急性腦梗死患者外周血中LncRNA RP11-147L13.8的表達(dá)水平及臨床意義

金麗霞, 劉 丹, 張廣煒, 馮佳佳

急性腦梗死是最常見的腦血管疾病之一，約占腦卒中的60%～70%[1]，具有急性起病、進(jìn)展較塊等特點(diǎn)。急性腦梗死的發(fā)生是由一系列在時間和空間上演變而形成的復(fù)雜的病理生理過程。目前，我們對于急性腦梗死發(fā)生的分子機(jī)制認(rèn)識較少，臨床上主要依靠影像學(xué)和血流動力學(xué)來評估病情的嚴(yán)重程度及預(yù)后[2～4]。近年來有研究發(fā)現(xiàn)LncRNA可參與腦梗死后腦缺血再灌注損傷及神經(jīng)功能損傷等過程[5]。LncRNA RP11-147L13.8是LncRNA RP11的家族成員之一，但現(xiàn)階段仍未有研究報道LncRNA RP11與急性腦梗死的發(fā)生存在相關(guān)性。基于此，本實(shí)驗(yàn)探索外周血LncRNA RP11-147L13.8與急性腦梗死的相關(guān)性，為預(yù)測急性腦梗死的發(fā)生提供潛在靶點(diǎn)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 隨機(jī)選擇2021年5月-2021年12月在我科住院的急性腦梗死患者50例(病例組)和非腦梗死患者50例(對照組)。納入標(biāo)準(zhǔn)：均符合1996年全國第四屆腦血管病學(xué)術(shù)會議修訂的腦梗死的診斷標(biāo)準(zhǔn);滿足CISS卒中分類標(biāo)準(zhǔn);CISS分型為動脈粥樣硬化性腦梗死，年齡≥18歲，發(fā)病時間≤7 d，第一次發(fā)病，且治療過程中無再發(fā)腦梗死。排除標(biāo)準(zhǔn)：既往曾有腦出血病史或CT顯示存在腦出血;有明顯的心、肝、腎功能不全及惡性腫瘤;存在心房顫動等嚴(yán)重心律失常;心源性栓塞所致的卒中患者。該實(shí)驗(yàn)已經(jīng)通過本院倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2 LncRNA RP11-147L13.8的測定 患者入院次日清晨空腹采集外周肘靜脈血4 ml，置入抗凝集管內(nèi)，放置-80 ℃冰箱待測。采用實(shí)時熒光定量PCR檢測患者外周血中LncRNA RP11-147L13.8的表達(dá)水平，采用2-△△CT法分析LncRNA RP11-147L13.8的相對表達(dá)量，對所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析。

2 結(jié) 果

2.1 腦梗死組與對照組的一般臨床特征資料比較 兩組一般臨床特征比較，結(jié)果顯示TC、TG、LDL-C、HDL-C和高脂血癥病史，無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),而性別、年齡、收縮壓、舒張壓、空腹血糖、高血壓病史和糖尿病史，有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)(見表1)。

表1 腦梗死組與對照組一般臨床特征資料比較

2.2 外周血LncRNA RP11-147L13.8在腦梗死組和對照組中表達(dá)水平的比較 結(jié)果顯示，腦梗死組患者外周血LncRNA RP11-147L13.8的表達(dá)水平(8.733±7.355)明顯高于對照組(4.026±4.405)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)(見圖1)。

圖1 外周血LncRNA RP11-147L13.8在腦梗死組和對照組中表達(dá)水平的比較

2.3 腦梗死組與對照組的臨床特征資料及外周血LncRNA RP11-147L13.8的相關(guān)性分析 急性腦梗死的發(fā)生與性別、年齡、收縮壓、舒張壓、空腹血糖、高血壓病史、糖尿病史和外周血LncRNA RP11-147L13.8表達(dá)水平呈正相關(guān)(P<0.05);而與TC、TG、LDL-C、HDL-C和高脂血癥病史無關(guān)(P>0.05)(見表2)。

表2 腦梗死組與對照組臨床特征及外周血LncRNA RP11-147L13.8的相關(guān)性分析

2.4 急性腦梗死發(fā)病危險因素的Logistic回歸分析 以急性腦梗死發(fā)病為因變量，以性別、年齡、收縮壓、舒張壓、空腹血糖、高血壓病史、糖尿病史和LncRNA RP11-147L13.8的表達(dá)水平為自變量，采用二元Logistic回歸分析法進(jìn)行分析，結(jié)果顯示：高血壓病史和LncRNA RP11-147L13.8是急性腦梗死發(fā)病的獨(dú)立危險因素，有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)(見表3)。

表3 急性腦梗死發(fā)病危險因素的Logistic回歸分析

2.5 外周血LncRNA RP11-147L13.8診斷急性腦梗死的ROC曲線分析 ROC曲線分析顯示，得到LncRNA RP11-147L13.8診斷急性腦梗死的曲線下面積為0.750(95%CI0.656～0.845，P<0.001),臨界值為0.4，敏感度為0.66，特異度為0.74。因此，LncRNA RP11-147L13.8的表達(dá)對急性腦梗死診斷具有一定的價值(見圖2)。

圖2 外周血LncRNA RP11-147L13.8的ROC曲線

3 討 論

急性腦梗死是指各種原因引起的腦供血動脈血流障礙造成的腦組織缺血缺氧性壞死。若血流障礙得不到及時的糾正，則會導(dǎo)致嚴(yán)重的神經(jīng)功能缺損以及一系列并發(fā)癥的發(fā)生。目前，臨床上缺乏可靠的生物標(biāo)記物用于急性腦梗死的早期診斷。故尋找與急性腦梗死發(fā)生相關(guān)的外周血標(biāo)記物尤為重要。

長鏈非編碼RNA是一組長度大于200 nt的RNA分子，缺乏編碼功能。大多數(shù)LncRNA被RNA聚合酶Ⅱ轉(zhuǎn)錄[6]。LncRNA可以調(diào)控基因的表達(dá)，與缺血性腦卒中等多種神經(jīng)系統(tǒng)疾病密切相關(guān)[7]。近年來有研究發(fā)現(xiàn)，LncRNA以穩(wěn)定性二級結(jié)構(gòu)作為游離核酸在人體外周血液中出現(xiàn)，其含量相對穩(wěn)定。然而LncRNA在疾病狀態(tài)下血液中的表達(dá)異常，有助于疾病的早期診斷和預(yù)后評估[8,9]。田春歐等[10]發(fā)現(xiàn)，患者外周血液中差異表達(dá)的LncRNA與急性腦梗死的發(fā)生具有一定的相關(guān)性。

本課題檢測了腦梗死組與對照組患者外周血中LncRNA RP11-147L13.8的表達(dá)情況，同時探討LncRNA RP11-147L13.8與腦梗死的相關(guān)性。結(jié)果顯示：腦梗死患者外周血中LncRNA RP11-147L13.8的表達(dá)水平明顯高于對照組，具有統(tǒng)計學(xué)差異 (P<0.01)。急性腦梗死的發(fā)生與外周血LncRNA RP11-147L13.8的表達(dá)水平呈正相關(guān)。Logistic回歸分析顯示，LncRNA RP11-147L13.8是急性腦梗死發(fā)生的獨(dú)立危險因素。ROC曲線分析顯示，LncRNA RP11-147L13.8診斷腦梗死的曲線下面積是0.750，由此LncRNA RP11-147L13.8對急性腦梗死的診斷具有一定的診斷價值。

性別、年齡、高血壓和糖尿病是急性腦梗死發(fā)生的危險因素[11]。我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果與大量回顧性研究結(jié)果一致[12]。本次研究首次提出了急性腦梗死患者外周血中LncRNA RP11-147L13.8的表達(dá)上調(diào)，可以對腦梗死患者的診斷提供一定的價值。因此，LncRNA RP11-147L13.8有望成為急性腦梗死患者外周血中的診斷指標(biāo)。

目前，缺乏LncRNA RP11-147L13.8與心腦血管疾病相關(guān)性的文獻(xiàn)。研究表明，LncRNA N_R 120420在腦梗死患者外周血中的表達(dá)水平明顯高于健康組,同時外周血中的LncRNA N_R 120420可以作為急性腦梗死發(fā)生的獨(dú)立危險因素[10]。Zhu等[13]研究發(fā)現(xiàn)，在腦梗死患者外周血白細(xì)胞中LncRNA MIAT的表達(dá)會上調(diào)，并與NIHSS評分，嚴(yán)重程度和梗死面積等相關(guān)。他們還發(fā)現(xiàn)LncRNA MIAT是腦梗死患者的獨(dú)立預(yù)后因素，與高表達(dá)LncRNA MIAT組相比，低表達(dá)LncRNA MIAT組預(yù)后更好，生存時間更長。因此，外周血白細(xì)胞中的LncRNA MIAT可作為急性腦梗死的一種新的診斷和預(yù)后標(biāo)志物。研究表明，腦梗死患者血漿中的LncRNA PITPNA-AS1通過微滴式數(shù)字PCR檢測，發(fā)現(xiàn)其表達(dá)水平高于對照組，LncRNA PITPNA-AS1有可能成為急性腦梗死的生物標(biāo)記物[14]。同時也在動物實(shí)驗(yàn)中驗(yàn)證了這種現(xiàn)象，Zhang等[15]人研究發(fā)現(xiàn)，建立小鼠腦梗死模型，采用實(shí)時熒光定量PCR 檢測小鼠模型中LncRNA SNHG14的表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)LncRNA SNHG14的表達(dá)上調(diào)，進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)敲除LncRNA SNHG14可通過miR-199b/AQP4軸抑制炎癥和氧化應(yīng)激，進(jìn)而減輕缺血性腦損傷。因此，我們認(rèn)為LncRNA RP11-147L13.8可能參與急性腦梗死的發(fā)生和發(fā)展，但值得注意的是LncRNA RP11-147L13.8在急性腦梗死中的確切機(jī)制仍未明確。

研究表示，腦梗死患者全血中LncRNA的表達(dá)會隨時間的變化而發(fā)生顯著改變[16]。本研究中腦梗死患者納入標(biāo)準(zhǔn)的發(fā)病時間要小于7 d，因此未進(jìn)行與腦梗死發(fā)病時間相關(guān)性探討。本課題的局限性在于納入樣本量較少，有關(guān)LncRNA RP11-147L13.8與心腦血管疾病相關(guān)的文獻(xiàn)較少，結(jié)果可能存在偶然性或錯誤性。因此，在今后的研究中需要加大樣本量來進(jìn)一步驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。綜上所述，LncRNA RP11-147L13.8與急性腦梗死具有一定的相關(guān)性，并有望成為診斷急性腦梗死的新靶點(diǎn)。但其具體的靶向機(jī)制和真正的臨床應(yīng)用還需進(jìn)一步探索和研究。