薩能奶山羊同期發(fā)情與定時(shí)輸精方法探究

張 靜，陸曉雨，孫國(guó)正，范宇偉，吳興龍，李相運(yùn)*

（1.河北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，河北保定 071000；2.上海牧齊牧業(yè)科技有限公司，上海 201514）

薩能奶山羊產(chǎn)奶量高、抗病能力強(qiáng)，是當(dāng)今世界上乳用奶山羊的代表品種，但奶山羊,發(fā)情具有明顯的季節(jié)性，利用同期發(fā)情技術(shù)調(diào)整奶山羊的自然發(fā)情周期，能夠提高繁殖效率，為實(shí)現(xiàn)全年供奶提供技術(shù)支持。目前常見的奶山羊同期發(fā)情方法有孕酮栓（12～15 d）+馬絨毛膜促性腺激素（eCG）法、短期孕酮栓（5～6 d）+PGF2+eCG 法或短期孕酮栓（5～6 d）+PGF2+GnRH法等程序，并在撤栓后36～42 h 輸精2 次。不同的方案與輸精時(shí)間對(duì)不同季節(jié)、不同胎次、不同生理時(shí)期的薩能奶山羊的繁殖效果不同，不能滿足市場(chǎng)對(duì)全年供奶的需求。此外，陰道黏液的變化反映雌性的生殖狀態(tài)，將黏液狀態(tài)作為判斷發(fā)情、排卵的輔助指標(biāo)能夠更快、更便捷地確定最佳輸精時(shí)間，提高受胎率。因此，為探究適合薩能奶山羊的最佳同期發(fā)情與定時(shí)輸精方法，本實(shí)驗(yàn)采用孕酮栓+eCG 的方法對(duì)過渡時(shí)期（7 月）以及繁殖季節(jié)（11 月）的母羊進(jìn)行同期發(fā)情處理，結(jié)合黏液狀態(tài)，探究適合薩能奶山羊的同期發(fā)情與定時(shí)輸精方案，提高受胎率，簡(jiǎn)化配種工作，為薩能奶山羊的高效繁殖提供技術(shù)支持。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和場(chǎng)地 實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)位于甘肅省慶陽市環(huán)縣薩能奶山羊羊場(chǎng)。實(shí)驗(yàn)時(shí)間分別為2019 年11 月繁殖季節(jié)和2020 年7 月過渡時(shí)期2個(gè)階段。試驗(yàn)分為5 組，A 組為1 100 只繁殖季節(jié)的青年薩能奶山羊，B、C 組分別為過渡時(shí)期的245 只青年羊和259 只經(jīng)產(chǎn)母羊，D、E 組分別為泌乳后期停止擠奶的母羊125 只和46 只。試驗(yàn)?zāi)秆蛟?～5 歲，體重30 kg 以上，膘情中等，無生殖道疾病。母羊全部舍飼，每天定時(shí)飼喂2 次燕麥草和苜蓿草，自由飲水和舔食礦物鹽磚。

1.2 同期發(fā)情 實(shí)驗(yàn)?zāi)秆蛲ㄟ^埋置陰道海綿栓（含45 mg氟孕酮，上海牧齊牧業(yè)科技有限公司）進(jìn)行同期發(fā)情處理，埋栓當(dāng)天記為0 d，于15 d 撤栓，同時(shí)每只母羊肌肉注射馬絨毛膜促性腺激素（eCG）330 IU（1000 IU/瓶，寧波三生生物科技有限公司）。

1.3 定時(shí)輸精 為減小季節(jié)對(duì)精液的影響，采集薩能種公羊的新鮮精液后對(duì)原精活力進(jìn)行評(píng)估，選擇活力/密度>0.7 的種公羊精液，使用30℃預(yù)熱的伊利脫脂牛奶作為稀釋劑將精液稀釋5～10 倍（稀釋后精液活力>0.5，精子密度>4×10/mL），置于30℃恒溫水浴鍋內(nèi)備用。A～D 組母羊均在撤栓后40 h 和48 h 輸精2 次；E 組母羊在撤栓后48 h 和56 h 輸精2 次。輸精方法為子宮頸口內(nèi)輸精。輸精時(shí)，試驗(yàn)羊倒立保定，用溫生理鹽水清洗并擦拭外陰部，通過開膣器打開陰道，使用頭燈觀察并定位子宮頸口，利用羊?qū)Ｓ幂斁鳎ū６ㄕ旧锟萍加邢薰荆┪?.3 mL 精液，并緩慢注入子宮頸口內(nèi)。若有黏液遮擋子宮頸口，則使用黏液管吸取干凈以免影響輸精。過渡期的D、E 兩組母羊在放栓時(shí)每只羊注射2 mL 苯甲酸雌二醇注射液（四川省泰信動(dòng)物藥業(yè)有限公司）。

1.4 黏液檢查 輸精時(shí)詳細(xì)記錄每只母羊陰道黏液的外觀狀態(tài)，包括黏液量、粘稠度以及顏色。

1.5 妊娠檢查 輸精后40 d 由1 名固定人員使用B 超檢測(cè)儀（DP-30Vet，深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司）經(jīng)腹壁對(duì)受配母羊進(jìn)行妊娠檢查，統(tǒng)計(jì)每組母羊的受胎率。受胎率=妊娠母羊數(shù)/受配母羊數(shù)×100%。

1.6 統(tǒng)計(jì)分析 利用 Excel 軟件整理數(shù)據(jù)，用SPSS 19.0 進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，各組奶山羊受胎率之間的顯著性檢驗(yàn)采用卡方檢驗(yàn)，<0.05 為差異顯著。

2 結(jié)果

2.1 同期發(fā)情方案對(duì)各組山羊同期效果的影響 撤栓后40 h 對(duì)試驗(yàn)?zāi)秆蜻M(jìn)行試情，發(fā)情結(jié)果如表1 所示，繁殖季節(jié)的A 組母羊同期發(fā)情效果最好，過渡時(shí)期的B、C組母羊發(fā)情較好，但D、E 組泌乳母羊的發(fā)情效果一般，這說明本實(shí)驗(yàn)的同期方案雖對(duì)不同時(shí)期的母羊均可行，但青年羊和斷奶經(jīng)產(chǎn)母羊的同期效果更好。

表1 各組奶山羊同期發(fā)情效果統(tǒng)計(jì)表

2.2 同期方案與輸精時(shí)間對(duì)不同季節(jié)和生理狀態(tài)奶山羊受胎率的影響 由表2 可知，A 組繁殖季節(jié)青年羊的受胎率為85.9%，高于相同處理的過渡時(shí)期B、C、D 組（<0.05）。B 組青年羊受配245 只，妊娠166 只，受胎率為67.8%；C 組經(jīng)產(chǎn)母羊受配259 只，妊娠159 只，受胎率為61.4%，不同胎次間受胎率差異不顯著。D 組泌乳母羊受配200 只，妊娠94 只，受胎率為47.0%；E組泌乳母羊受配69 只，妊娠35 只，受胎率為50.7%。D、E 組不同輸精時(shí)間的泌乳母羊受胎率差異不顯著。

表2 同期發(fā)情與定時(shí)授精方案對(duì)薩能奶山羊受胎率的影響

2.3 輸精時(shí)陰道黏液狀態(tài)與受胎率高低的相關(guān)性 過渡時(shí)期奶山羊在輸精時(shí)的黏液狀態(tài)與受胎率的對(duì)比情況如表3 所示，撤栓后40 h，經(jīng)產(chǎn)母羊的黏液為大量透明清亮黏液，青年羊黏液量比經(jīng)產(chǎn)羊少且呈拉絲狀，泌乳母羊呈少量半透明拉絲狀。撤栓后48 h，經(jīng)產(chǎn)母羊黏液量開始減少并出現(xiàn)拉絲狀，青年羊的黏液變化較小呈渾濁拉絲狀，泌乳母羊的黏液開始變得渾濁和粘稠。撤栓后56 h，泌乳母羊的黏液呈粘稠狀。結(jié)果顯示，在撤栓后相同輸精時(shí)間內(nèi)，經(jīng)產(chǎn)母羊的黏液最清亮，發(fā)情階段最早，受胎率較低，青年羊的黏液較粘稠且呈拉絲狀，受胎率較高。泌乳母羊黏液雖然很濃稠，但受胎率較斷奶母羊低。

表3 過渡時(shí)期薩能奶山羊輸精時(shí)的黏液狀態(tài)與受胎率高低的比較

3 討 論

3.1 不同季節(jié)對(duì)薩能奶山羊受胎率的影響 奶山羊?qū)儆诙倘照瞻l(fā)情動(dòng)物，在自然條件下，非繁殖季節(jié)以及過渡時(shí)期的發(fā)情率和受胎率均低于繁殖季節(jié)。本試驗(yàn)分別在繁殖季節(jié)和過渡時(shí)期對(duì)薩能奶山羊進(jìn)行了同期發(fā)情與定時(shí)輸精處理。在處理方案與輸精時(shí)間一致的條件下，A 組繁殖時(shí)期的青年羊獲得85.9%的受胎率。同時(shí)在過渡時(shí)期的B 組青年羊和C 組經(jīng)產(chǎn)母羊中獲得了較高的受胎率，D、E 組泌乳后期的母羊也獲得了近50%的受胎率。這說明本實(shí)驗(yàn)的同期發(fā)情和定時(shí)輸精方法適合在繁殖季節(jié)以及過渡時(shí)期的薩能奶山羊中推廣應(yīng)用。后期將繼續(xù)在繁殖季節(jié)探究本試驗(yàn)的同期方案對(duì)經(jīng)產(chǎn)羊以及泌乳后期母羊受胎率的影響。

3.2 不同胎次對(duì)薩能奶山羊受胎率的影響 本試驗(yàn)分別在繁殖季節(jié)和過渡時(shí)期使用孕酮栓+eCG 的方法對(duì)薩能奶山羊進(jìn)行同期發(fā)情和人工輸精，評(píng)估胎次與受胎率之間的關(guān)系。結(jié)果表明，撤栓后40 h 和48 h 輸精兩次，繁殖季節(jié)的青年奶山羊獲得了很高的受胎率；同時(shí)過渡時(shí)期的青年羊和經(jīng)產(chǎn)母羊也獲得了不錯(cuò)的受胎率，且青年羊的受胎率略高于經(jīng)產(chǎn)母羊。這些數(shù)據(jù)表明本試驗(yàn)方案能夠使不同胎次的薩能奶山羊均獲得不錯(cuò)的受胎率，而輸精時(shí)間更接近青年羊的排卵時(shí)間。關(guān)于排卵時(shí)間的文獻(xiàn)中指出，使用孕酮栓+hCG 同期發(fā)情的母羊從注射hCG 到排卵，青年羊比經(jīng)產(chǎn)母羊早約5～10 h。這均與本試驗(yàn)的結(jié)論一致。對(duì)文登奶山羊使用孕酮栓+eCG 的方法進(jìn)行同期發(fā)情和人工輸精，第1 胎（青年羊）的受胎率（81.8% VS 57.1%）也顯著高于第2 胎（經(jīng)產(chǎn)母羊）。推斷本試驗(yàn)的同期方案也存在青年羊排卵早于經(jīng)產(chǎn)羊的現(xiàn)象。因此，使用孕酮栓+eCG 對(duì)薩能奶山羊進(jìn)行同期處理并在撤栓后40 h 和48 h 輸精，青年羊和經(jīng)產(chǎn)羊均獲得較好的受胎率，若適當(dāng)推遲經(jīng)產(chǎn)羊的輸精時(shí)間6～8 h，有望獲得更高的受胎率，后期將繼續(xù)設(shè)計(jì)試驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證。

3.3 不同輸精時(shí)間對(duì)奶山羊受胎率的影響 D、E 2 組母羊的輸精時(shí)間相差8 h，輸精較晚的E 組母羊受胎率略高，但二者差異不顯著。結(jié)果說明將輸精時(shí)間推遲到撤栓后48 h 和56 h，受胎率未受影響。大多數(shù)關(guān)于山羊定時(shí)輸精的文獻(xiàn)報(bào)道中，輸精時(shí)間都在撤栓后36～42 h 之間。而使用孕酮栓+eCG 法同期發(fā)情處理的母羊，在撤栓后54～56 h 內(nèi)進(jìn)行單次陰道輸精，獲得了較高的受胎率，這與本試驗(yàn)結(jié)果一致。此外，使用孕酮栓+eCG的方法對(duì)努比亞山羊進(jìn)行同期發(fā)情處理，約65% 的母羊在撤栓后25～48 h 內(nèi)發(fā)情，27%的母羊在49～72 h 內(nèi)發(fā)情，而大部分母羊在撤栓后56 h 左右到達(dá)發(fā)情末期并輸精，這些均與E 組母羊的輸精時(shí)間一致。因此，將薩能奶山羊的輸精時(shí)間推遲至撤栓后48 h 和56 h，既能包含更多的排卵母羊以提高受胎率，又能使輸精時(shí)間相對(duì)自由，避免出現(xiàn)白天撤栓，晚間輸精的問題。

3.4 雌二醇對(duì)泌乳母羊受胎率的影響 雌二醇是一種甾體雌激素，具有很強(qiáng)的性激素作用。在放栓期間對(duì)D、E 2 組泌乳奶山羊注射2 mL 雌二醇并獲得了近50%的受胎率，猜測(cè)雌二醇起到了促進(jìn)發(fā)情的效果。有研究在繁殖季節(jié)對(duì)奶山羊注射6 mg 苯甲酸雌二醇，能夠提高羊群的發(fā)情同期性與受胎率。而在埋栓當(dāng)天給肉牛注射2 mg 雌二醇，并于7 d 后撤栓，發(fā)情比例與受胎率也均顯著升高。這與本試驗(yàn)結(jié)果類似。猜測(cè)在埋栓期間注射雌二醇能夠?qū)ε怕哑鸬酱龠M(jìn)作用，提高發(fā)情的同期性和排卵率。另外，對(duì)同期發(fā)情的奶牛注射苯甲酸雌二醇12 h 后，增加了LH 的峰值和持續(xù)時(shí)間，起到了促排的作用。因此，為縮短空懷時(shí)間，實(shí)現(xiàn)全年產(chǎn)羔，對(duì)于泌乳后期的母羊可以在現(xiàn)有同期發(fā)情方案的基礎(chǔ)上，配合雌二醇的使用，促進(jìn)泌乳母羊的干奶及發(fā)情，提高妊娠率。

3.5 輸精時(shí)的黏液狀態(tài)與受胎率 陰道黏液變化可反映雌性的生殖狀態(tài)，與排卵和最佳輸精時(shí)間密切相關(guān)。反復(fù)經(jīng)直腸超聲檢測(cè)排卵時(shí)間的工作在生產(chǎn)實(shí)踐中不便執(zhí)行。因此，通過對(duì)陰道黏液狀態(tài)的直接觀察能更簡(jiǎn)單地判斷排卵并確定最佳輸精時(shí)間。陰道黏液的變化主要由發(fā)情旺盛時(shí)期的大量、透明，隨后變?yōu)榘胪该骼z狀，再變?yōu)榘l(fā)情中后期的混濁和濃稠。本實(shí)驗(yàn)對(duì)過渡時(shí)期4 組母羊黏液分泌情況的統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)，在撤栓后相同的時(shí)間輸精時(shí)，青年羊的黏液呈現(xiàn)拉絲狀，發(fā)情階段晚于經(jīng)產(chǎn)母羊，獲得了較高的受胎率，即本實(shí)驗(yàn)的輸精時(shí)間更接近青年羊的排卵時(shí)間。有類似的研究表明，在黏液較多且有拉絲狀的時(shí)候輸精，妊娠率獲得提高，這與本試驗(yàn)結(jié)果一致。在小反芻動(dòng)物中，卵泡破裂之前卵泡的直徑通常會(huì)減少，而宮頸黏液從透明狀到半透明拉絲狀的時(shí)候卵巢上有更大的有腔卵泡，說明大多數(shù)排卵發(fā)生在黏液由半透明變渾濁的階段。因此，宮頸黏液檢查的簡(jiǎn)便性使其成為確定人工授精最佳時(shí)間的一種非常有用的方法，在黏液開始變渾濁的時(shí)期輸精能夠增加精子遇到卵子的概率，獲得更高的受胎率。

4 結(jié) 論

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，使用孕酮栓+eCG 的方法對(duì)薩能奶山羊進(jìn)行同期發(fā)情，并在撤栓后40 h 和48 h 輸精2 次，不同季節(jié)、不同胎次以及不同生理時(shí)期的母羊均獲得較好的受胎率。適當(dāng)推遲輸精時(shí)間，受胎率不受影響。此外，借助陰道黏液狀態(tài)的評(píng)估能夠更加準(zhǔn)確地判斷輸精時(shí)間。