膜控型非諾貝特緩釋微丸制備工藝優(yōu)選及體外釋放度評價

牛向偉 ，姜莉莉 ，周國忠 ，張 寧

（1. 頸復(fù)康藥業(yè)集團有限公司，河北 承德 067000； 2. 河北省中藥新輔料技術(shù)創(chuàng)新中心，河北 承德 067000）

高脂血癥已成為21世紀(jì)威脅人類生命健康的主要疾病之一，也是眾多慢性疾病的直接誘因［1］。目前，臨床用于調(diào)血脂的藥物主要可分為貝特類、他汀類、煙酸類、樹脂類、膽固醇吸收抑制劑及其他六大類［2］。其中，貝特類的代表藥物為非諾貝特，其上市產(chǎn)品劑型以速釋劑為主［3］。但高脂血癥患者多為老年人，速釋制劑藥物釋放過快，易造成藥物突釋而產(chǎn)生中毒；且劑量較小，1 d 需服用2～3 次才能達到治療效果，易出現(xiàn)漏服現(xiàn)象，順應(yīng)性差。由于藥物本身難溶［4］，若制成普通的緩釋劑會造成遲釋現(xiàn)象，影響療效；而制成微球比表面積較大，難以把握藥物包封率及釋放度。微丸是一種多單元型給藥系統(tǒng)，具有比表面積適中、釋藥穩(wěn)定、流動性好等優(yōu)點［5-7］，將藥物制成緩釋微丸效果較理想。本研究中采用流化床包衣技術(shù)制備膜控型非諾貝特緩釋微丸，采用正交試驗優(yōu)選制備工藝，并考察其體外釋放效果?，F(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Mini-Glatt 型流化床（德國Glatt 公司）；LC-10AT型高效液相色譜儀（日本島津公司）；ZRS-8GD 型智能溶出試驗儀（天大天發(fā)科技有限公司）；FEI JEM -2800F 型聚焦離子束/ 場發(fā)射掃描電子顯微鏡（美國FEI 公司）；XSE205DU 型電子分析天平（梅特勒-托利多儀器有限公司，精度為十萬分之一）；DG-202BS型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（天津市天宇實驗儀器有限公司）。

1.2 試藥

非諾貝特對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號為20180405，純度為99.9%）；非諾貝特緩釋膠囊（上海愛的發(fā)制藥有限公司，批號為20180709，規(guī)格為每粒250 mg）；非諾貝特原料藥（江蘇恩華藥業(yè)集團有限公司，批號為171021）；Eudragit NE30D 丙烯酸樹脂水分散體（德國羅姆公司，批號為G090918109）；羥丙甲基纖維素（遼寧奧達制藥有限公司，批號為20180602）；滑石粉（廣西龍勝華美滑石開發(fā)有限公司，批號為1612075）；十二烷基硫酸鈉（湖南九典宏陽制藥有限公司，批號為TF33191103）；乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 緩釋微丸制備

2.1.1 載藥微丸制備

取羥丙甲基纖維素（黏度為4 mPa·s）3 g，分散于熱水中，攪拌，冷卻，待溶液澄清后加入非諾貝特原料藥4 g及滑石粉（過100 目篩）0.5 g，混勻，即得上藥液；取空白丸芯（400～500 μm）60 g，置流化床內(nèi)，采用底噴包衣技術(shù)包載藥層。設(shè)置包載藥層工藝參數(shù)為進風(fēng)流量10 m3/ h，霧化壓力1.7 bar，噴槍流速 2.5 mL/ min，物料溫度35 ℃，反吹間隔4 s。隨時調(diào)整參數(shù)至載藥結(jié)束，即得載藥微丸。

2.1.2 正交試驗優(yōu)選微丸制備工藝

采用流化床技術(shù)制備載藥微丸時發(fā)現(xiàn)，霧化壓力（因素A）、物料溫度（因素B）和噴槍流速（因素C）對微丸制備工藝的影響較大。故以這3 個參數(shù)為考察因素，以7 h 的藥物累積釋放率為評價指標(biāo)，采用L（934）正交試驗優(yōu)化制備工藝。因素與水平見表1，正交試驗設(shè)計及結(jié)果見表2。

表1 因素與水平Tab.1 Factors and levels of L9（34） orthogonal test

表2 L9（34）正交試驗設(shè)計及結(jié)果（n=9）Tab.2 Design and results of L9（34） orthogonal test（n=9）

采用Design Expert 8.0.6 軟件進行試驗設(shè)計與數(shù)據(jù)分析。由表2 可知，影響微丸釋放度的順序由大至小為因素C>因素A>因素B。直觀分析擬訂最優(yōu)方案為A1B3C3，即霧化壓力為1.7 bar，物料溫度為35 ℃，噴槍流速為2.5 mL/min。

2.1.3 載藥緩釋微丸制備

取十二烷基硫酸鈉和滑石粉（過100 目篩）各1 g，加入丙烯酸樹脂水分散體和適量超純水稀釋至固體含量（按丙烯酸樹脂水分散體計）為10%，即得緩釋層包衣液，采用流化床包衣技術(shù)將其包裹于載藥微丸上。設(shè)置包衣工藝條件為進風(fēng)流量9 m3/h，霧化壓力1.7 bar，噴槍流速2.5 mL/min，物料溫度35 ℃，反吹間隔5 s。隨后適當(dāng)固化衣膜，得到載藥緩釋微丸。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線建立

2.2.1 色譜條件

色譜柱：Dikma Diamonsil C18柱（200 mm ×4.6 mm，5 μm）；流動相：水（磷酸調(diào)pH 至2.5）- 乙腈（25∶75，V/V）；流速：1 mL/min；檢測波長：286 nm；柱溫：25 ℃；進樣量：20 μL。

2.2.2 線性關(guān)系考察

取非諾貝特對照品20 mg，精密稱定，置100 mL 容量瓶中，加入適量流動相溶解并稀釋至刻度，用0.45 μm微孔濾膜濾過，即得對照品貯備液。分別精密吸取0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0 mL對照品貯備液，置50 mL容量瓶中，加入流動相稀釋至刻度，即得質(zhì)量濃度分別為2.0，4.0，6.0，8.0，10.0，12.0 μg/mL 的系列對照品溶液，按2.2.1 項下色譜條件進樣測定，以非諾貝特質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（X，μg/mL）、峰面積（Y）為縱坐標(biāo)進行線性回歸，得回歸方程Y=29 450X+88.457（r=0.999 6，n=6）。結(jié)果表明，非諾貝特質(zhì)量濃度在2.0～12.0 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

2.3 體外釋放度試驗

按2020 年版《中國藥典（四部）》中的槳法［8］，設(shè)置參數(shù)，轉(zhuǎn)速為120 r/min，溶出介質(zhì)為10 g/L 十二烷基硫酸鈉溶液（助溶劑），溶出體積為1 000 mL，溫度為36.5～37.5 ℃。依法操作，分別于1，2，4，7，12 h 時吸取供試品溶液各10 mL，濾過，立即向所操作容器中補充10 mL 溶出介質(zhì)，精密量取 2 mL 續(xù)濾液，置 50 mL 容量瓶中，加入流動相稀釋并定容，按2.2.1 項下色譜條件進樣測定3次，計算供試品溶液在不同時間的累積釋放率。結(jié)果自制制劑與參比制劑的釋藥時間基本一致，表明自制制劑體外釋放度良好。詳見圖1。

圖1 自制制劑與參比制劑的體外釋放曲線（n=5）Fig.1 Release profiles of the homemade preparation and reference preparation in vitro（n=5）

2.4 緩釋微丸體外釋放度影響因素考察

老化時間：將按上述優(yōu)化條件制備好的載藥緩釋微丸置40 ℃烘箱中，分別于老化0，5，10，15，20 h 時按2.3項下方法測定體外釋放度，繪制體外釋放曲線（圖2）。結(jié)果表明，藥物的體外釋放度隨老化時間的延長而減慢，但當(dāng)老化時間達到10 h 以上時，體外釋放度未見明顯變化，表明緩釋微丸的衣膜已愈合完全，藥物釋放趨于穩(wěn)定，故老化時間確定為10 h。

圖2 老化時間對緩釋微丸體外釋放度的影響（n=5）Fig.2 Effects of aging time on the release of sustained-release pellets in vitro（n=5）

包衣增量：由本制劑通過空白丸芯經(jīng)過包覆藥物層及緩釋層衣膜而延緩藥物的釋放，釋放機制為膜滲透型，故緩釋層包衣的增量會直接影響藥物的釋放。采用丙烯酸樹脂分別增量10%，15%，20%，25%，30%，測定藥物1，4，7 h 的累積釋放量是否符合藥典規(guī)定的10%～30%、50%～75%、75%以上。結(jié)果當(dāng)包衣增量為10%，15%時，藥物出現(xiàn)了突釋現(xiàn)象；當(dāng)包衣增量為25%～30%時，藥物出現(xiàn)了遲釋現(xiàn)象；當(dāng)包衣增量為20%時緩釋效果良好。故最終包衣增量選擇20%。詳見圖3。

圖3 包衣增量對緩釋微丸體外釋放度的影響（n=5）Fig.3 Effects of coating increment on the release of sustained-release pellets in vitro（n=5）

2.5 載藥緩釋微丸掃描電子顯微鏡表征

按優(yōu)選工藝制備載藥緩釋微丸，采用掃描電子顯微鏡進行體外表征。結(jié)果微丸衣膜較平整光滑，圓整度好（圖4 A 和圖4 B）；明顯看到空白丸芯，藥物及緩釋層清晰可見（圖4 C）；可觀察到微丸表面成膜材料致密規(guī)則（圖4 D）。結(jié)果表明，包衣效果較理想。

圖4 緩釋微丸表面及橫切面掃描電子顯微鏡表征A-B.Plans C.Section D.Partial enlargementFig.4 SEM characterizations of the surface and cross-section of sustained-release pellets

3 討論

非諾貝特為生物藥劑學(xué)分類系統(tǒng)Ⅱ類藥物，屬難溶型藥物，溶出度較低，水中溶解度僅為0.8 μg/mL［9］，故口服生物利用度較低。為提高其溶解度，曾考察不同方法，如做成自乳化給藥系統(tǒng)，采用超臨界流體法、乳化固化法、噴霧干燥法等制備微粉化非諾貝特，與乳糖、聚維酮、十二烷基硫酸鈉共研磨，與β- 環(huán)糊精制成包合物，采用介孔結(jié)構(gòu)的氧化錫載體載藥等［10-15］，可提高藥物溶出度，但口服后仍可能出現(xiàn)藥物再結(jié)晶、藥物突釋、載藥量較小、包封率較低、個體差異較大等問題。由于藥物本身難溶，若制成普通的緩釋片劑會造成藥物遲釋現(xiàn)象，影響療效；而制成微球比表面積較大，藥物包封率及釋放度很難把握。因此，制成比表面積相對適中的緩釋微丸，再包封于膠囊之中，藥物的釋放效果較理想。

非諾貝特緩釋微丸的制備受以下因素影響。1）包衣材料的類型。本試驗中采用緩釋成膜材料，選用的10%丙烯酸樹脂水分散體為中等滲透性非離子型聚合物，其分子結(jié)構(gòu)中不含活性基團，屬非pH 依賴型，且最低成膜溫度只有5 ℃，具有良好的膜抗張強度和拉伸率。2）流化床工藝參數(shù)。采用L（934）正交試驗確定最佳工藝參數(shù)為霧化壓力1.7 bar，物料溫度35 ℃，噴槍流速2.5 mL/min，制得的微丸平整光滑，圓整度好，包衣效果較理想，釋藥穩(wěn)定，適合批量生產(chǎn)。

非諾貝特緩釋微丸體外釋放度受以下因素影響。1）對于膜控型制劑，包衣增量對其藥效起決定性作用，本研究中最終確定包衣增量為20%，此時體外釋放效果良好。2）老化時間對膜滲透性及外觀影響較大，故需通過充分的試驗確定最適老化時間，以保證制劑釋藥性能符合要求，且能在貯存期間維持釋藥性能的穩(wěn)定，本研究中最終確定老化時間為10 h。

綜上所述，本研究中優(yōu)選的非諾貝特緩釋微丸的制備工藝簡單可行，制備樣品的體外釋放度符合要求，與參比制劑緩釋效果相近，達到了預(yù)期的緩釋效果，為開發(fā)新劑型奠定了基礎(chǔ)。