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    唾液乳桿菌膜外蛋白對(duì)金黃色葡萄球菌黏附的影響

    2022-03-30 02:14:18劉金秋任大勇
    食品科學(xué) 2022年6期
    關(guān)鍵詞:唾液致病菌灌胃

    楊 樂,楊 柳,李 月,劉金秋,任大勇

    (吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院,吉林 長春 130118)

    金黃色葡萄球菌為革蘭氏陽性菌,是人體微生物群的一部分,也是引起食物中毒、菌血癥、心內(nèi)膜炎、骨髓炎、皮膚和軟組織感染的主要原因[1],由于其可以定植在人體內(nèi),當(dāng)宿主機(jī)體免疫紊亂時(shí),作為內(nèi)源性致病菌可能會(huì)引起更嚴(yán)重的感染[2]。致病菌侵入腸道的第1步是黏附,繼而定植到腸道,在局部產(chǎn)生毒素或者直接侵入組織,引起宿主細(xì)胞出現(xiàn)形態(tài)結(jié)構(gòu)和生理功能的變化,從而引發(fā)疾病[3]。

    目前在臨床上尚未有基于黏附的靶向治療手段,抗生素是目前治療致病菌最常見的方法,抗生素的普遍使用有力地抑制了致病菌,卻促進(jìn)了耐藥性細(xì)菌的增長。經(jīng)常使用抗生素類藥品會(huì)使人體的抵抗力和免疫力下降,還會(huì)消滅人體有益菌群,導(dǎo)致體內(nèi)菌群失衡,耐藥細(xì)菌乘虛而入[4]。2018年,世界衛(wèi)生組織報(bào)道,如果不立即采取行動(dòng),到2050年,亞洲每年約有500萬 人死于對(duì)抗生素產(chǎn)生耐藥性的細(xì)菌感染,比預(yù)計(jì)每年死于癌癥的人數(shù)還要多[5]。因此,找到其他治療致病菌的方法至關(guān)重要。

    大量研究表明,乳酸菌可以在體內(nèi)外很好地抑制致病菌黏附和定植于人體腸道上皮細(xì)胞,從而達(dá)到治療致病菌感染的作用[6-7]。部分研究表明某些乳酸菌能夠促進(jìn)致病菌的黏附,Collado等[8-9]研究17 株益生菌對(duì)4 種致病菌(中間葡萄球菌、鼠傷寒沙門氏菌、產(chǎn)莢膜梭菌、空腸彎曲菌)黏附的抑制效果,發(fā)現(xiàn)2 株益生性球菌提高了空腸彎曲菌黏附力,1 株雙歧桿菌提高了鼠傷寒沙門氏菌的黏附力;白潔等[10]研究6 株益生菌對(duì)2 株致病菌(大腸桿菌和鼠傷寒沙門氏菌)黏附人腸道上皮細(xì)胞的影響發(fā)現(xiàn),這6 株益生菌通過競爭和排斥作用反而促進(jìn)了致病菌黏附。當(dāng)乳酸菌促進(jìn)致病菌黏附時(shí),人體腸道內(nèi)致病菌數(shù)量增加,一旦腸黏膜屏障受損,腸道系統(tǒng)功能紊亂,會(huì)大大增加致病幾率,但乳酸菌促進(jìn)黏附的具體機(jī)制尚不清楚。因此,本研究以一株前期篩選得到的促進(jìn)金黃色葡萄球菌黏附的唾液乳桿菌CICC 23174為研究對(duì)象,試圖從膜外蛋白角度研究其促進(jìn)金黃色葡萄球菌黏附的機(jī)制,為乳酸菌安全性評(píng)價(jià)以及乳酸菌的科學(xué)使用提供依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    1.1.1 菌株與動(dòng)物

    唾液乳桿菌(Lactobacillus salivarius)CICC 23174、金黃色葡萄球菌金黃亞種(Staphylococcus aureussubsp.aureus)ATCC 8739、大腸桿菌(Escherichia coli)DH5α和E. coliBL21(DE3)均由吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院食品與安全毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)室保存;pET-28a質(zhì)粒購于淼靈質(zhì)粒平臺(tái);pNZ5319質(zhì)粒購于上海海吉浩格生物科技有限公司。

    4 只健康SD大鼠(體質(zhì)量(200±20) g)、108 只SPF級(jí)健康小鼠(體質(zhì)量(20±2) g、6 周齡、雌雄各半)購于遼寧長生生物技術(shù)股份有限公司,生產(chǎn)許可證號(hào):SCXK(遼)2020-0001,該研究經(jīng)吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物保護(hù)局和使用委員會(huì)批準(zhǔn)。

    1.1.2 試劑

    MRS培養(yǎng)基 青島海博生物技術(shù)有限公司;2×SoSoo Mix Plus 北京擎科生物科技有限公司;質(zhì)粒小量抽提試劑盒、小量膠回收試劑盒 美國Axygen公司;細(xì)菌全基因提取試劑盒 天根生化科技(北京)有限公司;XhoI、SmaI和BamH I 北京NEB公司;番紅染液 北京Solarbio公司。本研究所用引物(表1)和測序結(jié)果均來自于吉林省庫美生物科技有限公司。

    表1 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)引物信息Table 1 Primer sequences used in this study

    1.2 儀器與設(shè)備

    Red-96G聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerase chain reaction,PCR)儀、Biotop SC810凝膠成像系統(tǒng) 上海山富科學(xué)儀器有限公司;infinite M200酶標(biāo)儀 瑞士Tecan集團(tuán);DYY-11電泳儀、垂直電泳槽、水平電泳槽北京六一儀器廠;5804R離心機(jī)、5424R離心機(jī)、22331 Hamburg電轉(zhuǎn)儀 德國Eppendorf公司;IX 73熒光倒置顯微鏡 日本奧林巴斯株式會(huì)社;XL30 ESEM-FEG場發(fā)射環(huán)境掃描電子顯微鏡 美國FEI公司;紫外-可見分光光度計(jì) 島津國際貿(mào)易(上海)有限公司;FDU-1200冷凍干燥機(jī) 日本EYELA東京理化器械株式會(huì)社。

    1.3 方法

    1.3.1ef-g基因的克隆及重組菌E.coliBL21(DE3)的制備

    唾液乳桿菌基因組為模板,利用ef-gF和ef-gR特異性引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增,小量膠回收試劑盒回收ef-g基因,將ef-g基因與BamH I酶切的pET-28a質(zhì)粒用2×SoSoo Mix Plus試劑盒在50 ℃水浴連接15 min。將pET-ef-g重組質(zhì)粒用化學(xué)方法轉(zhuǎn)化到E. coliBL21(DE3)中,含卡那霉素的LB平板篩選,隔天挑取陽性菌落,PCR驗(yàn)證重組E. coliBL21(DE3)菌株是否構(gòu)建成功。

    1.3.2 EF-G蛋白純化及SDS-PAGE分析

    重組E. coliBL21(DE3)菌株在200 r/min、37 ℃搖床培養(yǎng)2~3 h,OD600nm達(dá)到0.6~0.8時(shí)加入終濃度1 mmol/L異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyβ-D-thiogalactoside,IPTG),調(diào)節(jié)溫度30 ℃、轉(zhuǎn)速200 r/min培養(yǎng)3 h誘導(dǎo)蛋白延伸因子G(elongation factor G,EF-G)表達(dá),回收菌體,超聲破碎,收集上清液,0.22 μm過濾器過濾,通過鎳柱純化,十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)驗(yàn)證EF-G是否正確表達(dá)[11]。

    1.3.3 EF-G對(duì)金黃色葡萄球菌黏附性的影響

    提取大鼠腸道黏液,凍干,用碳酸鈉-碳酸氫鈉緩沖液(pH 9.6)以1 g/L的比例溶解,4 ℃、5 000×g離心15 min,上清液分裝,-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

    用蛋白包被法驗(yàn)證EF-G體外促進(jìn)金黃色葡萄球菌黏附。取200 μL上述腸道黏液溶液于96 孔板中,4 ℃靜置過夜,實(shí)驗(yàn)分為2 組:第1組先加入200 μL 0.15 mg/mL EF-G溶液,4 ℃靜置過夜,加入200 μL含0.05% Tween-20的PBS(PBST)封閉1 h,PBST溶液洗2 次,倒置風(fēng)干,然后加入200 μL 1×109CFU/mL金黃色葡萄球菌菌液;第2組加入0.15 mg/mL EF-G溶液與1×109CFU/mL金黃色葡萄球菌的混合溶液共200 μL;兩組均以PBS替代EF-G溶液作為對(duì)照組。繼續(xù)4 ℃孵育過夜,吸去孔板液體,PBST洗滌2 次,無水乙醇固定10 min,加入50 μL番紅染液染色,PBST洗滌1 次,倒置風(fēng)干。用倒置顯微鏡觀察番紅染液染色情況,然后測定492 nm波長處測定OD值[12],評(píng)價(jià)黏附性EF-G對(duì)金黃色葡萄球菌黏附性的影響。

    1.3.4ef-g基因敲除表達(dá)載體(pNZ-ef-gsx)的構(gòu)建

    圖1 pNZ-ef-gsx敲除載體構(gòu)建流程圖Fig. 1 Flow chart of pNZ-ef-gsx knockout vector construction

    唾液乳桿菌基因組為模板,利用ef-gsF和ef-gsR引物克隆上游基因ef-gs,ef-gxF和ef-gxR引物克隆下游基因ef-gx。將ef-gs基因與XhoI酶切的pNZ5319質(zhì)粒用2×SoSoo Mix Plus試劑盒在50 ℃水浴連接15 min,得到pNZ-ef-gs重組質(zhì)粒。用上述同樣方法將ef-gx基因與SmaI酶切后的pNZ-ef-gs質(zhì)粒連接,得到pNZ-ef-gsx基因敲除質(zhì)粒,PCR驗(yàn)證并測序[13-14],流程見圖1。

    1.3.5 唾液乳桿菌Δef-g菌株的制備

    提取pNZ-ef-gsx重組質(zhì)粒,在電阻200 Ω、電容25 μF、電場強(qiáng)度2.5 kV/cm條件下[15]用電擊法導(dǎo)入唾液乳桿菌中,通過氯霉素和紅霉素抗性,多次傳代篩選陽性菌株,PCR、SDS-PAGE以及測序驗(yàn)證唾液乳桿菌Δef-g菌株是否構(gòu)建成功。

    1.3.6 唾液乳桿菌Δef-g對(duì)金黃色葡萄球菌體外黏附的影響

    在600 nm波長下調(diào)整唾液乳桿菌、唾液乳桿菌Δef-g和金黃色葡萄球菌濃度均為1×109CFU/mL。通過黏液蛋白黏附模型方法在體外驗(yàn)證唾液乳桿菌Δef-g促進(jìn)金黃色葡萄球菌黏附的效果[16]。

    實(shí)驗(yàn)組1:取200 μL腸道黏液溶液于96 孔板中,4 ℃靜置過夜,次日分別加入200 μL唾液乳桿菌Δef-g菌液,4 ℃靜置過夜,加入200 μL PBST封閉1 h,PBST洗2 次,倒置風(fēng)干,加入濃度1×109CFU/mL的金黃色葡萄球菌菌液,4 ℃孵育過夜。取200 μL腸道黏液溶液于96 孔板中,4 ℃靜置過夜,次日加200 μL PBST封閉1 h,PBST溶液洗2 次,倒置風(fēng)干。實(shí)驗(yàn)組2:同時(shí)加入濃度均為1×109CFU/mL的金黃色葡萄球菌和唾液乳桿菌Δef-g各100 μL,4 ℃孵育過夜。兩組均以等體積唾液乳桿菌菌液替代唾液乳桿菌Δef-g菌液為對(duì)照組。吸去孔板液體,PBST洗滌2 次,無水乙醇固定10 min,加入50 μL番紅染液染色,PBST洗滌1 次,倒置風(fēng)干。用倒置顯微鏡觀察番紅染液染色情況,然后測定492 nm波長處測定OD值。

    1.3.7 唾液乳桿菌Δef-g對(duì)金黃色葡萄球菌體內(nèi)黏附的影響

    調(diào)整菌液濃度為1×109CFU/mL,用終濃度20 μmol/L cFDA-SE進(jìn)行熒光標(biāo)記[17]。

    唾液乳桿菌Δef-g在小鼠腸道內(nèi)的黏附情況:取36 只小鼠,雌雄各半,隨機(jī)分成2 組,每組18 只,灌胃體積(以體質(zhì)量計(jì)算)0.1 mL/10 g;T1組灌胃熒光標(biāo)記的唾液乳桿菌,T2組灌胃熒光標(biāo)記的唾液乳桿菌Δef-g。

    唾液乳桿菌Δef-g在體內(nèi)促進(jìn)金黃色葡萄球菌黏附的效果:小鼠數(shù)量同上,灌胃體積0.1 mL/10 g。J1組灌胃未熒光標(biāo)記的唾液乳桿菌和熒光標(biāo)記的金黃色葡萄球菌,J2組灌胃未熒光標(biāo)記的唾液乳桿菌Δef-g和熒光標(biāo)記的金黃色葡萄球菌。

    掃描電子顯微鏡直接觀察唾液乳桿菌Δef-g在體內(nèi)促進(jìn)金黃色葡萄球菌黏附的效果:小鼠數(shù)量同上,灌胃體積0.1 mL/10 g,D1組灌胃均未熒光標(biāo)記的唾液乳桿菌和金黃色葡萄球菌,D2組灌胃均未熒光標(biāo)記的唾液乳桿菌Δef-g和金黃色葡萄球菌。

    以上實(shí)驗(yàn)小鼠均灌胃1 次,分別于灌胃后24、72、120 h,每組避光處死6 只小鼠,取小鼠結(jié)腸2 cm,用1 mL無菌PBS沖洗腸道內(nèi)壁,收集清洗后的PBS,過程中注意避光[18]。熒光倒置顯微鏡觀察熒光標(biāo)記菌株數(shù)量,結(jié)果以每視野下菌株數(shù)量除以小鼠數(shù)量計(jì)。用紫外分光光度計(jì)測定熒光強(qiáng)度,發(fā)射波長518 nm、激發(fā)波長488 nm。掃描電子顯微鏡觀察時(shí),將結(jié)腸組織用2.5%戊二醛固定(4 ℃、24 h),PBS無菌溶液清洗3 次。不同體積分?jǐn)?shù)乙醇溶液梯度脫水,每次10 min,無水乙醇脫水2 次,醋酸異戊酯置換10 min,叔丁醇-無水乙醇(1∶1,V/V)置換10 min,再用叔丁醇I、II各置換20 min,-4 ℃冰箱過夜,噴金后用于觀察。

    1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

    2 結(jié)果與分析

    2.1 重組菌E. coli BL21(DE3)的制備及EF-G純化驗(yàn)證結(jié)果

    PCR擴(kuò)增后1%瓊脂糖凝膠電泳驗(yàn)證,ef-g基因正確克隆。pET-ef-g重組質(zhì)粒導(dǎo)入E. coliBL21(DE3)中,卡那霉素篩選,PCR擴(kuò)增1%瓊脂糖凝膠電泳驗(yàn)證。經(jīng)IPTG誘導(dǎo)重組E. coliBL21(DE3)菌株大量表達(dá)EF-G,EF-G蛋白分子質(zhì)量約為77 kDa,EF-G條帶位于66.4~97.2 kDa之間,表明EF-G正確表達(dá)。

    2.2 EF-G對(duì)金黃色葡萄球菌黏附性的影響

    番紅染液可以將細(xì)胞核染成紅色,菌黏附數(shù)量越多顏色越深,菌黏附數(shù)量越少顏色越淺。由圖2可知,加入0.15 mg/mL EF-G后金黃色葡萄球菌黏附數(shù)量明顯增多,表明EF-G促進(jìn)了金黃色葡萄球菌的黏附。通過番紅染液對(duì)黏附性作初步評(píng)價(jià),再通過測定OD492nm對(duì)黏附性變化進(jìn)行定量分析。由圖3可知,先加入EF-G將金黃色葡萄球菌黏附率提高了43%(n=6,P<0.05),同時(shí)加入EF-G使金黃色葡萄球菌黏附率提高了40%(n=6,P<0.05),對(duì)比兩組結(jié)果,先加入EF-G時(shí),金黃色葡萄球菌黏附數(shù)量更多,可能是因?yàn)镋F-G是金黃色葡萄球菌黏附的特異性識(shí)別位點(diǎn),EF-G與金黃色葡萄球菌混合加入時(shí)蛋白占據(jù)了金黃色葡萄球菌表面的黏附位點(diǎn),使金黃色葡萄球菌黏附率降低。

    圖2 EF-G對(duì)金黃色葡萄球菌黏附性的影響(番紅染液)Fig. 2 Effect of EF-G on the adhesion of S. aureus as examined by safranin staining

    圖3 EF-G對(duì)金黃色葡萄球菌黏附性的影響結(jié)果(OD492 nm)Fig. 3 Effect of EF-G on the adhesion of S. aureus as reflected by optical density at 492 nm

    2.3 pNZ-ef-gsx基因敲除載體的構(gòu)建及唾液乳桿菌Δef-g菌株的制備

    pNZ-ef-gsx重組質(zhì)粒驗(yàn)證結(jié)果顯示pNZ-ef-gsx敲除載體構(gòu)建成功。通過同源重組的方法將ef-g用氯霉素基因替換,先通過紅霉素抗性篩選,再通過氯霉素抗性篩選,多次傳代培養(yǎng)消除敲除載體,提取基因組,進(jìn)行測序、PCR和SDS-PAGE驗(yàn)證,圖4表明唾液乳桿菌Δef-g菌株構(gòu)建成功。

    圖4 唾液乳桿菌Δef-g菌株構(gòu)建驗(yàn)證結(jié)果Fig. 4 Construction and verification of L. salivarius Δef-g strain

    2.4 唾液乳桿菌Δef-g對(duì)金黃色葡萄球菌體外黏附的影響

    由圖5可知,唾液乳桿菌Δef-g組顏色較唾液乳桿菌組顏色淺,結(jié)果表明唾液乳桿菌Δef-g組黏附菌少。與番紅染色觀察結(jié)果一致,如圖6所示,與唾液乳桿菌相比,實(shí)驗(yàn)組1的金黃色葡萄球菌黏附率降低了40%,實(shí)驗(yàn)組2的金黃色葡萄球菌黏附率降低了34%,結(jié)果表明EF-G能夠促進(jìn)金黃色葡萄球菌黏附。

    圖5 唾液乳桿菌Δef-g對(duì)金黃色葡萄球菌體外黏附的影響(番紅染色)Fig. 5 Effect of L. salivarius Δef-g on the adhesion of S. aureus in vitro as observed by safranin staining

    圖6 唾液乳桿菌Δef-g對(duì)金黃色葡萄球菌體外黏附的影響Fig. 6 Effect of L. salivarius Δef-g on the in vitro adhesion of S. aureus as reflected by optical density at 492 nm

    2.5 唾液乳桿菌Δef-g對(duì)金黃色葡萄球菌體內(nèi)黏附的影響

    2.5.1 唾液乳桿菌Δef-g體內(nèi)黏附實(shí)驗(yàn)結(jié)果

    對(duì)比圖7A、B可知,唾液乳桿菌Δef-g和唾液乳桿菌數(shù)量大致相同,表明EF-G對(duì)唾液乳桿菌黏附定植腸道沒有影響。

    圖7 唾液乳桿菌Δef-g體內(nèi)黏附實(shí)驗(yàn)顯微鏡觀察結(jié)果Fig. 7 Microscopic observation of L. salivarius Δef-g in vivo adhesion

    2.5.2 唾液乳桿菌Δef-g促進(jìn)致病菌黏附實(shí)驗(yàn)結(jié)果

    對(duì)比圖8A、B可知,唾液乳桿菌Δef-g組黏附金黃色葡萄球菌數(shù)量較唾液乳桿菌組少,表明唾液乳桿菌EF-G促進(jìn)金黃色葡萄球菌黏附。

    圖8 唾液乳桿菌Δef-g促進(jìn)金黃色葡萄球菌黏附實(shí)驗(yàn)顯微鏡觀察結(jié)果Fig. 8 Microscopic observation of L. salivarius Δef-g promotion of S. aureus adhesion

    2.5.3 金黃色葡萄球菌黏附的定量分析結(jié)果

    如圖9A、C所示,唾液乳桿菌和唾液乳桿菌Δef-g在小鼠腸道內(nèi)數(shù)量大致相同,結(jié)果表明ef-g基因?qū)ν僖喝闂U菌黏附定植腸道無影響;如圖9B、D所示,唾液乳桿菌組黏附金黃色葡萄球菌數(shù)量較唾液乳桿菌Δef-g組多,與唾液乳桿菌組相比,唾液乳桿菌Δef-g組金黃色葡萄球菌黏附率降低了20%,表明EF-G促進(jìn)唾液乳桿菌黏附金黃色葡萄球菌。

    圖9 唾液乳桿菌Δef-g對(duì)金黃色葡萄球菌體內(nèi)黏附影響的定量分析結(jié)果Fig. 9 Effect of L. salivarius Δef-g on the in vivo adhesion of S. aureus

    2.5.4 掃描電子顯微鏡觀察唾液乳桿菌Δef-g體內(nèi)促金黃色葡萄球菌黏附效果

    圖10 唾液乳桿菌Δef-g體內(nèi)促金黃色葡萄球菌黏附效果掃描電子顯微鏡圖Fig. 10 L. salivarius Δef-g promoted in vivo adhesion of S. aureus as observed by SEM

    如圖10A~C所示,一個(gè)唾液乳桿菌可促進(jìn)6~10 個(gè)金黃色葡萄球菌黏附于腸道表皮,如圖10D~F所示,一個(gè)唾液乳桿菌Δef-g可促進(jìn)3~5 個(gè)金黃色葡萄球菌黏附于腸道表皮,更直觀地表明EF-G促進(jìn)唾液乳桿菌黏附金黃色葡萄球菌。

    3 討 論

    定植是致病菌入侵人體腸道的第1步,乳酸菌通過與致病菌競爭細(xì)胞黏附位點(diǎn),從而發(fā)揮其抗感染的作用,然而有研究表明這種通過競爭黏附位點(diǎn)抑制致病菌的黏附,反而會(huì)促進(jìn)致病菌的黏附[19],Tuomola等[20]也報(bào)道了兩株鼠李糖乳桿菌將沙門氏菌的黏附率提高至190%和332%,但具體機(jī)制尚不清楚。有研究發(fā)現(xiàn)乳酸菌膜外蛋白中,具有黏附性的蛋白不一定是已發(fā)現(xiàn)的Slp,還可能是MAPP、EF-Tu、EF-G等[21-22]。EF是乳酸菌膜外蛋白,主要有2 個(gè)功能:黏附作用以及作為血纖維蛋白溶酶發(fā)揮結(jié)合蛋白的功能[23-24]。Munro[25]和Palmer[26]等發(fā)現(xiàn)EF-G對(duì)于Caco-2細(xì)胞也有很好的黏附作用。

    本課題組前期研究[27]對(duì)唾液乳桿菌表面蛋白進(jìn)行質(zhì)譜分析發(fā)現(xiàn),EF-G評(píng)分最高,且匹配的肽段最多,其中發(fā)揮黏附功能可能是EF-G,因此本實(shí)驗(yàn)選取EF-G進(jìn)行研究。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,EF-G在體外能夠促進(jìn)金黃色葡萄球菌的黏附,黏附率較對(duì)照組提高了43%;在小鼠腸道內(nèi)唾液乳桿菌Δef-g組金黃色葡萄球菌黏附率較唾液乳桿菌組降低了20%,結(jié)果表明EF-G對(duì)金黃色葡萄球菌的黏附具有促進(jìn)作用,體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)結(jié)果相差較大,可能是由于小鼠體內(nèi)環(huán)境復(fù)雜,也可能是EF-G缺少影響了唾液乳桿菌生物活性,從而減少了金黃色葡萄球菌黏附,掃描電子顯微鏡結(jié)果也進(jìn)一步證實(shí)了這一結(jié)論。

    本實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明唾液乳桿菌膜外蛋白中確實(shí)存在可以促進(jìn)金黃色葡萄球菌黏附的蛋白,這與王迪[16]的研究結(jié)果一致,但是膜外蛋白促進(jìn)金黃色葡萄球菌黏附的具體機(jī)制還不明確,可能是膜外蛋白中存在金黃色葡萄球菌的黏附位點(diǎn)[28],也可能是膜外蛋白通過其他作用力促進(jìn)了金黃色葡萄球菌黏附[29],促進(jìn)黏附的具體機(jī)制還需進(jìn)一步探究。

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