中藥微生態(tài)制劑對(duì)奶牛子宮內(nèi)膜炎乳汁相關(guān)指標(biāo)的影響

程 磊，郭 慶

（1.河南省開(kāi)封市畜產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)測(cè)檢驗(yàn)中心，河南開(kāi)封 475000；2.安徽科寶生物工程有限公司，安徽淮北 235000）

隨著生活水平的提高，人們對(duì)牛奶的需求量與日俱增，這促進(jìn)了我國(guó)奶牛事業(yè)的不斷發(fā)展壯大。奶牛子宮內(nèi)膜炎是影響奶牛業(yè)發(fā)展和經(jīng)濟(jì)效益的重要疾病之一，其原因主要是奶牛生產(chǎn)后子宮未完全修復(fù)，自身抵抗力差，使病原體進(jìn)入子宮內(nèi)繁殖增長(zhǎng)，引起子宮內(nèi)膜淺表的炎癥。該病主要有全身性的治療和針對(duì)子宮局部抗感染的治療，然而在治療過(guò)程中由于抗生素的濫用，造成奶牛機(jī)體產(chǎn)生抗藥性和抗生素殘留，使養(yǎng)殖戶遭受巨大經(jīng)濟(jì)損失。近年來(lái)用中藥治療子宮內(nèi)膜炎的研究越來(lái)越多，并且己有研究表明中草藥復(fù)方制劑、灌注劑和中草藥提取物注射劑對(duì)子宮內(nèi)膜炎具有良好的防治效果。目前，亦有微生態(tài)制劑治療奶牛子宮內(nèi)膜炎的報(bào)道，但微生態(tài)制劑中均沒(méi)有中藥成分，都是單純的采用益生菌制成微生態(tài)制劑。本實(shí)驗(yàn)以中獸醫(yī)理論為基礎(chǔ)，旨在篩選出對(duì)奶牛子宮內(nèi)膜炎有效的中藥，科學(xué)組方并提取有效成份，接種益生菌發(fā)酵，制成中藥微生態(tài)制劑直接給奶牛飲用，通過(guò)測(cè)定用藥前后乳汁中的體細(xì)胞數(shù)、電導(dǎo)率、乳酸脫氫酶（LDH）、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）和白蛋白（ALB）相關(guān)指標(biāo)，以評(píng)價(jià)其對(duì)奶牛子宮內(nèi)膜炎的治療效果。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 中藥與試劑 益母草、紅花、桃仁、金銀花、白頭翁、紫錐菊、絞股藍(lán)、黃芪、甘草購(gòu)于開(kāi)封協(xié)和醫(yī)藥連鎖店；CMT 診斷液購(gòu)于西安麥得法藥業(yè)有限公司；乳酸桿菌、紅茶菌和酵母菌購(gòu)于徐州市獻(xiàn)華生物科技有限公司；LDH、ALT 和ALB 試劑盒均購(gòu)于上海士鋒生物科技有限公司；乙醇食品級(jí)，購(gòu)于安徽安特食品股份有限公司；葡萄糖食品級(jí)，購(gòu)于西王藥業(yè)有限公司。

1.1.2 主要儀器 SZC-A 恒溫磁力攪拌器（鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司）、R-1005 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司）、DL-360B 超聲波清洗器（上海之信儀器有限公司）、CONscan40 型數(shù)顯電導(dǎo)率儀（上海理達(dá)儀器廠）、邁瑞B(yǎng)A-90 半自動(dòng)生化分析儀（咸陽(yáng)銘海醫(yī)療器械有限公司）、高速冷凍離心機(jī)（鹽城市凱特實(shí)驗(yàn)儀器有限公司）、YC-300L 醫(yī)用冷藏箱（中科美菱低溫科技有限公司）、PHS-3E 型精密pH 計(jì)（上海儀電科學(xué)儀器有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 中藥微生態(tài)制劑的制備 將益母草、紅花、桃仁、金銀花、白頭翁、紫錐菊、絞股藍(lán)、黃芪、甘草等按重量比15:15:15:13:13:12:10:8:4 精確稱取，超微粉碎，加10 倍量（中藥重量）的80% 乙醇浸泡30 min 后超聲15 min，再加熱回流2 h，降至常溫，用布氏漏斗真空抽濾，收集藥液。藥渣加8 倍量60% 乙醇，加熱回流提取1 h，降至常溫，用布氏漏斗真空抽濾，合并2次藥液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)回收乙醇至無(wú)醇味，向濃縮液中加純化水至每毫升含有0.5 g 中藥。以1 000 g 濃縮液加50 g的葡萄糖加熱煮沸5 min，降至常溫轉(zhuǎn)無(wú)菌室內(nèi)接種乳酸桿菌、紅茶菌和酵母30 g，37℃發(fā)酵72 h，即得中藥微生態(tài)制劑，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 乳汁中體細(xì)胞數(shù)和電導(dǎo)率的測(cè)定 參照參考文獻(xiàn)中的方法檢測(cè)體細(xì)胞數(shù)，用CONscan40 型數(shù)顯電導(dǎo)率儀測(cè)定乳汁的電導(dǎo)率。

1.2.3 乳汁中pH 的測(cè)定 采集乳樣到實(shí)驗(yàn)室，按照說(shuō)明書(shū)操作PHS-3E 型精密pH 計(jì)，先開(kāi)機(jī)預(yù)熱30 min，校正后，再測(cè)定乳汁pH。

1.2.4 乳清中LDH、ALT 和ALB 含量的測(cè)定 將3 mL乳汁加入5 mL 離心管內(nèi)，3 000 r/min 離心10 min，除去乳脂，然后12 000 r/min 離心15 min，取上清液4℃保存，備用。采用邁瑞B(yǎng)A-90 半自動(dòng)生化分析儀測(cè)定乳清中LDH、ALT 和ALB 含量，按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行測(cè)定。

1.2.5 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的分組與采樣 選取安徽淮北某奶牛場(chǎng)患有子宮內(nèi)膜炎的奶牛36 頭，隨機(jī)分成2 組，中藥微生態(tài)制劑治療組（I）30 頭和陽(yáng)性對(duì)照組（II）6 頭，另選取胎次、年齡、泌乳月相近、身體狀況良好的陰性健康奶牛10 頭為陰性對(duì)照組（III）。治療組將中藥微生態(tài)制劑稀釋5 倍，讓奶牛自由飲用，連續(xù)用藥7 d，陽(yáng)性對(duì)照組采用抗生素治療，陰性對(duì)照組將中藥微生態(tài)制劑稀釋10 倍，讓奶牛自由飲用；采取乳樣進(jìn)行分析，嚴(yán)格消毒，棄去前三把乳液，同時(shí)比較用藥第0 天和用藥后第7 天的各組乳汁指標(biāo)的變化，并統(tǒng)計(jì)泌乳量。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì) 應(yīng)用SPSS 18.0 統(tǒng)計(jì)軟件，對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。數(shù)據(jù)用“平均值± 標(biāo)準(zhǔn)差”表示，＜0.05表示差異顯著，＜0.01 表示差異極顯著。

2 結(jié)果

2.1 中藥微生態(tài)劑對(duì)奶牛子宮內(nèi)膜炎乳汁中體細(xì)胞數(shù)和電導(dǎo)率的影響 由表1 可知，中藥微生態(tài)制劑治療前，I、II 組奶牛乳汁中的體細(xì)胞數(shù)、電導(dǎo)率與III 組相比差異極顯著。通過(guò)中藥微生態(tài)制劑治療7 d 后，I 組奶牛乳汁中的體細(xì)胞數(shù)、電導(dǎo)率與II 組相比差異極顯著，與III 組相比差異不顯著；II 組奶牛乳汁中的體細(xì)胞數(shù)、電導(dǎo)率與III 組相比差異極顯著。

表1 中藥微生態(tài)制劑對(duì)乳汁中體細(xì)胞數(shù)和電導(dǎo)率的影響

2.2 中藥微生態(tài)劑對(duì)奶牛子宮內(nèi)膜炎乳汁pH 值和泌乳量的影響 由表2 可知，在治療前，I、II 組奶牛乳汁pH 和泌乳量與III 組相比差異顯著。通過(guò)中藥微生態(tài)制劑治療7 d 后，I 組奶牛乳汁的pH 和泌乳量與II 組相比差異顯著，與III 組相比差異不顯著；II 組奶牛乳汁的pH 值和泌乳量與III 組相比差異顯著；III 組經(jīng)過(guò)7 d的自由飲用中藥微生態(tài)制劑后泌乳量增加了4.36%，差異不顯著。

表2 中藥微生態(tài)制劑對(duì)乳汁pH 值和泌乳量的影響

2.3 中藥微生態(tài)制劑對(duì)奶牛子宮內(nèi)膜炎患牛乳清中LDH、ALT 和ALB 含量的影響 由表3 可知，在治療前，I、II 組奶牛乳清中LDH、ALT 和ALB 含量與III組相比差異極顯著。通過(guò)中藥微生態(tài)制劑治療7 d 后，I 組奶牛乳清中ALT、LDH、ALB 與II 組相比差異顯著，與III 組相比差異不顯著；II 組奶牛乳清中的ALB、LDH、ALT 與III 組相比差異極顯著。

表3 中藥微生態(tài)制劑對(duì)子宮內(nèi)膜炎患牛乳清中LDH、ALT、ALB 含量的影響

3 討 論

中藥微生態(tài)制劑配方中，益母草、紅花、金銀花、白頭翁等均有活血化瘀、清熱解毒的功能，黃芪、甘草等均能增強(qiáng)機(jī)體免疫力。乳酸菌是良好的免疫激活劑，能夠增強(qiáng)奶牛免疫功能，激活巨噬細(xì)胞活性，提高奶牛抗體水平和免疫球蛋白水平，提高抗病力，有效預(yù)防病原體的感染，降低子宮內(nèi)膜炎發(fā)病率。本試驗(yàn)結(jié)果表明：對(duì)患有奶牛子宮內(nèi)膜炎的奶牛，經(jīng)中藥微生態(tài)制劑治療，乳清中的LDH、ALT 和ALB 含量達(dá)到正常的水平，與陰性對(duì)照組相當(dāng)。這為臨床應(yīng)用提供了實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，其具體作用機(jī)制有待進(jìn)一步探討。

根據(jù)我國(guó)奶牛隱性乳房炎快速診斷技術(shù)農(nóng)業(yè)標(biāo)準(zhǔn)（NY/T2692-2015）的規(guī)定，健康奶牛乳汁中體細(xì)胞數(shù)應(yīng)低于50 萬(wàn)個(gè)/mL。健康泌乳牛乳腺中體細(xì)胞數(shù)很少，機(jī)體發(fā)生炎癥時(shí)，大量的中性粒細(xì)胞及淋巴細(xì)胞從血液中向乳腺遷移，導(dǎo)致上皮細(xì)胞的脫落，致使乳汁中體細(xì)胞數(shù)量異常升高。本試驗(yàn)結(jié)果表明，患有子宮內(nèi)膜炎的奶牛連續(xù)7 d 自由飲用中藥微生態(tài)制劑后，乳汁體細(xì)胞數(shù)由161.12 萬(wàn)個(gè)/mL 降到42.31 萬(wàn)個(gè)/mL，說(shuō)明中藥微生態(tài)制劑對(duì)治療奶牛子宮內(nèi)膜炎有明顯效果，而陽(yáng)性對(duì)照組變化不大，陰性對(duì)照組體細(xì)胞數(shù)下降，說(shuō)明中藥微生態(tài)制劑對(duì)奶牛子宮內(nèi)膜炎也具有較好的預(yù)防作用，這與周鍵報(bào)道的結(jié)果一致。提示中藥微生態(tài)制劑防治奶牛子宮內(nèi)膜炎的作用，可能是益生菌和腸道菌群建立共生，促進(jìn)營(yíng)養(yǎng)的吸收，增強(qiáng)免疫力，也可能是中藥中的有效成分和活性小肽等能夠促進(jìn)胎衣排出和子宮修復(fù)，降低有害菌群的滋生等原因所致，但其作用機(jī)理待深入研究。

本研究針對(duì)當(dāng)?shù)啬膛?chǎng)的試驗(yàn)，未能擴(kuò)大到其他地方的奶牛場(chǎng)進(jìn)行大群試驗(yàn)的驗(yàn)證，且本試驗(yàn)所分離的致病菌主要是金黃色葡萄球菌和大腸桿菌，其他致病菌的試驗(yàn)待進(jìn)一步驗(yàn)證。后期擬開(kāi)展中藥微生態(tài)制劑對(duì)致病菌的機(jī)理方面研究。

4 結(jié) 論

本研究發(fā)現(xiàn)，將中藥提取有效成分和益生菌發(fā)酵制備的中藥微生態(tài)制劑應(yīng)用于奶牛子宮內(nèi)膜炎的治療，經(jīng)過(guò)7 d 的治療能夠使乳汁中的體細(xì)胞數(shù)、LDH、ALT 和ALB 含量降至正常值。