厚樸樹不同高度皮層藥用成分含量變化分析

馬冬雪, 劉劍鋒，胡明嬌，李炳忠，陳 娟，劉仁林

(1.河北政法職業(yè)學(xué)院 園林系，河北 石家莊 050061；2.萍鄉(xiāng)市林業(yè)科學(xué)研究所，江西 萍鄉(xiāng) 337000；3.贛南師范大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院，江西 贛州 341000)

厚樸Houpoeaofficinalis(Rehder & E.H.Wilson) N.H.Xia & C.Y.Wu為木蘭科 Magnoliaceae厚樸屬Houpoea植物，主要分布于安徽、浙江、江西、福建、湖南、廣東及廣西等地區(qū)[1-2].據(jù)文獻[3]記載，中藥材厚樸為厚樸和凹葉厚樸HoupoeaofficinalisRehd.et Wils.var.bilobaRehd.et Wils.的干燥干皮、根皮及枝皮，有燥濕消痰、下氣除滿的功效.厚樸中活性物質(zhì)主要是厚樸酚及和厚樸酚，在抗氧化、抗菌、抗病毒、抗腫瘤、心腦血管、中樞神經(jīng)、消化等方面具有明顯的藥理作用[4-10].研究文獻表明，種源、樹齡、坡位、藥用部位等是影響厚樸樹皮厚度及所含藥理成分含量的關(guān)鍵因素，如楊占南等[11]研究表明，厚樸最佳藥材采集樹齡為10 a；張丹等[12]研究表明，根皮、干皮、枝皮和厚樸葉中厚樸酚與和厚樸酚的含量差異明顯[13-16].植物同一部位藥用成分含量與其生長高度聯(lián)系緊密[17]，而關(guān)于厚樸樹不同高度皮的藥用成分含量變化情況至今未見報道.本文中，筆者對厚樸不同高度皮中厚樸酚、和厚樸酚含量進行測定分析，探索不同高度厚樸樹干皮層中藥用成分含量變化規(guī)律，為厚樸皮藥材等級劃分、栽培管理、樹皮采集、中藥方劑應(yīng)用等提供科學(xué)依據(jù).

1 材料與方法

1.1 取 樣

3株取樣厚樸樹位于井岡山自然保護區(qū)獅子巖，海拔810 m，樹齡9 a，胸徑13.7～14.0 cm，樹高11.9～12.5 m.從樹干基部(地面)向頂梢依次量取，每50 cm為一個取樣區(qū)間，將該區(qū)間的樹皮全部剝?nèi)?，陰干得到樣?見表1).除在樹干上取樣外，還在枝條上取樣，即在3株取樣的厚樸樹中，選1根最粗的枝條(枝條基部最粗)，在其長度的一半處切斷，分為2段，取下半段(最粗的)剝皮作為枝條皮測定的樣品.

表1 厚樸藥材具體取樣方法Tab.1 Specific Sampling Methods of Houpoea officinalis m

1.2 方 法

1.2.1 儀器與試劑

島津LC-10A高效液相色譜儀：DGU-14A 脫氣機，LC-10AT 二元泵，SIL-10AD自動進樣器，CTO-10AS 恒溫箱，SPD-10AZ紫外檢測器，LC solution 化學(xué)工作站.FW-177中草藥粉碎機(天津市泰斯特儀器有限公司)，KQ-250DE數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)，BS124S 電子天平(Sartorius，220 g/0.000 1 g)，ME5賽多利斯超微量電子分析天平(Sartorius，5 100 mg/0.001 mg)，WP-UP-IV-20沃特浦(雙取水口)超純水機(四川沃特爾科技發(fā)展有限公司).

甲醇(分析純，上海振興化工一廠)、超純水、甲醇(色譜純，霍尼韋爾貿(mào)易(上海)有限公司)、和厚樸酚對照品(批號為110720-201313)及厚樸酚對照品(批號為110729-200412)均購于中國藥品生物制品檢定研究院.

1.2.2 測定方法

1)色譜條件.Welch Ultimate XB-C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)色譜柱；流動相為甲醇-水(V(甲醇)∶V(水)=78∶22)，流速為1 mL/min.檢測波長為294 nm，柱溫25 ℃.在此條件下，樣品中和厚樸酚與厚樸酚能達到基線分離,結(jié)果見圖1.

a.對照品；b.厚樸藥材.圖1 厚樸藥材供試品和對照品的HPLC圖譜Fig.1 HPLC Diagrams of the Tested and Control Substances of Houpoea officinalis

2)對照品溶液的配制.分別取和厚樸酚、厚樸酚對照品適量，精密稱定，加甲醇溶解配制成33.2,34.3 μg/mL溶液.

3)樣品溶液的配制.分別將不同的厚樸藥材粉碎，過3號篩，精密稱定0.1 g，置于50 mL具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，搖勻，密塞，浸漬24 h，過濾，精密量取續(xù)濾液5 mL，置于25 mL容量瓶中，加甲醇至刻度線處，搖勻，過濾后即得.

4)標準曲線的測定.用甲醇分別配制成0.08 mg/mL厚樸酚、0.096 mg/mL和厚樸酚標準品溶液，然后分別測定得到回歸方程.

5)精密度測定.取0.1 mg/mL的混標溶液10 μL，按同樣的色譜條件進行HPLC分析，連續(xù)3次進樣，測定3次厚樸酚、和厚樸酚的含量，衡量儀器的精密度.

6)穩(wěn)定性和加樣回收率.相同色譜條件下分別在0,2,4,6,8,24 h進樣10 μL，計算厚樸酚、和厚樸酚的含量，衡量兩者的穩(wěn)定性.精密稱取厚樸酚、和厚樸酚至已知含量的厚樸原藥材中，按樣品溶液配制方法操作，配制樣品液，按同樣的色譜條件測定厚樸酚、和厚樸酚的含量，計算加樣回收率.

1.2.3 含量測定

每個高度取3份供試品溶液4 μL，注入液相色譜儀，按“1.2.2”色譜條件進行測定，記錄結(jié)果，計算平均值，得到不同高度厚樸藥材中和厚樸酚與厚樸酚的含量.

各高度剝?nèi)〉暮駱愀善ぞ衔墨I[3]中厚樸藥材含量測定規(guī)定，即產(chǎn)品按干燥品計算，厚樸酚、和厚樸酚的總含量不得少于2.0 %.

2 結(jié)果與分析

2.1 厚樸樹干不同高度皮中藥用成分含量變化

測定得到的井岡山產(chǎn)厚樸枝條及不同高度皮的藥用成分含量見表2.不同高度厚樸皮中厚樸酚與和厚樸酚的總含量在樹干高度0.5 m(離地面)處為最大值(46.6 mg/g)，高度10.5 m處的總含量最低(29.6 mg/g).不同高度樹干皮中厚樸酚、和厚樸酚的總含量平均值為34.8 mg/g.厚樸酚含量最高值出現(xiàn)在高度0.5 m處(28.0 mg/g)，最低值出現(xiàn)在高度9.5 m處(20.3 mg/g),平均值為23.0 mg/g；和厚樸酚含量最高值也出現(xiàn)在高度0.5 m處(18.6 mg/g)，最低值出現(xiàn)在高度10.5 m處(9.0 mg/g)，平均值為11.7 mg/g.由此可知，厚樸酚、和厚樸酚含量隨樹干高度有相似的變化規(guī)律，但同一高度皮中的厚樸酚含量高于和厚樸酚含量.枝條皮中2種藥用成分的總含量為28.3 mg/g，其中厚樸酚含量為19.5 mg/g，和厚樸酚含量為8.8 mg/g.總體上來說,枝條皮中的厚樸酚與和厚樸酚含量均低于樹干皮，與高度10.5 m以上樹干皮中的含量接近.

表2 3株厚樸樹不同高度皮中厚樸酚、和厚樸酚含量平均值Tab.2 The Average of Magnolia and Honokiol Contents in Bark of 3 Trees of Houpoea officinalis at Different Heights

2.2 厚樸樹不同高度皮中藥用成分含量比較

厚樸樹不同高度皮中藥用成分含量變化如圖2所示.2種藥用成分的總含量與厚樸酚、和厚樸酚各自的含量變化趨勢一致，總體上隨高度的增高而下降;2種藥用成分都在樹干高度0.5 m處含量最高，且明顯高于其他高度區(qū)間值;高度1.5 m是一個明顯的“拐點”，超過此高度，2種藥用成分具有增、減波動現(xiàn)象;高度超過7.5 m的樹干皮中，厚樸酚與和厚樸酚總含量與厚樸酚含量、和厚樸酚含量均明顯下降，說明7.5 m以下的厚樸皮具有較高的藥用價值，因此，厚樸皮在劃分等級時可以用高度表示，如0.5 m高度的干皮可列為1級品、0.5～1.5 m為2級品、1.5～7.5 m為3級品、7.5 m高度以上的干皮可列為等外品；不同高度樹干皮中厚樸酚含量的極差最大，為0.77 %，表明厚樸酚的積累與樹齡有關(guān)，高度較高的樹干皮層的年齡較小，厚樸酚含量也很小，厚樸皮的采收樹齡最佳為9～11 a.

圖2 厚樸樹不同高度皮中藥用成分含量變化Fig.2 Changes in the Content of Medicinal Ingredients in Bark of Houpoea officinalis at Different Heights

3 結(jié)論與討論

1) 不同高度厚樸皮中厚樸酚、和厚樸酚總含量在樹干高度0.5 m(離地面)處為最大值(46.6 mg/g)，平均值為34.8 mg/g,其中厚樸酚含量最高為28.0 mg/g，平均含量為23.0 mg/g,和厚樸酚含量最高僅為18.6 mg/g，平均含量為11.7 mg/g.

2) 所有高度樹干皮中厚樸酚、和厚樸酚含量均高于枝條皮中的含量.

3) 不同高度樹干皮中藥用成分含量差異明顯，但整體上呈現(xiàn)隨高度升高而遞減的趨勢.

4) 高度1.5 m是一個明顯的“拐點”，超過此高度，厚樸酚與和厚樸酚含量具有增、減波動現(xiàn)象.

5) 枝條皮中厚樸酚與和厚樸酚的含量與高度10.5 m以上樹干皮中藥用成分的含量接近，具有一定的藥用價值.

6) 高度超過7.5 m的樹干皮中，厚樸酚與和厚樸酚總含量、厚樸酚含量、和厚樸酚含量均明顯下降,說明低于7.5 m的樹干皮具有較好的利用價值.因此，厚樸皮劃分等級時，可以用高度表示，如0.5 m高度的皮可列為1級品，而7.5 m高度以上的皮可列為等外品.

7) 厚樸皮中厚樸酚、和厚樸酚含量呈現(xiàn)隨樹干高度升高而遞減的趨勢，但并非線性均勻減少，而是呈現(xiàn)增、減波動變化.王曉明等[17]研究也得到了相似的規(guī)律；秦彥杰[18]對黃檗不同高度樹皮的藥用成分進行了分析，結(jié)果表明藥用成分含量也表現(xiàn)為隨樹干高度升高而降低，且在0～1.5 m隨高度的增高變化最大，與筆者研究結(jié)果相似.由此可見，藥材質(zhì)量與樹齡有關(guān).

厚樸是重要傳統(tǒng)藥物，栽培和藥用歷史悠久.由于人類的干擾，野生厚樸資源急劇減少.因此，要做好種質(zhì)資源收集及人工栽培研究，加強厚樸規(guī)范性生產(chǎn)與有效利用，創(chuàng)新提取工藝技術(shù)，提高藥用成分含量及活性[19-20].