豬牙皂皂苷對(duì)痰瘀互結(jié)型缺血性中風(fēng)模型大鼠的保護(hù)作用及機(jī)制研究

董娜娜 陳曉蘭 鄧鉍莉 萬(wàn)靜 謝樹(shù)才 胡娟 羅晨月 曹國(guó)瓊

中圖分類號(hào) R965 文獻(xiàn)標(biāo)志碼 A 文章編號(hào) 1001-0408（2022）09-1068-07

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2022.09.08

摘 要 目的 研究豬牙皂皂苷對(duì)痰瘀互結(jié)型缺血性中風(fēng)（ISPBS）模型大鼠的保護(hù)作用，并探究其作用機(jī)制。方法 將119只大鼠隨機(jī)分為正常組（生理鹽水）、假手術(shù)組（生理鹽水）、模型組（生理鹽水）、尼莫地平組（陽(yáng)性對(duì)照組，5 mg/kg）和豬牙皂皂苷低、中、高劑量組（3.21、6.42、12.84 mg/kg），每組17只。除正常組外，其余各組大鼠均采用高脂飼料飼養(yǎng)+線栓法復(fù)制ISPBS模型。測(cè)定或觀察大鼠神經(jīng)功能評(píng)分、腦組織含水量、腦組織病理形態(tài)學(xué)變化和血清中血液流變學(xué)指標(biāo)[全血黏度、紅細(xì)胞聚集指數(shù)、卡松黏度]、血脂四項(xiàng)[三酰甘油（TG）、總膽固醇（TC）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）]、炎癥因子[白細(xì)胞介素1β（IL-1β）、IL-10、腫瘤壞死因子α（TNF-α）]及腦組織中氧化應(yīng)激指標(biāo)[丙二醛（MDA）、一氧化氮（NO）、超氧化物歧化酶（SOD）]變化情況，并測(cè)定腦組織中B淋巴細(xì)胞瘤2（Bcl-2）、Bcl-2相關(guān)X蛋白（Bax）和半胱氨酸蛋白酶3（caspase-3）蛋白表達(dá)情況。結(jié)果 與正常組比較，模型組大鼠神經(jīng)功能評(píng)分、5項(xiàng)血清指標(biāo)（TC、TG、LDL-C、TNF-α、IL-1β）、血液流變學(xué)指標(biāo)和腦組織中MDA、NO含量以及Bax、caspase-3蛋白表達(dá)水平均顯著升高（P<0.01），血清中HDL-C、IL-10水平和腦組織中SOD活性、Bcl-2蛋白表達(dá)水平均顯著降低（P<0.01），腦組織出現(xiàn)核固縮、胞膜碎裂等明顯病變。與模型組比較，各給藥組上述指標(biāo)均不同程度改善，其中豬牙皂皂苷高劑量組大鼠的上述指標(biāo)變化差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。結(jié)論 豬牙皂皂苷對(duì)ISPBS模型大鼠具有較好的保護(hù)作用，其機(jī)制可能與減少氧化損傷、減少促炎介質(zhì)的產(chǎn)生和抑制神經(jīng)元凋亡有關(guān)。

關(guān)鍵詞 豬牙皂皂苷;痰瘀互結(jié)型缺血性中風(fēng);氧化損傷;機(jī)制

Protective effect and mechanism of saponins from Gleditsia sinensis on ischemic stroke with phlegm and blood stasis model rats

DONG Nana，CHEN Xiaolan，DENG Bili，WAN Jing，XIE Shucai，HU Juan，LUO Chenyue，CAO Guoqiong（School of Pharmacy， Guizhou University of Traditional Chinese Medicine， Guiyang 550025， China）

ABSTRACT ? OBJECTIVE To study the protective effects of saponins from Gleditsia sinensis on ischemic stroke with phlegm and blood stasis（ISPBS） model rats， and to explore its mechanism. METHODS Totally 119 rats were randomly divided into normal group （normal saline）， sham operation group （normal saline）， model group （normal saline）， nimodipine group （positive control group， 5 mg/kg）， G. sinensis saponin low-dose， medium-dose and high-dose groups （3.21， 6.42 and 12.84 mg/kg）， with 17 rats in each group. Except for normal group， other groups were all given high-fat diet+suture-occluded method to induce ISPBS model. The neurological function score， water content of brain tissue， pathological morphology of brain tissue， the changes of hemorheology indexes ?（whole blood viscosity， erythrocyte aggregation index， Casson-viscosity）， four items of blood lipid [triacylglycerol （TG）， total cholesterol （TC）， low-density lipoprotein cholesterol （LDL-C）， high-density lipoprotein cholesterol （HDL-C）] and inflammatory factors in serum and oxidative stress indexes [malondialdehyde （MDA）， nitric oxide （NO）， superoxide dismutase （SOD）] in brain tissue were determined or observed in rats. The protein expressions of B lymphocytoma 2 （Bcl-2）， Bcl-2 associated X protein （Bax） and caspase-3 in cerebral tissue were also detected. RESULTS Compared with normal group， the score of nerve function， 5 kinds of serum indexes （TC， TG， LDL-C， TNF-α， IL-1β）， hemorheology indexes， the contents of MDA and NO and protein expressions of Bax and caspase-3 in cerebral tissue were all increased significantly in model group （P<0.01）. The levels of HDL-C and IL-10 in serum， SOD activity and protein expression of Bcl-2 in cerebral tissue were decreased significantly （P<0.01）， and obvious lesions such as nuclear pyknosis and cell membrane fragmentation occurred in brain tissue. Compared with model group， above indexes of administration groups were improved to different extents， among which there was statistical significance in above indexes of G. sinensis saponin high-dose group （P<0.01）. CONCLUSIONS Saponin from G. sinensis has a good protective effect on ISPBS model rats. Its mechanism may be associated with reducing oxidative damage， reducing the production of pro-inflammatory mediators and resisting neuronal apoptosis.

KEYWORDS ? saponins from Gleditsia sinensis; ischemic stroke with phlegm and blood stasis; oxidative injury; mechanism

中風(fēng)是全球致殘和致死的主要原因之一，人口老齡化的加劇將導(dǎo)致中風(fēng)發(fā)生率的升高[1]。據(jù)全球疾病負(fù)擔(dān)研究數(shù)據(jù)顯示，我國(guó)總體中風(fēng)發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)為39.9%，位居全球首位[2]。中醫(yī)理論認(rèn)為，中風(fēng)是在內(nèi)傷的基礎(chǔ)上加上飲食不規(guī)律、情志不暢、過(guò)度疲勞等引起的臟腑陰陽(yáng)失調(diào)[3];痰瘀互結(jié)是中風(fēng)的主要病機(jī)和致病因素，痰濁、瘀血貫穿了中風(fēng)發(fā)生發(fā)展的全過(guò)程[4]。因此，目前中醫(yī)治療中風(fēng)的方法主要為祛痰和開(kāi)竅。

豬牙皂為豆科植物皂莢Gleditsia sinensis Lam.的干燥不育果實(shí)，具有祛痰開(kāi)竅、消腫散結(jié)之功效[5]。據(jù)2020年版《中國(guó)藥典》（一部）記載，以豬牙皂為主藥、配以鵝不食草和細(xì)辛制成的通關(guān)散，吹鼻可治療痰濁阻竅所致的氣閉神昏、牙關(guān)緊閉、不省人事等癥[5]。研究表明，經(jīng)鼻給藥是藥物到達(dá)大腦最快、最直接的途徑，以該方式給藥后藥物可以無(wú)創(chuàng)方式通過(guò)血腦屏障[6]。本課題組前期研究了豬牙皂不同萃取部位經(jīng)鼻給藥后對(duì)缺血缺氧模型小鼠血腦屏障通透性的影響，發(fā)現(xiàn)芳香類成分和皂苷類成分具有較好的“通關(guān)開(kāi)竅、醒腦復(fù)神”作用[7]。因此，本研究在前期研究基礎(chǔ)上考察豬牙皂皂苷對(duì)痰瘀互結(jié)型缺血性中風(fēng)（ischemic stroke with phlegm and blood stasis，ISPBS）模型大鼠的保護(hù)作用和可能機(jī)制，為豬牙皂皂苷鼻內(nèi)給藥制劑的研制和應(yīng)用提供一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料

1.1 主要儀器

本研究所用的主要儀器有Multiskan Mk3型酶標(biāo)儀（美國(guó)Thermo Fisher Scientific公司），BA200Digita型顯微攝像系統(tǒng)（麥克奧迪實(shí)業(yè)集團(tuán)有限公司），DZKW-4型恒溫水浴鍋（北京中興偉業(yè)儀器有限公司），LG-R-80B型血液黏度儀（北京中科富邦醫(yī)療設(shè)備有限公司），AUW12D型分析天平（日本Shimadzu公司）。

1.2 主要藥品與試劑

本研究所用的主要藥品與試劑有：豬牙皂皂苷（本實(shí)驗(yàn)室按文獻(xiàn)[7]方法自制，1 g豬牙皂生藥可以得到57 mg皂苷），尼莫地平片（亞寶藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司，批號(hào)170606，規(guī)格20 mg/片），三酰甘油（triacylglycerol，TG）試劑盒、總膽固醇（total cholesterol，TC）試劑盒、低密度脂蛋白膽固醇（low-density lipoprotein cholesterol，LDL-C）試劑盒、高密度脂蛋白膽固醇（high-density lipoprotein cholesterol，HDL-C）試劑盒、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）試劑盒、丙二醛（malondialdehyde，MDA）試劑盒、一氧化氮（nitric oxide，NO）試劑盒（南京建成生物工程研究所，批號(hào)分別為A110-1-1、A111-1-1、A113-1-1、A112-1-1、A001-1、A003-1、A012），大鼠白細(xì)胞介素1β（interleukin 1β，IL-1β）酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）試劑盒、大鼠IL-10 ELISA試劑盒、大鼠腫瘤壞死因子α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）ELISA試劑盒（上海茁彩生物科技有限公司，批號(hào)分別為ZC-36391、ZC-36379、ZC-37624），兔源B淋巴細(xì)胞瘤2（Bcl-2）抗體（美國(guó)Santa Cruz公司，批號(hào)sc-492），兔源Bcl-2相關(guān)X蛋白（Bax）抗體、兔源半胱氨酸蛋白酶3（caspase-3）抗體（美國(guó)CST公司，批號(hào)分別為2772s、9662s），辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的山羊抗兔/小鼠免疫球蛋白G（Ig G）二抗（武漢博士德生物工程有限公司，批號(hào)BST13J17B16G56），蘇木精染液、伊紅染液（武漢賽維爾生物技術(shù)有限公司，批號(hào)分別為G1005-1、G1001），磷酸鹽緩沖液（PBS，北京索萊寶科技有限公司，pH 7.2～7.4），多聚甲醛（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）;其余試劑均為分析純或?qū)嶒?yàn)室常用規(guī)格，水為純凈水。

1.3 動(dòng)物

本研究所用動(dòng)物為SPF級(jí)SD雄性大鼠，共119只，體質(zhì)量為250～280 g，購(gòu)自長(zhǎng)沙市天勤生物技術(shù)有限公司，動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)為SCXK（湘）2019-0014，合格證號(hào)為430726210100322185。所有大鼠均飼養(yǎng)于12 h光照/12 h黑暗、溫度（25±1） ℃、相對(duì)濕度（50±10）%的動(dòng)物房?jī)?nèi)，飼養(yǎng)期間自由攝食、飲水。實(shí)驗(yàn)前先適應(yīng)性喂養(yǎng)7 d。

2 方法

2.1 分組、造模與給藥

將119只大鼠按照隨機(jī)數(shù)字表法分成正常組（生理鹽水）、假手術(shù)組（生理鹽水）、模型組（生理鹽水）、尼莫地平組（陽(yáng)性對(duì)照組，5 mg/kg，劑量按藥品說(shuō)明書(shū)中成人劑量換算后制定）和豬牙皂皂苷低、中、高劑量組[3.21、6.42、12.84 mg/kg;劑量參考2020版《中國(guó)藥典》（一部）豬牙皂成人每日用量（1～1.5 g），并按照體表面積法[8]換算成大鼠的每日用量]，每組17只。正常組大鼠采用普通飼料喂養(yǎng);其余各組大鼠均給予高脂飼料（由3.5%膽固醇、10%豬油、0.2%丙硫尿嘧啶、0.5%膽酸鈉、10%白糖、75.8%基礎(chǔ)飼料組成）喂養(yǎng)[4，9]。大鼠飼養(yǎng)28 d后，眼眶取血，檢測(cè)血液流變學(xué)指標(biāo)及血脂四項(xiàng)的變化，若發(fā)現(xiàn)各指標(biāo)均異常則認(rèn)為痰瘀互結(jié)型大鼠造模成功[4]。正常組、假手術(shù)組、模型組和豬牙皂皂苷組大鼠通過(guò)鼻腔給予等體積生理鹽水或相應(yīng)藥物，尼莫地平組大鼠灌胃給藥，每天給藥1次，連續(xù)7 d。末次給藥1 h后，大鼠禁食不禁水12 h，采用線栓法建立ISPBS模型[10]。具體造模方法為：將大鼠麻醉，然后將其仰臥固定，從頸正中切口，繼而分離右側(cè)頸總動(dòng)脈（common carotid artery，CCA）、頸外動(dòng)脈（external carotid artery，ECA）、頸內(nèi)動(dòng)脈（internal carotid artery，ICA），結(jié)扎CCA近心端以及ECA，在CCA距離ICA和ECA分叉口4 mm處剪小口;將魚(yú)線插入ICA，缺血2 h后，將魚(yú)線輕輕拔至分叉口，再灌注24 h。正常組大鼠不進(jìn)行任何處理;假手術(shù)組大鼠僅分離血管，不插入魚(yú)線及結(jié)扎，其余操作與各造模大鼠相同。在ISPBS模型制備過(guò)程中，有部分組別的少數(shù)大鼠造模不成功，故本研究最終每組篩選12只大鼠進(jìn)行各指標(biāo)測(cè)定。

2.2 神經(jīng)功能評(píng)分

大鼠再灌注24 h后，采用Berderson評(píng)分法對(duì)大鼠神經(jīng)功能進(jìn)行評(píng)分：0分為正常，表示無(wú)神經(jīng)功能缺陷;1分為提尾時(shí)左前肢彎曲;2分為向左側(cè)轉(zhuǎn)圈;3分為向左側(cè)傾倒;4分為不能行走，即在無(wú)意識(shí)但疼痛刺激下會(huì)出現(xiàn)肢體活動(dòng)。若評(píng)分為1～3分，則表示造模成功[11]。

2.3 腦組織含水量檢測(cè)

大鼠再灌注24 h后，每組隨機(jī)取6只大鼠，處死后，立即取出其腦組織，精密稱定腦組織濕質(zhì)量，然后置于105 ℃電熱鼓風(fēng)干燥箱內(nèi)烘干，待干燥至恒重后再稱定腦組織質(zhì)量，并按公式計(jì)算腦組織含水量：腦組織含水量（%）=（腦組織濕質(zhì)量-腦組織干質(zhì)量）/腦組織濕質(zhì)量×100%。

2.4 血清中血脂四項(xiàng)、炎癥因子和血液流變學(xué)指標(biāo)檢測(cè)

大鼠再灌注24 h后，各組取剩余6只大鼠，麻醉后自眼眶取血2 mL，4 ℃靜置30 min，以3 000 r/min離心10 min，分離血清。根據(jù)試劑盒說(shuō)明書(shū)方法測(cè)定血清中血脂四項(xiàng)（TC、TG、LDL-C、HDL-C）和炎癥因子（IL-1β、IL-10、TNF-α）水平。另外，于大鼠腹主動(dòng)脈取血5 mL，4 h內(nèi)用血液黏度儀進(jìn)行血液流變學(xué)指標(biāo)檢測(cè)。

2.5 腦組織中氧化應(yīng)激指標(biāo)水平檢測(cè)

采用ELISA法進(jìn)行測(cè)定。取“2.4”項(xiàng)下取血后的大鼠，處死后，立即取出其缺血側(cè)腦組織，一部分保存于 ?-80 ℃冰箱中，待用;另一部分于冰浴下制成10%腦組織勻漿，在4 ℃下以3 000 r/min離心10 min，取上清液，根據(jù)相應(yīng)試劑盒說(shuō)明書(shū)方法測(cè)定缺血側(cè)腦組織中MDA、NO含量及SOD活性。

2.6 腦組織病理形態(tài)學(xué)變化觀察

采用蘇木精-伊紅（HE）染色法進(jìn)行觀察。取“2.5”項(xiàng)下冷凍的腦組織適量，固定于4%多聚甲醛中，常規(guī)制備石蠟切片（4～6 μm）并行常規(guī)HE染色，然后將切片置于顯微鏡下觀察腦組織的病理形態(tài)學(xué)變化。

2.7 腦組織中Bax、Bcl-2和caspase-3蛋白表達(dá)檢測(cè)

采用免疫組化法進(jìn)行測(cè)定。取“2.5”項(xiàng)下冷凍的腦組織適量，固定于4%多聚甲醛中，經(jīng)脫水、修剪、包埋、切片（4～6 μm）及二甲苯脫蠟、梯度乙醇脫水后，以過(guò)氧化氫浸泡;濕盒中加入Bax、Bcl-2、caspase-3一抗（稀釋比例均為1 ∶ 200），4 ℃孵育過(guò)夜;加入HRP標(biāo)記的山羊抗兔/小鼠IgG二抗（稀釋比例均為1 ∶ 200），37 ℃孵育20 min;PBS沖洗，二氨基聯(lián)苯胺（DAB）顯色，蒸餾水洗滌，蘇木精復(fù)染，二甲苯透明，中性樹(shù)膠封片。最后采用顯微攝像系統(tǒng)對(duì)切片進(jìn)行圖片采集，通過(guò)Image J 1.42軟件分析樣本的平均光密度值（平均光密度值越高表示蛋白表達(dá)越強(qiáng)）。

2.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以x±s表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.01。

3 結(jié)果

3.1 豬牙皂皂苷對(duì)模型大鼠神經(jīng)功能評(píng)分的影響

與正常組比較，假手術(shù)組大鼠神經(jīng)功能評(píng)分差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.01），模型組大鼠神經(jīng)功能評(píng)分顯著升高（P<0.01）;與模型組比較，尼莫地平組和豬牙皂皂苷高劑量組大鼠的神經(jīng)功能評(píng)分均顯著降低（P<0.01）。結(jié)果見(jiàn)表1。

3.2 豬牙皂皂苷對(duì)模型大鼠腦組織含水量的影響

與正常組比較，假手術(shù)組大鼠腦組織含水量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.01），模型組大鼠腦組織含水量顯著升高（P<0.01）;與模型組比較，各給藥組大鼠腦組織含水量均顯著降低（P<0.01）。結(jié)果見(jiàn)表1。

3.3 豬牙皂皂苷對(duì)模型大鼠血脂四項(xiàng)的影響

與正常組比較，假手術(shù)組和模型組大鼠血清中TC、TG、LDL-C水平均顯著升高（P<0.01），HDL-C水平均顯著降低（P<0.01）。與模型組比較，尼莫地平組、豬牙皂皂苷高劑量組大鼠血清中TC、TG、LDL-C水平均顯著降低（P<0.01），HDL-C水平均顯著升高（P<0.01）;豬牙皂皂苷中劑量組大鼠血清中TG、LDL-C水平均顯著降低（P<0.01）。結(jié)果見(jiàn)表2。

3.4 豬牙皂皂苷對(duì)模型大鼠血液流變學(xué)的影響

與正常組比較，假手術(shù)組和模型組大鼠在各切變率下的全血黏度、紅細(xì)胞聚集指數(shù)和卡松黏度均顯著升高（P<0.01）;與模型組比較，各給藥組大鼠在各切變率下的全血黏度、紅細(xì)胞聚集指數(shù)（除豬牙皂皂苷低劑量組外）、卡松黏度均顯著降低（P<0.01）。結(jié)果見(jiàn)表3。

3.5 豬牙皂皂苷對(duì)模型大鼠血清中炎癥因子的影響

與正常組比較，假手術(shù)組大鼠血清中TNF-α、IL-10、IL-1β含量差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.01）;模型組大鼠血清中TNF-α、IL-1β含量顯著升高（P<0.01），IL-10含量顯著降低（P<0.01）。與模型組比較，尼莫地平組、豬牙皂皂苷高劑量組大鼠血清中TNF-α含量均顯著降低（P<0.01），IL-10含量均顯著增加（P<0.01）;各給藥組大鼠血清中IL-1β含量均顯著降低（P<0.01）。結(jié)果見(jiàn)表4。

3.6 豬牙皂皂苷對(duì)模型大鼠腦組織中氧化應(yīng)激指標(biāo)的影響

與正常組比較，假手術(shù)組大鼠腦組織中MDA、NO含量和SOD活性差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.01）;模型組大鼠腦組織中MDA、NO含量顯著增加（P<0.01），SOD活性顯著降低（P<0.01）。與模型組比較，各給藥組大鼠腦組織中MDA、NO（除豬牙皂皂苷低劑量組外）含量均顯著降低（P<0.01），尼莫地平組、豬牙皂皂苷高劑量組大鼠腦組織中SOD活性均顯著升高（P<0.01）。結(jié)果見(jiàn)表5。

3.7 豬牙皂皂苷對(duì)模型大鼠腦組織病理形態(tài)學(xué)變化的影響

正常組、假手術(shù)組大鼠腦組織形態(tài)結(jié)構(gòu)正常，神經(jīng)細(xì)胞排列規(guī)則、核輪廓清晰，神經(jīng)纖維結(jié)構(gòu)完整、排列緊密。模型組大鼠腦組織形態(tài)不完整，細(xì)胞核固縮或溶解消失，胞膜碎裂，神經(jīng)纖維松散、排列雜亂，腦組織病變較嚴(yán)重。豬牙皂皂苷低、中劑量組大鼠腦組織神經(jīng)細(xì)胞結(jié)構(gòu)破壞，部分細(xì)胞核固縮或溶解消失，神經(jīng)纖維較松散。尼莫地平組和豬牙皂皂苷高劑量組大鼠腦組織病理改變較模型組均明顯減輕，神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)較為完整，神經(jīng)纖維結(jié)構(gòu)完整、排列緊密，僅可見(jiàn)少量被不同程度破壞的細(xì)胞。結(jié)果見(jiàn)圖1。

3.8 豬牙皂皂苷對(duì)模型大鼠腦組織中Bax、Bcl-2、caspase-3蛋白表達(dá)的影響

與正常組比較，假手術(shù)組大鼠腦組織中Bax、Bcl-2、caspase-3蛋白表達(dá)水平差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.01）;模型組大鼠腦組織中Bax、caspase-3蛋白表達(dá)水平顯著升高（P<0.01），Bcl-2蛋白表達(dá)水平顯著降低（P<0.01）。與模型組比較，各給藥組大鼠腦組織中Bax蛋白表達(dá)水平（除豬牙皂皂苷低劑量組外）均顯著降低（P<0.01）;尼莫地平組和豬牙皂皂苷高劑量組大鼠腦組織中Bcl-2蛋白表達(dá)水平顯著升高（P<0.01），caspase-3蛋白表達(dá)水平顯著降低（P<0.01）。結(jié)果見(jiàn)表6、圖2。

4 討論

尼莫地平是一種選擇性較強(qiáng)的二氫毗陡類有機(jī)鈣拮抗劑，易于透過(guò)血腦屏障，臨床上主要用于腦血管灌流不足、腦血管痙攣、蛛網(wǎng)膜下腔出血等腦血管疾病的治療[12-14]，目前被認(rèn)為是預(yù)防和治療腦血管疾病的首選藥物[15]，因此本研究將其作為陽(yáng)性對(duì)照藥物。

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為，ISPBS的發(fā)生發(fā)展和血脂代謝、血液流變學(xué)異常密切相關(guān)。血脂代謝異常主要表現(xiàn)為TG、TC、LDL-C水平異常升高和HDL-C水平異常降低，可引發(fā)血液流動(dòng)性、血液黏度、紅細(xì)胞膜滲透性等異常改變，出現(xiàn)中醫(yī)理論上“痰瘀致病”的病理變化，進(jìn)而誘發(fā)中風(fēng)[16-17]。在本研究中，ISPBS模型大鼠的血脂和血液流變學(xué)指標(biāo)異常，符合痰瘀互結(jié)證的病理特征;豬牙皂皂苷能降低模型大鼠在各切變率下的全血黏度、紅細(xì)胞聚集指數(shù)、卡松黏度以及血清中TG、TC、LDL-C水平，升高血清中HDL-C水平。這提示豬牙皂皂苷具有改善ISPBS模型大鼠血液流變學(xué)、調(diào)節(jié)其血脂代謝的作用。

腦中風(fēng)患者的腦損傷是一個(gè)快速級(jí)聯(lián)反應(yīng)，包括炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激、凋亡基因激活、細(xì)胞內(nèi)鈣離子超載、興奮性氨基酸毒性增加等[18]。炎癥反應(yīng)是腦缺血再灌注后繼發(fā)性損傷的重要誘因和發(fā)病機(jī)制[19-20]。腦缺血發(fā)生后會(huì)引起炎癥細(xì)胞活化和TNF-α、IL-1β等促炎因子分泌，進(jìn)一步加重炎癥反應(yīng)和神經(jīng)細(xì)胞損傷[21]。IL-10作為一種多功能炎癥負(fù)調(diào)控因子，可抑制炎癥反應(yīng)的擴(kuò)散，能一定程度保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞免受傷害，具有神經(jīng)保護(hù)作用[22]。本研究結(jié)果顯示，豬牙皂皂苷能降低ISPBS模型大鼠血清中TNF-α、IL-1β水平，升高血清中IL-10水平。這提示豬牙皂皂苷可以通過(guò)抑制IL-1β、TNF-α分泌和促進(jìn)IL-10釋放，進(jìn)而起到抗炎的作用。

氧化應(yīng)激是腦缺血再灌注后繼發(fā)性損傷的主要發(fā)病機(jī)制，也是該領(lǐng)域研究熱點(diǎn)之一[23-24]。在腦缺血的不同時(shí)期，NO以不同的方式改善腦組織損傷及神經(jīng)細(xì)胞的凋亡[25]。腦缺血發(fā)生后，缺血區(qū)域產(chǎn)生大量自由基，自由基攻擊細(xì)胞膜引起脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)，從而產(chǎn)生大量代謝產(chǎn)物（如MDA）。因此，測(cè)定腦組織中MDA含量可間接反映腦組織損傷程度[26]。SOD是重要的過(guò)氧化物分解酶，可有效清除氧自由基，從而抑制腦組織的過(guò)氧化反應(yīng)，保護(hù)腦組織[25]。本研究結(jié)果顯示，豬牙皂皂苷能降低ISPBS模型大鼠腦組織中MDA、NO含量，升高其腦組織中SOD活性。這提示豬牙皂皂苷可通過(guò)抑制MDA、NO生成和促進(jìn)SOD產(chǎn)生，從而減少過(guò)氧化反應(yīng)引發(fā)的腦組織損傷。

在哺乳動(dòng)物體內(nèi)發(fā)現(xiàn)的14種caspase中，有8種被認(rèn)為參與了細(xì)胞的凋亡過(guò)程，其中caspase-3被認(rèn)為在凋亡過(guò)程中占主導(dǎo)地位，是最關(guān)鍵的凋亡蛋白酶[27]。Bcl-2和Bax蛋白是具有調(diào)控細(xì)胞凋亡作用的一對(duì)重要的內(nèi)源性蛋白，Bax作為一種轉(zhuǎn)錄因子參與誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的基因轉(zhuǎn)錄過(guò)程，Bcl-2則可抑制Bax的作用，二者共同決定細(xì)胞的生存情況[28]。這提示豬牙皂皂苷能下調(diào)ISPBS模型大鼠腦組織中Bax、caspase-3蛋白表達(dá)并上調(diào)Bcl-2蛋白表達(dá)。上述結(jié)果提示，豬牙皂皂苷可以抑制神經(jīng)元凋亡從而改善腦組織損傷。

5 結(jié)語(yǔ)

豬牙皂皂苷對(duì)ISPBS模型大鼠具有一定的保護(hù)作用，其機(jī)制可能與減少氧化損傷、減少促炎介質(zhì)的產(chǎn)生和抑制神經(jīng)元凋亡有關(guān)。但是，本研究?jī)H初步探討了豬牙皂皂苷抗ISPBS的作用及可能機(jī)制，其更多的作用機(jī)制以及具體是哪種成分起作用等問(wèn)題均需要進(jìn)一步深入研究。

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（收稿日期：2021-10-26 修回日期：2022-04-02）

（編輯：林 靜）