FISH技術(shù)在乳腺癌HER-2基因檢測中的應(yīng)用價值分析

費炳友

【摘 要】目的：分析探究FISH技術(shù)在乳腺癌HER-2基因檢測中的應(yīng)用價值。方法：在2018年8月至2021年8月期間選擇42例乳腺癌患者展開回顧性分析，以上42例患者采集的標(biāo)本均接受FISH技術(shù)和IHC技術(shù)對其HER-2基因進(jìn)行相應(yīng)的檢測，并比較不同檢測技術(shù)的陽性符合率，觀察經(jīng)FISH技術(shù)對17號染色體多體發(fā)生的檢測情況。結(jié)果：經(jīng)不同檢測技術(shù)檢測其結(jié)果一致性相對較高（Kappa=0.544，P<0.05）。經(jīng)IHC技術(shù)檢測與經(jīng)FISH技術(shù)檢測在17號染色體多體發(fā)生率上無顯著差異（P>0.05）。結(jié)論：在乳腺癌HER-2基因檢測中無論是運用FISH技術(shù)還是IHC技術(shù)進(jìn)行檢測均具有較高的檢出率，而其中導(dǎo)致兩種檢測技術(shù)結(jié)果出現(xiàn)偏差的因素在于17號染色體多體的發(fā)生率，臨床中對于乳腺癌HER-2基因擴(kuò)增檢測可應(yīng)用FISH技術(shù)進(jìn)行操作，值得推廣應(yīng)用。

【關(guān)鍵詞】FISH技術(shù)；乳腺癌HER-2基因；IHC技術(shù)；17號染色體

Analysis of the application value of FISH technology in breast cancer HER-2 gene detection

FEI Bingyou

Huai an Maternal and Child Health Care Hospital， Huaian， Jiangsu 223002， China

【Abstract】Objective：To explore the application value of FISH technology in HER-2 gene detection in breast cancer.Methods：42 breast cancer patients from August 2018 to August 2021were selected for retrospective analysis. All samples collected from the 42 patients were tested for their HER-2 gene by FISH and IHC and compared the positive compliance rate of different testing techniques to observe the detection of chromosome 17 by FISH.Results：Theconsistencyof different detection techniques was relatively high （Kappa=0.544，P<0.05）. There was no significant difference between the incidence of polysome on chromosome 17， as detected by IHC technology， and as detected by FISH technology（P> 0.05）.Conclusion：In the detection of HER-2 gene in breast cancer， both FISH technology and IHC technology have higher detection rate，and the factors leading to the deviation is the incidence of polysomy onchromosome 17. In clinical practice， the HER-2 gene amplification test of breast cancer can be operated by FISH technology， which is worthy of popularization and application.

【Key？Words】FISH technology； Breast cancer HER-2 gene； IHC technology； Chromosome 17

乳腺癌（Breast cancer）是臨床中極為常見的惡性腫瘤之一，與宮頸癌并稱為粉紅殺手，具有極高的發(fā)病率和死亡率，近年來呈現(xiàn)出不斷增長的趨勢[1]。現(xiàn)階段我國對于此類惡性腫瘤的主要研究重點在于原癌基因HER-2，大量的研究和實驗發(fā)現(xiàn)乳腺癌患者中大約有20%～30%的患者其HER-2基因呈現(xiàn)為過表達(dá)情況，而HER-2基因也與患者預(yù)后、風(fēng)險評估、內(nèi)分泌治療、化療以及生物靶向治療等有著密切的聯(lián)系[2]。本文針對FISH技術(shù)在乳腺癌HER-2基因檢測中的應(yīng)用價值進(jìn)行分析和觀察，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

在2018年8月至2021年8月選擇42例乳腺癌患者展開回顧性分析，其中男性1例，女性41例，年齡37歲～70歲，平均年齡（53.53±5.66）歲，其中浸潤性小葉癌4例、浸潤性導(dǎo)管癌38例。

納入標(biāo)準(zhǔn)：符合乳腺癌臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)并經(jīng)HE染色確診者。

排除標(biāo)準(zhǔn)：合并心臟、肝腎等嚴(yán)重功能障礙者；拒絕參與本次研究者；臨床資料不完整者；參與研究前接受輔助化療者。

1.2 方法

采集本次研究所需標(biāo)本，通過粗針穿刺活檢或者手術(shù)切除進(jìn)行獲取，將其劃分為兩份，分別實施FISH技術(shù)和IHC技術(shù)進(jìn)行相應(yīng)的檢測。

在進(jìn)行FISH技術(shù)檢測過程中，首先將標(biāo)本切片選擇二甲苯進(jìn)行脫蠟操作直到其水化，而后將其放置在室溫下分別使用100%、85%、70%的乙醇實施梯度脫水操作，每次脫水時間為2min，完成后將其放置在去離子水中實施浸泡操作，時間為30min，浸泡結(jié)束后在50℃之下將其放置在30%酸性亞硫酸鈉溶液中，時間為30 min，并選擇2×SSC緩沖液對切片實施洗片操作，反復(fù)2次洗片后將其放置在37℃的蛋白酶K溶液中進(jìn)行浸泡，時間為4min～10min，然后再次實施洗片操作，再將其在室溫下放置在0.1mol/L的鹽酸中，時間為5min～10min；浸泡后再次進(jìn)行洗片操作，而后分別在零下20℃的70%、85%、100%的乙醇中進(jìn)行脫水操作，每次時間為2min；將其放置在室溫下的丙酮中2min進(jìn)而放置在空氣中將其自然風(fēng)干，完成后使用56℃對其實施烤片操作，時間為5min，并滴加10μL的探針混合液在上面，將溫度轉(zhuǎn)變?yōu)?3℃靜置5min達(dá)到變性之后，將切片放置在原位雜交儀中實施雜交操作，在42℃的濕盒中進(jìn)行雜交，經(jīng)過14hmin～18h，而后依次選擇2×SSC、0.3%以及NP-40的洗滌液實施洗片操作，使得多于的探針全部洗掉，而后將其放置在室溫的陰暗處進(jìn)行干燥，并滴加10μL的DAPI顯色液實施復(fù)染操作，最后蓋玻片后可運用熒光顯微鏡進(jìn)行仔細(xì)的觀察[3]。

在進(jìn)行IHC技術(shù)檢測過程中，首先將標(biāo)本切片進(jìn)行脫蠟操作直到其水化，將其放置在枸櫞酸鈉緩沖液中進(jìn)行微波加熱操作，反復(fù)2次，每次時間均為5 min，而后對抗原進(jìn)行修復(fù)，直到切片自然冷卻與室溫相同后選擇PBS緩沖液對切片實施洗片操作，反復(fù)3次，并滴加工作濃度的一抗并將其放置在預(yù)熱濕盒中，溫度為37℃，時間為1 h，實施洗片操作；而后滴加辣根過氧化物酶標(biāo)記的二抗，溫度為37℃，孵化時間為30min，實施洗片操作；再次滴加100μLDAB顯色液，而后使用自來水對切片進(jìn)行沖洗，而后選擇蘇木素實施復(fù)染操作，并封片，將其放置在顯微鏡下仔細(xì)觀察。

1.3 觀察指標(biāo)

比較不同檢測技術(shù)的陽性符合率，觀察經(jīng)FISH技術(shù)對17號染色體多體發(fā)生的檢測情況。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析

采用SPSS 24.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計數(shù)資料采用（%）表示，進(jìn)行χ2檢驗，計量資料采用（χ±s）表示，進(jìn)行t檢驗，P<0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同檢測方式檢測結(jié)果比較

當(dāng)IHC技術(shù)檢測結(jié)果顯示+++、++、+/0分別為6、32、4例的情況下，F(xiàn)ISH技術(shù)檢測結(jié)果與其的陽性符合率為83.33%（5/6）、93.75%（30/32）、25.00%（1/4），兩種檢測方式結(jié)果一致性相對較高（Kappa=0.544，P<0.05），見表1。

2.2 FISH技術(shù)在17號染色體多體發(fā)生的檢測符合率

經(jīng)IHC技術(shù)檢測結(jié)果顯示HER-2+++、++的患者中存在17號染色體多體發(fā)生的占比為15.79%（6/38），+/0患者中17號染色體多體發(fā)生的占比為25.00%（1/4）；經(jīng)FISH技術(shù)檢測結(jié)果顯示以上42例患者中17號染色體多體發(fā)生占比為16.67%（7/42），對比無顯著差異（2χ=0.016，P=0.903，P>0.05）。

3 討論

乳腺癌對于患者生命安全和身心健康均會造成極大的威脅和影響，而其中HER-2基因?qū)儆谠换?，在臨床中也被稱之為C-erbB基因，通過大量的研究和實驗證實其與乳腺癌的發(fā)病、疾病進(jìn)展以及預(yù)后有著不可分割的聯(lián)系，通過對HER-2基因擴(kuò)張表達(dá)進(jìn)行檢測能為此類疾病治療、預(yù)估預(yù)后提供重要的參考依據(jù)?，F(xiàn)階段對于HER-2基因檢測方式最為常見的以FISH技術(shù)和IHC技術(shù)為主，IHC技術(shù)主要原理是以組織為基礎(chǔ)的一種蛋白檢測方式，由于HER-2基因擴(kuò)增的情況下其腫瘤細(xì)胞也存在著極為顯著的膜著色的情況，繼而可提高檢測符合率，其具有操作便捷、重復(fù)性高且檢測費用較低的特點，然而蛋白極易在標(biāo)本處理和固定過程中受到損害導(dǎo)致檢測結(jié)果出現(xiàn)偏差，可見其存在一定的局限性[4]。而FISH技術(shù)是當(dāng)前最新的一種分子細(xì)胞遺傳學(xué)技術(shù)，目前被廣泛應(yīng)用于病毒感染分析、動植物基因組結(jié)構(gòu)研究以及染色體精細(xì)結(jié)構(gòu)變異等相關(guān)研究中，其原理是將組織作為研究基礎(chǔ)，在石蠟包埋的組織塊下通過檢測基因拷貝數(shù)對患者HER-2基因水平進(jìn)行判斷，其具有極高的檢驗準(zhǔn)確率，可有效規(guī)避綠色熒光對結(jié)果的干擾，因此也被作為HER-2基因擴(kuò)增檢測的金標(biāo)準(zhǔn)。根據(jù)本次研究結(jié)果深入分析可見，F(xiàn)ISH技術(shù)具有極高的檢測準(zhǔn)確率，在臨床的實際應(yīng)用中，可將IHC技術(shù)作為早期篩查，對于HER-2基因高表達(dá)的患者可接受FISH技術(shù)進(jìn)行相關(guān)的檢測。

綜上所述，在乳腺癌HER-2基因檢測中無論是運用FISH技術(shù)還是IHC技術(shù)進(jìn)行檢測均具有較高的檢出率，而其中導(dǎo)致兩種檢測技術(shù)結(jié)果出現(xiàn)偏差的因素在于17號染色體多體的發(fā)生率，臨床中對于乳腺癌HER-2基因擴(kuò)增檢測可應(yīng)用FISH技術(shù)進(jìn)行操作，值得推廣應(yīng)用。

參考文獻(xiàn)

[1] 鞠薇薇.FISH技術(shù)在乳腺癌HER-2基因檢測中的應(yīng)用價值評估[J].中國現(xiàn)代藥物應(yīng)用，2020，14（8）：237-238.

[2] 陳輝，汪小霞，沈勤，等.FISH檢測在乳腺癌的非典型擴(kuò)增和不確定病例中的應(yīng)用價值[J].臨床與實驗病理學(xué)雜志，2019，35（1）：95-97.

[3] 劉繼英，陳明光，韓明其，等.免疫組織化學(xué)法雙色銀染原位雜交與熒光原位雜交技術(shù)檢測乳腺癌HER-2基因狀態(tài)的應(yīng)用[J].河北醫(yī)學(xué)，2020，26（12）：1991-1995.

[4] 彭燕，鄭細(xì)閏，劉紅英，等.微滴式數(shù)字PCR與IHC聯(lián)合FISH對乳腺癌新輔助化療前后HER-2檢測的分析[J].臨床與實驗病理學(xué)雜志，2021，37（1）：81-83.