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    包藥珠核對提高淡水有核珍珠育珠效果的初步研究

    2022-03-24 02:15:18李曉紅金偉鋒
    淡水漁業(yè) 2022年2期
    關(guān)鍵詞:核率土霉素珍珠

    李曉紅,詹 毅,虞 立,金偉鋒

    (1.浙江中醫(yī)藥大學(xué),杭州 310053;2.安徽省新貝生態(tài)農(nóng)業(yè)發(fā)展有限公司,浙江諸暨 311800)

    三角帆蚌()是我國主要的淡水育珠蚌,廣泛地分布于安徽、浙江、江蘇和湖北等地。育珠蚌在進行插核手術(shù)后,傷口極易感染病菌,致使育珠蚌吐核甚至死亡,讓珍珠養(yǎng)殖戶遭受經(jīng)濟損失。為了提高珍珠的產(chǎn)量和品質(zhì),很多研究者從育珠環(huán)境、外套膜細(xì)胞的培育、術(shù)前術(shù)后處理以及細(xì)胞小片的處理等方面對有核珍珠培育技術(shù)做了大量的研究和實踐工作。也有研究者對珠核的材質(zhì)和固核技術(shù)進行探索和研究,李詠梅等將珠核用處理液浸泡后再植入育珠蚌體內(nèi),取得了很好的育珠效果。從現(xiàn)有的研究來看,尚未有研究者使用珠核表面包裹藥物,制成包藥珠核,將具有消炎抗菌、滋養(yǎng)育珠蚌的作用。

    為了降低育珠蚌死亡率,很多養(yǎng)殖戶向水面潑灑抗生素或者投喂含有抗生素的餌料,以達到消炎抗菌的目的。長此以往,不僅污染了水體環(huán)境,也危害到人類的健康。因此,藥物配方和用藥方式對于提高珍珠的品質(zhì)和保持生態(tài)環(huán)境尤為重要。由于中藥含有的多種有效成分具有抗菌消炎,增強機體的免疫能力的功能,可以有效解決耐藥性和藥物殘留的問題,目前已廣泛地應(yīng)用于水產(chǎn)養(yǎng)殖。多項研究表明,中藥黃芪所含有的黃芪多糖能有效增強動物的非特異免疫活性,促進動物生長。黃霉素具有毒性低,不易與其他抗生素產(chǎn)生拮抗作用,安全性高等特點,是國家認(rèn)定的動物“綠色”飼料添加劑。

    近年來,很多學(xué)者將向后反饋神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)(back propagation neural network,BPNN)模型與遺傳算法(genetic algorithm,GA)的尋優(yōu)功能相結(jié)合來研究中藥有效成分提取工藝條件優(yōu)選的問題。由于在訓(xùn)練模型的過程中追求擬合誤差的最小化,導(dǎo)致網(wǎng)絡(luò)中隱層神經(jīng)元數(shù)目增多,使網(wǎng)絡(luò)模型出現(xiàn)過度擬合。同時,傳統(tǒng)BP神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)的權(quán)值往往會使算法陷入局部極值,導(dǎo)致網(wǎng)絡(luò)訓(xùn)練失敗。而利用遺傳算法的全局尋優(yōu)功能,優(yōu)化神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)的結(jié)構(gòu),并利用全局尋優(yōu)功能,找到全局最優(yōu)解,更加符合包藥珠核各藥物濃度之間非線性的特征。本實驗對珠核包衣中黃芪藥液的適宜濃度、黃霉素和土霉素的藥液的適宜濃度進行測試,以育珠蚌死亡率、成珠率、優(yōu)質(zhì)珠率為指標(biāo),采用遺傳神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)算法,以期探索一種新型包藥珠核的生產(chǎn)工藝方法,優(yōu)化包衣中各種藥物成分的配比提高淡水珍珠的品質(zhì)。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    選取體質(zhì)健康、體長100~130 mm的2齡三角帆蚌為育珠蚌,體長50~80 mm的1齡蚌制做細(xì)胞小片,均由浙江省諸暨山下湖珍珠養(yǎng)殖基地培育。

    珠核由淡水麗蚌殼研磨而成,正球形,直徑2.5 mm,表面光滑,符合質(zhì)量要求。制作包藥珠核的藥物[黃霉素(批號:11015-37-5)、土霉素(批號:031161018)和中藥材黃芪(批號:1731213)]均購自江山市萬里中藥材有限公司。

    1.2 包藥珠核的制做

    稱取3 600 g干燥的黃芪,切片后放入過濾袋,扎緊袋口并留有一定空余,放入裝中藥煎藥機玻璃桶,加入6 000 mL清水浸泡30 min。設(shè)置高火煎煮20 min,轉(zhuǎn)文火煎煮30 min,過濾,收集濾液,查看藥液體積,如不足1 800 mL,則在藥液中加入清水至1 800 mL,冷卻至常溫備用。取黃霉素18 g溶于180 mL清水,土霉素18 g溶于20 mL濃度95%的乙醇溶液。將配置好的三種藥液混合,則混合藥液中黃芪生藥濃度為1.8 g/mL,黃霉素的濃度為9 mg/mL,土霉素的濃度為9 mg/mL。類似的,可以配制正交實驗組其他方案所需的混合藥物。

    將珠核放入注有清水的滾筒中滾動清洗三次,洗去表面粉塵,再放入超聲波清洗機中繼續(xù)清洗30 min,洗去殘余粉塵。清洗后的珠核放入沸水中煮40 min滅菌消毒,然后置于烘箱60 °C干燥。將處理好的珠核浸沒在不同濃度混合的藥液中,每隔10 min攪拌一次,常溫下浸泡30 min,取出,放于烘箱中烘干,即得包藥珠核。

    1.3 外套膜插核手術(shù)

    將育珠蚌刷洗干凈,放于清水池中10 h左右,讓母蚌排除體內(nèi)污泥和糞便等。將蚌體固定在手術(shù)臺上,用開殼器緩慢將蚌殼撐開約10 mm,加塞。用開口針在外套膜后端靠近腹緣處開口,口徑與深度以能放入一個珠核和一個細(xì)胞小片為宜。從小片貝上切下用來做細(xì)胞小片的外套膜,滴上紅藥水進行殺菌,將外套膜去掉邊緣觸手,再切成長度約為0.8 mm的小片,用送針將干燥的珠核與黏在一起的細(xì)胞小片從開口處移植到育珠蚌體內(nèi),每只育珠蚌植核30顆,兩側(cè)各15顆。術(shù)后將育珠蚌吊養(yǎng)在育珠水塘,育珠期8個月,每個星期檢查一次,去除死蚌。

    1.4 正交實驗設(shè)計

    以黃芪生藥的濃度、黃霉素的濃度和土霉素的濃度為影響因素,以育珠蚌的成活率、留核率和優(yōu)質(zhì)珠率為指標(biāo),安排實驗。設(shè)一對照組,植入經(jīng)消毒干燥處理過的無藥珠核,重復(fù)3組,每組用蚌100只。實驗組采用三因素四水平正交實驗設(shè)計方案,黃芪生藥的濃度分別為0.9、1.2、1.5、1.8 g/mL,混合藥液中黃霉素的濃度分別為6、7.5、9、10.5 mg/mL,土霉素的濃度分別為7.5、9、10.5、12 mg/mL。實驗組共16組,重復(fù)3組,每組用蚌100只。

    1.5 數(shù)據(jù)的收集與處理

    1.5.1 育珠蚌的成活率、留核率和優(yōu)質(zhì)珠率

    育珠期結(jié)束后,分別統(tǒng)計對照組和實驗組育珠蚌存活的數(shù)量、留核數(shù)以及優(yōu)質(zhì)珍珠數(shù),按下列方法計算各組成活率、留核率和優(yōu)質(zhì)珠率。

    育珠蚌的成活率=100%×育珠期結(jié)束后活蚌的總數(shù)量/育珠蚌的總數(shù);

    留核率=100%×成活的育珠蚌留核總數(shù)/成活的育珠蚌植核總數(shù);

    優(yōu)質(zhì)珠率=100%×優(yōu)質(zhì)珍珠數(shù)/收獲珍珠的總數(shù)。

    優(yōu)質(zhì)珠的衡量標(biāo)準(zhǔn)具有多樣性,聘請經(jīng)驗豐富的珍珠養(yǎng)殖專家以及權(quán)威機構(gòu),對收獲的珍珠從光澤度、形狀、直徑、光潔度四個方面進行品質(zhì)鑒定,選出優(yōu)質(zhì)珍珠。

    1.5.2 基于熵權(quán)法的珍珠品質(zhì)綜合評價指標(biāo)的確定

    熵權(quán)法是基于信息學(xué)的理論,通過計算指標(biāo)的信息熵決定指標(biāo)的權(quán)重的一種客觀賦權(quán)法。指標(biāo)的變異性越大,所起的作用也越大,其權(quán)重也就越大。熵權(quán)法能夠消除信息之間的重疊性,深刻反映出指標(biāo)信息熵值的效用價值,具有較高的可信度和精確度。本實驗先采用熵權(quán)法確定指標(biāo)存活率、留核率和優(yōu)質(zhì)珠率的權(quán)重分別記為,,,再按照式(1)將它們進行線性加權(quán)合并為一個綜合評價指標(biāo)。

    =++

    (1)

    1.6 遺傳神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)優(yōu)化模型的建立

    利用實驗得到的統(tǒng)計數(shù)據(jù),以神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)理論為基礎(chǔ),利用遺傳算法優(yōu)化隱層神經(jīng)元的個數(shù)和網(wǎng)絡(luò)權(quán)值,建立藥用珠核生產(chǎn)工藝的遺傳神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)數(shù)學(xué)模型,再用遺傳算法的全局尋優(yōu)功能,搜索最優(yōu)生產(chǎn)工藝組合。

    1.6.1 數(shù)據(jù)預(yù)處理

    因?qū)嶒炓蛩睾蛯嶒炛笜?biāo)的量綱不同,因此在建立數(shù)學(xué)模型進行數(shù)據(jù)分析之前,先對數(shù)據(jù)按公式(2)進行歸一化處理,去除量綱和數(shù)量級對分析結(jié)果的影響,歸一化后的數(shù)據(jù)位均于[0,1]之間。

    1.6.2 GA-BP神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)

    BP神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)由輸入層、隱層和輸出層構(gòu)成,具有簡單、計算量小等優(yōu)點。但是,由于訓(xùn)練開始時,系統(tǒng)中網(wǎng)絡(luò)權(quán)值、閾值、隱層神經(jīng)元的個數(shù)等參數(shù)的設(shè)置具有隨機性,易導(dǎo)致訓(xùn)練誤差增大或出現(xiàn)過擬合的現(xiàn)象。遺傳算法(Genetic Algorithm,GA)是一種基于自然選擇和種群遺傳機理的全局優(yōu)化搜索算法。通過模擬種群個體在遺傳過程中的選擇、雜交和突變,實現(xiàn)適者生存,從而找到最佳個體。

    GA-BP神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)先隨機生成一個初始權(quán)值種群,并對種群中的個體進行二進制編碼。然后,根據(jù)權(quán)值的適應(yīng)度值,用GA算法對權(quán)值進行更新,淘汰劣的個體,留下優(yōu)的個體再組合成新一代種群,不斷重復(fù)上面的過程,逐步得到最優(yōu)解。GA-BP神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)算法可以有效地提高預(yù)測的精度和處理問題的速度,縮短網(wǎng)絡(luò)的訓(xùn)練時間?;谶z傳神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)算法搜尋包藥珠核最佳生產(chǎn)工藝條件的具體方案如下:

    將實驗數(shù)據(jù)歸一化處理,為了提高網(wǎng)絡(luò)的收斂性和泛化能力,采用留一交叉驗證方法,把所有正交實驗數(shù)據(jù)隨機分為訓(xùn)練集和測試集;設(shè)置遺傳算法運行參數(shù),利用遺傳算法優(yōu)化BP神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu),根據(jù)個體適應(yīng)度值,確定隱層神經(jīng)元的個數(shù);利用遺傳算法優(yōu)化BP神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)各層之間的權(quán)值。根據(jù)網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu),對網(wǎng)絡(luò)的權(quán)值進行編碼,并生成初始種群。根據(jù)個體適應(yīng)度值,不斷地運行選擇、交叉和變異算子,生成新種群,直至滿足標(biāo)準(zhǔn),得到最優(yōu)初始權(quán)值;再利用遺傳算法的全局尋優(yōu)功能,對得到的BP神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)搜索最優(yōu)解,得到制作包藥珠核各藥物的最優(yōu)濃度組合。

    利用Matlab14.0軟件對實驗結(jié)果進行計算和分析,按照熵權(quán)法的步驟,計算育珠蚌的死亡率、留核率、優(yōu)質(zhì)珠率的權(quán)重和綜合評價指標(biāo)。設(shè)雙側(cè)顯著性檢驗<0.05,利用卡方獨立性檢驗,比較對照組和實驗組、重復(fù)組之間的死亡率、留核率和優(yōu)質(zhì)珠率是否有顯著性差異。借助Matlab14.0工具箱,設(shè)計遺傳神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)算法程序,以黃芪生藥濃度、黃霉素濃度、土霉素濃度為輸入,以綜合評價指標(biāo)為輸出,搜索包藥珠核藥物的最佳濃度。

    2 結(jié)果

    2019年,于浙江省諸暨市山下湖珍珠養(yǎng)殖基地進行實驗,育珠期為3-11月,期間日平均氣溫約為12.7~29.8 ℃。11月底,剖蚌取珠,分別統(tǒng)計對照組和所有實驗組存活蚌的總數(shù)、留核總數(shù)和優(yōu)質(zhì)珠總數(shù)。植入無藥珠核的對照組育珠蚌存活率為(85.0±2.6)%,留核率為(70.3±2.9)%,優(yōu)質(zhì)珠率為(60.6±2.4)%。

    2.1 正交試驗設(shè)計的方案和結(jié)果

    以黃芪藥液濃度、黃霉素濃度和土霉素濃度為因素,設(shè)計三因素四水平正交試驗方案,各因素和水平見表1。

    表1 正交試驗設(shè)計的因素和水平

    熵權(quán)法確定、和分別是0.352 0,0.271 7,0.376 3,根據(jù)公式(2)計算珍珠品質(zhì)的綜合評價指標(biāo)。正交試驗設(shè)計的方案、結(jié)果和綜合評價指標(biāo)值見表2。

    表2 正交試驗方案及結(jié)果

    經(jīng)卡方檢驗,16個實驗組的育珠蚌存活率、留核率和優(yōu)質(zhì)珠率均明顯高于對照組,但3個重復(fù)組間無顯著性差異。

    2.2 包藥珠核的最佳工藝條件的確定

    以黃芪藥液濃度(g/mL)、黃霉素濃度(mg/mL)、土霉素濃度(mg/mL)為網(wǎng)絡(luò)輸入,以綜合評價指標(biāo)為網(wǎng)絡(luò)輸出,建立GA-BP神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)模型,采用留一法將16組實驗數(shù)據(jù)分為測試集和驗證集,所有變量經(jīng)過標(biāo)準(zhǔn)化處理。利用遺傳算法,對神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)進行訓(xùn)練,確定隱層神經(jīng)元個數(shù)和優(yōu)化網(wǎng)絡(luò)權(quán)值,再對建立的神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)進行全局尋優(yōu),得到包藥珠核各藥物的的最佳濃度。

    2.2.1 確定BP神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)

    設(shè)定初始種群的大小為20,隱含層為1層,訓(xùn)練的次數(shù)為20次,訓(xùn)練的適應(yīng)值為0.001。經(jīng)過訓(xùn)練,隱層神經(jīng)元的數(shù)量與平均訓(xùn)練誤差和平均預(yù)測誤差的關(guān)系如圖1所示。

    圖1 神經(jīng)元的數(shù)量與絕對誤差

    從圖1可以看出,隨著隱層神經(jīng)元數(shù)量的增加,雖然平均測試誤差不斷減小,但是當(dāng)神經(jīng)元數(shù)量為3時,平均驗證誤差最小,之后逐漸增大,出現(xiàn)過擬合現(xiàn)象,因此取隱層神經(jīng)元的個數(shù)為3。以NMSE作為遺傳算法的適應(yīng)度值,對神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)進行訓(xùn)練,確定網(wǎng)絡(luò)權(quán)值和閾值,當(dāng)訓(xùn)練到15代時,訓(xùn)練集與驗證集的最大絕對誤差為1.476,達到了預(yù)計值,擬合優(yōu)度=0.86。訓(xùn)練誤差和驗證誤差如圖2(a)所示,預(yù)測值與實際值的關(guān)系如圖2(b)所示。

    圖2 GA-BP神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)訓(xùn)練與預(yù)測結(jié)果.

    2.2.2 最優(yōu)生產(chǎn)工藝

    基于上述建立好的GA-BP網(wǎng)絡(luò)模型,利用遺傳算法的全局尋優(yōu)功能,實現(xiàn)對最優(yōu)生產(chǎn)工藝組合的自主搜索,得到包藥珠核混合的最佳藥物濃度:黃芪生藥濃度為1.55 g/mL,黃霉素藥液濃度為7.9 mg/mL,土霉素藥液濃度為9.48 mg/mL,綜合評價指標(biāo)可以達到94.49 %。

    3 討論

    3.1 包藥珠核規(guī)格對珍珠品質(zhì)的影響

    本實驗中所用到的珠核直徑均為2.5 mm,如果珠核的直徑變大,每只育珠蚌的植核數(shù)量將會減少,用于制作包藥珠核的最佳藥物濃度也會相應(yīng)地發(fā)生改變。以6 mm直徑珠核為例,如果按本實驗中的最佳藥物濃度制作包藥珠核,育珠蚌的存活率和留核率大大降低,對育珠蚌解剖的結(jié)果發(fā)現(xiàn),部分珍珠囊破損,珠核脫落,其原因可能是大珠核附著的藥物比較多,黑化細(xì)胞小片并腐蝕珍珠囊壁,引起育珠蚌藥物中毒。因此對于不同規(guī)格的珠核,藥物的濃度也不一樣。

    3.2 包藥珠核促進育珠蚌傷口愈合

    育珠蚌植入2.5 mm的普通珠核后,一般需要10 d左右傷口可以愈合,而植入同規(guī)格的包藥珠核后,傷口在3~5 d即可愈合。極大的降低了傷口感染致病菌的幾率,減少壞珠的數(shù)量,提高留核率。同時,中藥黃芪的益補作用可以更快地促進育珠蚌珍珠質(zhì)的分泌,提高優(yōu)質(zhì)珠的數(shù)量,縮短育珠時間。

    3.3 藥物濃度對珍珠品質(zhì)的影響

    基于珍珠養(yǎng)殖戶長期養(yǎng)殖經(jīng)驗的基礎(chǔ)上,實驗選取的藥物濃度范圍安全可靠,不會造成育珠蚌中毒死亡,而且實驗結(jié)果(圖3)也表明,在此濃度范圍內(nèi),育珠蚌的存活數(shù)量并沒有明顯的變化。然而,留核率和優(yōu)質(zhì)珠率隨著黃芪濃度、黃霉素濃度和土霉素濃度的升高,表現(xiàn)出先增加后減小的特點。從對育珠蚌的解剖結(jié)果來看,過高的藥物濃度導(dǎo)致細(xì)胞小片黑化,腐蝕珍珠囊,增加脫核數(shù)。所以,優(yōu)化包藥珠核的藥物濃度對于提高珍珠的品質(zhì)十分重要。此外,中藥黃芪因產(chǎn)地、采收時間和貯藏條件的不同,藥效也會有所不同。因此在選取黃芪時,應(yīng)根據(jù)黃芪的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),盡量選取道地藥材。多項研究表明,山西的蒙古黃芪中黃芪甲苷、總黃酮、多糖的含量高于其他產(chǎn)地的黃芪,因此本實驗選用了山西蒙古黃芪。

    圖3 黃芪藥液濃度、黃霉素濃度、土霉素濃度與存活率、留核率、優(yōu)質(zhì)珠率的關(guān)系

    3.5 外界環(huán)境對存活率、留核率及優(yōu)質(zhì)珠率的影響

    育珠蚌的存活率、留核率及優(yōu)質(zhì)珠率與外界的氣候條件和育珠水域環(huán)境密不可分。水體的pH值,含菌量、養(yǎng)料的多少可以人為地進行調(diào)控,但是水溫是不可控的因素之一,夏季的持續(xù)高溫或冬季的持續(xù)低溫,會增加育珠蚌的死亡率,并影響育珠蚌珍珠質(zhì)的分泌。育珠水域的生態(tài)環(huán)境也會影響到珍珠的養(yǎng)殖,近年來,廣大養(yǎng)殖戶積極探索魚蚌混養(yǎng)的生態(tài)養(yǎng)殖方式,魚類可以為蚌類提供豐富餌料,減少有機肥和化肥的施用;蚌類可以凈化水體,二者相容共生,不但降低了投資成本,提高社會效益和生態(tài)效益,也有利于促進水域的健康和可持續(xù)性發(fā)展。

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