細(xì)胞分裂周期因子25-A與胃癌化療藥物奧沙利鉑聯(lián)合5-氟尿嘧啶耐藥的相關(guān)性研究

程波，劉巧珍，曹清

（江西省九江市第三人民醫(yī)院，江西 九江 332000）

胃癌是臨床上較為常見的消化道惡性腫瘤之一，相關(guān)報(bào)道指出，胃癌的發(fā)病率和病死率位居我國惡心腫瘤前位[1]。臨床以奧沙利鉑為基礎(chǔ)的聯(lián)合化療是治療晚期胃癌的主要手段，但大部分患者會(huì)出現(xiàn)原發(fā)或繼發(fā)耐藥，嚴(yán)重影響化療效果[2]。目前，關(guān)于奧沙利鉑聯(lián)合用藥在胃癌耐藥中的分子機(jī)制研究較少，本研究旨在從蛋白水平初步分析胃癌中細(xì)胞分裂周期因子25A（cell division cycle 25-A，CDC25A）的表達(dá)水平，進(jìn)一步分析其表達(dá)水平與胃癌耐藥的相關(guān)性，以期為早期胃癌的發(fā)現(xiàn)和晚期胃癌化療方案的制定提供支持，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2016年7月至2020年11月本院收治的100 例胃癌患者作為觀察組，其中男56例，女 44 例；年齡 31～77 歲，平均年齡（53.45±10.51）歲；TNM分期：ⅢB 46例，ⅢC 37例，Ⅳ17例；分化程度：低分化35例，中分化28例，高分化37例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移54例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移46例。納入標(biāo)準(zhǔn)：觀察組研究對(duì)象均為本院首診或入院前未經(jīng)放、化療等相關(guān)治療；化療方案為奧沙利鉑聯(lián)合5-氟尿嘧啶，治療2 個(gè)療程后評(píng)估療效；臨床分期均為ⅢB～Ⅳ期；觀察組患者均經(jīng)病理明確診斷為胃癌。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并其他惡性腫瘤；臨床及病理資料不全或缺失；合并嚴(yán)重基礎(chǔ)疾病。根據(jù)化療后療效評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)，參照世界衛(wèi)生組織針對(duì)實(shí)體瘤療效評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)（response evaluation criteria in solid tumors，RECIST），分為完全緩解、部分緩解、穩(wěn)定及進(jìn)展[3]，并根據(jù)其分為敏感組（完全緩解+部分緩解）和耐藥組（穩(wěn)定+進(jìn)展）。另選取同期于本院行胃鏡檢查的100胃炎患者作為對(duì)照組，其中男52例，女48例；年齡30～76歲，平均年齡（54.08±9.81）歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：對(duì)照組患者均在本研接受治療；胃鏡活檢標(biāo)本均經(jīng)病理明確診斷為胃炎。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并其他惡性腫瘤；萎縮性胃炎或其他特殊類型胃炎；合并嚴(yán)重基礎(chǔ)疾病；臨床/病理不全或缺失。兩組性別、年齡比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，具有可比性。本研究經(jīng)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)。所有患者均對(duì)本研究知情同意，并簽署知情同意書。

1.2 方法 采集兩組患者的胃黏膜組織，通過免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)CDC25A的表達(dá)水平，嚴(yán)格按照SP 檢測(cè)流程進(jìn)行：經(jīng)考片、脫蠟、水化處理后，置于濃度3%的雙氧水中孵育10 min，然后進(jìn)行微波抗原修復(fù)，滴加一抗后將切片置于4 ℃下過夜。隨后加入辣根過氧化物酶（horseradish peroxidase，HRP）標(biāo)記的二抗，室溫孵育2 h 后，用2031 加強(qiáng)型二氨基聯(lián)苯胺（diaminobenzidine，DAB）顯色，孵育1 h，蘇木精復(fù)染，脫水，透明，最后用中性樹膠封固。其中SP 檢測(cè)試劑盒來自北京中山生物技術(shù)有限公司；CDC25A 抗體（ab19204）來自 Abcam 公司；小鼠P27抗人單克隆抗體購自北京中山生物技術(shù)有限公司；DAB購自福州邁新技術(shù)開發(fā)有限公司。用光學(xué)倒置顯微鏡觀察免疫組化結(jié)果。

1.3 觀察指標(biāo) 免疫組化結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)：CDC25A均以鏡下胞漿呈現(xiàn)黃褐色或深黃色顆粒為陽性細(xì)胞，每張切片鏡下選取3個(gè)高倍視野，根據(jù)每張切片陽性細(xì)胞所占比例和細(xì)胞染色程度評(píng)分，最后采用半定量積分法綜合判斷結(jié)果。①按陽性細(xì)胞所占比例：0分細(xì)胞不顯色；1分陽性細(xì)胞所占比例≤25%；2分陽性細(xì)胞所占比例＞25%～49%；3分陽性細(xì)胞所占比例≥50%。②按細(xì)胞染色程度：0分細(xì)胞不顯色，1分細(xì)胞呈淺黃色，2分細(xì)胞呈深黃色，3分細(xì)胞呈深褐色。評(píng)分相加：＞3分計(jì)為陽性，≤3分計(jì)為陰性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 19.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以“”表示，組間比較采用雙樣本方差假設(shè)t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，采用Spearman 進(jìn)行相關(guān)性分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組CDC25A陽性表達(dá)比較 觀察組CDC25A陽性率為86.00%（86/100），高于對(duì)照組的21.00%（21/100），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=84.916，P=0.000）

2.2 CDC25A 表達(dá)與胃癌臨床病理特征的關(guān)系CDC25A 在胃癌組織中的表達(dá)水平與分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期有關(guān)（P＜0.05），與性別、年齡、解剖位置無關(guān)，見表2。

表2 CDC25A與胃癌臨床病理特征的關(guān)系[n（%）]Table 2 Relationship between CDC25A and clinicopathological features of gastric cancer[n(%)]

2.3 CDC25A 與胃癌化療藥物奧沙利鉑聯(lián)合5-氟尿嘧啶耐藥性的相關(guān)性 100例胃癌患者中有47例對(duì)奧沙利鉑聯(lián)合5-氟尿嘧啶耐藥，耐藥率為47.00%。敏感組CDC25A陽性表達(dá)率低于耐藥組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。Spearman 相關(guān)性分析顯示，CDC25A表達(dá)水平與胃癌化療藥物奧沙利鉑聯(lián)合5-氟尿嘧啶耐藥成正相關(guān)（r=0.582，P＜0.05），見表3。

表3 CDC25A與胃癌化療藥物奧沙利鉑聯(lián)合5-氟尿嘧啶耐藥性的相關(guān)性Table 3 Correlation between CDC25A and drug resistance of oxaliplatin combined with 5-fluorouracil in gastric cancer

3 討論

腫瘤的發(fā)生與多基因密切相關(guān)，但大部分腫瘤均存在細(xì)胞周期調(diào)節(jié)絮亂，主要表現(xiàn)為促進(jìn)細(xì)胞增殖或?qū)NA 損傷的不應(yīng)答。CDC25A 是細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶（cyclin-dependentkinase，CDK）的上游調(diào)節(jié)蛋白，具有雙特異磷酸酶活性，已被證實(shí)可調(diào)節(jié)細(xì)胞周期和影響細(xì)胞凋亡[4]。奧沙利鉑聯(lián)合5-氟尿嘧啶是目前胃癌常用的化療方案，但該類治療方案尚未能有效改善晚期轉(zhuǎn)移性胃癌的總生存時(shí)間。

本研究結(jié)果顯示，觀察組CDC25A 陽性率高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），提示CDC25A在胃癌組織中表達(dá)水平較高，其主要與CDC25A能直接作用于細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶有關(guān)[5]。CDC25A 在胃癌中的表達(dá)水平與分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM 分期相關(guān)，主要由于CDC25A 可通過去磷酸化激活CDK1活性，加快細(xì)胞周期轉(zhuǎn)換，完成細(xì)胞的有絲分裂，促進(jìn)腫瘤發(fā)展[6]。另外，本研究100例胃癌患者中有47 例對(duì)奧沙利鉑聯(lián)合5-氟尿嘧啶耐藥，而敏感組的CDC25A 陽性率低于耐藥組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。Spearman 相關(guān)性分析顯示，CDC25A 表達(dá)水平與胃癌化療藥物奧沙利鉑聯(lián)合5-氟尿嘧啶耐藥呈正相關(guān)。說明CD25A 的表達(dá)能影響胃癌化療藥物奧沙利鉑聯(lián)合5-氟尿嘧啶的耐藥性。5-氟尿嘧啶通過在體內(nèi)轉(zhuǎn)化，可干擾蛋白質(zhì)的合成，改變DNA 的穩(wěn)定性，從而抑制腫瘤的發(fā)展[7]；而奧沙利鉑屬于第3 代鉑類化療藥物，其藥理機(jī)制與順鉑類似，均可靶向作用于細(xì)胞中的DNA，從而阻斷腫瘤細(xì)胞DNA的復(fù)制，進(jìn)而誘發(fā)細(xì)胞凋亡[8]。研究[9]認(rèn)為，腫瘤耐藥性可能與細(xì)胞微環(huán)境改變、膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白介導(dǎo)的藥物外排及細(xì)胞內(nèi)藥物濃度改善、細(xì)胞凋亡和增殖異常有關(guān)，而CDC25A與細(xì)胞凋亡密切相關(guān)，可能是其高表達(dá)水平能影響奧沙利鉑聯(lián)合5-氟尿嘧啶耐藥性的主要原因。

綜上所述，CDC25A基因表達(dá)水平與分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM 分期相關(guān)，可反映胃癌臨床病理特征，且與胃癌化療藥物奧沙利鉑聯(lián)合5-氟尿嘧啶耐藥性密切相關(guān)。