T淋巴細(xì)胞聯(lián)合血漿細(xì)胞因子診斷兒童ITP的研究*

江南靜，雷勛明，龐 英，朱書瑤，皮光環(huán)，陳 艾

(四川省婦幼保健院/四川省婦女兒童醫(yī)院/成都醫(yī)學(xué)院附屬婦女兒童醫(yī)院兒科，成都 600031)

特發(fā)性血小板減少性紫癜(ITP)為一種以血小板減少為表現(xiàn)的自身免疫性疾病，該病可導(dǎo)致患兒出現(xiàn)內(nèi)臟、皮下、顱內(nèi)等多部位急性出血，嚴(yán)重者可危及患兒生命[1-2]。據(jù)統(tǒng)計(jì)兒童出血性疾病中約有70%是因ITP引起，目前對(duì)于該病的發(fā)病機(jī)制尚未完全明確，近年來隨著免疫學(xué)、分子生物學(xué)等學(xué)科的發(fā)展，發(fā)現(xiàn)ITP存在自身免疫功能異常導(dǎo)致患兒體內(nèi)產(chǎn)生血小板抗體，使血小板被大量破壞而致血小板水平下降可能是該病的發(fā)生原因之一[3-4]。目前國內(nèi)對(duì)于ITP的診斷雖有標(biāo)準(zhǔn)，但需要進(jìn)行骨髓穿刺檢查，可對(duì)患兒機(jī)體造成較大的創(chuàng)傷，因此有必要尋找創(chuàng)傷性更小的檢測(cè)指標(biāo)[5-6]。本研究旨在通過分析T淋巴細(xì)胞亞群及血漿細(xì)胞因子檢測(cè)指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)對(duì)兒童ITP診斷價(jià)值，以期為該病的臨床診斷提供新的思路。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2018年2月至2020年9月本院接診的血小板減少的住院患兒92例，其中男55例，女37例。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)連續(xù)2次以上檢測(cè)顯示血小板計(jì)數(shù)(PLT)<100×109/L；(2)初次患?。?3)采血前未接受免疫抑制治療；(4)患兒家屬已獲知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)人類免疫缺陷病毒(HIV)抗體檢查陽性者；(2)采血前4周內(nèi)有輸血、疫苗接種者。本研究經(jīng)醫(yī)院論理委員會(huì)審核并通過。

1.2 方法

1.2.1檢測(cè)T淋巴細(xì)胞亞群及血漿細(xì)胞因子水平

患兒在入院24 h內(nèi)抽取空腹外周靜脈血5 mL，其中2 mL全血采用美國BD公司的FACS Calibur型流式細(xì)胞儀檢測(cè)CD3+、CD4+及CD8+水平。另外3 mL采用日立公司生產(chǎn)的7600型全自動(dòng)血液生化分析儀檢測(cè)白細(xì)胞介素(IL)-2、IL-4及腫瘤壞死因子-α(TNF-α)水平。

1.2.2ITP診斷標(biāo)準(zhǔn)

參照《諸福棠實(shí)用兒科學(xué)(第8版)》[7]的規(guī)定：經(jīng)2次以上檢測(cè)血常規(guī)顯示PLT 100×109/L，脾臟無增大或僅有輕度增大，骨髓檢查顯示巨核細(xì)胞增多或正常，有成熟障礙，具有以下5項(xiàng)中的任一點(diǎn)：(1)潑尼松治療有效；(2)切脾治療有效；(3)人體產(chǎn)生血小板相關(guān)免疫球蛋白G(PAIgG)增多；(4)人血小板相關(guān)補(bǔ)體3(PAC3)增多；(5)血小板壽命測(cè)定縮短；除外繼發(fā)性血小板減少癥。根據(jù)ITP診斷結(jié)果將患兒分為兩組，符合ITP診斷者為ITP組，不符合ITP診斷者為非ITP組，比較兩組患兒T淋巴細(xì)胞亞群及血漿細(xì)胞因子水平，并以受試者工作特征(ROC)曲線評(píng)估各指標(biāo)單獨(dú)檢測(cè)與聯(lián)合檢測(cè)對(duì)ITP的診斷價(jià)值。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié) 果

2.1 兩組患者基線資料比較

92例患兒中共62例(67.39%)被診斷為ITP，兩組患兒性別、年齡、病程、PLT水平比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表1。

表1 兩組患兒基線資料比較

2.2 兩組患兒T淋巴細(xì)胞亞群比較

ITP組患兒CD3+及CD4+水平均低于非ITP組，CD8+水平高于非ITP組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表2。

表2 兩組患兒T淋巴細(xì)胞亞群比較

2.3 兩組患兒血漿細(xì)胞因子檢測(cè)指標(biāo)比較

ITP組患兒血漿IL-4水平低于非ITP組，ITP組患兒IL-2、TNF-α水平高于非ITP組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表3。

表3 兩組患兒血漿細(xì)胞因子檢測(cè)指標(biāo)比較

2.4 ROC曲線分析

ROC曲線分析結(jié)果顯示，CD3+、CD4+、CD8+、IL-2、IL-4、TNF-α對(duì)兒童ITP的截?cái)嘀捣謩e為59.13%、26.04%、24.08%、4.05 pg/mL、3.74 pg/mL、4.19 pg/mL；曲線下面積(AUC)分別為0.883、0.528、0.806、0.875、0.759、0.506。六者聯(lián)合診斷(指聯(lián)合檢測(cè)時(shí)CD3+、CD4+、IL-4其中1個(gè)指標(biāo)低于截?cái)嘀祷駽D8+、IL-2、TNF-α其中1個(gè)指標(biāo)低于截?cái)嘀导磁袛酁镮TP)的AUC為0.932，其診斷效能高于各指標(biāo)單獨(dú)檢測(cè)(Z=5.142、4.338、4.882、3.957、4.226、3.921，P=0.001、0.009、0.003、0.017、0.011、0.019)，見表4。

表4 ROC曲線分析結(jié)果

3 討 論

兒童為ITP的高發(fā)人群，該病起病較為隱匿，在疾病早期主要以散在皮膚出血點(diǎn)及鼻衄、牙齦出血等較輕的出血癥狀為表現(xiàn)，在急性期可出現(xiàn)發(fā)熱、惡寒并有突然發(fā)起廣泛而嚴(yán)重的皮膚黏膜紫癜等癥狀，此類紫癜可出現(xiàn)于任何部位的皮膚或黏膜，嚴(yán)重者可對(duì)患兒的生命造成威脅[8-9]。過去較長(zhǎng)時(shí)間被認(rèn)為ITP是一種不明原因的血小板減少而引起的出血性疾病，近年來隨著對(duì)該病的研究，發(fā)現(xiàn)此類患兒多有體液免疫異常的表現(xiàn)，同時(shí)研究發(fā)現(xiàn)細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)失調(diào)也可能是ITP發(fā)生的分子生物學(xué)基礎(chǔ)之一[10]。ITP患兒因自身抗原異常表達(dá)而激活自身反應(yīng)性T淋巴細(xì)胞亞群，使體內(nèi)血小板抗體產(chǎn)生增加而致血小板被大量破壞使血小板水平下降；加上巨核細(xì)胞的增殖分化及其成熟后生成血小板均受細(xì)胞因子的調(diào)控，因此，可選擇T淋巴細(xì)胞亞群及血漿細(xì)胞因子作為兒童ITP的診斷指標(biāo)[11-12]。

CD3+T細(xì)胞主要包括CD4+、CD8+T細(xì)胞2個(gè)亞群，CD4+T細(xì)胞為T輔助/誘導(dǎo)細(xì)胞表面標(biāo)志，可輔助T細(xì)胞的分化并有協(xié)助B細(xì)胞產(chǎn)生抗體的作用，同時(shí)CD4+T細(xì)胞為機(jī)體免疫反應(yīng)中的主要反應(yīng)細(xì)胞，可增強(qiáng)及擴(kuò)大其他免疫細(xì)胞的功能，因而CD4+T細(xì)胞水平升高提示患兒免疫功能較強(qiáng)[13]。CD8+T細(xì)胞則為T抑制/細(xì)胞毒性細(xì)胞的表面標(biāo)志，其具有抑制T細(xì)胞的活化及抑制B細(xì)胞產(chǎn)生抗體的作用[14]。本研究結(jié)果顯示，ITP組患兒CD3+、CD4+水平均低于非ITP組，CD8+水平高于非ITP組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，與相關(guān)研究結(jié)果相一致[15]。CD4+T細(xì)胞根據(jù)產(chǎn)生細(xì)胞因子的不同可為Th0、Th1、Th2等細(xì)胞，對(duì)于ITP患者Th1及Th2的研究較多，研究證實(shí)ITP患兒體內(nèi)Th1/Th2比例水平升高，Th1細(xì)胞主要介導(dǎo)細(xì)胞免疫，可刺激CD8+T細(xì)胞反應(yīng)而產(chǎn)生TNF-α、IL-2等細(xì)胞因子而激活巨噬細(xì)胞對(duì)血小板的吞噬作用，加速血小板破壞。Th2細(xì)胞則主要產(chǎn)生IL-4等細(xì)胞因子，可介導(dǎo)體液免疫，限制抗原遞呈細(xì)胞活性而起到增強(qiáng)體液免疫的作用[16]。

IL-2可參與免疫應(yīng)答，同時(shí)可促進(jìn)Th1及Th2細(xì)胞的增生并可促進(jìn)自然殺傷(NK)細(xì)胞的細(xì)胞毒性及其他細(xì)胞因子的分泌；白細(xì)胞介素-4則主要由單核巨噬細(xì)胞及Th2所分泌，可起到促進(jìn)B細(xì)胞增生分化及促進(jìn)抗體分泌的作用，并可提高機(jī)體免疫力；TNF-α主要由單核巨噬細(xì)胞及經(jīng)活化的T細(xì)胞產(chǎn)生，適當(dāng)?shù)腡NF-α水平可對(duì)機(jī)體起保護(hù)作用，但過量的TNF-α反而可對(duì)機(jī)體造成損傷[17]。本研究對(duì)兩組患兒細(xì)胞因子水平比較，結(jié)果顯示ITP組患兒血漿IL-4水平低于非ITP組，IL-2、TNF-α水平高于非ITP組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。正常情況下IL-2、TNF-α水平均較低，當(dāng)出現(xiàn)外源性感染時(shí)可使機(jī)體因感染而在免疫應(yīng)答過程中產(chǎn)生復(fù)合物而刺激單核-巨噬細(xì)胞合成并釋放出大量的IL、TNF-α等促炎因子，上述炎癥因子可參與ITP的發(fā)病過程[18-19]。本研究ROC曲線分析結(jié)果顯示，CD3+、CD4+、CD8+、IL-2、IL-4、TNF-α對(duì)兒童ITP的截?cái)嘀捣謩e為59.13%、26.04%、24.08%、4.05 pg/mL、3.74 pg/mL、4.19 pg/mL；AUC分別為0.883、0.528、0.806、0.875、0.759、0.506。六者聯(lián)合診斷的AUC為0.932，其診斷效能高于各指標(biāo)單獨(dú)檢測(cè)(P<0.05)，提示T淋巴細(xì)胞亞群及血漿細(xì)胞因子聯(lián)合檢測(cè)可從患兒的免疫功能及炎性反應(yīng)的角度反映患兒的病情，可為ITP的診斷提供更多的參考依據(jù)，本研究所采取的診斷方法與當(dāng)前ITP診斷的金標(biāo)準(zhǔn)相比，不進(jìn)行骨髓穿刺檢查，對(duì)患兒創(chuàng)傷較小，T淋巴細(xì)胞亞群及血漿細(xì)胞因子聯(lián)合檢測(cè)可作為ITP早期篩查手段而提高兒童ITP的早期診斷率[20]。

綜上所述，CD3+、CD4+、CD8+、IL-2、IL-4、TNF-α均可作為兒童ITP的診斷指標(biāo)，聯(lián)合檢測(cè)可提高ITP診斷效能。上述指標(biāo)在使用時(shí)注意需與血常規(guī)指標(biāo)、臨床診斷相結(jié)合，發(fā)揮其輔助診斷作用才能有效提高兒童ITP的早期診斷效率。