乳腺浸潤性導(dǎo)管癌SLeX和Maspin表達(dá)的臨床病理研究

張 偉，喬樹平，尚培中，劉 冰，李 偉，南潤玲

(1.中國人民解放軍陸軍第八十一集團(tuán)軍醫(yī)院普通外科，河北 張家口 075000；2.河北懷來世濟(jì)醫(yī)院普通外科， 河北 懷來 075400；3.中國人民解放軍陸軍第八十一集團(tuán)軍醫(yī)院檢驗病理科，河北 張家口 075000)

乳腺浸潤性導(dǎo)管癌(breast invasive ductal carcinoma，BIDC)是女性乳腺癌常見的一種病理類型，盡管采用術(shù)前新輔助化療、手術(shù)切除、術(shù)后化療、放射治療、內(nèi)分泌治療、靶向治療、中藥治療、有氧運(yùn)動等多種方法綜合治療，仍有不少病人較快出現(xiàn)復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移甚至死亡[1-4]。研究表明，許多腫瘤標(biāo)志物與BIDC的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[5-6]。SLeX(sialyl Lewis X)是細(xì)胞表面特有的一種糖類腫瘤標(biāo)志物，系與選擇素發(fā)生黏附作用的配體之一；Maspin(mammary serine protease inhibitor)系乳腺絲氨酸蛋白酶抑制劑，在細(xì)胞外基質(zhì)中可與一些參與細(xì)胞生長、侵襲的因子結(jié)合發(fā)揮抑癌作用。我們應(yīng)用EliVisionTMplus免疫組織化學(xué)(IHC)染色二步法檢測SLeX和Maspin在BIDC及癌旁乳腺組織中的表達(dá)，探討其與部分臨床病理指標(biāo)的相關(guān)性。

1 材料與方法

1.1 材料

收集2014-05-2015-12月間陸軍第八十一集團(tuán)軍醫(yī)院收治的80例BIDC患者的手術(shù)切除標(biāo)本，年齡29～73歲，平均(55.0±8.7)歲；癌灶直徑1.0～6.5 cm，平均(3.7±2.1)cm；根據(jù)2017年《AJCC癌癥分期手冊(第8版)》進(jìn)行TNM分期，其中T1期11例，T2期40例，T3期21例，T4期8例。根據(jù)術(shù)前彩超乳腺影像報告和數(shù)據(jù)系統(tǒng)(breast imaging，reporting and data system，BI-RADS)分類及其他影像學(xué)檢查、冰凍報告、納米碳示蹤情況，按照診療規(guī)范確定手術(shù)方式。對照組30例癌旁組織取自距癌灶3 cm處的同側(cè)乳腺。

納入標(biāo)準(zhǔn)：①病理判定及分類明確的BIDC(非特殊性)；②術(shù)前未接受過新輔助化療、放療等抗癌措施；③無嚴(yán)重內(nèi)科系統(tǒng)性疾??；④凝血功能正常，無出血傾向。排除標(biāo)準(zhǔn)：①病理證實的原位癌、浸潤性小葉癌、硬癌、單純癌、浸潤性特殊癌或其他少見的組織類型；②并發(fā)其他部位惡性腫瘤的多元癌；③并發(fā)各種炎癥性疾??；④并發(fā)妊娠或其他嚴(yán)重系統(tǒng)性疾病。

診療方案經(jīng)醫(yī)院倫理委員會審批，病人及(或)親屬均于術(shù)前知情同意并簽字。

1.2 IHC染色方法

采用EliVisionTMplus IHC染色二步法檢測癌組織及癌旁乳腺組織SLeX和Maspin的表達(dá)。制備石蠟切片厚度為4μm。選取與蘇木精-伊紅染色相鄰的切片，采用微波儀修復(fù)抗原。鼠抗人SLeX即用型單克隆抗體、Maspin濃縮型單克隆抗體(工作濃度1：150)、3，3'-二氨基聯(lián)苯胺顯色劑和EliVisionTMplus試劑盒均購于福州邁新公司。技術(shù)步驟及陰性對照按說明書操作，陽性對照采用SLeX和Maspin陽性染色片。

1.3 判定標(biāo)準(zhǔn)

由2位病理醫(yī)師聯(lián)合觀察判定IHC染色結(jié)果。在清晰的背景下呈黃、棕、褐色顆粒者為陽性反應(yīng)。計分方法：①染色深淺度：無染色、黃色、棕黃色、黃褐色，對應(yīng)計0、1、2、3分；②染色百分比：≤5%、6%～30%、31%～69%、≥70%，對應(yīng)計0、1、2、3分。①和②計分相加即為定性結(jié)果：≤2分為陰性(-)，3～6分均為陽性，其中3分、4分為弱陽性(+)，5分、6分為強(qiáng)陽性(++)。

1.4 觀察指標(biāo)

①SLeX和Maspin在BIDC組織及癌旁乳腺組織中的表達(dá)部位及陽性率；②SLeX和Maspin表達(dá)與病人年齡、TNM分期、分化等級、淋巴結(jié)宏轉(zhuǎn)移、術(shù)后隨訪5年內(nèi)復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移等臨床病理指標(biāo)的相關(guān)性；③BIDC組織SLeX與Maspin表達(dá)的相關(guān)性。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

運(yùn)用SPSS 22.0分析數(shù)據(jù)。SLeX和Maspin陽性計數(shù)資料采用n(%)表示，組間比較采用χ2檢驗，通過χ2值計算列聯(lián)系數(shù)進(jìn)行相關(guān)性分析。檢驗水準(zhǔn)α=0.05，P<0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 BIDC組織及癌旁乳腺組織SLeX和Maspin表達(dá)的比較

BIDC組織及癌旁乳腺組織SLeX陽性染色多見于細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)(圖1A～B)，Maspin蛋白陽性染色多見于細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核(圖2A～B)。癌組織SLeX和Maspin陽性率與癌旁乳腺組織比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(均P<0.05)(表1)。

A：SLeX在BIDC組織強(qiáng)陽性表達(dá) B：SLeX在癌旁乳腺組織陰性表達(dá)

A：Maspin在BIDC組織弱陽性表達(dá) B：Maspin在癌旁乳腺組織強(qiáng)陽性表達(dá)

表1 BIDC組織及癌旁乳腺組織SLeX和Maspin表達(dá)比較 n(%)

2.2 BIDC組織SLeX和Maspin表達(dá)與病人臨床病理指標(biāo)的關(guān)系

SLeX和Maspin表達(dá)與年齡無關(guān)(均P>0.05)。在TNM T3+T4期、低分化、有淋巴結(jié)宏轉(zhuǎn)移和5年內(nèi)復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移病人中，SLeX高表達(dá)，Maspin低表達(dá)(均P<0.05)(表2)。

表2 BIDC組織SLeX和Maspin表達(dá)與病人臨床病理指標(biāo)的關(guān)系 n(%)

表2(續(xù))

2.3 BIDC組織SLeX和Maspin表達(dá)的相關(guān)性

80例病人SLeX和Maspin同時陽性者28例，共陽性率為35.0%；同時陰性者1例，共陰性率為1.2%。經(jīng)相關(guān)性分析，SLeX和Maspin在BIDC的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r=-0.33)(表3)。

表3 BIDC組織SLeX和Maspin表達(dá)的相關(guān)性 n(%)

3 討 論

多種腫瘤標(biāo)志物的異常表達(dá)及協(xié)同作用與乳腺癌的生物學(xué)特性密切相關(guān)。為了探討SLeX和Maspin在乳腺癌的表達(dá)特點(diǎn)，提高研究的針對性及結(jié)果的客觀性，我們選擇臨床常見的BIDC作為研究對象，結(jié)果顯示，癌組織SLeX陽性率顯著高于癌旁乳腺組織，而Maspin陽性率顯著低于癌旁乳腺組織，表明兩者均可視為判斷乳腺良、惡性病變的標(biāo)志物。

3.1 BIDC組織SLeX表達(dá)與病人年齡、TNM分期、分化等級及復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的關(guān)系

SLeX(即CD15s)是腫瘤標(biāo)志物SLeA(即CA19-9)的同分異構(gòu)體，作為細(xì)胞表面重要的黏附分子，可與血管內(nèi)皮細(xì)胞選擇素結(jié)合通過Lewis-Selectin轉(zhuǎn)移途徑導(dǎo)致癌轉(zhuǎn)移[7-8]。近年研究發(fā)現(xiàn)，SLeX在正常上皮細(xì)胞多為不表達(dá)或低表達(dá)，但在肺癌、肝癌、胰腺癌、結(jié)直腸癌等許多癌瘤中呈異常的高表達(dá)[9-11]。有研究報道，SLeX表達(dá)與乳腺癌細(xì)胞浸潤轉(zhuǎn)移有關(guān)，可視為病人預(yù)后不良的標(biāo)志物[12-14]。本研究通過對69例SLeX陽性表達(dá)病人進(jìn)行分組對比分析，結(jié)果表明，SLeX表達(dá)與年齡無關(guān)(P>0.05)；在TNM T3+T4期、低分化和有復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移病人中，SLeX表達(dá)顯著高于TNM T1+T2期、高分化+中分化、無復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的病人(均P<0.05)，表明臨床分期越高(癌灶越大)、分化等級越低、復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移越早，SLeX陽性率越高。SLeX表達(dá)與BIDC惡性發(fā)展呈顯著正相關(guān)，其表達(dá)上調(diào)預(yù)示易發(fā)生復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移。

3.2 BIDC組織Maspin表達(dá)與病人年齡、TNM分期、分化等級及復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的關(guān)系

Maspin是絲氨酸蛋白酶抑制劑超家族中的一員，與絲氨酸蛋白酶抑制劑高度同源。研究發(fā)現(xiàn)，Maspin在正常上皮細(xì)胞多為高表達(dá)，但在宮頸癌、子宮內(nèi)膜癌、卵巢癌等多種癌瘤中呈異常表達(dá)，通過MKL-1/miR-142-5p/DNMT1/Maspin信號通路可調(diào)控乳腺癌細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)移[15-18]。本研究通過對38例Maspin陽性表達(dá)病人進(jìn)行分組對比分析，結(jié)果表明，Maspin表達(dá)與年齡無關(guān)(P>0.05)。在TNM T3+T4期、低分化和有復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移病人中，Maspin表達(dá)顯著低于TNM T1+T2期、高分化+中分化、無復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的病人(均P<0.05)，表明臨床分期越高(癌灶越大)、分化等級越低、復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移越早，Maspin陽性率越低。Maspin表達(dá)與BIDC的惡性發(fā)展呈顯著負(fù)相關(guān)，其表達(dá)下調(diào)預(yù)示易發(fā)生復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移。有研究發(fā)現(xiàn)，Maspin細(xì)胞質(zhì)陽性率與細(xì)胞核陽性率比值也與乳腺癌惡性發(fā)展行為顯著相關(guān)[19-20]。

3.3 BIDC組織SLeX和Maspin表達(dá)與淋巴結(jié)宏轉(zhuǎn)移的關(guān)系

淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是BIDC常見的轉(zhuǎn)移途徑，而前哨淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與否對乳腺癌的治療策略及預(yù)后評估具有重要指導(dǎo)價值[21-22]，利用納米碳示蹤、乳腔鏡技術(shù)，有助于提高淋巴結(jié)清除的精準(zhǔn)性和徹底性，從而使術(shù)后對轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)的IHC研究更全面可靠[23-24]。我們研究了SLeX和Maspin表達(dá)與淋巴結(jié)宏轉(zhuǎn)移的關(guān)系，結(jié)果表明，有淋巴結(jié)宏轉(zhuǎn)移與無淋巴結(jié)宏轉(zhuǎn)移病人SLeX和Maspin表達(dá)陽性率差異有顯著性(均P<0.05)，表明SLeX表達(dá)上調(diào)和(或)Maspin的表達(dá)下調(diào)均在BIDC淋巴結(jié)宏轉(zhuǎn)移中發(fā)揮了重要作用。Umekita等[25]研究了乳腺癌轉(zhuǎn)移前哨淋巴結(jié)Maspin mRNA表達(dá)，發(fā)現(xiàn)其陽性率不僅與原發(fā)癌灶Maspin表達(dá)水平密切相關(guān)，也是預(yù)測非前哨淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、超過4枚淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、淋巴管浸潤及腫瘤大小的獨(dú)立病理指標(biāo)。

綜上，SLeX高表達(dá)和(或)Maspin低表達(dá)均與BIDC的惡性發(fā)展密切相關(guān)，且兩者表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。檢測SLeX和Maspin的表達(dá)對評估病人預(yù)后及臨床治療效果具有一定指導(dǎo)價值。當(dāng)前，基于SLeX和Maspin的分子診斷和抗癌治療為研究熱點(diǎn)之一，譬如應(yīng)用H2受體拮抗劑西咪替丁、FAK抑制劑等抑制癌細(xì)胞SLeX的表達(dá)、對ER陽性乳腺癌應(yīng)用氧化鋅納米顆粒增強(qiáng)癌細(xì)胞Maspin的表達(dá)等。相信隨著研究的不斷深入，有望開發(fā)出針對BIDC的靶向治療或化學(xué)治療新制劑，推進(jìn)精準(zhǔn)個體化分子治療的發(fā)展[7-8，26-27]。