白細(xì)胞介素-4 通過上調(diào)蛋白質(zhì)精氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶1的表達(dá)水平引起對氧磷酶2的精氨酸甲基化修飾*

楊萬勇, 馬麗, 任家駿, 楊旭東△

1東莞市水鄉(xiāng)中心醫(yī)院檢驗(yàn)科(廣東東莞 523130); 2西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)部基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院生物化學(xué)與分子生物學(xué)系(陜西西安 710061)

支氣管哮喘是一種過敏性氣道炎癥性疾病，氣道炎癥進(jìn)而導(dǎo)致哮喘患者氣道高反應(yīng)性，引發(fā)氣道通氣障礙，哮喘長期反復(fù)發(fā)作會導(dǎo)致氣道重塑[1]。呼吸道上皮細(xì)胞是機(jī)體和外部環(huán)境之間的屏障，是機(jī)體抵抗病原微生物、有害氣體和過敏原侵害的第一道防線[2]。近來許多研究發(fā)現(xiàn)，上皮細(xì)胞在哮喘發(fā)病進(jìn)程中發(fā)揮了重要的作用，它可通過分泌多種細(xì)胞因子啟動并加強(qiáng)氣道炎癥，并導(dǎo)致氣道高反應(yīng)性[3]。蛋白質(zhì)精氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶1(PRMT1)是Ⅰ型的蛋白質(zhì)精氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶(PRMTs)家族的成員，它可以催化蛋白質(zhì)精氨酸殘基發(fā)生非對稱二甲基化修飾[4]，這是一種調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)功能的重要方式。根據(jù)我們課題組的前期實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，在卵清蛋白誘導(dǎo)的E3大鼠急性哮喘模型(AIPI)中，肺上皮PRMT1 的表達(dá)明顯升高，白細(xì)胞介素-4(IL-4)可以上調(diào)肺上皮細(xì)胞中PRMT1的表達(dá)水平。這些都提示PRMT1與哮喘氣道炎癥的發(fā)生密切相關(guān)[4]。但是在哮喘發(fā)病的進(jìn)程中，PRMT1是如何發(fā)揮作用的，它修飾的下游靶分子有哪些尚不清楚。為了闡明PRMT1在哮喘中的作用，2018年1月至2021年3月我們采用免疫沉淀的方法對肺上皮細(xì)胞中PRMT1修飾的靶蛋白進(jìn)行了篩選，并對篩選出的對氧磷酶-2(PON2)的甲基化修飾做了進(jìn)一步的驗(yàn)證。

1 材料與方法

1.1 材料 卵清白蛋白(OVA)(美國Sigma公司)、KAl(SO4)2·12H2O(美國Sigma公司)、小鼠IgE檢測試劑盒(上海西塘生物)、RevertAcid 第一鏈 cDNA合成試劑盒(Thermo Fisher Scientific, USA)、2×SYBR? Prime mix(Roche)、ECL 發(fā)光液(BIO-RAD)、重組人IL-4(易飛生物)、兔抗PRMT1 多克隆抗體(英國Abcam 公司)、兔抗PON 2 多克隆抗體(英國Abcam 公司)、兔抗不對稱精氨酸甲基化多克隆抗體(英國Abcam 公司)、兔同型IgG(英國Abcam 公司)、兔抗 β-actin 單克隆抗體(北京博奧森生物技術(shù)有限公司)、鼠抗GAPDH多克隆抗體(Santa)、MS023(MCE)、Protein A+G磁珠(碧云天生物技術(shù)有限公司)、銀染試劑盒(碧云天生物技術(shù)有限公司)。

本研究已獲西安交通大學(xué)倫理委員會審批(審批號為2017-693)。

1.2 篩選在IL-4刺激下發(fā)生精氨酸非對稱性二甲基化修飾的蛋白 A549 細(xì)胞購于上海中科院細(xì)胞庫，用含10% FBS的1640培養(yǎng)基，在37℃,5% CO2的環(huán)境下培養(yǎng)。把細(xì)胞種于10 cm的平皿，用50 ng/μL IL-4的刺激A549細(xì)胞24 h，用中等強(qiáng)度的RIPA細(xì)胞裂解液在冰上裂解細(xì)胞，提取總蛋白；對照組的細(xì)胞用PBS刺激24 h提取總蛋白。用BCA試劑盒測定樣品的濃度。

用Protein A+G磁珠吸附同型兔IgG后，與3 mg新鮮的蛋白樣品混合，去除非特異性結(jié)合的蛋白，分離上清溶液。隨后用Protein A+G磁珠吸附抗不對稱精氨酸甲基化多克隆抗體，與去除了非特異性結(jié)合蛋白后的蛋白樣品混合，在搖床上4℃孵育過夜。棄掉上清液，用PBS清洗磁珠。加入SDS-PAGE上樣緩沖液，并在95℃加熱5 min，以洗脫磁珠結(jié)合的蛋白和抗體。把洗脫的上清液保存在-80℃冰箱備用。

制作中型變性梯度聚丙烯酰胺凝膠，濃度梯度的范圍為5%～20%。把從磁珠上洗脫的蛋白在中型變性梯度聚丙烯酰胺凝膠上電泳。電泳結(jié)束后，用銀染法對凝膠進(jìn)行染色，顯示電泳的條帶。割取對照樣品泳道與IL-4刺激樣品泳道的差異性條帶。用胰酶進(jìn)行膠內(nèi)酶解20 h，隨后抽提酶解肽段進(jìn)行ESI質(zhì)譜鑒定。

1.3 PON2精氨酸甲基化修飾的水平的驗(yàn)證 把A549細(xì)胞接種到6孔板培養(yǎng)，分為2種不同的處理組：IL-4刺激組和對照組。用50 ng/μL IL-4的刺激24 h，對照孔用PBS刺激細(xì)胞。用RIPA裂解細(xì)胞，提取蛋白，用BCA法測定蛋白濃度。從對照樣品及IL-4處理樣品中各取400 μg，用免疫沉淀法檢測PON2的甲基化。具體過程如下：把抗PON2的抗體與蛋白樣品混合，在4℃緩慢搖動過夜，用兔IgG做同型對照；把孵育好的樣品與Protein A+G磁珠混勻，在室溫孵育1 h；用PBST洗滌磁珠3次后，用SDS電泳上樣緩沖液洗脫磁珠捕獲的蛋白，用抗精氨酸非對稱性二級甲基化修飾的抗體做Western blot，檢測PON2的甲基化修飾水平。

1.4 IL-4對PON2和PRMT1表達(dá)的影響 把A549細(xì)胞接種到6孔板培養(yǎng)，分析PON2和PRMT1表達(dá)對IL-4的濃度依賴性。分別用0、25、50、100、200 ng/mL的IL-4刺激細(xì)胞，刺激24 h后，用RIPA裂解細(xì)胞，提取蛋白。用BCA法測定蛋白濃度。用Western blot檢測PON2和PRMT1的表達(dá)水平，用GADPH做內(nèi)參。

并且用50 ng/mL的IL-4分別刺激細(xì)胞0、6、12、24、48 h，用RIPA裂解細(xì)胞，提取蛋白。用BCA法測定蛋白濃度。用Western blot檢測PON2和PRMT1的表達(dá)水平，用GADPH做內(nèi)參，分析PON2和PRMT1表達(dá)對IL-4的時(shí)間依賴性。

1.5 分析PON2與PRMT1的相互作用 把A549細(xì)胞接種到6孔板培養(yǎng)，分為2種不同的處理組：IL-4刺激組和對照組。用50 ng/μL IL-4的刺激24 h，對照孔用PBS刺激細(xì)胞。用RIPA裂解細(xì)胞，提取蛋白，用BCA法測定蛋白濃度。從對照樣品及IL-4處理樣品中各取400 μg，用免疫共沉淀法檢測PON2與PRMT1的相互作用。把抗PRMT1的抗體與蛋白樣品混合，在4℃緩慢搖動過夜，用兔IgG做同型對照；把孵育好的樣品與Protein A+G磁珠混勻，在室溫孵育1 h；用PBST洗滌磁珠3次后，用SDS電泳上樣緩沖液洗脫磁珠捕獲的蛋白，用抗PON2的抗體做western blotting，檢測沉淀下來的PON2的水平。

進(jìn)而用PRMT1抑制劑MS023處理細(xì)胞，檢測PON2的甲基化水平。把A549細(xì)胞接種到6孔板培養(yǎng)，分為3種不同的處理組：IL-4刺激組、對照組、IL-4+MS023組和MS023組。用50 ng/μL IL-4的刺激24 h，對照孔用PBS刺激細(xì)胞，MS023的終濃度為4.76 μmol/mL。用RIPA裂解細(xì)胞，提取蛋白，用BCA法測定蛋白濃度。從對照樣品及IL-4處理樣品中各取400 μg。用免疫沉淀法檢測PON2甲基化的水平，用抗精氨酸非對稱性二級甲基化修飾的抗體做western blotting，檢測PON2的甲基化修飾水平。具體方法同1.3。

1.6 急性哮喘模型的誘導(dǎo) 24只7～8周的雌性Balb/c小鼠，均購自西安交通大學(xué)動物實(shí)驗(yàn)中心。適應(yīng)1周，自由攝取水食，晝/夜12 h循環(huán)燈光。飼養(yǎng)環(huán)境溫度維持在(25±3)℃，相對濕度維持在(40±5)%。1周后隨機(jī)分為對照組和哮喘模型組。

在第0天，給哮喘模型組小鼠腹腔注射卵清蛋白-氫氧化鋁混懸液[0.1% OVA，5% Al(OH)3]0.1 mL進(jìn)行致敏；在第7天再次注射卵清蛋白-氫氧化鋁混懸液以加強(qiáng)免疫。給對照組小鼠腹腔注射等量PBS。在第14 天開始哮喘組小鼠用40μL 2.5 mg/mL OVA 溶液滴鼻，1次/d，連續(xù)7 d，對照組小鼠用PBS滴鼻。在第21天拔眼取血處死小鼠，分離血清備用。分離出完整的肺連同氣管，用1 mL PBS進(jìn)行肺泡灌洗，共灌洗3次，1 000 r/min離心10 min，分離肺泡灌洗液中的細(xì)胞，300 μL的PBS懸浮細(xì)胞。吸取30 μL細(xì)胞懸液涂到載玻片上制備肺泡灌洗液涂片，等涂片干燥后用甲醇固定細(xì)胞。分離出左肺第三葉，用4%多聚甲醛固后，在石蠟中包埋。剩余的肺組織用液氮速凍后保存到-80℃冰箱。

用吉姆薩染液對細(xì)胞涂片進(jìn)行染色，檢測肺泡灌洗液中嗜酸性粒細(xì)胞的水平。石蠟切片用HE染色，觀察肺組織的病理改變。用PON2抗體做免疫組化檢測肺組織中PON2表達(dá)的組織細(xì)胞類型。用ELISA法檢測小鼠血清中總IgE的水平。

用RIPA裂解肺組織，提取組織蛋白，用western blotting檢測肺組織中PON2和PRMT1的表達(dá)水平。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用Mann Whitney檢驗(yàn)分析進(jìn)行兩兩比較。采用One way ANOVA中的Newman-Keuls 多組檢驗(yàn)來進(jìn)行多組比較，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)意義。所有統(tǒng)計(jì)采用統(tǒng)計(jì)軟件 GraphPad Prism5完成。

2 結(jié)果

2.1 質(zhì)譜篩查結(jié)果顯示PON2精氨酸殘基可發(fā)生非對稱性二甲基化修飾 分別從IL-4刺激的A549細(xì)胞以及對照組細(xì)胞中提取蛋白質(zhì)，用免疫沉淀法捕獲其中發(fā)生了精氨酸殘基非對稱性二甲基化修飾的蛋白，并采用變性梯度聚丙烯酰胺膠來顯示甲基化水平發(fā)生改變的蛋白。經(jīng)銀染后顯示，在40 KD左右的位置，在IL-4處理組的泳道有2個(gè)差異明顯的條帶(圖1-A)。我們割取了這兩個(gè)差異比較明顯的蛋白條帶，進(jìn)行ESI質(zhì)譜鑒定。第一個(gè)膠條，蛋白的分子量范圍約為40 KD；第二個(gè)膠條蛋白的分子量范圍約為35 KD。第一個(gè)膠條的質(zhì)譜圖顯示有一個(gè)較強(qiáng)的質(zhì)譜峰(圖1-B)。對獲得多肽序列進(jìn)行評價(jià)，以Delta CN(≥0.1)和具備恰當(dāng)cross-correlation scores的序列為鑒定成功的序列，又從中選擇肽段數(shù)≥2的肽段來做搜庫。最終獲得159個(gè)候選蛋白。第二個(gè)膠條的質(zhì)譜圖也顯示有一個(gè)較強(qiáng)的質(zhì)譜峰(圖1-C)，搜庫后找到152個(gè)候選蛋白。

注：A：變性梯度聚丙烯酰胺電泳顯示抗甲基化抗體免疫性沉淀捕獲的蛋白；B：在45 KD處的差異性條帶的質(zhì)譜分析圖；C：在35 KD處的差異性條帶的質(zhì)譜分析圖

PON2為第一個(gè)膠條所篩選出的159個(gè)蛋白中之一。Polonikov等[5]在采用關(guān)聯(lián)分析及多因素維數(shù)降維分析等方法分析抗氧化酶的基因多態(tài)性與成人哮喘發(fā)病的相關(guān)性時(shí)，發(fā)現(xiàn)PON2可能是哮喘的易感基因。因此，我們選擇PON2作為進(jìn)一步研究的對象。

2.2 IL-4可以促進(jìn)PON2發(fā)生非對稱性二甲基化修飾 為了進(jìn)一步驗(yàn)證質(zhì)譜分析的結(jié)果，我們采用免疫沉淀的方法檢測了IL-4刺激的肺上皮細(xì)胞株A549中PON2的非對稱性二甲基化修飾水平。發(fā)現(xiàn)IL-4刺激可導(dǎo)致肺上皮細(xì)胞株中PON2的甲基化非對稱性二甲基化修飾水平升高(圖2)。

圖2 免疫沉淀顯示 IL-4上調(diào)A549細(xì)胞中PON2的甲基化水平

2.3 IL-4上調(diào)PRMT1的表達(dá)，但不改變PON2的表達(dá)水平 PRMT1是催化蛋白質(zhì)發(fā)生精氨酸殘基非對稱性甲基化的酶。為了進(jìn)一步闡明IL-4促進(jìn)PON2甲基化水平升高的機(jī)制，我們分析了不同的IL-4劑量，以及刺激不同的時(shí)間對PRMT1和PON2表達(dá)水平的影響。結(jié)果顯示，隨IL-4濃度的升高，PRMT1的蛋白水平不斷升高，但是PON2的蛋白水平不會隨IL-4濃度的升高而改變(圖3-A)；在不同濃度IL-4刺激下PRMT1和PON2的相對表達(dá)見表1。同時(shí)在IL-4刺激12 h時(shí)，PRMT1的蛋白水平開始顯著升高，隨著IL-4刺激時(shí)間的延長，PRMT1的水平會繼續(xù)升高；隨著IL-4刺激時(shí)間從0～48 h，PON2的蛋白水平均無明顯的變化(圖3-B)；在IL-4刺激不同時(shí)間后PRMT1和PON2的相對表達(dá)見表2。由此可以得出結(jié)論，IL-4對PRMT1的表達(dá)水平的影響呈時(shí)間依賴性和劑量依賴性，但是對PON2的表達(dá)水平無顯著的影響。

表1 IL-4刺激24 h后PRMT1和PON2的相對表達(dá)

表2 50 ng/mL IL-4刺激不同時(shí)間后PRMT1和PON2的相對表達(dá)

注：A：隨IL-4濃度從0～200 ng/mL不斷升高，PRMT1的蛋白水平升高，而PON2的表達(dá)水平不變；B：隨IL-4濃度從0～200 ng/mL不斷升高，PRMT1蛋白的相對表達(dá)水平升高

2.4 PON2為PRMT1的底物分子 為了驗(yàn)證PON2是PRMT1的底物蛋白，我們通過免疫共沉淀(Co-IP)實(shí)驗(yàn)來檢測PRMT1和PON2 的相互作用。Co-IP實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，用抗PON2 抗體沉淀后，再用抗PRMT1 抗體進(jìn)行Western blotting 檢測，可以發(fā)現(xiàn)IL-4 刺激組PRMT1的水平顯著高于對照組(圖4-A)。這說明PON2與PRMT1在細(xì)胞內(nèi)有相互作用，并且隨著IL-4刺激，與PON2結(jié)合的PRMT1增多。這說明PON2為PRMT1的底物蛋白。因?yàn)镮L-4不會上調(diào)PON2的表達(dá)水平，所以我們可以確定是因?yàn)镻RMT1的表達(dá)升高，所以有更多的PON2被PRMT1所識別和結(jié)合，從而提高了PON2的甲基化水平。為了進(jìn)一步驗(yàn)證這一結(jié)論，我們使用了Ⅰ型PRMT的抑制劑MS023，可以看到IL-4可以上調(diào)PON2蛋白精氨酸殘基非對稱性二甲基化水平，但是當(dāng)PRMT1的活性被抑制后，IL-4上調(diào)PON2甲基化的效應(yīng)立即減弱了(圖4-B)。這進(jìn)一步說明PON2是PRMT1的底物蛋白。

注：A：用抗PON2抗體做免疫共沉淀，可以拉下PRMT1蛋白，這說明PON2與PRMT1相結(jié)合。并且IL-4處理組PRMT1與PON2的結(jié)合增強(qiáng)。B：用免疫沉淀法檢測PON2蛋白的甲基化修飾水平，IL-4可增強(qiáng)PON2蛋白的甲基化修飾水平，但當(dāng)MS023抑制PRMT1活性后，IL-4對PON2蛋白甲基化修飾的促進(jìn)作用也削弱了

2.5 小鼠哮喘模型氣道上皮細(xì)胞中PON2的表達(dá)水平無明顯變化 為了了解哮喘動物模型中PON2的表達(dá)情況，我們誘導(dǎo)了小鼠的急性哮喘模型。我們哮喘組和對照組小鼠的肺組織切片進(jìn)行了HE染色：和對照組相比，哮喘模型組小鼠在氣道壁周圍均有大量炎癥細(xì)胞浸潤(圖5)。與對照組相比，哮喘模型組小鼠肺泡灌洗液中嗜酸性粒細(xì)胞的比例顯著升高(P<0.01)。并且，哮喘模型組血清中總IgE水平也顯著高于對照組(P<0.01)，見表3。這些都說明急性哮喘模型誘導(dǎo)成功。

表3 肺泡灌洗液中嗜酸性粒細(xì)胞的水平及血清總IgE的水平

注：A：對照組小鼠肺組織的組織圖片；B：哮喘模型組小鼠肺組織的組織圖片

隨后，我們檢測了小鼠肺組織中PON2的表達(dá)。我們發(fā)現(xiàn)，小鼠肺組織中PON2主要表達(dá)于氣道上皮細(xì)胞(圖6-A、B)；并且與對照組相比，哮喘模型組小鼠的PON2的表達(dá)水平無明顯變化，但是PRMT1的表達(dá)水平顯著升高(圖6-C)。這與細(xì)胞模型相吻合。見表4。由此，我們推測在哮喘發(fā)生過程中，PON2的精氨酸殘基非對稱性二甲基化修飾水平應(yīng)該與細(xì)胞模型中所觀察的一樣，會顯著升高。

表4 小鼠哮喘模型肺組織PRMT1和PON2的相對表達(dá)

注：A：對照組小鼠肺組織PON2主要在氣道上皮細(xì)胞中表達(dá);B：哮喘模型組小鼠肺組織中PON2主要在氣道上皮細(xì)胞中表達(dá)；C：與對照組相比，哮喘模型組小鼠PRMT1的表達(dá)水平顯著升高，PON2的表達(dá)水平無明顯變化

3 討論

在本研究中，我們篩選了肺上皮細(xì)胞中PRMT1的底物蛋白，并發(fā)現(xiàn)PON2為PRMT1的底物蛋白，IL-4可以促進(jìn)PON2發(fā)生非對稱性的二甲基化修飾。

氣道上皮是隔絕機(jī)體內(nèi)環(huán)境與外界環(huán)境的屏障[6]，并且可通過分泌多種細(xì)胞因子等多種細(xì)胞因子來調(diào)介導(dǎo)先天性免疫和繼發(fā)性免疫，在維持維持機(jī)體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定方面具有重要的意義。而哮喘的發(fā)生、發(fā)展與氣道上皮損傷有密切關(guān)系[7-8]。一般認(rèn)為，哮喘導(dǎo)致的氣道上皮損傷與氧化應(yīng)激以及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激有密切的關(guān)系。哮喘可導(dǎo)致肺組織中氧化-抗氧化平衡的破壞[9-11]，造成氧化應(yīng)激。氧化應(yīng)激可導(dǎo)致支氣管上皮損傷[12-14]。同時(shí)，與氣道過敏性炎癥有密切關(guān)系的IL-4可通過誘導(dǎo)氣道上皮細(xì)胞發(fā)生氧化應(yīng)激，進(jìn)而導(dǎo)致氣道上皮損傷[15]。氧化應(yīng)激造成的脂質(zhì)過氧化會向氣道招募的炎癥細(xì)胞促進(jìn)TGF-β和VEGF釋放，進(jìn)一步增強(qiáng)氣道炎癥，并引發(fā)氣道重塑[16]。而且ROS的積累不僅破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)，還可激活線粒體凋亡通路，造成氣道上皮細(xì)胞過度凋亡[17-19]。因此，抗氧化也成為哮喘治療的一個(gè)重要研究方向。

PON2是對氧磷酶家族中最古老的成員，它在多種組織細(xì)胞中廣泛表達(dá)，并且分布于細(xì)胞膜、胞漿、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、線粒體和胞核等多個(gè)亞細(xì)胞部位。PON2具有鈣依賴的內(nèi)酯、酶、芳基酯酶活性和抗氧化活性[20]，在抗病原菌感染發(fā)揮重要的作用[21]；同時(shí)它也是抗氧化系統(tǒng)的重要組成部分[22]，可保護(hù)線粒體免受氧化應(yīng)激的損傷，并減少氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的凋亡[23]；PON2還表現(xiàn)出抗內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的能力[24]。Polonikov等[5]在采用關(guān)聯(lián)分析及多因素維數(shù)降維分析等方法分析抗氧化酶的基因多態(tài)性與成人哮喘發(fā)病的相關(guān)性時(shí)，發(fā)現(xiàn)PON2可能是哮喘的易感基因。在從PON2表現(xiàn)出的抗氧化和抗內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激能力來看，它對細(xì)胞有保護(hù)性的作用。通過我們的實(shí)驗(yàn)顯示，在小鼠哮喘模型中，PON2主要表達(dá)于氣道上皮細(xì)胞，并且與對照組相比，小鼠哮喘模型肺組織中PON2的表達(dá)水平無明顯的改變。結(jié)合在哮喘發(fā)生過程中氣道上皮會發(fā)生氧化應(yīng)激和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激這一情況來看，在PON2蛋白表達(dá)水平不變的情況下，它的保護(hù)功能應(yīng)該是通過蛋白的修飾，或活性調(diào)節(jié)等方式來進(jìn)行調(diào)整，以適應(yīng)生理狀態(tài)的變化。

在篩選肺上皮細(xì)胞中PRMT1底物時(shí)，我們發(fā)現(xiàn)PON2為PRMT1底物，可發(fā)生精氨酸非對稱的二甲基化修飾，并且IL-4可促進(jìn)PON2發(fā)生非對稱的二甲基化修飾，但是不改變PON2的蛋白表達(dá)水平。我們前期的工作已證實(shí)PRMT1在哮喘發(fā)生中起重要作用，IL-4可以上調(diào)肺上皮細(xì)胞中PRMT1表達(dá)[4]，隨著PRMT1的升高可促使上皮細(xì)胞產(chǎn)生趨化因子[5]，改變miRNA的表達(dá)譜[25]。在氣道上皮細(xì)胞中，PRMT1發(fā)揮作用的機(jī)制尚不清楚。而且有研究顯示，ROS可促進(jìn)PRMT1活性的升高[26]。蛋白質(zhì)的精氨酸殘基發(fā)生非對稱的二甲基化修飾通常會改變蛋白的功能，PON2已被證實(shí)可發(fā)生泛素化以及谷胱甘肽化等修飾形式，而且這些修飾也會改變PON2的功能。因此，PRMT1催化PON2發(fā)生非對稱的二甲基化修飾很可能也改變PON2的抗氧化及抗內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激活性，從而參與哮喘的發(fā)病過程中去。

在本研究中，我們確定了PON2是PRMT1的底物蛋白，并且在IL-4刺激下其精氨酸殘基可發(fā)生非對稱性的二甲基化修飾。這為我們理解PRMT1參與哮喘氣道上皮炎癥發(fā)生的過程提供了一個(gè)新的視角，也為我們理解哮喘發(fā)病過程中氧化-抗氧化失衡的機(jī)制提供了一個(gè)新的研究方向。

利益相關(guān)聲明：文章所有作者共同認(rèn)可文章無相關(guān)利益沖突。

作者貢獻(xiàn)說明：研究設(shè)計(jì)為楊旭東，研究方案執(zhí)行與實(shí)施為楊萬勇、馬麗、任家駿，數(shù)據(jù)整理為馬麗，統(tǒng)計(jì)撰寫論文為楊萬勇，論文審閱為楊旭東。