小檗堿對(duì)利血平誘導(dǎo)的抑郁癥小鼠行為學(xué)影響的實(shí)驗(yàn)研究

王晴 劉競(jìng)元 齊曉娟

[摘要]目的探討小檗堿對(duì)利血平誘導(dǎo)的抑郁癥模型小鼠行為學(xué)變化的影響。方法將40只實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型組、小檗堿組及氟西汀組，每組各10只。模型組、小檗堿組及氟西汀組小鼠每日腹腔注射利血平200 mg/kg（生理鹽水配制），正常對(duì)照組每日腹腔注射等量的生理鹽水，每組小鼠連續(xù)注射4周。造模4周后采用灌胃法給藥，每天1次，共21 d。小檗堿組190 mg/kg灌胃;氟西汀組3 mg/kg灌胃;正常對(duì)照組和模型組每天給予同體積蒸餾水灌胃。采用強(qiáng)迫游泳、懸尾及高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)法觀察小鼠的行為學(xué)變化。結(jié)果與正常對(duì)照組比較，模型組的懸尾不動(dòng)時(shí)間及強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間均明顯延長(zhǎng)（P<0.01）。與正常對(duì)照組比較，小檗堿組強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間縮短（P<0.05）。與模型組比較，小檗堿組的懸尾不動(dòng)時(shí)間及強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間均縮短（P<0.05）;氟西汀組的懸尾不動(dòng)時(shí)間及強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間均明顯縮短（P<0.01）。與正常對(duì)照組比較，模型組開臂區(qū)進(jìn)入次數(shù)明顯減少（P<0.05）;與模型組比較，氟西汀組開臂區(qū)進(jìn)入次數(shù)明顯增多（P<0.01）。與正常對(duì)照組比較，模型組開臂區(qū)滯留時(shí)間明顯縮短（P<0.05）;與模型組比較，小檗堿組開臂區(qū)滯留時(shí)間明顯延長(zhǎng)（P<0.01），氟西汀組開臂區(qū)滯留時(shí)間明顯延長(zhǎng)（P<0.01）。結(jié)論小檗堿具有抗抑郁作用。

[關(guān)鍵詞]小檗堿;抑郁癥;小鼠;行為學(xué)

[中圖分類號(hào)]R285.5??? [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A??? [文章編號(hào)]2095-0616（2022）05-0023-04

Experimental study of the effect of berberine on behaviors of mice with reserpine-induced depression

WANG Qing??? LIU Jingyuan??? QI Xiaojuan

Staff Room of Physiology，Qiqihar Medical University，Heilongjiang，Qiqihar 161006，China

[Abstract]Objective To investigate the effect of berberine on the behavioral changes in a mouse model of reserpine-induced depression. Methods A total of 40 experimental animals were randomly divided into the normal control group，the model group，the berberine group and the fluoxetine group，with 10 mice in each group. The mice in the model group，the berberine group and the fluoxetine group were intraperitoneally injected with 200 mg/kg reserpine （prepared in normal saline）every day，the normal control group was intraperitoneally injected with the same amount of normal saline every day，and the injection in each group lasted for 4 weeks. After 4 weeks of modeling，the drug was administered by gavage once a day for 21 days. The berberine group was given 190 mg/kg by gavage;the fluoxetine group was given 3 mg/kg by gavage;the normal control group and the model group were given the same volume of distilled water by gavage every day. The behavioral changes of mice were observed by forced swim test （FST），tail suspension test （TST）and elevated plus-maze test. Results Compared with the normal control group，the immobility time in TST and immobility time in FST in the model group were significantly longer （P<0.01）. Compared with the normal control group，the immobility time of forced swimming in the berberine group was shortened （P<0.05）. Compared with the model group，the immobility time in TST and immobility time in FST in the berberine group were shorter （P<0.05）;the immobility time in TST and immobility time in FST in the fluoxetine group were significantly shorter （P<0.01）. Compared with the normal control group，the number of entries into the open arms in the model group was significantly reduced （P<0.05）. Compared with the model group，the number of entries into the open arms in the fluoxetine group increased significantly （P<0.01）. Compared with the normal control group，the time spent in the open arms in the model group was significantly shorter （P<0.05）. Compared with the model group，the time spent in the open arms in the berberine group was significantly longer （P<0.01）;and the time spent in the open arms in the fluoxetine group was significantly longer （P<0.01）. Conclusion Berberine has antidepressant effects.

[Key words] Berberine;Depression;Mouse;Behavior

抑郁癥是一種常見(jiàn)的精神障礙性疾病，以顯著而持久的情緒低落為主要臨床表現(xiàn)，嚴(yán)重者會(huì)出現(xiàn)悲觀厭世的情緒和自殺行為，患者自殺率高達(dá)12%～14%[1]。近年來(lái)由于人們生活和工作壓力的增大，該病發(fā)病率逐年上升且發(fā)病人群越發(fā)廣泛，嚴(yán)重影響人們的身心健康[2]。在臨床上，抑郁癥還會(huì)繼發(fā)或伴發(fā)其他疾病，甚至?xí)谝欢ǔ潭壬霞又仄洳∏閇3-4]。因此，人們對(duì)抑郁癥的治療越來(lái)越重視。西藥治療抑郁癥主要選用丙咪嗪、氟哌噻噸美利曲辛片及新型抗抑郁焦慮藥物鹽酸帕羅西汀等，但存在禁忌證多、成癮性大、副作用明顯、停藥后易復(fù)發(fā)、有效率較低、患者依從性較差等問(wèn)題[5-6]。因此，研究者將研究重點(diǎn)逐漸聚焦在具有廣闊前景的植物藥領(lǐng)域，特別是我國(guó)傳統(tǒng)的中藥領(lǐng)域，當(dāng)前研究并開發(fā)安全且有效的抗抑郁中草藥已成為研究者的共識(shí)，是目前一個(gè)新的研究熱點(diǎn)[7]。本實(shí)驗(yàn)研究了中藥小檗堿對(duì)小鼠抑郁癥模型行為學(xué)改變的影響，為臨床抑郁癥的治療探討新思路并提供相應(yīng)的數(shù)據(jù)支撐。

1??? 材料與方法

1.1??? 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

40只清潔級(jí)ICR小鼠，購(gòu)于哈爾濱醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物部，動(dòng)物許可證號(hào)為SCXK（黑）2013-001，雌雄各半，體重（20.45±2.23）g，所有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物均飼養(yǎng)在齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，動(dòng)物許可證號(hào)為SYXK（黑）2016-001。所有小鼠均自由進(jìn)食和飲水，分籠飼養(yǎng)，每日日光燈照明時(shí)間為12 h，溫濕度條件分別為（22.32±2.16）℃和40%～60%，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的使用嚴(yán)格遵循3R原則。

1.2??? 試劑與儀器

利血平注射液購(gòu)自天津金耀藥業(yè)有限公司（國(guó)藥準(zhǔn)字H12020905），鹽酸小檗堿購(gòu)自武漢遠(yuǎn)成共創(chuàng)科技有限公司，鹽酸氟西汀片購(gòu)自禮來(lái)蘇州制藥有限公司（國(guó)藥準(zhǔn)字J20080016），高架十字迷宮為成都泰盟科技有限公司生產(chǎn)。

1.3??? 方法

將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型組、小檗堿組及氟西汀組，每組10只，每組小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)3 d后造模，正常對(duì)照組小鼠每日腹腔注射等量的生理鹽水，模型組、小檗堿組及氟西汀組小鼠每日腹腔注射利血平200 mg/kg（生理鹽水配制），每組小鼠連續(xù)注射4周。造模4周后采用灌胃法給藥，給藥劑量按動(dòng)物體重折算系數(shù)公式換算。氟西汀組3 mg/kg灌胃;小檗堿組190 mg/kg灌胃;每天給予模型組及正常對(duì)照組同體積的蒸餾水灌胃。每天1次，共21 d。

1.3.1??? 懸尾實(shí)驗(yàn)??? 將膠帶粘住尾巴的小鼠倒掛于水平木棍上，保持小鼠頭部與地面距離為5～6 cm，分別記錄每只小鼠在實(shí)驗(yàn)6 min內(nèi)的后4 min累積不動(dòng)的時(shí)間。

1.3.2??? 強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)??? 將小鼠置于高25 cm、直徑18 cm柱形器皿內(nèi)，內(nèi)裝有清水，溫度保持在（25.00±1.00）℃，分別記錄每只小鼠在實(shí)驗(yàn)6 min 內(nèi)的后4 min累積不動(dòng)的時(shí)間。

1.3.3??? 高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)??? 測(cè)試前將待測(cè)小鼠置于一個(gè)鼠籠內(nèi)，先任其自由探索5 min，然后迅速置于高架十字迷宮的中央平臺(tái)處，使其頭部正對(duì)其中任一開放臂，釋放后即開始測(cè)試，每只小鼠測(cè)試5 min。取出小鼠后，用酒精棉球徹底擦拭箱底，待酒精完全揮發(fā)后，繼續(xù)下一只小鼠的測(cè)試[8]。

1.4??? 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2??? 結(jié)果

2.1??? 懸尾實(shí)驗(yàn)結(jié)果比較

由于實(shí)驗(yàn)過(guò)程中部分小鼠死亡，最終各組小鼠數(shù)量見(jiàn)表1所列。與正常對(duì)照組比較，模型組、小檗堿組及氟西汀組的懸尾不動(dòng)時(shí)間明顯延長(zhǎng)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=7.080，P=0.001）;與正常對(duì)照組比較，模型組懸尾不動(dòng)時(shí)間明顯延長(zhǎng)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.000），與正常對(duì)照組比較，小檗堿組懸尾不動(dòng)時(shí)間延長(zhǎng)，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.275），與正常對(duì)照組比較，氟西汀組懸尾不動(dòng)時(shí)間延長(zhǎng)，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.246）。與模型組比較，小檗堿組懸尾不動(dòng)時(shí)間明顯縮短，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.005）;與模型組比較，氟西汀組懸尾不動(dòng)時(shí)間明顯縮短，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.002）。見(jiàn)表1。

2.2??? 強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)結(jié)果比較

與正常對(duì)照組比較，模型組、小檗堿組及氟西汀組的強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間有明顯改變，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=11.916，P=0.000）;與正常對(duì)照組比較，模型組強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間明顯延長(zhǎng)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.002），與正常對(duì)照組比較，小檗堿組強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間縮短，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.014），與正常對(duì)照組比較，氟西汀組強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間縮短，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.352）。與模型組比較，小檗堿組強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間明顯縮短，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.000）;與模型組比較，氟西汀組強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間明顯縮短，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.000）。見(jiàn)表2。

2.3??? 高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果比較

與正常對(duì)照組比較，模型組、小檗堿組及氟西汀組開臂區(qū)進(jìn)入次數(shù)有改變，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=3.300，P=0.034）;與正常對(duì)照組比較，模型組開臂區(qū)進(jìn)入次數(shù)減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.023），與正常對(duì)照組比較，小檗堿組開臂區(qū)進(jìn)入次數(shù)減少，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.179），與正常對(duì)照組比較，氟西汀組開臂區(qū)進(jìn)入次數(shù)增多，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.726）。與模型組比較，小檗堿組開臂區(qū)進(jìn)入次數(shù)增多，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.366）;與模型組比較，氟西汀組開臂區(qū)進(jìn)入次數(shù)增多，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.009）。

與正常對(duì)照組比較，模型組、小檗堿組及氟西汀組開臂區(qū)滯留時(shí)間明顯改變，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=4.528，P=0.010）;與正常對(duì)照組比較，模型組開臂區(qū)滯留時(shí)間減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.010），與正常對(duì)照組比較，小檗堿組開臂區(qū)滯留時(shí)間延長(zhǎng)，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.648），與正常對(duì)照組比較，氟西汀組開臂區(qū)滯留時(shí)間延長(zhǎng)，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.648）。與模型組比較，小檗堿組開臂區(qū)滯留時(shí)間延長(zhǎng)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.005）;與模型組比較，氟西汀組開臂區(qū)滯留時(shí)間延長(zhǎng)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.003）。見(jiàn)表3。

3??? 討論

抑郁癥是一種常見(jiàn)的精神類疾病，主要癥狀一般表現(xiàn)為長(zhǎng)期情緒低落、思維遲鈍、意志力缺乏，嚴(yán)重時(shí)可表現(xiàn)為自殺行為[9]。流行病學(xué)調(diào)查顯示，抑郁癥已經(jīng)成為繼冠心病之后影響人類健康的第二大類疾病，對(duì)人類的健康產(chǎn)生極大的危害，嚴(yán)重影響人們的日常生活及工作，因而受到越來(lái)越多的關(guān)注[10-11]。

行為學(xué)測(cè)試方法有很多種，目前常見(jiàn)且被多數(shù)學(xué)者公認(rèn)的最標(biāo)準(zhǔn)的行為學(xué)測(cè)試方法是強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)和懸尾實(shí)驗(yàn)，由Isingrini等[12]發(fā)明，這兩種測(cè)試方法是通過(guò)記錄動(dòng)物在強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)和懸尾實(shí)驗(yàn)中的相對(duì)客觀指標(biāo)即不動(dòng)時(shí)間來(lái)量化反映動(dòng)物在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的絕望程度[13]，因其實(shí)驗(yàn)操作簡(jiǎn)單以及條件容易控制，且多種抗抑郁藥急性給藥后其反應(yīng)較為敏感，故常用于抗抑郁藥物的初篩[11，14-15]。

此外，高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)也是一種比較常見(jiàn)的評(píng)估動(dòng)物行為學(xué)的測(cè)試方法。通常情況下，正常小鼠在實(shí)驗(yàn)中進(jìn)入開放臂較進(jìn)入閉合臂的次數(shù)更多、滯留時(shí)間也更長(zhǎng)，表示其探索新環(huán)境的行為能力更強(qiáng)，而抑郁模型小鼠進(jìn)入開放臂的次數(shù)及滯留時(shí)間較正常小鼠明顯減少[16-17]。

小檗堿是中草藥如黃連、刺檗、白毛茛等的根莖和皮中的重要成分之一，研究顯示其具有多種藥理作用，如抑菌、抗炎、抗病毒等，且對(duì)多種疾病具有較好的治療作用，如腫瘤、糖尿病、心血管疾病、消化道疾病等[18-19]。目前多項(xiàng)研究表明小檗堿可顯著縮短動(dòng)物在強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)中的不動(dòng)時(shí)間，并具有抗焦慮作用，其作用機(jī)制可能與某些神經(jīng)遞質(zhì)如單胺類神經(jīng)遞質(zhì)及5-羥色胺受體等有關(guān)[7，20-23]。

本研究顯示，小檗堿能明顯縮短動(dòng)物的強(qiáng)迫游泳及懸尾不動(dòng)時(shí)間，與文獻(xiàn)研究結(jié)果一致[20-22]。高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與模型組比較，小檗堿組開臂區(qū)滯留時(shí)間更長(zhǎng)，表明該實(shí)驗(yàn)組小鼠在行為上具有較強(qiáng)的探索新環(huán)境的能力，與文獻(xiàn)研究結(jié)果一致[23]。但模型組與小檗堿組開臂區(qū)進(jìn)入次數(shù)比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），可能與本研究觀察的動(dòng)物數(shù)量有限有關(guān)，今后應(yīng)擴(kuò)大研究動(dòng)物數(shù)量，進(jìn)一步觀察小檗堿的抗抑郁效果。

綜合所述，提示小檗堿在利血平誘導(dǎo)的抑郁模型小鼠中有抗抑郁作用，其作用機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

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