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    系統(tǒng)性紅斑狼瘡的免疫學(xué)檢驗聯(lián)合檢測的診斷價值

    2022-04-29 09:08:38侯娟陳煥文陳建麗陳文青
    當(dāng)代醫(yī)學(xué) 2022年12期
    關(guān)鍵詞:紅斑狼瘡補體系統(tǒng)性

    侯娟,陳煥文,陳建麗,陳文青

    (廈門大學(xué)附屬第一醫(yī)院杏林分院檢驗科,福建 廈門 361000)

    臨床上,系統(tǒng)性紅斑狼瘡屬于一種常見的免疫系統(tǒng)疾病,好發(fā)于青年女性群體,其具體發(fā)病機(jī)制目前尚未完全明確,通常認(rèn)為與環(huán)境因素、免疫異常、感染、內(nèi)分泌及遺傳等因素密切相關(guān)[1-2]。系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者的機(jī)體免疫功能低下,且可能會出現(xiàn)多種自身抗體功能異常及B、T 淋巴細(xì)胞異常等情況,因該病的臨床表現(xiàn)多樣,易出現(xiàn)誤診情況[3]。基于此,本研究選取2016年6月至2019年3月本院收治的128 例系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者作為研究對象,均測定免疫球蛋白G(immunoglobulin-G,IgG)、免疫球蛋白A(immunoglobulin-A,IgA)、免疫球蛋白M(immunoglobulin-M,IgM)及補體β1C-球蛋白(C3)、β1E-球蛋白(C4),并行可提取核抗原(extractable nucler antigen,ENA)檢測、抗雙鏈脫氧核糖核酸抗體(double-stranded DNA,ds-DNA)抗體檢測與抗核抗體譜(anti-nuclear antibody spectra,ANAS)檢測,旨在探究系統(tǒng)性紅斑狼瘡診斷中免疫學(xué)檢驗聯(lián)合檢測的應(yīng)用價值,現(xiàn)報道如下。

    1 資料與方法

    1.1 臨床資料 選取2016 年6 月至2019 年3 月本院收治的128 例系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者作為甲組,另選取同期120 例健康體檢者作為乙組。甲組男70例,女58 例;年齡21~58 歲,平均(46.28±6.38)歲;活動期54例作為活動組,非活動期74例,作為非活動組。乙組男68 名,女52 名,年齡23~59 歲,平均(46.19±6.35)歲。兩組臨床資料比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義,具有可比性。本研究經(jīng)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會審核批準(zhǔn)。納入標(biāo)準(zhǔn):均對本研究知情同意并自愿簽署知情同意書;無精神障礙者;能正常交流與溝通者。排除標(biāo)準(zhǔn):拒絕參與本研究者;依從性低者。

    1.2 方法 所有研究對象均行免疫學(xué)聯(lián)合檢測,采集其5 ml清晨空腹靜脈血,以3 500 r/min離心15 min,獲取150 μl以上血清,置于-20 ℃的冰箱中保存待檢。

    IgG、IgA、IgM 及補體C3、C4 測定方式:均采用散射速率免疫比濁法進(jìn)行測定,于同一膜片上固化相應(yīng)特異性抗原,充分利用微孔濾膜的滲透、凝集及濃縮作用,捕捉被檢樣品中的特異性IgG抗體,在固相膜上,抗原抗體以極快的速度形成復(fù)合物,并與IgG免疫金試劑發(fā)生反應(yīng),固相膜上有紅色斑點出現(xiàn)。

    ENA、ds-DNA 抗體與ANAS 測定方式。①試劑與儀器:顯微鏡(日本尼康公司);ENA、抗ds-DNA 試劑(廣州萬孚生物公司);ANAS 試劑(歐蒙醫(yī)學(xué)實驗診斷有限公司)。②測定方式:ENA 采用免疫印跡法測定,ANAS采用間接免疫熒光法測定,采用識別儀對圖像進(jìn)行采集,分析不同點陣灰度值,判定測定結(jié)果;采用酶聯(lián)免疫吸附法測定抗ds-DNA抗體,采用樣本緩沖液稀釋待檢血清,在樣本槽中分別加入稀釋后的血清、標(biāo)準(zhǔn)品及陰陽性對照,在室溫條件下進(jìn)行溫育與洗板,加入酶結(jié)合物后,再次進(jìn)行溫育、洗板,將底物液加入,滴入終止液,將450 nm 作為比色,波長參考620~650 nm。測定ANA 時,采用間接免疫熒光法,采用PBS 吐溫緩沖液稀釋血清標(biāo)本,一直加到反應(yīng)區(qū),采用陰陽血清進(jìn)行對照;經(jīng)溫室溫育、沖洗、浸泡,加入抗人球蛋白,再次溫浴、浸泡,采用PBS 封片。以猴肝細(xì)胞、人喉癌細(xì)胞Hep-2作為ANA基質(zhì),采用熒光鏡進(jìn)行觀察,陽性判定標(biāo)準(zhǔn)為效價>1∶100。

    IgG 測定方式:人血清中抗線粒體抗體M2 型(antimitochon-drial antibody M2,AMA-M2)、抗核糖體P蛋白(anti-ribosomal P-protein antibody,APRA)、抗組蛋白(histone)、抗核小體(anti-nucleosome anti-body,AnuA)、抗增殖細(xì)胞核抗原(proliferatingcelnuclearantigen,PCNA)、抗著絲點B、抗Jo-1、抗PM-Scl、抗Scl-70、抗Ro-52、抗SS-B、抗SS-A、抗Sm、抗nRNP/Sm均可采用線性免疫測定法進(jìn)行檢測,顯色結(jié)果灰度值采用EUROLineScan軟件進(jìn)行掃描分析,陽性判定標(biāo)準(zhǔn)為灰度值≥11,弱陽性判定標(biāo)準(zhǔn)為灰度值6~10,陰性判定標(biāo)準(zhǔn)為灰度值≤5。

    1.3 觀察指標(biāo) 比較各組IgG、IgA、IgM 及其補體C3、C4測定值,并比較ENA檢測、ds-DNA抗體檢測與ANAS檢測結(jié)果。

    1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 22.0統(tǒng)計學(xué)軟件分析數(shù)據(jù),計量資料以“±s”表示,組間比較采用t檢驗,計數(shù)資料以[n(%)]表示,組間比較采用χ2檢驗,以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 各組檢測指標(biāo)比較 活動組IgA、IgG、IgM 均高于乙組,C3、C4 均低于乙組(P<0.05);非活動組C3低于乙組,IgA、IgG高于乙組(P<0.05),IgM、C4與乙組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義,見表1。

    表1 各組檢測指標(biāo)比較(±s,mg/L)

    表1 各組檢測指標(biāo)比較(±s,mg/L)

    注:IgG,免疫球蛋白-G;IgA,免疫球蛋白-A;IgM,免疫球蛋白-M;C3,β1C-球蛋白;C4,β1E-球蛋白。與乙組比較,aP<0.05

    組別活動組(n=54)非活動組(n=74)乙組(n=120)F值P值IgA 3.93±0.52a 2.15±0.58a 1.21±0.16 56.639<0.05 IgG 22.15±3.63a 19.63±2.96a 11.62±1.58 128.963<0.05 IgM 2.56±0.88a 1.28±0.63 1.25±0.16 225.632<0.05 C3 0.43±0.12a 0.95±0.16a 1.15±0.63 196.357<0.05 C4 0.11±0.02a 0.29±0.06 0.30±0.05 296.357<0.05

    2.2 甲組、乙組陽性測定結(jié)果比較 甲組ENA、ds-DNA 抗體與ANAS 各項測定指標(biāo)的陽性率均高于乙組(P<0.05),見表2。

    表2 甲組、乙組陽性測定結(jié)果比較[n(%)]

    3 討論

    系統(tǒng)性紅斑狼瘡屬于自身免疫系統(tǒng)疾病之一,其病變會累及多器官與組織,同時,患者體內(nèi)會出現(xiàn)各種針對正常細(xì)胞的自身抗體[4-5],且抗體含量大,親和力強,若不及時采取有效治療措施,會進(jìn)一步加重病情[6-7]。該病的免疫學(xué)異常主要表現(xiàn)為血清中出現(xiàn)以ANA為代表的各種自身抗體譜,細(xì)胞核成分為ANA 的靶抗原,包括抗核仁抗體、抗非組蛋白抗體、抗組蛋白抗體及抗DNA抗體[8]。本研究結(jié)果顯示,活動組IgA、IgG、IgM 均高于乙組,C3、C4均低于乙組(P<0.05);非活動組IgA、IgG、C3 均低于乙組(P<0.05),IgM、C4 與乙組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義。甲組ENA、ds-DNA 抗體與ANAS 各項測定指標(biāo)的陽性率均高于乙組(P<0.05),提示補體系統(tǒng)被激活后,補體成分被消耗,免疫球蛋白水平及其補體與系統(tǒng)性紅斑狼瘡的活動程度存在一定相關(guān)性。與其他補體成分相比,系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者的C4補體水平降低時間更早,回升更晚,可在預(yù)后、療效與病情診斷中發(fā)揮一定作用?,F(xiàn)階段,Sm 抗體、抗ds-DNA 是臨床公認(rèn)的系統(tǒng)性紅斑狼瘡標(biāo)志性抗體,其中抗ds-DNA 陽性率為60%~90%,滴度與活動性呈正向相關(guān),當(dāng)其持續(xù)升高時,提示腎臟嚴(yán)重受損[9-10]。其次,u1RNP、Sm 均具有較高特異度,且不受臨床治療、病情活動等因素影響,但其陽性率相對較低。本研究中,ulRNP、Sm 均陽性率為18.75%,與普遍研究相似。SS-B、SS-A陽性者和新生兒紅斑狼瘡、亞急性皮膚型紅斑狼瘡存在密切相關(guān)性,所以對其進(jìn)行檢測利于疾病預(yù)后判斷與分型。間接免疫熒光法是臨床用來測定ANAS 的經(jīng)典方式,從理論上來說,抗ds-DNA抗體或ENA為陽性時,ANAS也為陽性。但從臨床實踐來看,部分患者ANAS仍漏檢。

    綜上所述,系統(tǒng)性紅斑狼瘡診斷中免疫學(xué)檢驗聯(lián)合檢測的應(yīng)用價值較高,可輔助判斷患者病情嚴(yán)重程度與預(yù)后情況。

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