S-亞硝基海藻酸鈉抗菌水凝膠的制備與表征

陽 星，劉 橋，余達威，涂曉亮，田金環(huán)，李立華

1. 暨南大學 材料科學與工程系/人工器官及材料教育部工程研究中心，廣東 廣州 511486

2. 江南大學 食品學院/江南大學食品科學與技術國家重點實驗室，江蘇 無錫 214122

海藻酸是一種由 α-L-古羅糖 醛酸 (G) 和 β-D-甘露糖醛酸 (M) 2種結構單元通過1,4-糖苷鍵連接而成的褐藻多糖。藻酸鹽及其水凝膠具有良好的生物相容性，其中鈣、鈉、銨、鉀鹽被美國食品藥品監(jiān)督管理局認定為 GRAS (Generally recognized as safe，一般認可為安全 )，因此被廣泛用于食品、抗菌及醫(yī)用生物材料[1-4]。

一氧化氮 (NO) 是在生物體內(nèi)履行各種重要功能的氣體分子[5-7]，具有維持內(nèi)皮的天然功能，并可作為內(nèi)源性血管擴張劑和血小板黏附激活的天然抑制劑[7-8]。此外，NO還可調(diào)節(jié)血壓和血流量[9-11]、免疫反應[12-13]、骨骼代謝和中樞神經(jīng)系統(tǒng)活動[14]。NO 在高濃度 (超過 1 μmol·L-1) 環(huán)境下，將誘導亞硝化和氧化應激，直接修飾膜蛋白，進行脂質(zhì)過氧化，并破壞線粒體和細胞DNA[15]。這些過程可導致癌細胞和細菌壞死。因此，NO被認為是抗癌[16-19]和抗菌治療[20-24]的潛在治療劑。海藻酸能夠吸收水體中的氨氮、硝氮、亞硝氮、磷酸鹽等無機鹽和尿素等有機物質(zhì)所含的氮(N)、磷(P)，并將其轉(zhuǎn)化為自身的生物質(zhì)成分。已有許多文獻報道將其固定化用于對海水養(yǎng)殖廢水的凈化[25-28]。人體內(nèi)存在大量S-亞硝基硫醇 (RSNO)，如S-亞硝基白蛋白(SNO-Alb)、S-亞硝基血紅蛋白 (SNO-Hb)、S-亞硝基半胱氨酸 (SNO-Cys) 及S-亞硝基谷胱甘肽(GSNO)，反硝化反應將NO+官能團從RSNO轉(zhuǎn)移到另一個現(xiàn)有的游離硫醇中，從而實現(xiàn)體內(nèi)無限循環(huán)的NO供給。由于NO具有潛在的抗微生物和抗血栓形成功能，在過去的二十年中，釋放NO新型聚合物的開發(fā)受到了關注。

本研究以我國盛產(chǎn)的褐藻多糖海藻酸為原料，利用半胱氨酸對其改性，引入活性巰基制備可原位成型的巰基化海藻酸鈉 (SA-SH)。并進一步與NaNO2在pH 3.7下避光反應，制備S-亞硝基海藻酸鈉 (SA-SNO)作為釋放NO供體。最后將巰基化海藻酸鈉 (SA-SH) 與S-亞硝基海藻酸鈉 (SA-SNO)復合制得了SA-SH/SA-SNO復合水凝膠，并測定了該水凝膠釋放、負載NO能力及抗菌性能，為進一步實現(xiàn)NO控釋抗菌提供了依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

海藻酸鈉 (SA, Mn=120～190 kD, M/G=1.56) 購于Sigma-Aldrich；L-半胱氨酸鹽酸鹽無水物 (LCysteine, 98%) 購于阿拉丁生化科技有限公司；1-乙基-(3-二甲基氨基丙基) 碳酰二亞胺鹽酸鹽(EDC.HCl, ≥99%) 購于上海笛柏生物科技有限公司；N-羥琥珀酰亞胺 (NHS, ＞99.5%) 購于廣州碩恒生物有限公司；亞硝酸鈉 (NaNO2, 99%) 購于上海邁瑞爾化學有限公司；5,5'-二硫雙 (2-硝基苯甲酸)(DTNB, AR) 購于廣州市云天生物技術有限公司；磷酸二氫鈉(AR, 99%)、十二水合磷酸氫二鈉(AR)、β-甘油磷酸鈉水合物 (β-GP, 98%)、嗎啉乙磺酸 (MES, 99%) 均購于麥克林生化科技有限公司；鹽酸 (HCl, AR)、氫氧化鈉 (NaOH, AR)、氯化鈉 (NaCl, AR)、無水乙醇 (AR) 均購于廣州斯佳生物科技有限公司；Griess試劑購于上海碧云天生物科技有限公司。

1.2 儀器與設備

SFG-02.400型電熱恒溫鼓風干燥箱 (黃石市恒豐醫(yī)療器械有限公司)；ALPHA1-4/2-4/LS型冷凍干燥機 (德國Christ公司)；HJ-6型磁力攪拌器 (金壇區(qū)西城新瑞儀器廠)；EL104型電子天平 (翰強儀器制造有限公司)；HH-W600B型數(shù)顯恒溫三用水箱 (常州朗越儀器制造有限公司)；Equinox 55型傅立葉紅外光譜儀 (德國Bruker公司)；UV-2550型紫外可見分光光度計 (日本島津)；K-Alpha+型X射線光電子能譜儀 (Thermo Scientific公司)。

1.3 方法

1.3.1 S-亞硝基海藻酸鈉抗菌水凝膠的合成

1) 巰基化海藻酸鈉 (SA-SH) 的合成。按照質(zhì)量濃度10 mg·mL-1在攪拌條件下緩慢溶解一定量SA粉末，并按濃度0.1 mol·L-1加入助溶劑嗎啉乙磺酸 (MES)[29]。攪拌至溶解完全，依次往反應體系里加入一定量的EDC和NHS (EDC∶NHS∶COO-的摩爾比為1∶1∶1)。0.5 h后，按照摩爾比氨基比羧基為1∶1的量加入半胱氨酸鹽酸鹽無水物，半胱氨酸鹽酸鹽偏酸性，因此需要用氫氧化鈉溶液(1 mol·L-1) 來調(diào)節(jié)pH至5～6。避光攪拌反應12 h后，將溶液裝入透析袋 (φ=80 mm, 8 000～14 000 kD)中，用去離子水透析3 d，每12 h換一次去離子水。透析結束后將透析袋內(nèi)溶液倒入培養(yǎng)皿中，于-20 ℃冰箱冷凍，然后放入凍干機凍干，即可得到SA-SH，最后于4 ℃條件下密封避光保存。

2) S-亞硝基海藻酸鈉 (SA-SNO) 的合成。將2 g·L-1SA-SH水溶液置于冰浴中避光冷卻至0 ℃左右，按巰基與亞硝基摩爾比為1∶2加入NaNO2攪拌。反應1.5 h后，在冰浴中使用透析袋 (φ=80 mm,5 000～8 000 kD) 避光透析12 h以除去未反應完的小分子。純化后，先將透析袋內(nèi)的SA-SNO溶液收集后放入-20 ℃冰箱凍結，再用凍干機冷凍干燥，得到SA-SNO并避光保存在0 ℃以下。

3) SA-SNO/SA-SH復合水凝膠的合成。稱取0.12、0.11、0.10、0.08、0.06 g的SA-SH，分別與0、0.01、0.02、0.04、0.06 g SA-SNO 復合 (為方便表達，以下用 β-GP-1、β-GP-2、β-GP-3、β-GP-4、β-GP-5來表示這5個組分比例的水凝膠)，加入3 mL去離子水，磁力攪拌下避光溶解，配成 4 g·L-1的水凝膠前驅(qū)液。滴加 58 g·L-1β-甘油磷酸鈉水合物 (β-GP) 將溶液調(diào)至中性，然后倒入24孔板中，置于37 ℃恒溫水浴箱中。8 h后取出，制得 β-GP-1、β-GP-2、β-GP-3、β-GP-4、β-GP-5 (圖 1)。

圖1 疏基化海藻酸鈉/S-亞硝基海藻酸鈉復合水凝膠形成的示意圖Fig. 1 Schematic diagram of SA-SH/SA-SNO composite hydrogel formation

1.3.2 紫外可見分光光度計表征

分別稱取10 mg SA-SH和SA-SNO樣品于裝有10 mL PBS溶液的2支離心管中，振搖溶解后在37 ℃水浴箱中避光保溫15 min以獲得均勻的溶液。取出后立即用紫外可見光分光光度計在200～800 nm波長范圍內(nèi)進行掃描，記錄波長與吸光度的關系圖。

1.3.3 傅立葉紅外光譜儀 (FTIR) 表征

取適量SA粉末，與KBr按照約1∶40的質(zhì)量比加入研缽內(nèi)研磨、混合均勻，取適量粉末用壓片機壓成透明的薄片，在FT-IR儀上進行透射掃描(掃描波數(shù)=4 000～500 cm-1)。分別取適量的SASH和SA-SNO冷凍干燥樣品，直接進行全反射掃描 (掃描波數(shù)=4 000～500 cm-1)。

1.3.4 樣品巰基含量測定

參照Ding等[30]方法，利用Ellman's試劑通過紫外可見分光光度計測定SA-SH和SA-SNO中游離巰基的含量。巰基的標準曲線繪制：精確稱量適量的半胱氨酸無水物樣品，并計算其巰基含量，再置于100 mL的容量瓶中，加水稀釋成濃度為10 μmol·mL-1的半胱氨酸溶液。再從該溶液中精確量取2.5 mL置于25 mL容量瓶中，加入22.5 mL水配成1 μmol·mL-1的半胱氨酸溶液。接著分別精確量取 0.25、0.5、1.0、2.0、3.0 mL 的 1 μmol·mL-1的半胱氨酸溶液置于10 mL容量瓶中，并加水將其配成濃度分別為0、0.025、0.05、0.1、0.2、0.3 μmol·mL-1的半胱氨酸標準液。精確移取各濃度標準液2 mL于5 mL棕色離心管中，再各加入提前配置好的2 mL Ellman's試劑 [0.3 mg·mL-1DTNB溶液，溶質(zhì)為5,5'-二硫雙 (2-硝基苯甲酸)，溶劑為pH=8.0的PBS溶液]，室溫下避光反應2 h。以不加半胱氨酸的標準液作為空白組，用紫外分光光度計測定各個濃度半胱氨酸標準液在450 nm處的吸光度。最后以濃度 (C, μmol·mL-1) 對吸光度(A) 進行線性回歸，制定巰基的標準曲線。樣品的巰基含量測定：分別稱取冷凍干燥的SA-SH和SASNO樣品10 mg (每個樣品取3個平行樣為一組)于15 mL離心管中，并加入2.5 mL去離子水振搖溶解，再加入 2.5 mL PBS溶液 (0.5 mol·L-1、pH=8.0) 和5 mL Ellman's 試劑，然后在室溫下避光反應2 h，同時，用同樣方法以不加樣品的離心管為空白對照，在450 nm條件下，測定各離心管溶液的吸光度。最后根據(jù)繪得的標準曲線計算各樣品游離巰基含量，最終結果以每1 g SA-SH和SASNO中巰基的量 (μmol)表示 (μmol·g-1)。

1.3.5 X 射線光電子能譜技術 (XPS) 表征

隨機從SA-SH和SA-SNO樣品膜上剪取3塊5 mm×5 mm大小的樣品，用X射線光電子能譜儀(XPS) 獲得膜的XPS光譜。使用Avantage軟件 (VG Science) 進行光譜分析。將飽和碳氫化合物的N1s峰設置為402 eV進行電荷校正，再將C1s、O1s和N1s峰的半峰值全寬分別固定在1.6、1.8和1.7 eV，并將高斯/洛倫茲比設置為50%對峰進行擬合分析。

1.3.6 水凝膠中NO實時釋放速率與負載總量

水凝膠中NO釋放速率測定[31]：將水凝膠樣品 (200 μL) 浸入15 mL PBS的離心管中，密封后置于37 ℃的恒溫水浴箱中，在設定的時間間隔對離心管進行采樣50 μL，并在空氣中暴露15 min，以產(chǎn)生亞硝酸鹽。首先利用標準液制定出格里斯試劑的標準曲線：從4 ℃冰箱取出NO試劑盒，待恢復至室溫后，按照說明書將標準樣用PBS稀釋為不同濃度待用。在96孔板中每孔加入50 μL標準樣品再向其中分別加入50 μL Griess I和II，避光反應30 min，使用微孔板多功能檢測儀測定其在540 nm 處的吸光度。收集并處理數(shù)據(jù)，得到 NO釋放標準曲線。從水凝膠溶液中吸取50 μL上清液到96孔板中，每孔依次加入50 μL Griess I和50 μL Griess II，避光反應30 min，變色后用多功能酶標儀在540 nm處測定吸光度。根據(jù)Griess試劑標準曲線計算水凝膠中NO的釋放量及釋放速率。

水凝膠中NO負載總量測定：將水凝膠樣品(200 μL) 浸入15 mL 37 ℃的PBS溶液中，再加熱至90 ℃ 保溫反應2 h。冷卻至室溫后，用PBS將水凝膠溶液稀釋20倍，從稀釋后的溶液中吸取50 μL上清液添加到96孔板中，然后依次加入50 μL Griess I和50 μL Griess II，避光反應30 min，變色后用多功能酶標儀在540 nm處測定吸光度。根據(jù)Griess試劑標準曲線計算水凝膠中NO的負載總量。

1.3.7 水凝膠抑菌性測試

利用細菌在瓊脂板上擴散的方法來初步評價水凝膠對大腸桿菌 (Escherichia coli ATCC25922) 和金黃色葡萄球菌 (Staphylococcus aureus ATCC25923)的抑制效果。將細菌復蘇培養(yǎng)至菌液在600 nm處吸光度達0.5，此時菌落數(shù)約為108CFU·mL-1。然后將菌液稀釋100倍，取50 μL均勻涂布在瓊脂板表面，將水凝膠放在瓊脂板正中心。轉(zhuǎn)移到37 ℃5%的二氧化碳 (CO2) 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，觀察抑菌圈的大小。

為進一步了解SA-SNO的殺菌過程，將β-GP-5水凝膠放入15 mL離心管中，每個離心管加入10 mL肉湯作為細菌營養(yǎng)液，以及50 μL細菌懸浮液和多個小玻片，用于掃描電鏡觀察。將細菌與水凝膠在37 ℃下培養(yǎng)2、6、12、24 h后將玻片取出，玻片表面用PBS洗滌2次以洗去肉湯等雜質(zhì)，將表面附著細菌的玻片在20 ℃下用甲醛固定、乙醇梯度脫水后，通過掃描電子顯微鏡進行觀察。

2 結果與分析

2.1 巰基化海藻酸鈉的制備

海藻酸鈉的重復結構單元糖環(huán)上含有特征官能團羥基和羧基。羧基可以在活化劑碳二亞胺偶聯(lián)劑(EDC/NHS) 的作用下被活化，活化后可與L-半胱氨酸中的氨基發(fā)生縮合反應形成酰胺鍵繼而形成巰基，具體合成路線見圖2。

圖2 疏基化海藻酸鈉合成線路圖Fig. 2 SA-SH synthetic circuit diagram

2.2 S-亞硝基海藻酸鈉的制備

SA-SH (圖3-b1) 與酸化的NaNO2在0 ℃下接觸會立即生成SA-SNO[32]，巰基和亞硝酸反應生成S-亞硝基，反應原理見圖3-a。溶液由無色變?yōu)闇\紅色 (圖3-b2)，至深紅色 (圖3-b3)。

圖3 S-亞硝基海藻酸鈉的合成路線圖 (a) 和巰基化海藻酸鈉與亞硝酸鈉反應實圖 (b)Fig. 3 SA-SNO synthetic circuit diagram (a) and actual picture of reaction of thiolated sodium alginate and sodium nitrite (b)

2.3 紫外可見光譜分析

-SNO官能團具有特征性的UV-Vis光譜[33]。SA-SNO的紫外光譜在340和540 nm左右會有明顯的特征峰，圖4中343 nm處的峰表明S-NO鍵的n0→p*電子躍遷，545 nm處的峰表示N-π*電子躍遷。沒有該官能團的巰基化海藻酸鈉上則沒有這些峰。這2個峰能表明S-亞硝基海藻酸鈉主鏈上存在-SNO基團，即反應合成成功。

圖4 巰基化海藻酸鈉與S-亞硝基海藻酸鈉紫外掃描圖Fig. 4 UV-Vis diagrams of thiolated sodium alginate and S-nitrosated sodium alginate

2.4 FT-IR結果分析

對反應物SA和2種產(chǎn)物進行紅外光譜分析，從FI-IR圖5中可以看出，SA在1 595 cm-1出現(xiàn)的峰為海藻酸鈉中羧基官能團的不對稱伸縮振動峰，在1 409 cm-1處的吸收峰為海藻酸鈉中羧基官能團的對稱伸縮振動峰。當海藻酸鈉經(jīng)過改性成為巰基化海藻酸鈉時，SA-SH則會在2 370 cm-1出現(xiàn)一個微弱的峰，這是巰基特有的特征。在1 698 cm-1處形成新峰，這是酯基的-C=O的伸縮振動造成的。同時，在1 602 cm-1和1 409 cm-1處的峰分別是酰胺I帶的C=O伸縮振動峰和酰胺II帶-NH面內(nèi)彎曲振動峰，兩者最大的差別就是經(jīng)過巰基化改性，SA-SH在1 242 cm-1處形成了一個明顯的新峰，該峰是酰胺III帶-CN伸縮振動峰。通過對兩者紅外圖譜的比較，SA-SH相比SA，無論是羧基的對稱和不對稱伸縮振動峰還是羥基的伸縮峰，峰的強度都發(fā)生了明顯減弱，原因是SA進行巰基化改性時加入了活化劑，海藻酸鈉的羧基被碳二亞胺偶聯(lián)劑活化，被活化的羧基與L-半胱氨酸鹽酸鹽的氨基結合形成酰胺鍵，小部分羧基與海藻酸鈉分子鏈上活化的羥基發(fā)生自交聯(lián)形成酯鍵。而SA-SNO的紅外譜圖相比另外2個，所有峰的強度均出現(xiàn)了明顯減弱，原因是巰基與亞硝酸鈉反應，形成了亞硝基，圖中1 396 cm-1-SN的伸縮振動峰很好地證明了這一點。

圖5 巰基化海藻酸鈉與S-亞硝基海藻酸鈉紅外譜圖Fig. 5 Infrared spectra of thiolated sodium alginate and S-nitrosated sodium alginate

2.5 巰基含量測定結果分析

經(jīng)過多次實驗，通過數(shù)據(jù)處理得到L-半胱氨酸鹽酸鹽的游離巰基標準溶液曲線公式為：A=3.737 1×C-0.028 6,R2=0.999 9 (450 nm, 0.025≤C≤0.3 μmol·mL-1)。為了提高巰基含量，選用較優(yōu)方法及配比，SA/L-cysteine (w/w) 配比為1∶1，海藻酸鈉選用中黏度分子量樣品。通過計算可得，所制備的SA-SH游離巰基質(zhì)量摩爾濃度為 (348.06±4.25) μmol·g-1。而 SA-SNO 是由 SA-SH中的游離巰基改性得到的，所以游離巰基質(zhì)量摩爾濃度大大降低，為 (158.96±0.56) μmol·g-1。

2.6 XPS結果分析

在SA-SH的XPS譜圖中觀察到了N1s峰 (402 eV)，N元素百分比含量為3.33%，這是SA與半胱氨酸反應后形成的酰胺基的N元素量 (圖6)。SASH反應生成SA-SNO后，分子上的半胱氨酸殘基上又引入了-SNO基團，含氮量增加。在XPS圖上我們也可以看到更強的N1s峰，N元素百分比含量提高至8.91%。

圖6 巰基化海藻酸鈉與S-亞硝基海藻酸鈉XPS光譜圖Fig. 6 XPS spectra of thiolated sodium alginate and S-nitrosoalginate sodium

2.7 水凝膠中NO實時釋放速率與負載總量

NO的釋放量可通過Griess測定法[34]確定。不含SA-SNO成分的水凝膠也不產(chǎn)生NO，隨著SASNO在水凝膠中比例的增加，產(chǎn)物NO的量也隨之增多 (表1)。Hasan等[35]報道的 NO總釋放量為(0.23±0.006) μmol·mg-1，本實驗中最好樣品 (水凝膠5號樣) 釋放的 NO 總量為其116%，NO負載量增加較多。

表1 水凝膠中一氧化氮的總負載量Table 1 Total loading of NO in hydrogel

在120 h內(nèi)，含不同-SNO量的水凝膠均迅速釋放NO，10 h后達到頂峰，之后逐漸衰減，4 d后趨于平緩，釋放速率為 10～20 μmol·(g·h)-1(圖 7)。其中高含量的SA-SNO水凝膠在120 h后依然有較高速率的 NO 釋放，為 30.12～44.32 μmol·(g·h)-1。因此，SA-SNO的初始濃度是決定水凝膠NO釋放速率的一個重要因素。SA-SH/SA-SNO水凝膠降解SNO生成NO的反應性隨初始-SNO含量的增加而增大。這種現(xiàn)象與Maragos等[36]的研究結果一致，后者觀察到-SNO中NO的釋放速率與其初始濃度成正比。在熱激發(fā) (37 ℃) 或光的作用下，GelSNO分解生成噻吩基和NO [(反應 (1)]。新產(chǎn)生的噻吩基與GelSNO反應形成二硫鍵和NO [反應 (2)]。同時，噻吩基與氧反應生成過氧自由基[反應 (3)]。這些過氧自由基與GelSNO連續(xù)相互作用，生成NO和GSSG [反應 (4)]?？傮w而言，初始濃度較高的GelSNO會產(chǎn)生大量的硫代自由基，從而增加了NO的產(chǎn)生。

圖7 水凝膠120 h內(nèi)一氧化氮實時釋放曲線Fig. 7 Real-time release curve of NO from hydrogels in 120 h

2.8 水凝膠抑菌性分析

水凝膠能被用作傷口敷料，主要原因是其具有殺滅或抑制細菌的能力，從而避免外界細菌感染并促進傷口愈合[3]。利用抑菌圈實驗研究了水凝膠對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的抑制效果 (圖8)。隨著S-亞硝基濃度的增加，抑菌圈直徑逐漸增大，表明抑菌效果不斷增強。此外，掃描電鏡圖可進一步觀察到水凝膠的殺菌過程。首先，與水凝膠共培養(yǎng)1 h后，大腸桿菌呈棒狀 (圖9-a)，金黃色葡萄球菌呈圓形 (圖9-e)，均顯示出光滑的細胞膜。隨著共培養(yǎng)時間的延長，水凝膠開始持續(xù)釋放NO，細菌受到抑制，其形態(tài)發(fā)生了變化。在培養(yǎng)6 h后的細菌掃描圖中，大腸桿菌開始收縮 (圖9-b)，金黃色葡萄球菌個體變小，表面出現(xiàn)破損 (圖9-f)。培養(yǎng)12 h后的細菌掃描圖 (圖9-c、圖9-g) 顯示，兩種細菌的細胞膜發(fā)生破裂、變形，細菌開始干癟、爆裂分解。培養(yǎng)24 h后 (圖9-d、圖9-h)，只有細菌破裂的殘骸。這些變化表明，大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的膜被破壞，導致細胞死亡，最后細菌被滅殺破裂。相對而言，水凝膠對陽性的金黃色葡萄球菌顯示出了更好的抑菌效果，這可能與NO抗菌作用機理相關。有研究表明NO破壞了細菌生物膜，導致大量基質(zhì)外泄，造成細菌死亡[37]，也有研究認為NO能通過抑制細胞呼吸、減少細胞外膜蛋白的合成或抑制細胞壁的形成等機制殺菌[38]，目前尚未有定論。

圖8 水凝膠的抑菌圈測試Fig. 8 Inhibition zone test of hydrogels

圖9 與水凝膠共培養(yǎng)1、6、12、24 h的細菌形貌Fig. 9 Morphology of bacteria co-cultured with hydrogel for 1, 6, 12, 24 h

3 結論

本研究以生物相容性良好的海藻多糖原料——海藻酸鈉為基體，制備了可原位成型的巰基化海藻酸水凝膠以利于無規(guī)則創(chuàng)面的使用，設計了一個簡便高效的方法合成NO供體——SA-SNO。通過將2種改性膠復合成功地開發(fā)出可釋放NO的SA-SH/SASNO抗菌水凝膠。水凝膠NO釋放實驗顯示水凝膠供體在生理條件下具有優(yōu)良的NO釋放性能，控制反應條件和反應物SA-SNO的量，可以在10×nmol到μmol范圍內(nèi)調(diào)節(jié)水凝膠NO的釋放，對革蘭氏陽性和陰性細菌均表現(xiàn)出顯著的殺菌效果。本研究還存在一些問題，如未確定材料的具體殺菌機制，作為抗菌促修復傷口敷料，其生物相容性還需進一步探討。但總的來說，由于該水凝膠可持續(xù)釋放較高含量的NO且具有顯著的殺菌效果，有望作為抗菌敷料，在傷口感染治療和組織修復方面具有較好的應用前景。