

圖4 各組大鼠肺動脈中內(nèi)皮細(xì)胞凋亡率

2.7 大 鼠 肺 動 脈 中TGFβ1、p-Smad2 及p-Smad7mRNA及蛋白表達(dá)與正常組比較，模型組大鼠肺動脈中TGFβ1、p-Smad2及p-Smad7的mRNA熒光強(qiáng)度明顯增強(qiáng)（P＜0.05），蛋白表達(dá)量顯著升高（P＜0.05）。與模型組比較，治療組和抑制劑組大鼠肺動脈中TGFβ1和p-Smad2 的mRNA 熒光強(qiáng)度明顯減弱，蛋白表達(dá)量顯著降低（P＜0.05）；p-Smad7 的mRNA 熒光強(qiáng)度明顯增強(qiáng)，蛋白表達(dá)量顯著升高（P＜0.05）；治療組和抑制劑組大鼠肺動脈的TGFβ1、p-Smad2及p-Smad7的mRNA及蛋白表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見圖5—6。

圖5 各組大鼠肺動脈TGFβ1、p-Smad2及p-Smad7蛋白表達(dá)

圖6 各組大鼠肺動脈TGFβ1、p-Smad2 及p-Smad7 mRNA 表達(dá)（A1-D1，×200；A2-D2，×400；A3-D3，×800）

3 討論

肺心病是一種嚴(yán)重的呼吸系統(tǒng)和循環(huán)系統(tǒng)疾病，具有較高的患病率及病死率。相關(guān)研究［8］表明，PAH 是肺心病發(fā)生發(fā)展的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，而血管結(jié)構(gòu)，特別是內(nèi)皮結(jié)構(gòu)和功能改變是PAH 的基礎(chǔ)病理生理因素。因此，近年來越來越多的研究開始針對內(nèi)皮細(xì)胞進(jìn)行干預(yù)，用以治療PAH。麻黃堿是中藥麻黃的主要成分，研究［9］報道麻黃堿可通過抑制血管炎癥來減輕肺損傷和肺纖維化，對肺心病有一定的治療作用。本研究采用腹腔注射野百合堿構(gòu)建肺動脈高壓模型，然后觀察麻黃堿治療PAH的效果。結(jié)果顯示模型組大鼠的RVSP、PAP和RVHI 水平均顯著升高，而藥物干預(yù)后，治療組的RVSP、PAP和RVHI水平均顯著下降，結(jié)果提示麻黃堿對PAH大鼠具有一定的保護(hù)作用。

相關(guān)研究［10］表明，NO和ET-1兩者的平衡對于血管舒縮功能的維持具有重要意義。STEVEN S［11］研究報道，肺動脈高壓患者血漿中ET-1 升高，NO水平降低，肺動脈血管處于高度收縮狀態(tài)，形成肺動脈高壓，導(dǎo)致血管功能障礙。本研究中，PAH 模型組大鼠血清中ET-1的水平顯著升高，NO水平顯著下降，藥物干預(yù)后可顯著降低大鼠血清ET-1 水平，升高NO 水平，說明麻黃堿改善內(nèi)皮功能的作用機(jī)制與降低血清ET-1 水平、升高NO 水平有關(guān)。ROS 是一類廣泛存在于生物體中富含有氧元素的物質(zhì)，當(dāng)機(jī)體受到刺激后，過剩的ROS 可導(dǎo)致多種組織出現(xiàn)氧化應(yīng)激損傷［12］。SOD 是氧化應(yīng)激反應(yīng)中主要的抗氧化劑，機(jī)體抗氧化系統(tǒng)主要受SOD和MDA 的動態(tài)平衡維持。許良葵［13］研究表明，麻黃堿可通過抑制ROS 的產(chǎn)生來抑制細(xì)胞凋亡，從而幫助血管內(nèi)皮細(xì)胞抵抗H2O2誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激。本研究發(fā)現(xiàn)，應(yīng)用麻黃堿干預(yù)后，大鼠ROS 和MDA水平顯著降低，而SOD 和T-AOC 水平顯著升高，說明麻黃堿對PAH 引起的氧化應(yīng)激反應(yīng)具有一定的緩解作用，該結(jié)果與既往實(shí)驗(yàn)結(jié)果［13］一致，再次證實(shí)了藥物的治療效果。

PAH 發(fā)病機(jī)制尚未明確，文獻(xiàn)報道［14］稱內(nèi)皮細(xì)胞凋亡在PAH 發(fā)生發(fā)展過程中起著重要作用，內(nèi)皮細(xì)胞過度凋亡會促進(jìn)循環(huán)系統(tǒng)障礙，因此阻斷內(nèi)皮細(xì)胞凋亡可以改善PAH。本研究染色結(jié)果顯示，模型組大鼠肺動脈血管僵硬度明顯增加，內(nèi)膜增厚明顯，管腔明顯變窄，管腔內(nèi)有大量炎癥細(xì)胞填充，內(nèi)皮凸起、缺損嚴(yán)重，且血管壁和周圍組織中顯示出許多無序增殖的膠原纖維。進(jìn)一步觀察超微結(jié)構(gòu)發(fā)現(xiàn)，模型組大鼠肺動脈內(nèi)皮細(xì)胞增生，失去穩(wěn)定結(jié)構(gòu)，基底膜斷裂明顯，平滑肌細(xì)胞肥大，彈力板結(jié)構(gòu)不完整且斷裂，胞漿內(nèi)線粒體腫脹明顯，結(jié)構(gòu)缺損嚴(yán)重，這提示PAH 大鼠的肺動脈組織結(jié)構(gòu)發(fā)生明顯改變。治療組肺動脈在內(nèi)皮結(jié)構(gòu)、厚度、內(nèi)膜完整性，以及膠原纖維增生方面較模型組有明顯改善，提示麻黃堿可以明顯改善PAH 大鼠肺動脈組織。李中燕［15］研究顯示，麻黃堿可以明顯抑制支氣管哮喘內(nèi)皮細(xì)胞凋亡，本研究中TUNNEL 染色結(jié)果顯示，模型組大鼠肺動脈內(nèi)皮細(xì)胞凋亡明顯，凋亡指數(shù)明顯高于正常組，而藥物干預(yù)處理后，凋亡指數(shù)明顯下降，提示麻黃堿能夠抑制肺動脈內(nèi)皮細(xì)胞凋亡，起到保護(hù)血管內(nèi)皮結(jié)構(gòu)的作用。

文獻(xiàn)報道［16］顯示，TGFβ1/Smad7 是與血管生物學(xué)行為密切相關(guān)的信號通路，在血管內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)維持、平滑肌細(xì)胞黏附與遷移以及血管中膜細(xì)胞收縮等多種細(xì)胞生物學(xué)行為發(fā)揮關(guān)鍵的調(diào)控作用。YAO W 等［17］研究表明抑制TGFβ1的表達(dá)、上調(diào)p-Smad7 的表達(dá)能明顯改善由炎性因子誘導(dǎo)的內(nèi)皮功能障礙。本研究中，用TGFβ1/Smad7信號通路特異性抑制劑SB431542灌胃處理PAH大鼠來觀察TGFβ1/Smad7 信號通路的作用機(jī)制。結(jié)果發(fā)現(xiàn)抑制劑組的結(jié)果與治療組大鼠無明顯差異，能夠改善PAH 大鼠中肺動脈血管的內(nèi)皮損傷。原位熒光和Western blot 結(jié)果表明，模型組大鼠肺動脈中TGFβ1、p-Smad2 及p-Smad7 的mRNA 熒光強(qiáng)度明顯增強(qiáng)，各蛋白的相對表達(dá)量顯著升高；治療組和抑制劑組大鼠肺動脈中TGFβ1、p-Smad2 的mRNA 熒光強(qiáng)度明顯減弱，p-Smad7 的mRNA 熒光強(qiáng)度明顯增強(qiáng)，TGFβ1、p-Smad2 蛋白的表達(dá)顯著下降，p-Smad7蛋白的表達(dá)顯著升高。推斷麻黃堿可能通過抑制TGFβ1和p-Smad2 的表達(dá)，上調(diào)p-Smad7 的表達(dá)來發(fā)揮其對PAH脈血管內(nèi)皮的保護(hù)作用。

綜上所述，麻黃堿對PAH 肺動脈血管內(nèi)皮的保護(hù)作用，與TGFβ1/Smad7 信號通路有關(guān)，其機(jī)制可能是抑制TGFβ1和p-Smad2的表達(dá)，上調(diào)p-Smad7的表達(dá)，來降低氧化應(yīng)激反應(yīng)，抑制內(nèi)皮細(xì)胞凋亡，發(fā)揮對PAH肺動脈血管內(nèi)皮的保護(hù)作用。