977例胎兒羊水染色體檢查結(jié)果分析及其臨床意義

章易琳，倪觀太，王玉萍

(皖南醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院 弋磯山醫(yī)院 1.婦產(chǎn)科；2.檢驗(yàn)科，安徽 蕪湖 241001)

染色體變異是一種可遺傳變異，主要包括結(jié)構(gòu)變異和數(shù)目變異，可使生物體形狀發(fā)生改變，胎兒染色體變異會(huì)使其發(fā)育異常，導(dǎo)致其出現(xiàn)先天缺陷，甚至出現(xiàn)胎兒畸形或死胎[1]。產(chǎn)前診斷是降低出生缺陷發(fā)生率的主要方式，可通過產(chǎn)前診斷盡早發(fā)現(xiàn)存在先天畸形或遺傳缺陷的胎兒，并對(duì)其給予及時(shí)的宮內(nèi)治療或?qū)?yán)重缺陷兒給予終止妊娠，從而可降低缺陷兒出生率[2]。羊水染色體檢查是檢查胎兒染色體及先天性代謝疾病的產(chǎn)前診斷方法，可通過羊膜穿刺術(shù)，對(duì)其進(jìn)行染色體核型分析，能夠了解胎兒細(xì)胞染色體核型，從而可診斷胎兒染色體是否異常[3]。本研究分析977例胎兒產(chǎn)前羊水染色體檢查結(jié)果，旨在探究羊水染色體檢查的臨床價(jià)值，為產(chǎn)前診斷提供理論依據(jù)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 回顧性分析2015年1月～2019年10月在弋磯山醫(yī)院就診的有產(chǎn)前診斷指征的977例高危孕婦的病歷資料，年齡22～47歲，平均(31.56±6.73)歲；產(chǎn)前診斷指征：高齡296例，唐篩高風(fēng)險(xiǎn)412例，無創(chuàng)DNA高風(fēng)險(xiǎn)56例，超聲異常表現(xiàn)79例，不良孕產(chǎn)史77例，其他53例。納入標(biāo)準(zhǔn)：①存在產(chǎn)前診斷指征[4]；②經(jīng)我院倫理委員會(huì)審核通過，孕婦知情同意且簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：①嚴(yán)重心肝腎功能異常者；②存在相關(guān)檢查禁忌證如先兆流產(chǎn)、體溫超過37.5 ℃、前置胎盤者。

1.2 方法

1.2.1 羊水細(xì)胞培養(yǎng) 抽取20 mL羊水，離心、混勻后吸取0.5 mL細(xì)胞懸液接種于50 mL培養(yǎng)瓶中，置于培養(yǎng)箱(37℃、5%)中行羊水培養(yǎng)。

1.2.2 染色體制備 羊水細(xì)胞鏡檢時(shí)可見多個(gè)細(xì)胞克隆后加入20 μg/mL秋水仙素，3 h后刮刀法獲取細(xì)胞，離心處理10 min后，取下層液體，加入8 mL 0.075 mol/L氯化鉀溶液，并在37℃環(huán)境下加1 mL固定液(甲醇：冰乙酸=3∶1)固定5 min，離心，棄上清液，然后按上述操作重復(fù)固定2次，固定完成后進(jìn)行常規(guī)滴片、顯帶、染色處理，參照ISCN2009標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行染色體核型分析。

1.3 觀察指標(biāo) ①統(tǒng)計(jì)羊水細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)果，并分析染色體異常核型及染色體多態(tài)性檢出情況。②比較不同年齡組及不同產(chǎn)前診斷指征異常核型檢出率。③比較不良孕產(chǎn)史高齡產(chǎn)婦異常核型檢出率。④比較無創(chuàng)DNA高風(fēng)險(xiǎn)組高齡產(chǎn)婦異常核型檢出率。

2 結(jié)果

2.1 羊水細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)果 977例孕婦中因細(xì)胞過少及活力不足培養(yǎng)失敗4例，羊水細(xì)胞培養(yǎng)成功973例，成功率為99.59%。

2.2 染色體異常核型檢出率 在染色體結(jié)構(gòu)異常方面，其各種類型檢出率較低；而在染色體數(shù)目異常方面，常染色體數(shù)目異常檢出率較高(4.52%)，見表1。

表1 染色體異常核型檢出率

2.3 染色體多態(tài)性檢出情況 染色體多態(tài)性共檢出72例，其中短臂多態(tài)變異檢出率為31.86%(31/973)，次縊痕區(qū)多態(tài)變異檢出率為42.14%(41/973)。

2.4 不同年齡組異常核型檢出率比較 35～39歲高危產(chǎn)婦異常核型檢出率高于<35歲、≥40歲產(chǎn)婦(χ2=19.763，P<0.05)，見表2。

表2 不同年齡組異常核型檢出率比較

2.5 不同產(chǎn)前診斷指征檢出率比較 無創(chuàng)DNA高風(fēng)險(xiǎn)產(chǎn)婦染色體異常核型檢出率高于其他產(chǎn)前診斷指征，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表3。

2.6 不良孕產(chǎn)史高齡產(chǎn)婦異常核型檢出率比較 夫妻一方存在染色體異常組、唐氏兒分娩史組、畸形兒生育史組各組異常核型檢出率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.081)，見表4。

2.7 無創(chuàng)DNA高風(fēng)險(xiǎn)組高齡產(chǎn)婦異常核型檢出率 21三體高風(fēng)險(xiǎn)組異常核型檢出率高于13三體高風(fēng)險(xiǎn)組及性染色體數(shù)目異常組(P<0.05)，見表5。

表3 不同產(chǎn)前診斷指征異常核型檢出率比較

表4 不良孕產(chǎn)史高齡產(chǎn)婦異常核型檢出率比較

表5 無創(chuàng)DNA高風(fēng)險(xiǎn)組高齡產(chǎn)婦異常核型檢出率

3 討論

大多數(shù)出生缺陷兒為遺傳因素所致，其中以染色體異常最為常見。有報(bào)道指出，通過產(chǎn)前診斷可降低缺陷兒的出生率[5-6]。染色體核型分析是目前產(chǎn)前診斷染色體異常的主要方式，可采取羊水進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，然后通過分析染色體核型來判斷胎兒是否存在遺傳缺陷或先天畸形[7]。本研究對(duì)孕18～22周的高危孕婦進(jìn)行羊水染色體檢查，染色體異常核型檢出率為7.61%，略高于Bhorat等[8]的研究，主要因?yàn)锽horat等的研究在進(jìn)行羊水細(xì)胞培養(yǎng)前，已將B超篩查出的多發(fā)畸形胎兒排除在外，使其染色體核型異常檢出率低于本研究。染色體核型異常主要可分為染色體結(jié)構(gòu)異常和數(shù)目異常，但目前尚無報(bào)道指出何種染色體變異類型的發(fā)生率較高。本研究發(fā)現(xiàn)在染色體結(jié)構(gòu)異常上，其各種類型檢出率較低；而在染色體數(shù)目異常上，常染色體數(shù)目異常檢出率較高，這主要是生殖細(xì)胞在第一次或第二次減數(shù)分裂時(shí)，染色體不分離導(dǎo)致的，而隨著孕婦年齡的增長(zhǎng)，其出現(xiàn)染色體不分離的概率也增加，且本研究中高齡產(chǎn)婦所占比例較大，從而導(dǎo)致常染色體數(shù)目異常的檢出率較高。

隨著二孩政策的開放，高齡產(chǎn)婦也隨之增加。先天愚型胎兒等缺陷兒的出生率會(huì)隨著孕婦年齡的增加而成倍增加，這表明產(chǎn)婦的年齡與先天缺陷的發(fā)生率密切相關(guān)[10]。高齡產(chǎn)婦的卵子質(zhì)量遠(yuǎn)低于最佳孕齡女性，其染色體也會(huì)發(fā)生變化，易導(dǎo)致胎兒畸形的出現(xiàn)。本研究發(fā)現(xiàn)，35～39歲高危產(chǎn)婦異常核型檢出率高于<35歲者，這說明染色體核型異常發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)性與年齡有關(guān)，因此需對(duì)高齡產(chǎn)婦做好排畸檢查，以減少畸形兒的出生。但本研究結(jié)果顯示35～39歲高危產(chǎn)婦異常核型檢出率高于≥40歲產(chǎn)婦，與馮杏琳等[11-12]研究結(jié)果存在差異，可能是由于40歲以上高齡組樣本量較小，檢出率低于實(shí)際發(fā)生率。

產(chǎn)前診斷一般分為創(chuàng)傷性、無創(chuàng)性兩類，創(chuàng)傷性產(chǎn)前診斷主要包括羊膜腔穿刺、臍血取樣等，超聲和無創(chuàng)DNA是最常用的無創(chuàng)性產(chǎn)前診斷方法，但超聲只能對(duì)已出現(xiàn)的器官或肢體畸形做出診斷，無法判斷染色體異常疾病[13]。無創(chuàng)DNA產(chǎn)前檢測(cè)是一種新型產(chǎn)前檢測(cè)方法，用于檢測(cè)各種染色體數(shù)目異常類疾病，無創(chuàng)DNA高風(fēng)險(xiǎn)是指胎兒患先天愚型的概率較高[14]。有報(bào)道指出，無創(chuàng)DNA檢測(cè)染色體異常核型的準(zhǔn)確率較高[15]。本研究結(jié)果顯示，無創(chuàng)DNA高風(fēng)險(xiǎn)產(chǎn)婦染色體異常核型檢出率高于其他產(chǎn)前診斷指征(P<0.05)，且超聲診斷的檢出率僅為7.59%，這說明無創(chuàng)DNA檢測(cè)的準(zhǔn)確率較高，與上述研究一致，因此可將無創(chuàng)DNA檢查應(yīng)用于產(chǎn)前診斷中，但無創(chuàng)DNA由于價(jià)格昂貴，現(xiàn)階段尚不能完全普及。21三體綜合征檢查又稱為唐氏綜合征檢查，本研究在進(jìn)行無創(chuàng)DNA高風(fēng)險(xiǎn)檢測(cè)時(shí)，發(fā)現(xiàn)21三體高風(fēng)險(xiǎn)組異常核型檢出率高于13三體高風(fēng)險(xiǎn)組及性染色體數(shù)目異常組，與古麗娜孜·米吉提等[16]的研究結(jié)果相同，說明胎兒染色體異常中21號(hào)染色體異常發(fā)生率較高，這主要是因?yàn)樘剖暇C合征的發(fā)病率高于其他染色體數(shù)目異常疾病。

不良孕產(chǎn)史是指患者曾經(jīng)有過死胎、出生缺陷等非正常妊娠情況。有生育過畸形或染色體異?；純旱漠a(chǎn)婦再次出現(xiàn)染色體核型異常的概率遠(yuǎn)高于正常產(chǎn)婦，這表明不良孕產(chǎn)史與產(chǎn)婦再次生育時(shí)出現(xiàn)染色體核型異常具有相關(guān)性[17]。夫妻一方存在染色體異常者生育染色體異常核型胎兒的概率較大，這主要是因?yàn)榉蚱抟环綌y帶異常染色體時(shí)遺傳給胎兒的概率遠(yuǎn)高于正常人群。但在本研究中，不良孕產(chǎn)史各組異常核型檢出率比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，這與唐敬龍等[18]大樣本不良孕產(chǎn)夫婦染色體核型分析結(jié)果不一致。筆者認(rèn)為主要與本研究不良孕產(chǎn)史高齡組樣本量較小有關(guān)，有待與進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量進(jìn)行對(duì)照研究。在臨床產(chǎn)診中該類孕婦仍需按時(shí)進(jìn)行孕檢及相關(guān)檢查，以做到早發(fā)現(xiàn)早干預(yù)，減少缺陷兒的出生。

綜上所述，在染色體核型異常中，常染色體數(shù)目異常的檢出率高于性染色體異常檢出率，無創(chuàng)DNA檢測(cè)診斷染色體異常核型的準(zhǔn)確率高于其他產(chǎn)前診斷指征。21三體高危孕婦異常核型檢出率高于其他染色體數(shù)目異常孕婦。因此，需加強(qiáng)高齡不良孕史及具有DNA高風(fēng)險(xiǎn)孕婦的唐氏兒無創(chuàng)產(chǎn)前篩查，以減少缺陷兒的出生，提高出生人口質(zhì)量。