五倍子單寧酸對(duì)1～21 日齡黃羽肉雞生長(zhǎng)性能、免疫及抗氧化功能的影響

童玉鑫，吳淑琴，李順路，曾興有，郭思言，郭娉婷*，王長(zhǎng)康*

（1.福建農(nóng)林大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院（蜂學(xué)學(xué)院），福建福州 350002；2.福建省華龍集團(tuán)飼料有限公司，福建福州 350003）

自2020 年7 月1 日起，我國(guó)已全面禁止在畜禽生產(chǎn)中添加促生長(zhǎng)類藥物飼料添加劑。因此，如何通過其他途徑來有效提高動(dòng)物生產(chǎn)性能、增強(qiáng)畜禽免疫力、抵御病原入侵，進(jìn)而增加養(yǎng)殖效益并促進(jìn)我國(guó)畜牧業(yè)的可持續(xù)發(fā)展，已成為畜禽養(yǎng)殖業(yè)共同面臨的難題。五倍子為倍蚜類昆蟲在漆樹科植物鹽膚木、青麩楊或紅麩木上形成的蟲癭，是我國(guó)特有的傳統(tǒng)中藥。水解單寧酸為五倍子的主要功能成分，具有顯著的收斂效果以及抗氧化、抗炎癥和改善腸道微生態(tài)環(huán)境的作用。近年來，國(guó)內(nèi)外諸多研究發(fā)現(xiàn)，在家禽不同生長(zhǎng)階段飼糧中添加一定劑量的水解單寧酸，可有效提高家禽的生產(chǎn)性能，改善其健康狀況。但HGT 在家禽飼糧中添加的最適劑量及其對(duì)家禽免疫功能和抗氧化功能的促進(jìn)作用機(jī)制還有待探明。因此，本試驗(yàn)旨在研究日糧中添加HGT對(duì)黃羽肉雞生長(zhǎng)前期的生長(zhǎng)性能、免疫以及抗氧化功能的影響，為單寧酸作為家禽飼料添加劑提供理論參考和技術(shù)支持。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料 HGT 由福建豐久生物科技有限公司提供（水解單寧酸含量為50%）。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物和試驗(yàn)設(shè)計(jì) 采用單因子完全隨機(jī)試驗(yàn)設(shè)計(jì)，選用288 只1 日齡健康、體重（34.10±0.08 ）g 的黃羽肉雞，隨機(jī)分成4 個(gè)組，每組6 個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)12 只。對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)飼糧，試驗(yàn)組飼糧在基礎(chǔ)飼糧中分別添加150、300、450 mg/kg HGT，現(xiàn)配現(xiàn)用，試驗(yàn)周期為21 d。

1.3 試驗(yàn)飼糧 玉米-豆粕型基礎(chǔ)飼糧根據(jù)《中國(guó)雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)》（NY/T 33-2004）配制，試驗(yàn)周期為21 d。基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)成分見表1。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成和營(yíng)養(yǎng)成分（風(fēng)干基礎(chǔ)）

1.4 飼養(yǎng)管理 于福建農(nóng)林大學(xué)家禽試驗(yàn)站進(jìn)行動(dòng)物飼養(yǎng)試驗(yàn)，采用籠養(yǎng)方式。雛雞送進(jìn)雞舍的前一天將雞舍溫度控制在35℃左右，此后每周溫度下降 2～3℃，降至22℃后溫度保持恒定。每天光照23 h，自然通風(fēng)，自由采食以及飲水。按照黃羽肉雞常規(guī)免疫程序免疫，同時(shí)每日觀察雞群健康與精神狀況。

1.5 測(cè)定指標(biāo)和方法

1.5.1 生長(zhǎng)性能 在試驗(yàn)第1 天和第21 天，各組以重復(fù)為單位稱重并記錄體重，每天記錄采食量，計(jì)算平均日增重、平均日采食量和耗料增重比。

1.5.2 免疫器官指數(shù) 試驗(yàn)第21 天，各組以重復(fù)為單位隨機(jī)選取2 只體質(zhì)健康、接近該重復(fù)平均體重的黃羽肉雞進(jìn)行屠宰，宰前禁食12 h，屠宰時(shí)稱取活雞重量，并取下胸腺、脾臟和法氏囊，稱取重量，計(jì)算免疫器官指數(shù)：

脾臟指數(shù)=脾臟重（g）÷活體重（g）×100%

法氏囊指數(shù)=法氏囊重（g）÷活體重（g）×100%

胸腺指數(shù)=胸腺重（g）÷活體重（g）×100%

1.5.3 血清免疫球蛋白與細(xì)胞因子 肉雞宰前進(jìn)行翅靜脈采血，血樣充分靜置后，3 000 r/min 離心10 min，收集上層血清并保存于-20℃待測(cè)。通過酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)測(cè)定血清中干擾素（IFN-）、白細(xì)胞介素1（IL-1）、白細(xì)胞介素10（IL-10）、白細(xì)胞介素6（IL-6）、白細(xì)胞介素4（IL-4）、免疫球蛋白A（IgA）和血清免疫球蛋白M（IgM）含量，按照試劑盒（上海酶聯(lián)生物科技有限公司）說明書的步驟進(jìn)行測(cè)定。

1.5.4 肝臟抗氧化指標(biāo) 肉雞宰后迅速將其肝臟分離，取適量肝臟樣品到離心管中，保存于-80℃待測(cè)。通過酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)測(cè)定肝臟總抗氧化能力（T-AOC）活性以及谷胱甘肽（GSH）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）、超氧化歧化酶（SOD）、過氧化氫酶（CAT）和丙二醛（MDA)含量。按照試劑盒（上海酶聯(lián)生物科技有限公司）說明書的步驟進(jìn)行測(cè)定。

1.6 統(tǒng)計(jì)分析 數(shù)據(jù)采用SPSS 25.0 進(jìn)行單因素方差分析，并采用Duncan's 進(jìn)行多重比較，同時(shí)進(jìn)行線性和二次曲線分析，＜0.05 為差異顯著，0.05 ≤＜0.10 為有差異顯著趨勢(shì)。

2 結(jié)果

2.1 HGT 對(duì)1～21 日齡黃羽肉雞生長(zhǎng)性能的影響 由表2 可知，飼糧中添加150 mg/kg HGT 對(duì)黃羽肉雞的平均日采食和平均日增重?zé)o顯著影響，但可顯著降低耗料增重比；添加300、450 mg/kg HGT 對(duì)21 日齡黃羽肉雞生長(zhǎng)性能無顯著影響（＜0.05）。

表2 HGT 對(duì)1～21 日齡黃羽肉雞生長(zhǎng)性能的影響

2.2 HGT 對(duì)21 日齡黃羽肉雞免疫器官指數(shù)的影響 由表3 可知，飼糧中添加不同劑量的HGT 對(duì)21 日齡黃羽肉雞的脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)及法氏囊指數(shù)均無顯著影響。

表3 HGT 對(duì)21 日齡黃羽肉雞免疫器官指數(shù)的影響 %

2.3 HGT 對(duì)21 日齡黃羽肉雞血清免疫球蛋白及細(xì)胞因子的影響 由表4 可知，添加HGT 可提高血清中IgM含量，且其含量隨HGT 添加水平的增加呈線性和二次曲線升高（＜0.05），肉雞血清中IFN-含量隨飼糧HGT 添加水平的增加呈二次曲線降低趨勢(shì)（=0.078），但飼糧中添加HGT 對(duì)血清中IL-1、IL-10、IL-4、IL-6 和IgA 含量均無顯著影響。

表4 HGT 對(duì)21 日齡黃羽肉雞免疫相關(guān)因子的影響

2.4 HGT 對(duì)21 日齡黃羽肉雞抗氧化指標(biāo)的影響 由表5 可知，肝臟中GSH-Px 含量隨飼糧HGT 添加水平的增加呈線性降低趨勢(shì)（=0.096），但飼糧中添加HGT對(duì)肝臟SOD、T-AOC、GSH、CAT 和MDA 含量均無顯著影響。

表5 HGT 對(duì)21 日齡黃羽肉雞肝臟抗氧化功能的影響

3 討 論

3.1 飼糧中添加HGT 對(duì)21 日齡黃羽肉雞生長(zhǎng)性能的影響傳統(tǒng)上，單寧被認(rèn)為是單胃動(dòng)物的“抗?fàn)I養(yǎng)因子”，對(duì)采食量、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化和生長(zhǎng)性能都有負(fù)面作用。但近期研究表明，飼糧中添加適量的HGT 可提高飼糧適口性并增強(qiáng)腸道健康，從而提高家禽生產(chǎn)性能。Cengiz等研究發(fā)現(xiàn)，在日糧中添加2 000 mg/kg HGT 可顯著降低肉雞飼養(yǎng)前期0～21 d 的耗料增重比，對(duì)0～42 d的平均日增重、日采食量以及耗料增重比均無顯著影響。Schiavone 等研究發(fā)現(xiàn)，在肉雞日糧中加入栗木單寧可顯著提高其平均日增重和平均日采食量，且添加2 000 mg/kg 效果最優(yōu)。另有報(bào)道指出，飼糧中添加400 mg/kg HGT 可顯著降低肉雞耗料增重比，從而起到提高飼料利用效率的作用。本試驗(yàn)結(jié)果也表明，飼糧中添加150 mg/kg HGT（含50 %水解單寧酸）可顯著降低黃羽肉雞生長(zhǎng)前期的耗料增重比。而HGT 可提高飼糧利用率可能是由于其收斂作用可降低腸道蠕動(dòng)，增加食糜在腸道內(nèi)的停留時(shí)間，從而促進(jìn)腸道對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收作用，但上述可能的作用機(jī)制仍需更多試驗(yàn)來對(duì)其進(jìn)行驗(yàn)證。

3.2 飼糧中添加HGT 對(duì)21 日齡黃羽肉雞免疫器官發(fā)育的影響 胸腺、脾臟和法氏囊是禽類重要的免疫器官，其臟器指數(shù)可在一定程度上反映機(jī)體生長(zhǎng)發(fā)育狀況和免疫功能強(qiáng)弱。胸腺和法氏囊是重要的中樞免疫器官，胸腺主要對(duì)T 淋巴細(xì)胞的發(fā)育和成熟起重要作用，其隨日齡的增加逐漸增大，且于青年期發(fā)育成熟，而后隨著生長(zhǎng)逐漸萎縮。而法氏囊則是B 淋巴細(xì)胞發(fā)育和成熟的重要場(chǎng)所；脾臟作為外周免疫器官，是成熟淋巴細(xì)胞定居、抗原呈遞以及誘發(fā)免疫應(yīng)答的重要場(chǎng)所。陳賽娟等研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加HGT 對(duì)獺兔脾臟指數(shù)與胸腺指數(shù)無顯著影響，但在數(shù)值上均有所升高。Brenes等研究也發(fā)現(xiàn)，在飼糧中添加葡萄籽單寧對(duì)肉雞免疫器官的發(fā)育無顯著影響。本試驗(yàn)結(jié)果也表明，飼糧中添加HGT 對(duì)21 日齡黃羽肉雞的脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)及法氏囊指數(shù)均無顯著影響。然而，從光雷等研究發(fā)現(xiàn)，在飼糧中添加橡椀單寧可顯著促進(jìn)42 日齡肉仔雞法氏囊的生長(zhǎng)，而對(duì)胸腺、脾臟無顯著影響。HGT 對(duì)家禽免疫器官發(fā)育的影響可能與HGT 的來源和濃度、動(dòng)物種類、日齡以及健康狀況等有關(guān)。因此，HGT 對(duì)家禽免疫器官發(fā)育的影響還有待進(jìn)一步研究。

3.3 飼糧中添加HGT 對(duì)21 日齡黃羽肉雞免疫相關(guān)因子分泌的影響 細(xì)胞因子在調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答中發(fā)揮著重要的作用。IL-1和IFN-是由多種免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞產(chǎn)生的促炎細(xì)胞因子。IL-10 是一種重要的抗炎因子，由T細(xì)胞分泌，并受免疫調(diào)節(jié)因子IL-4 調(diào)控，而IL-6 稱為B 細(xì)胞分化因子，可促進(jìn)免疫細(xì)胞發(fā)育，并具有炎癥識(shí)別和反應(yīng)能力。促炎因子（如IL-1和IFN-）可加劇炎癥反應(yīng)過程，而抗炎因子（如IL-10 等）則起到緩解和抑制炎癥的作用。在動(dòng)物遭受病原體等外界免疫應(yīng)激時(shí)，細(xì)胞因子對(duì)免疫應(yīng)答的響應(yīng)是促炎因子和抗炎因子之間的相互博弈，是一個(gè)復(fù)雜的動(dòng)態(tài)平衡過程。Matsumura 等研究發(fā)現(xiàn)，柿子單寧可顯著降低由于分枝桿菌感染的小鼠骨髓巨噬細(xì)胞（BMDMS）中過高的炎癥因子IL-1和腫瘤壞死因子-（TNF-）的mRNA 表達(dá)量，進(jìn)而有效緩解炎癥反應(yīng)。本試驗(yàn)結(jié)果也表明，21 日齡時(shí)，肉雞血清中的IFN-含量隨HGT劑量的增加呈二次曲線降低趨勢(shì)。而其他學(xué)者研究表明，在肉雞飼糧中添加500 mg/kg HGT，對(duì)脾臟中IL-1、IL-4 和IL-10 的mRNA 表達(dá)量無顯著影響，但會(huì)顯著增加IFN-的mRNA 表達(dá)量，從而提高了機(jī)體的免疫應(yīng)答。這可能由于HGT 具有刺激動(dòng)物免疫功能的作用，并與添加劑量密切相關(guān)。

免疫球蛋白可特異性結(jié)合抗原，并通過沉淀和吞噬作用將其清除。不同種類家畜的免疫球蛋白存在一定差異，家禽免疫球蛋白主要有IgA、IgM 和IgG。從光雷等研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加橡椀單寧對(duì)肉雞血清中IgA 和IgM 含量無顯著影響。但唐青松等研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加100 mg/kg 堅(jiān)木單寧可顯著提高肉雞血清IgA 和IgM 含量，從而提高機(jī)體免疫力和抗病力。解湧芳等研究表明，在飼糧中添加檸條單寧，綿羊血清中IgA、IgM 和IgG 含量均高于對(duì)照組。本研究結(jié)果也表明，HGT 可顯著提高21 日齡血清IgM 含量，以添加量300 mg/kg 為最適，但對(duì)血清lgA 含量無顯著影響。血清中免疫球蛋白水平的高低可在一定程度反映機(jī)體的免疫能力。綜合分析，HGT 可能在動(dòng)物正常生長(zhǎng)狀態(tài)下具有提高免疫功能的作用。

3.4 飼糧中添加HGT 對(duì)21 日齡黃羽肉雞抗氧化功能的影響 機(jī)體在正常情況下，自由基的產(chǎn)生和清除是動(dòng)態(tài)平衡狀態(tài)。但當(dāng)自由基在細(xì)胞和組織中不斷蓄積、無法消除時(shí)，這個(gè)平衡狀態(tài)就會(huì)被打破，從而造成氧化損傷。機(jī)體完整的抗氧化體系由酶促系統(tǒng)和非酶促系統(tǒng)構(gòu)成。非酶促系統(tǒng)主要包括維生素C、維生素E和GSH 等還原性物質(zhì)，其可直接與自由基發(fā)生氧化還原反應(yīng)，將其清除；酶促系統(tǒng)主要包括SOD、GSHPx 和CAT 等抗氧化酶，它們之間相互協(xié)調(diào)可將自由基分解為對(duì)機(jī)體無害的物質(zhì)。MDA 作為脂質(zhì)過氧化的終產(chǎn)物，可間接反映出組織的氧化損傷程度。T-AOC則是衡量抗氧化的綜合指標(biāo)。吳大偉等研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加HGT 對(duì)黃羽肉雞肝臟SOD、GSH-Px、CAT 活性及MDA 含量均無明顯影響，不能起到有效的抗氧化作用。本研究結(jié)果表明，飼糧中添加HGT 對(duì)黃羽肉雞肝臟T-AOC 活性及肝臟SOD、GSH、CAT、MDA 含量無顯著影響，但肝臟GSH-Px 含量呈線性降低趨勢(shì)。也有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)，在飼糧中添加葡萄籽單寧可顯著提高白羽肉雞肝臟中的GSH 含量，并降低肌肉中的MDA 含量，從而起到抗氧化的作用。上述研究結(jié)果的不同可能與不同肉雞品種對(duì)氧化應(yīng)激的抵抗調(diào)節(jié)能力不同以及HGT 的來源不同有關(guān)。

4 結(jié) 論

本研究結(jié)果表明，飼糧中添加150 mg/kg HGT 能夠顯著提高黃羽肉雞雞生長(zhǎng)前期的飼料利用效率，添加300 mg/kg HGT 可在一定程度上改善肉雞的免疫功能。