不同復(fù)合酶制劑對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能、血液和免疫指標(biāo)及腸道菌群的影響

楊 歡，劉 干，周洪彬，姜殿慧，劉道春，張愛(ài)忠，姜 寧*

（1.黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，黑龍江大慶 163319；2.大連成三畜牧有限公司，遼寧大連 116000；3.山東農(nóng)業(yè)廣播電視學(xué)校長(zhǎng)清區(qū)分校，山東濟(jì)南 250399）

通常幼齡禽類消化器官未發(fā)育完善，體內(nèi)分泌的內(nèi)源消化酶含量較少，不能完全降解飼料中抗?fàn)I養(yǎng)因子（如非淀粉多糖），導(dǎo)致飼料轉(zhuǎn)化率降低，進(jìn)而影響生產(chǎn)效率和機(jī)體發(fā)育。研究發(fā)現(xiàn)，飼料中添加外源酶制劑是一種重要輔助消化的方法，在降低抗?fàn)I養(yǎng)成分、解除飼料中植酸的抗?fàn)I養(yǎng)性、改善植酸磷的轉(zhuǎn)化水平、增加植物礦物質(zhì)和蛋白質(zhì)利用率而減少氮排放量、促進(jìn)動(dòng)物機(jī)體免疫力和內(nèi)源性酶的產(chǎn)生等多方面發(fā)揮作用。酶制劑研究中多以纖維素酶、植酸酶、蛋白酶和淀粉酶為主，這4 種單一酶進(jìn)行不同比例搭配使用效果如何需要進(jìn)一步驗(yàn)證。因此，本試驗(yàn)選用4 種酶制劑按照不同活性比例進(jìn)行搭配，添加于羅斯肉雞日糧中，探究復(fù)合酶制劑對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能、血液理化指標(biāo)、免疫指數(shù)及腸道內(nèi)部微生物菌群方面的作用，為復(fù)合酶制劑在家禽日常養(yǎng)殖過(guò)程中的使用提供理論支持。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料及試驗(yàn)設(shè)計(jì) 選擇單因素全部隨機(jī)方法，選取孵化后一天體質(zhì)正常的羅斯肉雞（齊齊哈爾市某肉雞孵化廠）390 只，隨機(jī)分成5 個(gè)組，每組6 個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)13 只雞，試驗(yàn)期6 周。對(duì)照組飼喂玉米-豆粕型基礎(chǔ)日糧（參照NRC94 版和2014 羅斯肉雞商品代營(yíng)養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)配制），酶制劑I、II、III、IV 組分別在基礎(chǔ)日糧上添加4 種不同酶活性占比的復(fù)合酶（大連成三畜牧業(yè)有限公司），添加量為0.2 g/kg，實(shí)測(cè)其主要酶組成及活性如表1 所示。設(shè)3 期日糧，基礎(chǔ)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)成分見(jiàn)表2。

表1 復(fù)合酶制劑成分及活性 U/kg

表2 基礎(chǔ)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)成分（風(fēng)干基礎(chǔ)）

1.2 飼養(yǎng)管理 肉雞飼養(yǎng)在3 層雞籠內(nèi)，給予網(wǎng)平面，每2 周為1 個(gè)階段，試驗(yàn)期可自由攝取食物和水。在1周齡時(shí)，通過(guò)鼻內(nèi)滴注方式進(jìn)行新城疫-傳支二聯(lián)苗免疫，在2 周和4 周齡時(shí)接種預(yù)防傳染性法氏囊病疫苗，在3 周齡時(shí)進(jìn)行新城疫-傳支二聯(lián)苗混合給水方法免疫，按照時(shí)間依次完成肉雞免疫接種程序。

1.3 測(cè)定指標(biāo)及方法

1.3.1 生長(zhǎng)性能 每周記錄投料量及剩料量，分別于試驗(yàn)第3 周和第6 周末逐只稱重試驗(yàn)雞，參照張萌萌的公式計(jì)算平均日采食量（ADFI）、平均日增重（ADG）和耗料增重比（F/G）。

1.3.2 血液生化指標(biāo) 試驗(yàn)期滿3 周和6 周時(shí)，絕食12 h后，按組抽取3 只接近平均體重的肉雞，翅下采血2 mL，3 500 r/min 離心10 min，將上清液吸入1.5 mL EP 管中低溫保存。用南京建成生物工程研究所試劑盒檢測(cè)血液生化指標(biāo)總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、尿酸（UA）、鈣（Ca）、磷（P）、血糖（GLU）等。

1.3.3 免疫器官指標(biāo) 將1.3.2 中雞采血后屠宰，活體重為停飼處理12 h 后肉雞的宰前重。宰后，依據(jù)《家禽生產(chǎn)性能名詞術(shù)語(yǔ)和度量統(tǒng)計(jì)方法》（NY/T823-2004）剝離取出肉雞體內(nèi)的肝臟、胸腺、脾臟和法氏囊等免疫器官進(jìn)行稱重。計(jì)算公式：

器官指數(shù)=（器官重量/活體重量）×100%

1.3.4 腸道菌群 雞宰殺后，迅速收集回腸和盲腸中段的內(nèi)容物，并在液氮中冷凍，并用青島海博生物技術(shù)有限公司的專性培養(yǎng)基（麥康凱、MRS、BLB）檢測(cè)大腸桿菌、乳酸桿菌和雙歧桿菌菌落的數(shù)量。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析 數(shù)據(jù)采用Excel 2007 完成預(yù)處理后，通過(guò)GraphPad Prism 8.0.2 軟件進(jìn)行單因素方差（One-Way ANOVA）分析，以＜0.05 為差異顯著的篩選條件通過(guò)Duncan's 法進(jìn)行多重分析。

2 結(jié)果

2.1 不同復(fù)合酶制劑對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能的影響 如圖1 所示，3 周齡時(shí)，酶制劑IV 組ADFI 高于其他各酶制劑組（＜0.05），與對(duì)照組無(wú)顯著差異；6 周齡時(shí)，酶制劑III、IV 組ADFI 高于對(duì)照組和II 組（＜0.05），與I 組無(wú)顯著差異。3 周齡時(shí)，酶制劑IV 組雞的ADG 高于I、II 組（＜0.05），與其余2 組無(wú)顯著差異；6 周齡時(shí)，酶制劑III、IV 組的ADG 高于對(duì)照組（＜0.05）。6 周齡時(shí)，酶制劑II、III 組F/G 均低于對(duì)照組（＜0.05），與其余2 組無(wú)顯著差異。

圖1 復(fù)合酶制劑對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能的影響

2.2 不同復(fù)合酶制劑對(duì)肉雞血液生化指標(biāo)的影響 3 周齡時(shí)，酶制劑IV 組血清TP 和ALB 含量高于對(duì)照組（＜0.05），與其余酶制劑組無(wú)顯著差異（圖2）；6 周齡時(shí)，III、IV 組血清ALB 含量高于其余各組（＜0.05）。3 周齡時(shí)，對(duì)照組血清UA 含量高于酶制劑組IV（＜0.05），與其余3 組無(wú)顯著差異；6 周齡時(shí)，IV 組雞血清UA 含量低于其余各組（＜0.05），其余4組間無(wú)顯著差異。3 周齡時(shí)，酶制劑IV 組血清Ca 含量均高于酶制劑II、III 組（＜0.05），均與其余2 組無(wú)顯著差異。3 周齡和6 周齡時(shí)，酶制劑IV 組血清P 和GLU 含量均高于其他各組（＜0.05），I 組GLU 含量最低。

圖2 復(fù)合酶制劑對(duì)肉雞血液指標(biāo)的影響

2.3 不同復(fù)合酶制劑對(duì)肉雞免疫器官指數(shù)的影響 3 周齡時(shí)，攝食IV 組日糧雞肝臟和胸腺指數(shù)只高于對(duì)照組（＜0.05），且其他各組間無(wú)顯著差異（圖3）；6 周齡時(shí)，各酶制劑組肝臟指數(shù)無(wú)顯著差異，胸腺指數(shù)變化與3 周齡相同（＜0.05）。3 周齡時(shí)，各酶制劑組法氏囊指數(shù)和脾臟指數(shù)差異不顯著；6 周齡時(shí)，各酶制劑組雞法氏囊指數(shù)和脾臟指數(shù)均高于對(duì)照組（＜0.05）。

圖3 復(fù)合酶制劑對(duì)肉雞免疫器官指數(shù)的影響

2.4 不同復(fù)合酶制劑對(duì)肉雞腸道菌群的影響 在回腸中，3 周齡和6 周齡時(shí)，各酶制劑組日糧雞大腸桿菌數(shù)均低于對(duì)照組（＜0.05），以酶制劑III、IV 組菌數(shù)較低（圖4）。3 周齡時(shí)，對(duì)照組雞乳酸桿菌數(shù)低于其他各組（＜0.05），IV 組與III 組雞菌數(shù)無(wú)顯著差異，但高于其他3 組（＜0.05）；6 周齡時(shí)對(duì)照組雞乳酸桿菌數(shù)最低（＜0.05），IV 組雞乳酸菌數(shù)最高（＜0.05），其他3 組間無(wú)差別。3 周齡時(shí)，對(duì)照組雞雙歧桿菌數(shù)低于其他各組（＜0.05），IV 組雞菌數(shù)高于I 組（＜0.05），與其余兩酶制劑組無(wú)差別；6 周齡時(shí)對(duì)照組雞雙歧桿菌數(shù)最低（＜0.05），各復(fù)合酶日糧組間無(wú)顯著差異。

圖4 復(fù)合酶制劑對(duì)肉雞腸道菌群的影響

在盲腸，3 周齡和6 周齡時(shí)，各酶制劑組大腸桿菌數(shù)均低于對(duì)照組（＜0.05），以酶制劑IV 組菌數(shù)最低（＜0.05）。3 周齡和6 周齡時(shí)，乳酸桿菌數(shù)變化情況同回腸。3 周齡時(shí)，對(duì)照組雞雙歧桿菌數(shù)低于其他各組（＜0.05），IV 組高高于其他組（＜0.05），其余3組間無(wú)顯著差異；6 周齡時(shí)，對(duì)照組雞雙歧桿菌數(shù)最低（＜0.05），IV 組較III 組菌量升高（＜0.05），但與酶制劑I、II 組間無(wú)顯著差異。

3 討 論

3.1 不同復(fù)合酶制劑對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能的影響 生長(zhǎng)性能可以直接反映出肉雞的營(yíng)養(yǎng)效果和復(fù)合酶制劑的作用效果。復(fù)合酶制劑可促進(jìn)肉仔雞內(nèi)源酶分泌及蛋白質(zhì)、植酸和葡聚糖等成分的降解，提高飼料利用率。Amerah 等研究表明，飼喂含-淀粉酶、蛋白酶和纖維素酶的復(fù)合酶可提高肉雞生長(zhǎng)性能。Cowieson 等研究表明，飼糧中添加淀粉酶和蛋白酶對(duì)肉雞的增重有促進(jìn)作用。Zhou 等報(bào)道，玉米-豆粕型日糧中添加酶可提高飼料轉(zhuǎn)化率；添加植酸酶可以提高ADG。本試驗(yàn)研究表明，添加酶制劑對(duì)肉雞ADFI 和ADG 有較好的改善，并且對(duì)肉雞ADG 的影響可持續(xù)整個(gè)試驗(yàn)期，以酶制劑IV 組為最佳。說(shuō)明肉雞在幼齡期補(bǔ)充酶制劑可以提高生長(zhǎng)性能，并且含有蛋白酶占比高的酶制劑對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能具有積極影響，但纖維素酶、植酸酶和淀粉酶并不是占比越多越好。

3.2 不同復(fù)合酶制劑對(duì)肉雞血液指標(biāo)的影響 血液生化指標(biāo)可以在一定程度上反映養(yǎng)分的吸收利用率，也是說(shuō)明肉雞各項(xiàng)機(jī)能的關(guān)鍵指標(biāo)。TP 由ALB 和球蛋白組成，可反映生物體的蛋白質(zhì)吸收以及與體液免疫的關(guān)系，它可以增強(qiáng)組織蛋白的沉積，從而促進(jìn)組織和器官的生長(zhǎng)。ALB 是血液膠體滲透壓的核心，是血液中低水溶性成分的循環(huán)載體，后者對(duì)肝臟內(nèi)部蛋白質(zhì)的分解吸收發(fā)揮至關(guān)重要的作用。TP 和ALB 能夠充分說(shuō)明試驗(yàn)肉雞體內(nèi)各種蛋白質(zhì)分解吸收的狀況，TP 與ALB 含量升高則表明機(jī)體內(nèi)蛋白質(zhì)合成量增加。本研究結(jié)果表明，酶制劑IV 組血清TP 和ALB 含量高，是因?yàn)槊钢苿㊣V 組中蛋白酶比例較高，蛋白酶能夠全面促進(jìn)飼料蛋白質(zhì)充分酶解吸收利用，減少了后腸道微生物發(fā)酵蛋白質(zhì)產(chǎn)氨量，這個(gè)結(jié)果與UA 結(jié)果相對(duì)應(yīng)。UA 含量可以直接反映體內(nèi)蛋白質(zhì)合成代謝狀態(tài)和蛋白質(zhì)利用效率，與飼喂日糧中所含的蛋白濃度和酶活性密切相關(guān)，酶制劑IV 組的UA 含量最低，則間接顯示該組雞在利用3 大有機(jī)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)上與蛋白質(zhì)比例有關(guān)，說(shuō)明復(fù)合酶中各組酶活性占比對(duì)日糧利用尤為重要。Law 等研究結(jié)果表明，日糧中添加占比高的蛋白酶制劑可有效降低UA 含量。周傳鳳等試驗(yàn)證明，植酸酶能夠消除植物性日糧中含有植酸所導(dǎo)致的阻斷各種礦物成分吸收，增加肉雞對(duì)于Ca、P 的利用率，具有高比例植酸酶的酶制劑IV 組可以更好地提高血清中的Ca、P 含量，本試驗(yàn)中血清的Ca、P 含量也證明了此效果，并與劉偉等研究結(jié)果一致。絕食代謝后GLU 主要受體內(nèi)儲(chǔ)備的脂肪和蛋白影響，體內(nèi)貯備的脂肪和蛋白受腸道淀粉酶、纖維素酶和蛋白酶的作用，酶制劑IV 中的3 種酶含量均呈高活性狀態(tài)，有助于提高GLU 濃度。張曉羊等的試驗(yàn)結(jié)果也表明加入淀粉酶可使GLU 上升。

3.3 不同復(fù)合酶制劑對(duì)肉雞免疫器官指數(shù)的影響 機(jī)體免疫水平可以通過(guò)觀察免疫器官的生長(zhǎng)狀態(tài)來(lái)判斷。肝臟和脾臟作為外周免疫器官參與調(diào)控家禽的體液免疫，具有分泌特異性免疫抗體和產(chǎn)生淋巴細(xì)胞的功能。法氏囊可以有效促進(jìn)血清抗體系統(tǒng)的細(xì)胞增殖，在家禽體液免疫中起到調(diào)節(jié)控制作用，被定義為中央免疫器官。而胸腺主要在細(xì)胞免疫中發(fā)揮調(diào)節(jié)作用。因此，肝臟、脾臟、法氏囊和胸腺指數(shù)可作為評(píng)價(jià)家禽免疫效能的依據(jù)。杜紅方等試驗(yàn)結(jié)果表明，日糧中添加酶制劑的肉雞法氏囊指數(shù)較未添加組雞有明顯提高，表明復(fù)合酶制劑可以提高肉雞的免疫力。曲浩杰等試驗(yàn)結(jié)果得出，法氏囊指數(shù)的變化與飼喂淀粉酶無(wú)關(guān)，但脾臟指數(shù)與淀粉酶有關(guān)。許金根等研究結(jié)果顯示，肉雞的免疫效果與日糧中纖維素的添加量多少無(wú)關(guān)。侯振平等通過(guò)研究指出，添加蛋白酶對(duì)其肝和脾這兩個(gè)臟器指標(biāo)沒(méi)有影響，這可能與單獨(dú)添加有關(guān)。本試驗(yàn)結(jié)果表明，添加4 種酶制劑均可提高雞法氏囊指數(shù)和脾臟指數(shù)，并且酶制劑IV 組對(duì)其他2 項(xiàng)免疫器官指數(shù)也有明顯提升。說(shuō)明復(fù)合酶制劑可以提高肉雞免疫能力，其原因可能與多種酶的協(xié)同使用和復(fù)合酶中各種單酶活性有關(guān)，但具體機(jī)制仍然需要深入探究。

3.4 不同復(fù)合酶制劑對(duì)肉雞腸道菌群的影響 腸道內(nèi)有益菌與致病菌的占比不均使肉雞常常出現(xiàn)結(jié)腸炎、雞白痢等疾病。益生菌則可以阻斷腸道當(dāng)中病原菌進(jìn)一步提升，進(jìn)而確保腸道菌群的穩(wěn)定，保證腸道健康發(fā)育。研究表明，纖維及其降解產(chǎn)物對(duì)腸道酸堿環(huán)境產(chǎn)生影響，進(jìn)而提高有益菌數(shù)量和抑制致病菌數(shù)量來(lái)調(diào)整腸道內(nèi)菌群比例。本研究結(jié)果表明，纖維素酶、淀粉酶和蛋白質(zhì)酶活性高的日糧組雞在3 周和6 周時(shí)均能減少大腸桿菌數(shù)量，促進(jìn)乳酸菌和雙歧桿菌的增殖，結(jié)果與Χie等和任文等研究結(jié)論相一致。因?yàn)樵趶?fù)合酶的影響下，可以水解飼料中抗?fàn)I養(yǎng)的組分，產(chǎn)生短鏈脂肪酸使腸道pH 發(fā)生變化，提高了腸道內(nèi)雙歧桿菌數(shù)量。但盧桂強(qiáng)等研究表明，添加復(fù)合酶制劑對(duì)回腸和盲腸的有益菌數(shù)量無(wú)明顯改善，與本研究中添加酶制劑導(dǎo)致的有益菌數(shù)增高的結(jié)果相反，可能因?yàn)槿占Z組成和酶制劑制作工藝及溫度控制所導(dǎo)致的內(nèi)部酶活性占比不同、飼養(yǎng)條件、個(gè)體差異等因素導(dǎo)致。因此，酶制劑作為飼料添加劑調(diào)控肉雞腸道微生物的 作用機(jī)制將是下一步研究的重點(diǎn)。

4 結(jié) 論

本試驗(yàn)結(jié)果表明，酶制劑IV 組對(duì)雞ADFI 和ADG有所提升，可較好改善雞血清TP、ALB、Ca、P、GLU 和UA 含量；添加復(fù)合酶制劑可提高法氏囊指數(shù)和脾臟指數(shù)，其中復(fù)合酶制劑IV 日糧對(duì)其他2 種免疫器官指數(shù)改善效果更好；整個(gè)試驗(yàn)期間，各酶制劑組均減少了回腸和盲腸中大腸桿菌數(shù)量，增加了乳酸桿菌和雙歧桿菌數(shù)量，以酶制劑IV 組蛋白酶1 157 U/kg、纖維素酶721 U/kg、植酸酶720 U/kg 和淀粉酶125 U/kg的酶活性組合作用效果最好。