基于質(zhì)量標(biāo)志物的三七粉質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提升研究＊

劉耀晨，郭海彪，張 楊，王德勤，劉建庭，4，李楚源，張洪兵，4，韓彥琪，4，張鐵軍，4，5＊＊，許 浚，4，5＊＊

（1.天津醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院 天津 300070；2.廣州白云山和記黃埔中藥有限公司 廣州 510515；3.天津藥物研究院天津市中藥質(zhì)量標(biāo)志物重點實驗室 天津 300301；4.天津藥物研究院中藥現(xiàn)代制劑與質(zhì)量控制技術(shù)國家地方聯(lián)合工程實驗室 天津 300301；5.天津藥物研究院釋藥技術(shù)與藥代動力學(xué)國家重點實驗室 天津 300301）

三七粉具有散瘀止血、消腫定痛的功效[1]，在預(yù)防及改善心腦血管疾病方面作用顯著，且無明顯毒副作用，有效性安全性極高，市場需求量極大。2013 年我國提出“一帶一路”建設(shè)，中醫(yī)藥行業(yè)響應(yīng)“一帶一路”倡議，中藥在國際市場上的貿(mào)易額不斷加大。從出口方向上看，主要為亞洲地區(qū)，尤其東盟各國由于地理位置及文化背景等原因，用藥習(xí)慣與我國相近，相對于西方發(fā)達(dá)國家市場，更加認(rèn)可中藥以藥品形式進(jìn)口，例如泰國、新加坡政府允許中藥作為藥品合法進(jìn)口。2010 年中國－東盟自由貿(mào)易區(qū)建成，對決大多數(shù)商品實行“零關(guān)稅”政策，今年上半年東盟已成為我國的第一大貿(mào)易伙伴，東盟正成為我國中藥出口最具潛力的市場。由于多數(shù)東盟國家經(jīng)濟(jì)醫(yī)療水平較低，且都已進(jìn)入老齡化社會，而三七粉在防治慢性疾病方面具有優(yōu)勢，因此，三七粉非常符合東盟國家的需求[2]。三七粉具有有效成分可快速釋放的優(yōu)點，三七粉飲片品牌眾多，但缺少統(tǒng)一的三七粉質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，摻假的鑒別較為困難[3-4]。對于三七粉的質(zhì)量評判國內(nèi)多參考《中國藥典》規(guī)定指標(biāo)，三七粉的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)主要是測定其中三七皂苷R1、人參皂苷Rg1及Rb1的總量[1]，這不能全面反映三七粉的質(zhì)量。針對三七粉的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究，劉永利在法定檢驗的基礎(chǔ)上，已圍繞重金屬檢查、有效成分檢測等方面進(jìn)行了初步研究，并建議增加多成分含測指標(biāo)，防止摻假造假[5]。再看東盟各國的中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，存在著過于西化、體系混亂等問題，一方面造成假冒偽劣產(chǎn)品流入東盟市場，另一方面導(dǎo)致中藥產(chǎn)品注冊困難[2]。因此，提升現(xiàn)有三七粉的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，成為未來制定三七粉國際標(biāo)準(zhǔn)和促進(jìn)三七粉國內(nèi)外貿(mào)易的關(guān)鍵。

中藥質(zhì)量標(biāo)志物（quality marker，Q-Marker）在解決現(xiàn)在中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)存在的問題和中藥質(zhì)量研究上有很好的指導(dǎo)意義，有利于提高中藥在國際上的地位[6-7]。根據(jù)中藥Q-Marker基本條件，對現(xiàn)行三七粉評價指標(biāo)做出改善需要明確三七粉中的有效成分群、特有成分群的組成同時兼顧成分的可測性[7]。經(jīng)過本課題組前期的研究，最終確定三七素、三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、Re、Rb1、Rg2、Rd 符合Q-Marker 基本條件，可為三七粉的質(zhì)量標(biāo)志物。本實驗建立了基于三七粉質(zhì)量標(biāo)志物的HPLC 含量測定和指紋圖譜方法，對不同廠家三七粉及不同商品規(guī)格原料藥材進(jìn)行質(zhì)量標(biāo)志物差異分析和質(zhì)量一致性評價。此外，由于傳統(tǒng)的相似度評價方法在中藥質(zhì)量控制中存在一定不足，及為了提高三七粉質(zhì)量標(biāo)志物在質(zhì)量評價上的作用，參考相關(guān)文獻(xiàn)采用一種新的相似度評價方法-等同系數(shù)模型，該模型中權(quán)重系數(shù)的確定采取層次分析法結(jié)合CRITIC 法的方式[8-12]。最后，為了更加全面評價三七藥材質(zhì)量，使用了模式識別進(jìn)行綜合分析。本研究結(jié)果可為三七粉的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提升及原料藥材的選擇提供科學(xué)依據(jù)。

1 儀器和材料

1.1 儀器

AB204-N 電子天平（德國Mettler 公司）；超聲波清洗儀（寧波新芝生物科技公司）；BT25S電子天平（德國Sartorius 公司）；Agilent 1260 高效液相色譜儀（美國Agilent 公司）；Waters Alliancee 2695 高效液相色譜儀（美國Waters 公司）；Waters Atlantis T3 C18色譜柱（4.6 mm×250 mm, 5 μm，美 國Waters 公 司）；Agilent ZORBAX Eclipse C18色譜柱（4.6 mm×250 mm,5μm，美國Agilent公司）。

1.2 材料

三七素（純度≥90%，批號：R06S8F43250），人參皂苷Rg1（批號：G30N10Y104330）、人參皂苷Rb1（批號：G01O11Y126429）純度均大于98%，均購自上海源葉生物科技有限公司；三七皂苷R1（批號：110745-201921）、人參皂苷Re（批號：110754-202028）、人參皂苷Rg2（批號：111779-200801）、人參皂苷Rd（批號：111818-201603）均購自中國食品藥品檢定研究院，純度均大于98%。純凈水購自杭州娃哈哈集團(tuán)有限公司，磷酸、乙腈、甲醇均為色譜純，購自天津市光復(fù)科技發(fā)展有限公司和康科德科技有限公司。

1.3 樣品

三七粉及三七藥材均由廣州白云山和記黃埔中藥有限公司（簡稱“白云山和黃中藥”）負(fù)責(zé)收集，具體信息見表1-表2。所有樣品經(jīng)天津藥物研究院張鐵軍研究員鑒定均來源于五加科人參屬植物三七Panax notoginseng（Burk.）F.H.Chen。

表1 三七粉樣品信息

表2 三七藥材樣品信息

2 方法與結(jié)果

2.1 三七素含量測定

2.1.1 色譜條件

Waters Atlantis T3 C18色譜柱（250 × 4.6 mm，5 μm）；流動相：0.2%磷酸水；檢測波長213 nm；進(jìn)樣量：10 μL；流速：1 mL·min-1；柱溫：20℃。0.2%磷酸水洗脫5 min。結(jié)果見圖1。

圖1 （A）對照品色譜圖；（B）樣品色譜圖

2.1.2 對照品溶液制備

取三七素對照品適量，精密稱定，置于量瓶中，加入少量純水溶解后稀釋至刻度，搖勻，即得三七素對照品儲備液（1.756 mg·mL-1）。精密量取儲備液5 mL置10 mL量瓶中，加純凈水稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.1.3 供試品溶液制備

取三七粉、藥材粉末各約1.0 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入純水20 mL，稱定重量，超聲45 min，放冷，再稱定重量，并用純水補足減失的重量，搖勻，0.45 μm微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液，即得。

2.1.4 線性關(guān)系考察

取三七素對照品置于量瓶中，配置儲備液，將溶液逐級稀釋，共配成五個濃度梯度的線性溶液。按“2.1.1”項下色譜條件進(jìn)行測定，得回歸方程，結(jié)果見表3。

表3 三七素線性關(guān)系考察

2.1.5 重復(fù)性實驗

取三七粉（YPA8L0004），按照“2.1.3”項下方法制備供試品溶液，平行制成6 份供試品溶液，連續(xù)測定，結(jié)果表明三七素峰面積RSD 不大于2%，符合含量測定方法學(xué)驗證要求。

2.1.6 穩(wěn)定性實驗

取同一批三七粉，按“2.1.3”項下方法制備供試品溶液，在室溫放置0、2、4、6、8、12 h 后分別進(jìn)樣，記錄三七素色譜峰面積，并計算RSD 值。結(jié)果顯示RSD 不大于2%，表明供試品溶液在室溫條件下放置12 h 內(nèi)穩(wěn)定。

2.1.7 中間精密度實驗

由另一分析人員于不同日期照重復(fù)性試驗項下方法重新配置6 份供試品溶液，使用不同儀器進(jìn)樣測定，將測定結(jié)果與重復(fù)性試驗結(jié)果進(jìn)行比較，兩組測定結(jié)果RSD均不大于2%，該方法精密度良好。

2.1.8 準(zhǔn)確度實驗

取同一批三七粉（含量已通過重復(fù)性試驗測得，取其含量平均值）約0.5 g 放置于50 mL 錐形瓶內(nèi)。加入定量的三七素對照品，稱重，超聲處理45 min，放冷，再稱定重量，并用純水補足減失的重量，搖勻，0.45 μm微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液。平行制備6份，分別進(jìn)樣于色譜儀，依法測定，計算加樣回收率（表4）。結(jié)果表明，三七素加樣回收率在92%～105%之間，符合方法學(xué)驗證要求，該方法具有良好的準(zhǔn)確度。

表4 準(zhǔn)確度實驗結(jié)果

2.1.9 含量測定

取三七粉及三七藥材，按“2.1.3”項下方法制備供試品溶液，并取“2.1.2”項下對照品溶液，依次進(jìn)樣測定（表5）。

表5 三七素含量測定結(jié)果

2.2 皂苷成分含量測定

2.2.1 色譜條件

ZORBAX Eclipse C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈（A）-水（B）；檢測波長203 nm；進(jìn)樣量：10 μL；流速：1 mL·min-1；柱溫：25℃。流動相洗脫梯度:0-30 min，20%A；30-40 min，20%-34%A；40-46 min，34%A；46-53 min，34%-39%A。結(jié)果見圖2。

圖2 （A）混合對照品色譜圖；（B）樣品色譜圖

2.2.2 對照品溶液制備

取三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、Re、Rb1、Rg2、Rd 對照品適量，精密稱定，分別置于量瓶中，用甲醇配成濃度分別為0.253、1.013、0.161、1.051、0.034、0.252 mg·mL-1混合對照品溶液。

2.2.3 供試品溶液制備

取三七粉、三七藥材粉末各約1.0 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，稱定重量，超聲45 min，放冷，再稱定重量，并用甲醇補足減失的重量，搖勻，0.45 μm微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液，即得。

2.2.4 線性關(guān)系考察

取6種皂苷對照品置于量瓶中，配置儲備液，將溶液逐級稀釋，共配成五個濃度梯度的線性溶液。按“2.2.1”項下色譜條件進(jìn)行測定，得回歸方程，結(jié)果見表6。

表6 皂苷成分線性關(guān)系

2.2.5 重復(fù)性實驗

取三七粉（YPA8L0004），按照“2.2.3”項下方法制備供試品溶液，平行制成6 份供試品溶液，連續(xù)測定，結(jié)果表明6 種皂苷的峰面積RSD 均不大于2%，符合含量測定方法學(xué)驗證要求。

2.2.6 穩(wěn)定性實驗

取同一批三七粉，按“2.2.3”項下方法制備供試品溶液，在室溫放置0、2、4、8、12、24 h 后分別進(jìn)樣，記錄色譜峰面積，并計算RSD 值。結(jié)果表明6 種皂苷的峰面積RSD 均不大于2%，表明供試品溶液在室溫條件下放置24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.7 中間精密度實驗

由另一分析人員于不同日期照重復(fù)性試驗項下方法重新配置6 份供試品溶液，使用不同儀器進(jìn)樣測定，將測定結(jié)果與重復(fù)性實驗結(jié)果進(jìn)行比較，兩組測定結(jié)果RSD均不大于3%，該方法精密度良好。

2.2.8 準(zhǔn)確度實驗

取同一批三七粉（含量已通過重復(fù)性試驗測得，取其含量平均值）約0.5g，置于25ml 容量瓶中，加入定量的6 種皂苷對照品溶液，超聲處理45min，放冷，即得。平行制備6份，依法測定，加樣回收率結(jié)果見表7。加樣回收率均符合方法學(xué)驗證要求，該方法具有良好的準(zhǔn)確度。

表7 準(zhǔn)確度實驗結(jié)果

2.2.9 相對校正因子計算

取“2.2.4”項下五個濃度梯度混合對照品溶液，以人參皂苷Rb1峰面積為內(nèi)標(biāo)，分別計算6種皂苷的相對校正因子（fR），結(jié)果RSD＜5%，差異較?。ū?）。

表8 相對校正因子計算結(jié)果

2.2.10 相對校正因子耐用性驗證

2.2.10 .1 用不同C18色譜柱測定的耐用性驗證

取“2.2.2”項下的混合對照品溶液，在同一臺高效液相色譜儀上，分別采用3 根同一廠家不同批號色譜柱進(jìn)行檢測，求算以Rb1作為參照成分時其他4種成分的fR，各相對校正因子RSD 在0.07%-1.74%，fR在使用不同色譜柱時耐用性良好（表9）。

表9 使用不同色譜柱測定并計算得到的各待測成分的相對校正因子

2.2.10 .2 用不同儀器測定的耐用性驗證

取“2.2.2”項下的混合對照品溶液，分別在不同廠家高效液相色譜儀上，采用相同色譜柱進(jìn)行檢測，分別計算以Rb1作為參照成分時其他4 種成分的fR，各相對校正因子RSD 在0.20%-1.14%，fR在使用不同儀器時耐用性良好（表10）。

表10 使用不同儀器測定并計算得到的各待測成分的相對校正因子

2.2.11 待測組分色譜峰定位

色譜峰的定位一般可以采用保留時間差或相對保留值，相對保留值計算公式：ras=tRa/tRs；保留時間差計算公式：ΔtRas=tRa-tRs。

考察保留時間差值及相對保留值對6種皂苷成分色譜峰在色譜圖上的定位準(zhǔn)確度。保留時間差值及相對保留值的RSD 分別為1.62%-12.39%、0.43%-3.32%。由結(jié)果可知，相對保留值可以用于待測成分色譜峰的定位（表11-表12）。

表11 使用不同儀器及色譜柱測定的保留時間差值

表12 使用不同儀器及色譜柱測定的相對保留值

（1） 不同C18色譜柱及儀器保留時間差重現(xiàn)性

（2） 不同C18色譜柱及儀器相對保留值差重現(xiàn)性

2.2.12 含量測定

以人參皂苷Rb1為參照成分作為“一測多評”法的參照成分，測定樣品中6 種皂苷成分的含量（%），“一測多評”法（QASM）測定結(jié)果與外標(biāo)法（ESM）進(jìn)行比較（表13）。將兩種結(jié)果進(jìn)行t 檢驗，P＞0.05，故“一測多評”法測定結(jié)果與外標(biāo)法測定結(jié)果不存在顯著性差異。

表13 “一測多評”法與外標(biāo)法測定6種皂苷成分含量的比較

2.3 指紋圖譜

對照品溶液及供試品溶液制備方法同“2.2.2”和“2.2.3”項。

2.3.1 色譜條件

ZORBAX Eclipse C18色譜柱（4.6 mm × 250 mm，5 μm）；流動相：乙腈（A）－純水（B）；流速1.0 mL·min-1；檢測波長：203 nm；柱溫為25℃；進(jìn)樣量：10 μL；流動相梯度：0-30 min，20%A；30-40 min，20%-34%A；40-46 min，34%A；46-53 min，34%-39%A；53-65 min，39%-67%A。

2.3.2 精密度實驗

取三七粉（YPA8L0006）約1.0 g，制備供試品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6 次，以人參皂苷Rb1的保留時間和色譜峰面積為參照，計算出各共有峰的相對保留時間及相對峰面積。結(jié)果表明，各色譜峰的相對保留時間及相對峰面積的RSD值均不大于5%。

2.3.3 穩(wěn)定性實驗

取精密度下的供試品溶液，室溫下分別在0、2、4、8、12、24 h時檢測。結(jié)果表明，各色譜峰的相對保留時間及相對峰面積的RSD值均不大于5%。

2.3.4 重復(fù)性實驗

取同一批三七粉約1.0 g，平行制備供試品溶液6份，進(jìn)樣。結(jié)果表明，各色譜峰的相對保留時間及相對峰面積的RSD值均不大于5%。

2.3.5 指紋圖譜測定和色譜峰指認(rèn)

對所有樣品進(jìn)行測定，確定三七藥材和三七粉的共有峰。將混合對照品溶液注入液相色譜儀進(jìn)行分析，得到各對照品色譜峰。白云山和黃中藥所產(chǎn)三七粉、不同廠家三七粉、三七藥材各形成14、23、21 個共有峰，其中指認(rèn)5個色譜峰（圖3～圖5）。

圖3 (A)白云山和黃中藥三七粉指紋圖譜；(B)白云山和黃中藥三七粉共有模式圖

圖5 (A)三七藥材指紋圖譜；(B)三七藥材共有模式圖

2.3.6 指紋圖譜等同系數(shù)相似度計算

等同系數(shù)相似度結(jié)果見表14～表16。根據(jù)表中結(jié)果，得出質(zhì)量波動范圍的95%置信區(qū)間下限分別為0.9797、0.9745、0.9713，以這些值進(jìn)行評價，實現(xiàn)了白云山和黃中藥三七粉中差異批次（表14 中S8、S11、S12）、不同廠家三七粉及冬三七120 頭的區(qū)分。但未有效區(qū)分出冬三七60 頭、春三七（筋條）、春三七（須根）、春三七（蘆頭），同時為了尋找對不同廠家三七粉質(zhì)量差異貢獻(xiàn)度較大的質(zhì)量標(biāo)志物，需要結(jié)合化學(xué)模式識別進(jìn)行更深入的研究。

表14 白云山和黃中藥三七粉指紋圖譜相似度

表15 不同廠家三七粉指紋圖譜相似度

表16 三七藥材指紋圖譜相似度

2.3.7 化學(xué)模式識別研究

（1） 主成分分析（PCA）

將三七藥材共有峰面積數(shù)據(jù)導(dǎo)入SIMCA-P 14.1軟件中，進(jìn)行PCA 分析，PCA 得分圖見圖6。由圖可見，PCA 可實現(xiàn)冬三七60 頭、冬三七120 頭、春三七（蘆頭）、春三七（須根）的區(qū)分，但春三七（筋條）沒有得到有效區(qū)分。

圖6 三七藥材PCA得分圖

圖4 (A)不同廠家三七粉指紋圖譜（S1為白云山和黃中藥三七粉標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜）；(B)不同廠家三七粉共有模式圖

（2） 聚類分析（CA）

將三七藥材共有峰面積數(shù)據(jù)導(dǎo)入SPSS 26 軟件中，以歐式平方距離為測度，采用組間聯(lián)接法進(jìn)行CA分析，CA 譜系圖見圖7。由圖可見，CA 可將三七藥材聚為五類，冬三七60 頭、冬三七120 頭、春三七（蘆頭）、春三七（須根）各為一類，其余樣品為一類，所得結(jié)果與PCA結(jié)果一致。

圖7 三七藥材CA譜系圖

（3） 偏最小二乘回歸分析（PLS-DA）

將三七藥材共有峰面積數(shù)據(jù)導(dǎo)入SIMCA-P 14.1軟件中，進(jìn)行有監(jiān)督的PLS-DA 分析，PLS-DA 得分圖見圖8。由圖可見，春三七主根主要集中于右下象限，冬三七位于左下象限，其他藥用部位位于上半部分。

圖8 三七藥材PLS-DA得分圖

通過對不同廠家三七粉進(jìn)行PLS-DA 分析，發(fā)現(xiàn)質(zhì)量標(biāo)志物色譜峰中峰5（三七皂苷R1）、峰13（人參皂苷Rb1）、峰14（人參皂苷Rg2）、峰16（人參皂苷Rd）的變量投影重要度（Variable importance for the projection,VIP）值大于1（圖9）。

圖9 不同廠家三七粉VIP圖

3 討論與結(jié)論

本實驗在確定三七粉質(zhì)量標(biāo)志物的基礎(chǔ)上建立了皂苷成分“一測多評”法和三七素含量測定方法，方法更簡單快捷，待測成分分離度良好，且降低了含量測定成本，方法學(xué)考察符合要求，為三七粉質(zhì)量控制提供參考。建議三七粉質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制定時可考慮增加相關(guān)指標(biāo)性成分。

三七素含量測定結(jié)果表明：①三七素含量與頭數(shù)關(guān)系不大，與崔秀明、徐娜等的研究結(jié)果一致[13-15]；②冬三七三七素含量高于春三七，原因可能與總氨基酸的積累有關(guān)[16]，而冬三七中多種氨基酸含量高于春三七[17]，三七中某些氨基酸可能會參與其生物合成；③蘆頭、須根、筋條的三七素含量高于主根，與黃海霞等的研究結(jié)果相符[18]。有研究表明，三七素作為富氮有機物可能經(jīng)成熟組織運送至生長分化能力強的組織[19]，因此三七素在這三個部位的積累可能多于主根；④白云山和黃中藥三七粉中三七素可能為市場上主流廠家產(chǎn)品中的優(yōu)勢指標(biāo)，這可能與不同廠家的生產(chǎn)工藝或原料藥材來源不同有關(guān)。擬定優(yōu)質(zhì)三七粉三七素含量不小于1.0%并列入質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

三七皂苷含量測定結(jié)果表明：①總皂苷及單體皂苷含量和頭數(shù)關(guān)系不大，與王其華、徐娜等的研究結(jié)果相同[14,20]；②不同藥用部位中，總皂苷及單體皂苷含量趨勢均表現(xiàn)為蘆頭＞主根＞須根＞筋條，與已有研究結(jié)果基本相符[15,20-21]；③冬三七中單體皂苷及總皂苷含量均高于春三七，以往有研究表明春三七皂苷含量高于冬三七[21]，但有研究發(fā)現(xiàn)種子成熟過程的生理活動可能有利于三七皂苷的形成[23-24]，因此冬三七皂苷含量也可能會高于春三七[14,22]。擬定優(yōu)質(zhì)三七粉中三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、Re、Rb1、Rg2、Rd 含量之和不小于6.5%并列入質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

綜合三七素和皂苷成分含量測定結(jié)果，考慮應(yīng)以冬三七為三七粉的原料。目前三七主要的藥用部位為主根，建議在三七粉生產(chǎn)中也應(yīng)提高三七須根、蘆頭的利用，避免三七藥用資源的浪費。

另外，本文在2020年版《中國藥典》基礎(chǔ)上新增了三七粉HPLC 指紋圖譜，并對指紋圖譜相關(guān)色譜峰進(jìn)行指認(rèn)，建議在制定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)時增加HPLC 指紋圖譜測定。指紋圖譜實驗對供試品制備方法進(jìn)行了考察，包括不同提取方法（超聲提取和加熱回流提?。?；提取溶劑（水、不同濃度甲醇溶液、不同濃度乙醇溶液）；提取時間（30、45、60 min）等對三七粉指紋圖譜的影響。對色譜條件進(jìn)行了考察，包括不同流動相（乙腈-水、乙腈-0.1%磷酸水）；不同的柱溫（20、25、30℃）；波長范圍（200-400 nm 全掃描），以色譜峰分離度、峰型、峰數(shù)為依據(jù)，確定了最優(yōu)條件。將等同系數(shù)模型和模式識別聯(lián)用應(yīng)用于三七粉和原料藥材質(zhì)量一致性評價，相似度評價很好地區(qū)分出白云山和黃中藥三七粉中的三個差異批次和不同廠家三七粉，其原因可能與生產(chǎn)原料來源、車間生產(chǎn)工藝及質(zhì)量控制方法不同有關(guān)。模式識別研究一方面實現(xiàn)了不同三七藥材的區(qū)分，表明不同采收期、不同部位三七存在差異，不同部位三七的質(zhì)量評價結(jié)果與孟哲研究結(jié)果相符[25]；另一方面，得出質(zhì)量標(biāo)志物中三七皂苷R1、人參皂苷Rb1、Rg2、Rd 可作為不同廠家三七粉的質(zhì)量差異標(biāo)志物，對于質(zhì)量差異的貢獻(xiàn)度較大。

綜上，本文根據(jù)三七粉質(zhì)量標(biāo)志物對2020 年版《中國藥典》三七粉含量測定項進(jìn)行修訂，新增HPLC指紋圖譜測定法。本文研究方法和結(jié)果可為以后三七粉的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制定及原料藥材選擇提供參考。