玉米糖肽的納濾脫鹽工藝

夏春榮， 王曉杰， 曲 悅

（齊齊哈爾大學(xué) 食品與生物工程學(xué)院/黑龍江省玉米深加工理論與技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，黑龍江 齊齊哈爾 161006）

轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶（TGase）在食品工業(yè)中被廣泛應(yīng)用，如乳品、肉類、烘焙食品等加工領(lǐng)域[1]。 根據(jù)?；荏w的不同，TGase 可以催化3 種類型反應(yīng)：交聯(lián)反應(yīng)、脫?；磻?yīng)和酶法糖基化反應(yīng)。 在酶法糖基化反應(yīng)中，由含有伯胺基團(tuán)的糖作為?；荏w[2]。 目前，TGase 催化的酶法糖基化反應(yīng)已經(jīng)成功應(yīng)用于多種食物蛋白質(zhì)和多肽的改性中，如酪蛋白、大豆蛋白質(zhì)、魚皮膠原蛋白肽、小麥谷蛋白肽等。 與未糖基化的蛋白質(zhì)和多肽相比，糖基化修飾產(chǎn)物的溶解性、表面疏水性、熱穩(wěn)定性等功能性質(zhì)以及抗氧化和抗菌等生物活性均顯著提高[3-8]。因此，TGase 途徑的酶法糖基化反應(yīng)在改善食物蛋白質(zhì)和多肽功能性質(zhì)方面顯示出良好的應(yīng)用潛力。

玉米糖肽是玉米蛋白質(zhì)先經(jīng)蛋白酶水解獲得低相對(duì)分子質(zhì)量玉米肽，再在TGase 催化下與氨基糖共價(jià)結(jié)合的產(chǎn)物。 在乙醇誘導(dǎo)的大鼠亞急性肝損傷模型中，與未糖基化的玉米肽相比，玉米糖肽顯示出更高的拮抗酒精性肝損傷活性，在食品、醫(yī)藥、保健食品等領(lǐng)域顯現(xiàn)出良好的應(yīng)用前景[9]。 但是，在玉米糖肽的制備過程中，為了維持蛋白酶和TGase的催化活性，在玉米蛋白質(zhì)的酶法水解和糖基化過程均會(huì)因調(diào)節(jié)酸堿度而引入大量的鹽分，使玉米糖肽成為高鹽食品。 研究表明，食鹽是造成高血壓和心血管疾病的重要原因之一[10]，因此，玉米糖肽中過多的鹽分會(huì)限制其作為保健食品及食品基料在食品工業(yè)中的應(yīng)用。 另外，糖基化反應(yīng)體系中未反應(yīng)的D-氨基葡萄糖還沒有有效去除方法， 尤其是沒有適用于工業(yè)規(guī)模生產(chǎn)的去除方法。 因此，為了促進(jìn)玉米糖肽的開發(fā)與應(yīng)用，需要從玉米糖肽中去除部分鹽分和未反應(yīng)的D-氨基葡萄糖。 在眾多適合生物活性物質(zhì)的脫鹽方法中，納濾因具有對(duì)單價(jià)離子截留率低、操作成本低、適合工業(yè)規(guī)模擴(kuò)大、不破壞被分離物質(zhì)的生物活性，同時(shí)具有脫鹽和濃縮于一體的效果等特點(diǎn)，已經(jīng)成功應(yīng)用于玉米肽、花生肽、魚皮膠原肽等生物活性肽的脫鹽處理，脫鹽率一般在42.56%～95.90%[11-15]。 另外， 納濾脫鹽處理時(shí)，反應(yīng)體系中糖的存在對(duì)氯化鈉的截留率影響不大[16]，說明納濾也適用于玉米糖肽的脫鹽處理。

作者以D-氨基葡萄糖共價(jià)修飾玉米肽的產(chǎn)物玉米糖肽溶液為原料，以膜通量、電導(dǎo)率、脫鹽率、短肽回收率以及納濾后產(chǎn)物的自由基清除率和Fe2＋-螯合率為測(cè)量指標(biāo)，確定相對(duì)分子質(zhì)量200 納濾膜對(duì)玉米糖肽抗氧化活性影響較小的納濾脫鹽工藝， 同時(shí)考察納濾對(duì)反應(yīng)體系中未反應(yīng)D-氨基葡萄糖的去除效果。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

TGase（酶活力1000 U/g）：泰興市一鳴生物制品有限公司產(chǎn)品；3，5-二硝基水楊酸： 天津市化學(xué)試劑廠制造；1，1-二苯基-2-三硝基苯肼 （1，1-diphenyl-2-picrylhydrazyl，DPPH）：日本TCI 化成工業(yè)發(fā)展有限公司產(chǎn)品；D-氨基葡萄糖鹽酸鹽、 菲洛嗪、硫代巴比妥酸、2-脫氧-D-核糖：上海生工生物有限公司產(chǎn)品；堿性蛋白酶（Alcalase，6.28×105U/mL）：丹麥諾維信公司產(chǎn)品；其他試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

1.2 儀器與設(shè)備

NDA701 凱氏定氮儀：意大利VELP 公司產(chǎn)品；相對(duì)分子質(zhì)量200 納濾膜：GE 公司產(chǎn)品；PC/PLCLD-53 真空冷凍干燥機(jī)：美國(guó)MILLROCK 公司產(chǎn)品；DDSJ-308A 電導(dǎo)率儀：上海雷磁儀器廠制造；HYM-Multi-RN 多功能實(shí)驗(yàn)分離機(jī)：廈門昊源膜科技有限公司產(chǎn)品；DF-Ⅱ氮吹儀：江蘇省金壇區(qū)醫(yī)療儀器廠制造；ICE3000 原子吸收光譜儀：賽默飛世爾科技有限公司產(chǎn)品。

1.3 方法

1.3.1 玉米糖肽的制備 玉米醇溶蛋白在底物質(zhì)量濃度5 g/dL、 反應(yīng)初始pH 8.5、 溫度60 ℃、Alcalase 添加質(zhì)量為底物質(zhì)量3%條件下水解2.0 h。 酶解結(jié)束后，酶解液經(jīng)鈍化蛋白酶、離心及冷凍干燥后獲得玉米肽[9]。玉米肽在底物質(zhì)量濃度3 g/dL、玉米肽與D-氨基葡萄糖的質(zhì)量比1∶3、pH 7.7、TGase加酶量55 U/g（以玉米肽質(zhì)量計(jì)）、溫度44 ℃條件下糖基化反應(yīng)7 h， 反應(yīng)物經(jīng)鈍化TGase 及離心后獲得玉米糖肽溶液[8]。

1.3.2 相對(duì)分子質(zhì)量200 納濾膜操作溫度和操作壓力的確定 在操作時(shí)間均為0.5 h 的條件下，考察玉米糖肽溶液通過相對(duì)分子質(zhì)量200 納濾膜時(shí)膜通量隨操作溫度和壓力的變化規(guī)律，以確定相對(duì)分子質(zhì)量200 納濾膜處理玉米糖肽溶液時(shí)的操作溫度和操作壓力，根據(jù)下式（1）計(jì)算膜通量。

式中：F 為膜通量，L/（m2·h）；Vp為玉米糖肽溶液經(jīng)相對(duì)分子質(zhì)量200 納濾膜處理后收集的透過液的體積，L；A 為相對(duì)分子質(zhì)量200 納濾膜的有效面積，此處為0.38 m2；t 為納濾操作的時(shí)間，h。

1.3.3 玉米糖肽溶液相對(duì)分子質(zhì)量200 納濾膜的脫鹽工藝 參照作者所在課題組前期確定的玉米肽納濾脫鹽工藝[17]，略有修改。 在納濾脫鹽工藝中，將玉米糖肽溶液的初始體積記為V0，納濾的體積濃縮倍數(shù)固定為2， 主要考察加水次數(shù)對(duì)玉米糖肽溶液脫鹽效果的影響。 第1 次納濾時(shí)，玉米糖肽溶液經(jīng)相對(duì)分子質(zhì)量200 納濾膜脫鹽、 濃縮至體積Vr（Vr=1/2V0），分別收集透過液和截留液；向截留液中加入蒸餾水至體積為V0，即加蒸餾水的體積與透過液的體積相同， 進(jìn)行第2 次納濾， 重復(fù)納濾操作5次，通過不斷循環(huán)達(dá)到脫鹽的目的。

1）電導(dǎo)率的測(cè)定 取10 mL 每次納濾結(jié)束后收集的透過液和截留液，用經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)液校準(zhǔn)的電導(dǎo)率儀測(cè)定電導(dǎo)率[13]。

2）Na＋質(zhì)量分?jǐn)?shù)和脫鹽率的測(cè)定 待測(cè)樣品中的Na＋質(zhì)量濃度參照 《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中鉀、鈉的測(cè)定》（GB 5009.91—2017）中的火焰原子吸收光譜法測(cè)定，并分別根據(jù)公式（2）和（3）計(jì)算Na＋質(zhì)量分?jǐn)?shù)和脫鹽率。

式中：ω 為Na＋質(zhì)量分?jǐn)?shù)，%；Co為玉米糖肽溶液的蛋白質(zhì)質(zhì)量濃度，mg/L；Cn為玉米糖肽溶液中Na＋的質(zhì)量濃度，mg/L；S 為脫鹽率，%；Ca為納濾截留液中Na＋的質(zhì)量濃度，mg/L；Vo為玉米糖肽溶液的體積，L；Vr為納濾截留液的體積，L。

3）短肽回收率的測(cè)定 取每次納濾結(jié)束的截留液，采用Folin-酚法[18]測(cè)定可溶性蛋白質(zhì)含量，根據(jù)公式（4）計(jì)算短肽回收率。

式中：G 為短肽回收率，%；Co為玉米糖肽溶液中蛋白質(zhì)的質(zhì)量濃度，mg/L；Cp為納濾透過液中蛋白質(zhì)的質(zhì)量濃度，mg/L；Vo為玉米糖肽溶液的體積，L；Vp為納濾透過液的體積，L。

4）D-氨基葡萄糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)的測(cè)定 采用DNS法測(cè)定D-氨基葡萄糖的質(zhì)量分?jǐn)?shù)[8]。 取0.01 g 待測(cè)樣品和2.5 mL 6 mol/L HCl 放于安瓿管中， 在氮?dú)猸h(huán)境下于100 ℃酸水解7.5 h，自然冷卻至室溫后將酸水解液過濾至1.5 mL 離心管中。 在10 mL 比色管中分別加入0.8 mL 濾過液、0.7 mL 6 mol/L 的NaOH 和1.5 mL 的DNS 試劑，搖勻，沸水浴5 min使3，5-二硝基水楊酸與還原糖生成棕紅色的氨基化合物，取出后立即冷卻至室溫，向每支比色管中加入1 mL 蒸餾水，搖勻，測(cè)定540 nm 處的吸光度。以0.7 mL 蒸餾水代替樣品作空白。將測(cè)定的吸光度代入D-氨基葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線， 計(jì)算出玉米糖肽中D-氨基葡萄糖的質(zhì)量分?jǐn)?shù)（%）。

5）抗氧化活性的測(cè)定 取每次納濾結(jié)束加完蒸餾水的循環(huán)液進(jìn)行冷凍干燥獲得玉米糖肽粉，參照《谷類、 豆類粗蛋白質(zhì)含量的測(cè)定 杜馬斯燃燒法》（NY/T 2007—2011）測(cè)定總蛋白質(zhì)含量。 在蛋白質(zhì)質(zhì)量濃度為2 mg/mL 條件下，參照文獻(xiàn)[19]描述的方法測(cè)定每次納濾脫鹽處理后樣品的自由基清除率和Fe2＋-螯合率。

1.3.4 統(tǒng)計(jì)分析 納濾脫鹽實(shí)驗(yàn)重復(fù)3 次，結(jié)果以x±SD 形式表示。采用SPSS statistics 19.0 軟件，根據(jù)單因素方差（One-way ANOVA）方法對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行差異顯著性分析， 采用LSD 法進(jìn)行組間多重比較，以P＜0.05 為差異顯著性水平。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同操作溫度對(duì)相對(duì)分子質(zhì)量200 納濾膜膜通量的影響

在玉米糖肽溶液體積6.4 L、 壓力2.0 MPa、操作時(shí)間0.5 h 的條件下， 考察玉米糖肽溶液通過相對(duì)分子質(zhì)量200 納濾膜時(shí)膜通量隨操作溫度的變化規(guī)律，結(jié)果如圖1 所示。 在14～20 ℃溫度下，隨著溫度的升高，相對(duì)分子質(zhì)量200 納濾膜的膜通量呈逐漸增大的變化趨勢(shì)，這是因?yàn)椴僮鳒囟鹊纳呖梢越档陀衩滋请娜芤旱酿ざ龋?增加溶質(zhì)的擴(kuò)散系數(shù)，使玉米糖肽溶液通過相對(duì)分子質(zhì)量200 納濾膜時(shí)的阻力較小，納濾膜的通量增加，進(jìn)而分離性能提高[12]。 但是，當(dāng)操作溫度從20 ℃升高至23 ℃時(shí)，膜通量?jī)H升高1.98%，因此，從操作成本角度考慮，選擇相對(duì)分子質(zhì)量200 納濾膜處理玉米糖肽溶液的操作溫度為20 ℃。

圖1 不同操作溫度對(duì)膜通量的影響Fig. 1 Effect of different operating temperature on membrane flux

2.2 不同操作壓力對(duì)相對(duì)分子質(zhì)量200 納濾膜膜通量的影響

操作壓力作為納濾分離的推動(dòng)力，是影響納濾膜膜通量和使用壽命的重要因素[20]。 在玉米糖肽溶液體積6.4 L、溫度20 ℃、操作時(shí)間0.5 h 的條件下，考察玉米糖肽溶液通過相對(duì)分子質(zhì)量200 納濾膜時(shí)膜通量隨操作壓力的變化規(guī)律， 結(jié)果如圖2 所示。 在納濾操作條件一定時(shí)，操作壓力對(duì)相對(duì)分子質(zhì)量200 納濾膜的膜通量影響較大。 當(dāng)操作壓力由1.5 MPa 升高至2.0 MPa 時(shí)， 膜通量顯著增大 （P＜0.05），可能由于操作壓力的增大加快了相對(duì)分子質(zhì)量200 納濾膜表面玉米糖肽溶液的流速，提高了納濾膜對(duì)玉米糖肽的分離性能[21]；當(dāng)壓力從2.0 MPa升高到2.5 MPa 時(shí)， 膜通量雖然升高9.44%， 但與2.0 MPa 時(shí)相比差異不顯著（P＞0.05），而在壓力升高至3.0 MPa 時(shí)， 膜通量與2.5 MPa 時(shí)相比顯著增加（P＜0.05）。 但是，壓力越高，在納濾膜表面的截留物越多，對(duì)納濾膜的污染越嚴(yán)重[15]，而且壓力越高，對(duì)納濾膜的損傷越嚴(yán)重。 因此，綜合考慮納濾膜的工作效率和損傷程度，選擇玉米糖肽溶液納濾脫鹽的操作壓力為2.0 MPa。

圖2 不同操作壓力對(duì)膜通量的影響Fig. 2 Effect of different operating pressure on membrane flux

2.3 相對(duì)分子質(zhì)量200 納濾膜脫鹽次數(shù)的確定

2.3.1 相對(duì)分子質(zhì)量200 納濾膜脫鹽次數(shù)對(duì)電導(dǎo)率和短肽回收率的影響 在溫度20 ℃、 壓力2.0 MPa 的條件下， 玉米糖肽溶液按1.3.3 工藝連續(xù)納濾5 次，考察截留液和透過液的電導(dǎo)率和短肽回收率隨納濾次數(shù)的變化情況，結(jié)果如圖3 所示。在圖3（a）中，與未納濾脫鹽處理的玉米糖肽溶液相比，當(dāng)納濾次數(shù)從1 次增加到3 次時(shí)，截留液的電導(dǎo)率顯著降低（P＜0.05）；但當(dāng)納濾次數(shù)從4 次增加到5 次時(shí)， 截留液和透過液的電導(dǎo)率均沒有顯著性差異（P＞0.05）；納濾5 次后，截留液的電導(dǎo)率與未納濾脫鹽處理的玉米糖肽溶液相比下降了60.87%，說明相對(duì)分子質(zhì)量200 納濾膜5 次納濾對(duì)玉米糖肽溶液（P＜0.05）中的鹽分有較好的透過性，能有效去除玉米糖肽溶液中過量的鹽分。 由圖3（b）可以看出，與未納濾脫鹽處理的玉米糖肽溶液相比，玉米糖肽溶液的短肽回收率隨著納濾次數(shù)的增加呈顯著降低的變化趨勢(shì)。 經(jīng)5 次納濾后，玉米糖肽溶液的短肽回收率為96.97%，比納濾前降低了3.03%，說明在實(shí)驗(yàn)中采用的相對(duì)分子質(zhì)量200 納濾膜和納濾條件下，在脫鹽的同時(shí)會(huì)有少量的蛋白質(zhì)吸附在納濾膜表面，使納濾膜孔有一定程度的堵塞，同時(shí)也會(huì)有一部分相對(duì)分子質(zhì)量小于200 的蛋白質(zhì)組分進(jìn)入透過液而損失掉。

圖3 納濾次數(shù)對(duì)電導(dǎo)率和短肽回收率的影響Fig. 3 Effect of nanofiltration times on electrical conductivity and recovery rate of short peptide

2.3.2 相對(duì)分子質(zhì)量200 納濾膜脫鹽次數(shù)對(duì)Na＋質(zhì)量分?jǐn)?shù)和脫鹽率的影響 按照1.3.3 部分的工藝，玉米糖肽溶液在溫度20 ℃、壓力2.0 MPa 條件下連續(xù)納濾5 次， 考察納濾次數(shù)對(duì)Na＋質(zhì)量分?jǐn)?shù)及脫鹽率的影響，結(jié)果如圖4 所示。 玉米糖肽溶液中Na＋的初始質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10.57%，這部分鹽分是在玉米醇溶蛋白酶法水解和玉米肽酶法糖基化反應(yīng)過程中，為了維持pH 穩(wěn)定滴加NaOH 產(chǎn)生的。 與未納濾脫鹽處理的玉米糖肽溶液相比， 在連續(xù)納濾3 次后，Na＋質(zhì)量分?jǐn)?shù)大幅度降低，降低了80.13%；隨后繼續(xù)增加納濾次數(shù)，Na＋質(zhì)量分?jǐn)?shù)趨于穩(wěn)定。 玉米糖肽溶液的脫鹽率與Na＋質(zhì)量分?jǐn)?shù)的變化規(guī)律相反， 隨著納濾次數(shù)的增加呈逐漸增加的變化趨勢(shì)，在連續(xù)納濾5 次后，玉米糖肽溶液的脫鹽率達(dá)81.60%。 于國(guó)才等采用相對(duì)分子質(zhì)量160 和相對(duì)分子質(zhì)量360 的兩種納濾膜對(duì)具有醒酒活性的玉米肽進(jìn)行濃縮，發(fā)現(xiàn)與相對(duì)分子質(zhì)量360 納濾膜相比，相對(duì)分子質(zhì)量160 納濾膜對(duì)Na＋具有較低的傳質(zhì)效率[11]，說明在納濾脫鹽過程中， 納濾膜的孔徑對(duì)脫鹽率有很大影響。 因此，可以在保證多肽的截留率的前提下，選擇孔徑大的納濾膜提高脫鹽率。 另外，經(jīng)過5 次納濾脫鹽后，玉米糖肽溶液中仍含有1.42%的Na＋，這與2.3.1 部分電導(dǎo)率的變化規(guī)律相一致。分析可能有兩方面的原因， 一是玉米糖肽分子中的羧基與Na＋以較強(qiáng)的靜電引力結(jié)合；二是隨著納濾操作的連續(xù)進(jìn)行，玉米糖肽在納濾膜表面逐漸沉積，使納濾膜的分離性能降低，在循環(huán)水量不增加的前提下，導(dǎo)致Na＋不能被完全脫除[21]。 因此，從節(jié)約成本角度考慮，采用相對(duì)分子質(zhì)量200 納濾膜連續(xù)納濾5 次基本可以達(dá)到玉米糖肽溶液脫鹽的目的。

圖4 納濾次數(shù)對(duì)Na+質(zhì)量分?jǐn)?shù)和脫鹽率的影響Fig. 4 Effect of nanofiltration times on Na+ mass fraction and desalinization rate

2.3.3 相對(duì)分子質(zhì)量200 納濾膜脫鹽次數(shù)對(duì)玉米糖肽抗氧化活性的影響 以未納濾脫鹽處理的玉米糖肽為對(duì)照，研究相對(duì)分子質(zhì)量200 納濾膜的納濾次數(shù)對(duì)玉米糖肽抗氧化活性的影響， 結(jié)果如圖5所示。由圖5（a）可知，在蛋白質(zhì)質(zhì)量濃度均為2 mg/mL條件下，與未納濾脫鹽處理的玉米糖肽相比，隨著納濾次數(shù)的增加，玉米糖肽的DPPH 自由基清除率呈逐漸降低的變化趨勢(shì)，在納濾5 次后，玉米糖肽的DPPH 自由基清除率降低11.83%，但與未納濾脫鹽處理的樣品相比差異不顯著（P＞0.05）；玉米糖肽的羥自由基清除能力呈逐漸增強(qiáng)的變化趨勢(shì)，在連續(xù)納濾5 次后， 玉米糖肽的羥自由基清除率從11.25%提高到15.85%，可能是由于納濾操作將玉米糖肽中的鹽分有效脫除，抗氧化活性玉米糖肽的純度增大，進(jìn)而清除羥自由基的能力增強(qiáng)。 于國(guó)才和Bourseau 等的研究也發(fā)現(xiàn)納濾脫鹽可以增加脫鹽產(chǎn)物的羥自由基清除能力[11，22]。

由圖5（b）可知，與未納濾脫鹽處理的玉米糖肽相比，經(jīng)納濾1 次后，玉米糖肽的Fe2＋-螯合率無(wú)顯著變化，繼續(xù)增加納濾次數(shù)，玉米糖肽的Fe2＋-螯合率顯著降低后趨于穩(wěn)定。 在連續(xù)納濾5 次后，玉米糖肽的Fe2＋-螯合率與未納濾脫鹽處理的玉米糖肽相比降低了46.07%， 分析可能有兩方面的原因，一是部分具有螯合亞鐵離子能力的玉米糖肽損失，二是玉米糖肽分子中捕獲亞鐵離子的結(jié)構(gòu)被納濾操作的剪切力所破壞。

圖5 納濾次數(shù)對(duì)羥自由基清除率和DPPH 自由基清除率以及Fe2+-螯合率的影響Fig. 5 Effect of nanofiltration times on hydroxyl and DPPH radicals scavenging rate as well as Fe2 +-chelating activity

2.4 相對(duì)分子質(zhì)量200 納濾膜脫鹽對(duì)玉米糖肽中D-氨基葡萄糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)的影響

在玉米糖肽溶液中存在未反應(yīng)的游離D-氨基葡萄糖，在實(shí)驗(yàn)室水平上可以采用相對(duì)分子質(zhì)量100～500 的透析膜去除[8]，但此方法處理時(shí)間長(zhǎng)、處理量小，不適合大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)，限制了玉米糖肽的進(jìn)一步開發(fā)與應(yīng)用。 研究玉米糖肽中D-氨基葡萄糖的質(zhì)量分?jǐn)?shù)隨納濾次數(shù)的變化，以表征納濾脫鹽對(duì)玉米糖肽的脫糖效果，結(jié)果見6。隨著納濾次數(shù)的增加， 玉米糖肽中D-氨基葡萄糖的質(zhì)量分?jǐn)?shù)逐漸下降，但下降幅度較小，可能是D-氨基葡萄糖的相對(duì)分子質(zhì)量與采用的納濾膜的截留相對(duì)分子質(zhì)量接近導(dǎo)致的。 在納濾次數(shù)為5 時(shí)，玉米糖肽中D-氨基葡萄糖的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為27.03%， 與納濾前相比降低了37.54%， 與玉米糖肽中D-氨基葡萄糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)為13.92%相比[8]， 說明采用相對(duì)分子質(zhì)量200 納濾膜脫鹽時(shí)， 可以將55.54%的游離D-氨基葡萄糖去除。 以上結(jié)果說明玉米糖肽溶液通過相對(duì)分子質(zhì)量200 納濾膜，可以起到脫鹽、脫糖和濃縮三重功效，但還需要進(jìn)一步對(duì)脫糖的工藝條件進(jìn)行研究，以期簡(jiǎn)化玉米糖肽的制備工藝。

圖6 納濾次數(shù)對(duì)玉米糖肽中D-氨基葡萄糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)的影響Fig. 6 Effect of nanofiltration times on D-glucosamine content in zein glycopeptide

3 結(jié)語(yǔ)

隨著人民生活水平的提高，對(duì)食品健康的重視程度不斷增加，玉米糖肽制備過程中為了維持蛋白酶和TGase 穩(wěn)定而引入的鹽分會(huì)限制其作為保健食品及食品基料在食品工業(yè)中的應(yīng)用。 為了去除玉米糖肽中過多的鹽分，采用相對(duì)分子質(zhì)量200 納濾膜對(duì)其進(jìn)行脫鹽處理，確定了對(duì)玉米糖肽抗氧化活性影響較小的納濾脫鹽工藝參數(shù)：壓力2.0 MPa、溫度20 ℃、納濾5 次，每次體積濃縮倍數(shù)為2。在此條件下， 還可以除去反應(yīng)體系中55.54%未反應(yīng)的D-氨基葡萄糖，起到脫鹽、脫糖和濃縮的三重作用。 在此基礎(chǔ)上， 需要進(jìn)一步對(duì)納濾膜脫除未反應(yīng)D-氨基葡萄糖的工藝條件進(jìn)行研究，以期簡(jiǎn)化玉米糖肽的制備工藝，促進(jìn)玉米糖肽的工業(yè)化生產(chǎn)及應(yīng)用。