SAT快速診斷結核性腦膜炎的價值分析

劉繼威（湖北省羅田縣人民醫(yī)院,湖北 黃岡 438600）

結核性腦膜炎（TBM）是由結核桿菌入血或直接侵入蛛網膜造成的一系列腦部神經損傷，主要表現為頭痛、盜汗、低熱、食欲不振等，病死率極高，因此需及時確診行針對性治療[1]。臨床常以傳統(tǒng)腦脊液檢查結果作為金標準，但此方案檢測時間較長，而TBM發(fā)病速度快，極易延誤病情。聚合酶聯反應（PCR）檢測是現今較為常見的檢測方案，通過擴增腦脊液樣本行循環(huán)閾值比對，但PCR檢測需加熱，在高溫下行循環(huán)測定，若溫度不達標，極易影響檢測靈敏度[2]。恒溫擴增熒光檢測（SAT）是將核糖體RNA的擴增引物與探針技術實現恒溫擴展檢測，對檢測溫度不作要求，具有方便快捷的特點，但將其用于疑似TBM患者的檢測對提高靈敏度的效果并未明確，基于此，本研究將探討SAT快速診斷結核性腦膜炎的價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 經患者、家屬同意及醫(yī)院倫理委員會批準納入我院2020年1月-2021年5月期間142例疑似TBM患者，均采用SAT檢測及聚合酶聯反應（PCR）檢測，以傳統(tǒng)腦脊液檢查作為金標準。男患者78例，女患者64例；年齡27-45歲，平均年齡（37.51±6.32）歲。納入標準：①疑似TBM患者；②能耐受腦脊液穿刺。排除標準：①已確診為其他的腦膜炎患者；②有嚴重腦部外傷；③已參與其他相關實驗者。

1.2 方法 142例疑似TBM患者，均采用SAT檢測及聚合酶聯反應（PCR）檢測，以傳統(tǒng)腦脊液檢查作為金標準。

SAT檢測：抽取患者1.5毫升腦脊液樣本，將其加入1.5毫升離心管內離心5分鐘，將上層清液棄去，并將50微升MTB-RNA稀釋液置入樣本內，充分震蕩，將其懸浮，以此制作為待測樣本，在核酸提純儀（廠家：北京萊普特）內將50微升陰性對照及待測樣本置入，保證液體進入水面下，使用超聲處理，15分鐘后將其取出，再次離心5分鐘后出現上層清液，即為提取的RNA，此時在潔凈的微量反應管中（含有30微升擴增檢測液）加入提取好的2微升RNA，并在60℃的K30干式恒溫器內放置5分鐘，后于42℃的溫度內放置5分鐘，并保持此溫度，加入10微升SAT酶，采用熒光定量PCR儀（廠家：上海實維實驗儀器技術有限公司；型號：7500fast）進行擴增，主要擴增溫度為42℃，時間為1分鐘，循環(huán)40次，在FAM通道下保證每分鐘采1次熒光。結果判斷：當Ct值＜40時，MTB-RNA陽性；當Ct值≥40時，MTBRNA陰性。采用試劑盒附帶陰、陽性對照作為對比。

PCR檢測：采集患者2毫升腦脊液樣本行PCR檢測，主要根據工作手冊[3]方案檢測。當Ct值＜36時，且樣本的MTB擴增曲線呈現S型，表示MTB-DNA陽性；當Ct值＜40時，且樣本的NTM擴增曲線呈現S型，表示NTM-DNA陽性；若NTM-DNA、MTB-DNA均呈現陽性時，表示MTB-DNA陽性；若NTM-DNA、MTB-DNA均呈現陰性時，表示正常。主要以試劑盒附帶的陰、陽性對照作為對比。

1.3 觀察指標和評價標準 觀察兩組檢測方法檢驗效能，主要包括檢測靈敏度、特異度、準確度、陰性預測值、陽性預測值、漏診率及誤診率。

1.4 統(tǒng)計學方法 數據錄入SPSS22.0軟件中分析，計數資料用%表示，采用χ2檢驗；計量資料用（±s）表示，采用t檢驗，P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 兩種方法檢查結果對比 142例疑似TBM患者，以傳統(tǒng)腦脊液檢查為金標準，確診TBM為陽性，未確診為陰性，現確診138陽性，4例陰性，經SAT檢測發(fā)現136例陽性，6例陰性；經PCR檢測發(fā)現130例陽性，12例陰性。見表1。

2.2 兩種方式檢驗效能對比 結果表明，SAT檢測方法的靈敏度（97.83%）、準確度（97.18%）均高于PCR檢測組（91.30%、91.55%），漏診率（2.17%）低于PCR檢測組（7.25%）（P＜0.05），特異度（75.00%）、陰性預測值（50.00%）、陽性預測值（99.26%）及誤診率（0.72%）與PCR檢測組（50.00%、16.67%、98.46%、1.45%）對比，差異不明顯，無統(tǒng)計學意義（P

表2 兩種方式檢驗效能對比(n,%)

3 討論

TBM常出現腦膜非化膿性炎癥，近年來，由于抗結核治療的不規(guī)范性，導致結核桿菌的多重耐藥性，且臨床癥狀多不典型，因此尋求快速及有效的診斷方式是治療的關鍵[4-6]。傳統(tǒng)腦脊液檢查作為金標準，檢測時間相對較長，不利于及時做出診斷給予針對性治療。PCR是通過DNA耐高溫的聚合酶在高溫下循環(huán)，以促使雙鏈DNA的分離，從而將引物粘連到模版上的互補區(qū)間，但此技術對溫度要求較高，因此對檢驗準確度的效果不佳[7]。SAT檢測方案是在恒溫箱內利用DNA與各種酶間的反應，促使核酸在同一溫度下得到擴增[8-10]，若將其用于TBM的檢測或許對提高檢驗準確度的效果更顯著。

本研究顯示，以傳統(tǒng)腦脊液檢查為標準，SAT檢測方法靈敏度（97.83%）、準確度（97.18%）均高于PCR檢測組（91.30%、91.55%），漏診率（2.17%）低于PCR檢測組（7.25%）（P＜0.05），特異度（75.00%）、陰性預測值（50.00%）、陽性預測值（99.26%）及誤診率（0.72%）與PCR檢測組（50.00%、16.67%、98.46%、1.45%）對比，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），說明SAT快速診斷結核性腦膜炎可顯著提高檢測靈敏度、準確度，降低漏診率，且不影響其余檢測效能。在王紫荊[11]等學者的研究中表明SAT檢測技術是新型分子檢測方案，檢測時間短，能有效提高診斷特異度及靈敏度而不存在交叉污染。這可能是因為SAT檢測方案主要是利用具有特異性的核糖體RNA擴增引物優(yōu)化探針技術，并根據具有極高反轉錄活性及反轉錄酶同時實現恒溫擴增及熒光檢測，其操作較為簡便，對儀器要求較低，此種技術下的靶標RNA極易降解，從而減少污染。探針具有同步擴增檢測信號的特征，因此能有效提高檢測靈敏度及準確度，降低漏診率[12]。

綜上所述，SAT快速診斷結核性腦膜炎可顯著提高檢測靈敏度、準確度，降低漏診率，且不影響其余檢測效能。