麻風(fēng)樹葉提取物多酚與黃酮分析及對肉雞盲腸微生物多樣性的影響

和貴文 和云鳳 陳粉粉 李恩良 李青青 郭愛偉

摘要：通過在肉雞飼糧中添加麻風(fēng)樹葉提取物（ Jatropha curcas ?leaves extract，JCLE），探討JCLE對肉雞腸道微生物多樣性的影響，為JCLE在家禽生產(chǎn)中應(yīng)用提供理論依據(jù)。試驗選取健康的1日齡鐵腳麻肉仔雞300羽（公母比為 1 ∶1），隨機分為5組，分別為ACG（對照組，基礎(chǔ)飼糧+15 mg/kg桿菌肽鋅）、JCLE20（基礎(chǔ)飼糧+200 mg/kg JCLE）、JCLE60（基礎(chǔ)飼糧+600 mg/kg JCLE）、JCLE100（基礎(chǔ)飼糧+1 000 mg/kg JCLE）、JCLE140（基礎(chǔ)飼糧+1 400 mg/kg JCLE），每組5個重復(fù)，每個重復(fù)12羽，試驗期為42 d。在試驗結(jié)束后屠宰，取盲腸內(nèi)容物，對樣品進行16S rRNA基因的V3～V4區(qū)測序，闡明麻風(fēng)樹葉提取物對肉雞腸道微生物多樣性的影響。結(jié)果表明，麻風(fēng)樹提取物中多酚含量高于黃酮，提取的麻風(fēng)樹提取物中多酚為（544.31±17.11） mg/g，黃酮為（482.21±12.58） mg/g。飼糧中添加JCLE可提高擬桿菌門（Bacteroidetes）、互養(yǎng)菌門（Synergistetes）相對豐度，并降低變形菌門（Proteobacteria）豐度;在屬水平上提高了擬桿菌屬（ Bacteroides）和Odoribacter 的豐度（ P <0.05），降低了彎曲桿菌屬（ Campylobacter ）、大腸埃希桿菌_志賀氏桿菌屬（ Escherichia_Shigella ）的豐度。乳酸桿菌屬（ Lactobacillus ）的豐度在ACG和JCLE100中較高，但差異不顯著（ P >0.05）。表明添加JCLE對于改善家禽腸道健康、維持家禽的可持續(xù)生產(chǎn)具有非常重要的意義，但JCLE-腸道微生物-宿主內(nèi)在機制還有待于進一步研究。

關(guān)鍵詞：麻風(fēng)樹葉;提取物;肉雞;盲腸;微生物多樣性

中圖分類號：S831.5 ??文獻標志碼： A

文章編號：1002-1302（2022）07-0165-07

收稿日期：2021-06-21

基金項目：國家自然科學(xué)基金（編號：3140609、31860650）;云南省優(yōu)勢特色重點學(xué)科生物學(xué)一級學(xué)科建設(shè)項目（編號：50097505）。

作者簡介：和貴文（1996—），男，云南麗江人，碩士研究生，主要從事家禽營養(yǎng)與腸道健康方面的研究。E-mail：963052726@qq.com。

通信作者：郭愛偉，碩士，副教授，主要從事家禽營養(yǎng)與腸道健康方面的研究。E-mail：g.aiwei.swfu@hotmail.com。

麻風(fēng)樹（ Jatropha curcas ?L.）為大戟科（Euphorbiaceae）膏桐屬（ Jatropha ）植物，別稱小桐子、膏桐、黃腫樹等，起源于墨西哥及中美洲，在我國主要分布于廣東、廣西、云南、貴州、四川、臺灣、福建、海南等省份的熱帶及干熱河谷地區(qū)，其中，云南主要栽培在滇西、滇西南、滇中及紅河、金沙江、瀾滄江、小綠汁江流域[1-2]。麻風(fēng)樹在熱帶地區(qū)常作為民間用藥，主治胃腸炎、腫痛、皮膚瘙癢等疾病。借助于現(xiàn)代分析技術(shù)，科研人員已從麻風(fēng)樹中分離得到了許多生物活性物質(zhì)如黃酮類、木脂素類、香豆素類等多酚類化合物，而植物多酚具有抗腫瘤、抗氧化、抗肥胖、抗菌消炎等多種生物活性功能[2]。目前，麻風(fēng)樹提取物已被證實在體外具有抑菌、殺蟲等作用，有些活性成分還具有一定的抗HIV病毒和抗腫瘤活性[3]。麻風(fēng)樹的有效成分主要存在于種子、皮、葉、根中，范樹國等研究表明，麻風(fēng)樹莖、根、葉的總黃酮含量分別為0.42%、3.05%、4.87%，表明麻風(fēng)樹葉是黃酮含量最高的部位[4]。劉娟等報道，麻風(fēng)樹提取物對細胞的毒性較小，既能抑制單純皰疹病毒在胞內(nèi)的增殖，又能直接滅活該病毒，對白色念珠菌、金黃色葡萄球菌和大腸桿菌具有極強的殺滅作用[3，5]。曾禮華等研究表明，麻風(fēng)樹葉提取物在體外對雞大腸桿菌（ Escherichia coli）、金黃色葡球菌（Staphylococcus aureus ）抑菌結(jié)果表明，麻風(fēng)樹葉提取物對雞大腸桿菌、金黃色葡萄球菌均有抑制作用，對大腸桿菌的抑菌作用優(yōu)于對金黃色葡萄球菌[6]。

目前，關(guān)于麻風(fēng)樹提取物的體外抗菌方面有些零星的報道，但多數(shù)是從抑菌效果方面探討的，沒有在家禽體內(nèi)探討其對家禽腸道微生物的影響規(guī)律，因此，本研究在前人研究麻風(fēng)樹提取物化學(xué)成分的基礎(chǔ)上，以肉雞為研究對象，將麻風(fēng)樹提取物添加到肉雞飼糧中，探討麻風(fēng)樹提取物對肉雞腸道微生物的影響規(guī)律，為開發(fā)綠色的植物提取物生長促進劑和免疫增強劑提供理論依據(jù)，同時有望將其開發(fā)成為抗生素的替代品。

1 材料與方法

1.1 試驗時間和地點

試驗于2018年9—11月在云南省昆明市西南林業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院動物養(yǎng)殖房進行。

1.2 麻風(fēng)樹葉提取物（JCLE）制備

采集新鮮麻風(fēng)樹葉（云南省墨江縣）陰干后用中藥粉碎機進行粉碎，過40目篩，收集樣品置于 -20 ℃ 冰箱貯存，備用。JCLE提取方法參照楊帆[7]提取植物多酚的方法。

1.3 主要試劑和設(shè)備

蕓香苷標準品（純度>98%）、沒食子酸標準品（純度>98%）為Sigma試劑。

中草藥粉碎機，RV8 S96旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（德國IKA），超聲波清洗器（上海冠特），TU-1901紫外可見分光光度計（北京普析）。臺式高速離心機（Centrifuge 5418，Eppendorf），PCR 儀（Bio-rad），凝膠成像儀（Tanon），電泳儀（Tanon）。

1.4 試驗設(shè)計

選取健康的1日齡鐵腳麻肉仔雞300羽（公母比為1 ∶1），隨機分為5組，分別為ACG（基礎(chǔ)飼糧+15 mg/kg桿菌肽鋅）、JCLE20（基礎(chǔ)飼糧+200 mg/kg JCLE）、JCLE60（基礎(chǔ)飼糧+600 mg/kg JCLE）、JCLE100（基礎(chǔ)飼糧+1 000 mg/kg JCLE）、JCLE140（基礎(chǔ)飼糧+1 400 mg/kg JCLE），每組5個重復(fù)，每個重復(fù)12羽，各組初始體質(zhì)量差異不顯著（ P >0.05），試驗共42 d。

1.5 試驗飼糧

飼糧參照NRC（1994）家禽營養(yǎng)需要配制[8]，主要原料有玉米、豆粕、魚粉、豆油、賴氨酸、蛋氨酸、石粉、磷酸氫鈣等，飼糧組成及營養(yǎng)水平見表1，飼料為粉料。

1.6 試驗動物的飼養(yǎng)管理

采用舍內(nèi)3層籠養(yǎng)，自由飲水、采食，試驗期間光照采用24 h連續(xù)光照法，1～6日齡保持舍內(nèi)為32～35 ℃，7～10 日齡保持舍內(nèi)為30～32 ℃，11～21 日齡保持舍內(nèi)為25～29 ℃，22 日齡至試驗結(jié)束保持舍內(nèi)為25 ℃。按肉雞的飼養(yǎng)規(guī)范進行常規(guī)免疫。

1.7 主要的測定指標

1.7.1 JCLE中黃酮和多酚含量的測定

1.7.1.1 多酚含量測定

精確稱取沒食子酸 10 mg，用蒸餾水溶解并定容到100 mL（0.1 mg/mL標準溶液），用95%乙醇稀釋成0.000、0.004、0.008、0.012、0.016、0.020 mg/mL，取不同濃度溶液各1 mL加1 mL Folin-Ciocalteu（0.25 mol/L）后混勻，靜置3 min后加入2 mL 15% Na 2CO 3溶液，混勻，靜置30 min，4 000 r/min 離心3 min，取上清液在波長760 nm測定吸光度，每個濃度重復(fù)4次，制作標準曲線。將JCLE進行梯度稀釋（103、105、107），重復(fù)以上步驟測定吸光度，并通過吸光度和標準曲線計算多酚含量[7]。

1.7.1.2 黃酮含量測定

準確稱取蕓香苷標準品10 mg，加體積分數(shù)60%乙醇溶液（無水乙醇 ∶蒸餾水=6 ∶4）定容于25 mL容量瓶中，得質(zhì)量濃度為0.4 mg/mL對照品溶液，并配置好5% NaNO 2溶液、10% Al（NO 3） 3溶液、4% NaOH溶液待用。移取對照品溶液7份，分別稀釋成0.00、0.05、0.10、0.15、0.20、0.25、0.30 mg/mL的對照品溶液。分別吸取5 mL上述稀釋后對照品溶液置于10 mL比色管中，加5% NaNO 3 0.5 mL，放置6 min，加10% Al（NO 3） 3 0.5 mL，放置6 min，再加4%氫氧化鈉 4 mL，搖勻，放置15 min后于510 nm處測定吸光度，繪制標準曲線。將JCLE進行梯度稀釋（103、104、105），重復(fù)以上步驟測定吸光度，并通過吸光度和標準曲線計算黃酮含量[9]。

1.7.2 盲腸微生物16S rRNA 基因測序

42 d時每組隨機選擇5羽健康公雞靜脈放血處死，剖開腹腔，采用75%乙醇對盲腸外壁消毒，用滅菌手術(shù)刀切斷盲腸，取靠近盲腸末端的腸道食糜1 g到已滅菌凍存管中，液氮速凍保存，-80 ℃冰箱中保存。提取細菌總DNA，利用Illumina MiSeq平臺進行Paired-end 150測序，對樣品進行16S rRNA的 V3-V4區(qū)測序。按照97%的相似度歸類操作分類單元（OTUs），去除序列數(shù)量少的OTUs，然后進行生物信息學(xué)分析，主要包括細菌Alpha多樣性和Beta多樣性，并分析了各組微生物在門、屬水平上的差異。獲得分類學(xué)信息并分別在門（phylum）和屬（genus）分類水平統(tǒng)計各樣本的群落組成。

1.8 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

試驗數(shù)據(jù)采用 SPSS 22.0進行單因素方差分析（one-way ANOVA），數(shù)據(jù)結(jié)果以“平均值±標準誤”表示。差異顯著性比較采用Duncan s法多重比較法。

2 結(jié)果與分析

2.1 JCLE中多酚和黃酮含量的比較

以質(zhì)量濃度（ C ）對吸光度（Abs）進行回歸分析，獲得蕓香苷標準曲線方程 y=0.370 5x -0.000 08（ r 2=0.999）;沒食子酸標準曲線方程為 ?y=15.641x +0.020 4（ r 2=0.991）（圖1）。通過標準曲線計算麻風(fēng)樹提取物中的多酚和黃酮，由圖2可知，麻風(fēng)樹提取物中多酚含量高于黃酮，提取的麻風(fēng)樹提取物中多酚為（544.31±17.11） mg/g，黃酮為（482.21±12.58） mg/g。

2.2 飼糧中添加JCLE對肉雞盲腸微生物多樣性的影響

2.2.1 測序深度和OTU分析

由圖3可知，對30羽肉雞（每組5羽）盲腸食糜進行16S rRNA的 V3-V4區(qū)測序，所有試驗樣品共得到有效序列 750 052 條，平均每個樣品含（30 002±1 464） 條。獲得的有效序列在不同分類水平上進行物種注釋，共獲得501個OTU，屬10個門、19個綱、26個目、43個科、97個屬。其中，各組間共有OTU數(shù)為345個，ACG、JCLE20、JCLE60、JCLE100、JCLE140平均OUT數(shù)分別為（317±40）、（269±26）、（289±44）、（320±27）、（294±38）個。

2.2.2 物種α多樣性的影響

由表2可知，各組 α 多樣性指數(shù)覆蓋率（goods_coverage）接近1.00，表明每組的數(shù)據(jù)可反映真實的盲腸微生物群水平。從goods_coverage和Simpson指數(shù)來看，試驗組和對照組間差異不顯著（ P >0.05）。從Chao 1指數(shù)來看，JCLE20顯著低于JCLE100（ P <0.05），JCLE140、JCLE60、JCLE20與ACG差異不顯著（ P >0.05）;observed_species指數(shù)JCLE100顯著高于JCLE20（ P <0.05），JCLE60、JCLE100、JCLE140與ACG差異不顯著（ P >0.05）;Shannon指數(shù)JCLE100顯著高于JCLE20（ P <0.05），JCLE60、JCLE100、JCLE140與ACG差異不顯著（ P >0.05）。以上 α 多樣性指數(shù)（Observed_species指數(shù)、Chao1指數(shù)、Shannon指數(shù)、Simpson指數(shù)）共同表明，添加抗生素的對照組與JCLE60、JCLE100、JCLE140盲腸微生物物種豐度和多樣性接近，而JCLE20盲腸微生物物種豐度和多樣性都較低。

2.2.3 物種β多樣性的影響

由圖4可知不同樣品間相對距離，ACG和JCLE20、JCLE60和JCLE100盲腸內(nèi)容物的β多樣性接近，而與JCLE140的β多樣性差異較大。

2.2.4 門和屬水平上的微生物物種相對豐度

從門水平觀察，由圖5和表3可知，各組盲腸菌群在門水平主要以厚壁菌門（Firmicutes）、擬桿菌門（Bacteroidetes）、變形菌門（Proteobacteria）為主。與ACG相比，添加JCLE提高了擬桿菌門（Bacteroidetes）相對豐度，而降低了厚壁菌門（Firmicutes）和變形菌門（Proteobacteria）的豐度。從添加的劑量來看，JCLE140提高了擬桿菌門（Bacteroidetes）、藍細菌門（Cyanobacteria）、互養(yǎng)菌門（Synergistetes）相對豐度，并降低變形菌門（Proteobacteria）豐度。JCLE100則提高了厚壁菌門（Firmicutes）、放線菌門（Actinobacteria）、軟壁菌門（Tenericutes）豐度。

從屬水平觀察，由圖6和表4可知，42日齡鐵腳麻肉雞盲腸微生物主要是擬桿菌屬（ Bacteroides）、另枝菌屬（Alistipes）、副擬桿菌屬（Parabacteroides）、巴恩斯氏菌屬（Barnesiella）、糞桿菌屬（Faecalibacterium） 為主。添加JCLE可以改變腸道菌群結(jié)構(gòu)，JCLE140顯著增加了擬桿菌屬（ Bacteroides） 的豐度（ P <0.05），降低了彎曲桿菌屬（ Campylobacter） 的相對豐度（ P <0.05）。與ACG相比，JCLE降低了幽門螺桿菌屬（ Helicobacter） 的豐度，JCLE20和JCLE140降低大腸埃希桿菌_志賀氏桿菌屬（ Escherichia_Shigella ）的豐度。添加JCLE后，JCLE60 Prevotellaceae_UCG_001豐度顯著高于ACG。JCLE100和JCLE140具有提高 Odoribacter 豐度的作用。

3 討論與結(jié)論

腸道不僅是機體營養(yǎng)物質(zhì)消化、吸收、代謝的重要場所，也是機體最大的免疫器官，禁抗后維護腸道健康對家禽的健康養(yǎng)殖至關(guān)重要。目前很多研究表明，腸道微生物菌群結(jié)構(gòu)的變化會影響家禽腸道健康和生產(chǎn)性能。腸道菌群被認為是維持宿主腸道健康的重要因素，通過調(diào)節(jié)營養(yǎng)、代謝和免疫等多種生理功能發(fā)揮重要的作用，被稱為機體的第二大腦[10-12]。雞腸道內(nèi)存在的微生物群包括數(shù)百種細菌，在門水平上主要有厚壁菌門、擬桿菌門、變形桿菌門和放線桿菌門等[13]。腸道中的微生物通過與宿主相互作用影響宿主的許多生理功能，乳酸桿菌屬（ Lactobacillus）、 瘤胃球菌屬（Ruminococcus） 和梭菌屬（ Clostridium） 中的幾種細菌類型與動物生產(chǎn)性能的改善有關(guān)[14]。

植物中含有豐富的酚類化合物，目前研究表明，植物多酚具有抗氧化、抗腫瘤、抗炎、抗肥胖、降血脂和抗菌等功效[15-16]，還可以通過調(diào)控腸道微生物來改善機體的健康，有研究表明，腸道微生物一方面通過將植物多酚轉(zhuǎn)化為活性更高的酚類代謝物來提高其生物活性[17-18]，另一方面可促進或阻止微生物的生長來調(diào)控腸道健康，對腸道致病性細菌發(fā)揮類似益生元的作用或抗菌活性來調(diào)節(jié)腸道微生態(tài)平衡[19]。Sun等研究表明，烏龍茶、綠茶和紅茶中的多酚提取物通過增加雙歧桿菌屬（ Bifidobacterium ?spp.）、乳桿菌屬（ Lactobacillus ?spp.）、腸球菌屬（ Enterococcus ?spp.）顯著影響雞腸道微生物組成來改善家禽的健康[20]。此外，有研究表明，紅葡萄提取物促進了 Alistipes、克雷伯氏菌屬（Klebsiella）、Cloacibacillus、Victivallis 和Akkermansia 的生長，而擬桿菌屬（Bacteroides）、Bifidobacteria、Blautia coccoides、Subdoligranulum 和Anaeroglobus ?等菌的生長減少[21]。許多研究表明，擬桿菌門是腸道內(nèi)的有益菌，可直接介導(dǎo)碳水化合物、類固醇、膽汁酸和糖類的代謝，而厚壁菌門則與體內(nèi)的能量代謝和脂質(zhì)沉積有關(guān)[22-23]。有研究表明， Odoribacter 和Bacteroides 是家禽腸道中2種常見的細菌，屬于與營養(yǎng)代謝正相關(guān)的擬桿菌科，這些微生物具有維持腸道完整性和提高免疫力等多種生理功能。 Parabacteroides distasonis ?被認為是腸道中的有益細菌，可通過產(chǎn)生琥珀酸和膽汁酸來調(diào)節(jié)宿主的新陳代謝并減輕新陳代謝的功能障礙[23-24]。研究表明，雞盲腸群落的優(yōu)勢菌門是厚壁菌門（Firmicutes），但也有報道稱其優(yōu)勢菌門是擬桿菌門（Bacteroidetes）。本試驗結(jié)果表明，Bacteroidetes是42日齡肉仔雞盲腸微生物群落的優(yōu)勢菌門，與張雪等報道的結(jié)果[25-26]一致。Claesson等在人類上的研究表明，低劑量的抗生素降低了Bacteroidetes（ Bacteroides ?and ?Parabacteroides ）比例，增加了Firmicutes （ Alistipes ）的比例，高劑量的抗生素增加了Bacteroidetes（ Parabacteroides） 的比例，降低了Firmicutes（ Alistipes ）的比例[27-28]，這與本研究添加的高、中、低的JCLE的結(jié)果類似，表明JCLE具有與抗生素類似的作用效果。

本研究在肉雞飼糧中添加JCLE可提高擬桿菌門（Bacteroidetes）、互養(yǎng)菌門（Synergistetes）相對豐度，并降低變形菌門（Proteobacteria）豐度，提高擬桿菌屬（ Bacteroides）和Odoribacter 的豐度，降低彎曲桿菌屬（ Campylobacter）、大腸埃希桿菌_志賀氏桿菌屬（Escherichia_Shigella ）的豐度，對于改善家禽腸道健康、維持家禽的可持續(xù)生產(chǎn)具有非常重要的意義，但JCLE-腸道微生物-宿主內(nèi)在機制還有待于進一步研究。

JCLE中多酚含量高于黃酮，多酚為（544.31±17.11） mg/g，黃酮為（482.21±12.58） mg/g。

飼糧中添加JCLE可提高肉雞盲腸擬桿菌門（Bacteroidetes）、互養(yǎng)菌門（Synergistetes）相對豐度，并降低變形菌門（Proteobacteria）豐度;提高肉雞盲腸擬桿菌屬（ Bacteroides）和Odoribacter的豐度，降低彎曲桿菌屬（Campylobacter）、大腸埃希桿菌_志賀氏桿菌屬（Escherichia_Shigella） 的豐度。

參考文獻：

[1]劉澤銘，蘇光榮，楊 清. 云南省麻瘋樹資源調(diào)查分析[J]. 林業(yè)科技開發(fā)，2008，22（1）：37-40.

[2]雷福紅，李青青，劉莉莉，等. 麻瘋樹籽仁粕多酚提取工藝優(yōu)化研究[J]. 西南林業(yè)大學(xué)學(xué)報，2019，39（1）：178-183.

[3]李 星，唐 琳，雷 蕾，等. 麻瘋樹葉提取物對惡性黑色素瘤A375細胞增殖抑制及誘導(dǎo)凋亡作用的研究[J]. 時珍國醫(yī)國藥，2010，21（9）：2291-2293.

[4]范樹國，陳安林，邱 璐，等. 3種方法測定麻瘋樹中總黃酮的含量[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010，38（2）：290-291，404.

[5]劉 娟，雷 蕾，唐 琳，等. 麻瘋樹提取物體外抗病毒和殺菌作用的初步研究[J]. 時珍國醫(yī)國藥，2009，20（8）：1890-1893.

[6]曾禮華，嚴 鈁，陳 放. 麻瘋樹葉提取物對雞大腸桿菌、金黃色葡萄球菌的體外抑菌作用[J]. 中國家禽，2004，26（增刊1）：35-37.

[7]楊 帆.? 麻瘋樹葉多酚提取物抗氧化活性研究[D]. 碩士學(xué)位論文，昆明：西南林業(yè)大學(xué)，2016.

[8]Pesti G M. Nutrient requirements of poultry[J]. Animal Feed Science and Technology，1995，56（1）：177-178.

[9]王靜霞，黃艷菲，趙小燕，等. 蕎麥和商品苦蕎茶中總黃酮的含量測定[J]. 食品工業(yè)科技，2013，34（2）：58-60.

[10] Diaz Carrasco J M，Casanova N A，F(xiàn)ernández Miyakawa M E.Microbiota，gut health and chicken productivity：what is the connection？[J]. Microorganisms，2019，7（10）：374.

[11]楊亞晉，郭愛偉，韓明升，等. 家禽腸道健康的生物標志物研究進展[J]. 動物營養(yǎng)學(xué)報，2020，32（5）：1980-1988.

[12]Roberts T，Wilson J，Guthrie A，et al. New issues and science in broiler chicken intestinal health：intestinal microbial composition，shifts，and impacts[J]. World s Poultry Science Journal，2015，71（2）：259-270.

[13]Clavijo V，F(xiàn)lórez M J V.The gastrointestinal microbiome and its association with the control of pathogens in broiler chicken production：a review[J]. Poultry Science，2018，97（3）：1006-1021.

[14]Stanley D，Geier M S，Denman S E，et al. Identification of chicken intestinal microbiota correlated with the efficiency of energy extraction from feed[J]. Veterinary Microbiology，2013，164（1/2）：85-92.

[15]Pandey K B，Rizvi S I.Plant polyphenols as dietary antioxidants in human health and disease[J]. Oxidative Medicine and Cellular Longevity，2009，2（5）：270-278.

[16]郭愛偉，劉莉莉，楊亞晉，等. 植物多酚的生物活性及其在家禽生產(chǎn)中的應(yīng)用[J]. 動物營養(yǎng)學(xué)報，2019，31（2）：491-499.

[17]Jamar G，Estadella D，Pisani L P.Contribution of anthocyanin-rich foods in obesity control through gut microbiota interactions[J]. BioFactors，2017，43（4）：507-516.

[18]Gowd V，Karim N，Shishir M R I，et al. Dietary polyphenols to combat the metabolic diseases via altering gut microbiota[J]. Trends in Food Science & Technology，2019，93：81-93.

[19]Ozdal T，Sela D A，Xiao J B，et al. The reciprocal interactions between polyphenols and gut microbiota and effects on bioaccessibility[J]. Nutrients，2016，8（2）：78.

[20]Sun H Y，Chen Y H，Cheng M，et al. The modulatory effect of polyphenols from green tea，oolong tea and black tea on human intestinal microbiota ?in vitro [J]. Journal of Food Science and Technology，2018，55（1）：399-407.

[21]Sánchez-Patán F，Cueva C，Monagas M，et al. ?In vitro ?fermentation of a red wine extract by human gut microbiota：changes in microbial groups and formation of phenolic metabolites[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry，2012，60（9）：2136-2147.

[22]Hu J L，Nie S P，Wu Q M，et al. Polysaccharide from seeds of ?Plantago asiatica ?L. affects lipid metabolism and colon microbiota of mouse[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry，2014，62（1）：229-234.

[23]李澤民. 苜蓿多糖對沙門氏菌感染肉雞腸道微生物組的調(diào)控機制研究[D]. 泰安：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)，2020.

[24]Wang K，Liao M F，Zhou N，et al. ?Parabacteroides distasonis ?alleviates obesity and metabolic dysfunctions via production of succinate and secondary bile acids[J]. Cell Reports，2019，26（1）：222-235.e5.

[25]張 雪，張 珊，鐘 光，等. 枯草芽孢桿菌對肉雞生長性能、腸道組織形態(tài)和盲腸微生物組成的影響[J]. 動物營養(yǎng)學(xué)報，2020，32（11）：5195-5208.

[26]廖 娟，王 鋼，喻世剛，等. 利用Illumina MiSeq測序平臺分析沐川烏骨黑雞空腸微生物多樣性[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2020，48（24）：178-182.

[27]Claesson M J，Cusack S，O Sullivan O，et al. Composition，variability，and temporal stability of the intestinal microbiota of the elderly[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America，2011，108 （Suppl 1）：4586-4591.

[28]Voreades N，Kozil A，Weir T L.Diet and the development of the human intestinal microbiome[J]. Frontiers in Microbiology，2014，5：494.