基于超分子傳感技術(shù)研究血府逐瘀湯對(duì)三甲胺結(jié)腸吸收的影響

王璐瑤，張亞平，穆琦瑄，于卉娟，王躍飛

基于超分子傳感技術(shù)研究血府逐瘀湯對(duì)三甲胺結(jié)腸吸收的影響

王璐瑤，張亞平，穆琦瑄，于卉娟*，王躍飛

天津中醫(yī)藥大學(xué) 省部共建組分中藥國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津市中藥化學(xué)與分析重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津 301617

基于超分子傳感技術(shù)研究血府逐瘀湯對(duì)三甲胺結(jié)腸吸收的影響。采用離體外翻腸囊模型研究三甲胺的結(jié)腸吸收；基于指示劑置換分析策略，構(gòu)建選擇性識(shí)別三甲胺的超分子熒光傳感體系，評(píng)價(jià)血府逐瘀湯對(duì)三甲胺結(jié)腸吸收的影響。基于杯芳烴分子識(shí)別的超分子傳感體系實(shí)現(xiàn)了三甲胺的靈敏檢測；與對(duì)照組相比，血府逐瘀湯高劑量（5.0 mg/mL）組顯著降低結(jié)腸單位面積三甲胺的累積吸收量（＜0.05、0.01、0.001），血府逐瘀湯低劑量（2.5 mg/mL）組能夠減少結(jié)腸單位面積三甲胺的累積吸收量，但與對(duì)照組相比無顯著性差異。血府逐瘀湯能夠減少三甲胺的結(jié)腸吸收，為血府逐瘀湯活血化瘀作用提供一定依據(jù)。

超分子傳感；血府逐瘀湯；指示劑置換分析；三甲胺；外翻腸囊法

三甲胺是膽堿、甜菜堿及肉堿等經(jīng)腸道菌群代謝生成的產(chǎn)物，經(jīng)肝臟黃素單加氧酶3（flavin-containing monooxygenase 3，F(xiàn)MO3）轉(zhuǎn)化生成氧化三甲胺（trimethylamine-oxide，TMAO）[1]。研究表明，血漿TMAO水平升高可導(dǎo)致血小板高反應(yīng)性，增加血栓形成風(fēng)險(xiǎn)，與心血管事件的發(fā)生呈正相關(guān)[2-3]。因此，通過干預(yù)三甲胺的吸收，減少三甲胺向TMAO的轉(zhuǎn)化，減少TMAO的生成，從而降低血栓形成風(fēng)險(xiǎn)，有助于預(yù)防心血管疾病的發(fā)生。血府逐瘀湯源自清代王清任的《醫(yī)林改錯(cuò)》，具有活血祛瘀、行氣止痛的功效，臨床上廣泛用于心血管疾病的預(yù)防和治療[4-5]。目前，關(guān)于血府逐瘀湯是否調(diào)控三甲胺的結(jié)腸吸收鮮有報(bào)道。

三甲胺相對(duì)分子質(zhì)量小，無顯色團(tuán)，為強(qiáng)極性的有機(jī)小分子。目前檢測三甲胺的方法主要為氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法、核磁共振法[6]，但檢測前樣品需進(jìn)行衍生化或同位素標(biāo)記等預(yù)處理，存在操作繁瑣、分析時(shí)間長、檢測成本高等缺點(diǎn)。基于指示劑置換分析（indicator displacement assay，IDA）的超分子傳感技術(shù)，通過指示劑熒光信號(hào)改變實(shí)現(xiàn)分析物的檢測，具有操作簡單、靈敏度高等優(yōu)勢(shì)?；贗DA策略，本課題組前期構(gòu)建了胍基杯[5]芳烴-熒光素鈉主客體對(duì)傳感體系，提供了一種易操作、低成本、無標(biāo)記、靈敏檢測TMAO的方法，實(shí)現(xiàn)了人工尿液和模擬疾病尿液中TMAO的檢測[7]。本研究構(gòu)建超分子熒光傳感體系識(shí)別檢測三甲胺，探究血府逐瘀湯對(duì)三甲胺結(jié)腸吸收的影響，旨在闡明血府逐瘀湯調(diào)控與血栓形成相關(guān)的三甲胺-TMAO通路的作用。

1 材料

1.1 動(dòng)物

SPF級(jí)雄性Wistar大鼠，體質(zhì)量（200±20）g，購自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，許可證號(hào)SCXK（京）2016-0006。動(dòng)物飼養(yǎng)于天津藥物研究院新藥評(píng)價(jià)有限公司，室溫22～25 ℃，相對(duì)濕度（40±10）%。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)經(jīng)天津藥物研究院新藥評(píng)價(jià)有限公司實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理與使用委員會(huì)批準(zhǔn)（批準(zhǔn)號(hào)2020060801）。

1.2 藥材

柴胡、川芎、炒桃仁、紅花、當(dāng)歸、赤芍、炒枳殼、生地、桔梗、甘草、牛膝飲片購自河北美威藥業(yè)股份有限公司，經(jīng)天津中醫(yī)藥大學(xué)李天祥教授鑒定分別為傘形科植物柴胡DC.的干燥根、傘形科植物川芎Hort.的干燥根莖、薔薇科植物桃(L.) Batsch的干燥成熟種子、菊科植物紅花L.的干燥花、傘形科植物當(dāng)歸(Oliv.) Diels的干燥根、毛茛科植物芍藥Pall.的干燥根、蕓香科植物酸橙L.及其栽培變種的干燥未成熟果實(shí)、玄參科植物地黃Libosch.的新鮮或干燥塊根、桔?？浦参锝酃?Jacq.) A. DC.的干燥根、豆科植物甘草Fisch.干燥根和根莖、莧科植物牛膝Bl.的干燥根，均符合《中國藥典》2020年版飲片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

1.3 藥品與試劑

氯化鈉、氯化鉀、碳酸氫鈉、磷酸二氫鈉、氯化鎂、氯化鈣、葡萄糖購自上海阿拉丁生化科技股份有限公司；稀鹽酸購自天津市化學(xué)試劑供銷公司；三甲胺（批號(hào)BCBZ6954）購自美國Sigma-Aldrich公司；惡嗪1（oxazine 1，OX1，批號(hào)AAT-89）購自武漢艾美捷科技有限公司；磺化杯[4]芳烴（-sulfonatocalix[4]arene，SC4A）由南開大學(xué)化學(xué)學(xué)院郭東升教授惠贈(zèng)。

1.4 儀器

Varian Cary Eclipse型熒光分光光度計(jì)（美國安捷倫科技有限公司）；ME 204型萬分之一天平、MS 105DU型十萬分之一天平（瑞士梅特勒-托利多公司）；FDU-2110型冷凍干燥機(jī)（上海愛朗儀器有限公司）；DB043型離體器官測量系統(tǒng)（北京智鼠多寶生物科技有限責(zé)任公司）；Centrifuge 5424R型臺(tái)式離心機(jī)（德國艾本德股份公司）；Milli-Q超純水儀（美國密理博公司）。

2 方法

2.1 樣品及溶液的制備

2.1.1 血府逐瘀湯凍干粉的制備 取4 g當(dāng)歸、4 g柴胡、6 g桔梗、6 g川芎、8 g甘草、8 g炒枳殼、8 g赤芍、12 g生地、12 g紅花、12 g牛膝、15 g炒桃仁，置于圓底燒瓶中，加入8倍量水，回流提取2次，每次提取2 h，合并水提液，濃縮，冷凍干燥，得血府逐瘀湯凍干粉末，備用。根據(jù)本課題組已建立方法[8]，測定血府逐瘀湯凍干粉中主要成分的含量，凍干粉樣品含苦杏仁苷3.50 mg/g、芍藥苷5.33 mg/g、阿魏酸0.27 mg/g、柚皮苷7.28 mg/g、新橙皮苷6.18 mg/g、甘草酸1.96 mg/g。

2.1.2 Tyrode緩沖液的配制 按照文獻(xiàn)方法[9]配制Tyrode緩沖液：取0.28 g氯化鉀、8.0 g氯化鈉、0.05 g磷酸二氫鈉、1.0 g碳酸氫鈉、0.1 g氯化鎂，溶于500 mL蒸餾水中，攪拌均勻；取0.2 g氯化鈣溶于500 mL蒸餾水中，攪拌均勻；將上述溶液混合均勻，臨用前加入1.0 g葡萄糖，用稀鹽酸調(diào)pH至7.4，備用。

2.1.3 樣品溶液的制備 取血府逐瘀湯凍干粉，精密稱定，用Tyrode緩沖液分別配制質(zhì)量濃度為5.0、2.5 mg/mL的血府逐瘀湯樣品溶液，備用。

取SC4A、OX1、三甲胺，精密稱定，分別用超純水配制成濃度為100 mmol/L、100 μmol/L、100 mmol/L的儲(chǔ)備液，備用。

2.2 外翻腸囊模型的構(gòu)建與取樣

按照文獻(xiàn)方法[9]構(gòu)建外翻腸囊模型。Wistar大鼠實(shí)驗(yàn)前16 h禁食，自由飲水，隨機(jī)分成5組，每組6只。大鼠ip 3%戊巴比妥鈉麻醉（40 mg/kg），剝離大鼠腸管，剪取結(jié)腸（4～7 cm），用Tyrode緩沖液沖洗至無內(nèi)容物。將腸管一端結(jié)扎，翻轉(zhuǎn)腸管，另一端結(jié)扎成囊狀。向腸囊內(nèi)注入1 mL Tyrode緩沖液，將其放入麥?zhǔn)显〔郏?0 mL Tyrode緩沖液）中，并向浴槽中通入95% O2和5% CO2，保持37 ℃，平衡5 min，將麥?zhǔn)显〔壑械腡yrode緩沖液放出，分別加入20 mL樣品溶液：5 mmol/L三甲胺（三甲胺對(duì)照組）、5.0 mg/mL血府逐瘀湯（高劑量血府逐瘀湯對(duì)照組）、2.5 mg/mL血府逐瘀湯（低劑量血府逐瘀湯對(duì)照組）、5.0 mg/mL血府逐瘀湯＋5 mmol/L三甲胺（高劑量血府逐瘀湯測試組）、2.5 mg/mL血府逐瘀湯＋5 mmol/L三甲胺（低劑量血府逐瘀湯測試組），分別于15、30、45、60、90、120 min時(shí)從腸囊內(nèi)取樣200 μL，同時(shí)補(bǔ)足相同體積的Tyrode緩沖液。各組實(shí)驗(yàn)結(jié)束后將腸管縱向剖開，自然攤于濾紙上測量長度和寬度，計(jì)算結(jié)腸吸收面積。

2.3 熒光分光光度計(jì)實(shí)驗(yàn)條件

2.3.1 檢測溶液的配制 將“2.2”項(xiàng)下采集的腸囊液，12 000 r/min離心10 min，取上清液100 μL，用Tyrode緩沖液稀釋10倍，加入SC4A（測試體系中終濃度為0.4 mmol/L）和OX1（測試體系中終濃度為1 μmol/L）混勻，總體積為1 mL，進(jìn)行熒光檢測。由于腸囊液經(jīng)Tyrode緩沖液稀釋10倍后進(jìn)行熒光檢測，故測試體系中血府逐瘀湯質(zhì)量濃度為0.50、0.25 mg/mL。

2.3.2 檢測條件 采用配備Cary Single-cuvette Peltier比色皿控溫裝置的Varian Cary Eclipse熒光光譜儀進(jìn)行檢測，樣品池為石英比色皿，光程為10 mm；熒光滴定試驗(yàn)均在37 ℃下進(jìn)行。

在目標(biāo)跟蹤系統(tǒng)中，解決非線性濾波最常用的方法是EKF方法及其相關(guān)改進(jìn)算法。CKF算法是近年來新出現(xiàn)的一種非線性濾波算法，該算法利用了三階球面-徑向容積積分準(zhǔn)則進(jìn)行了嚴(yán)密的數(shù)學(xué)推導(dǎo)，在理論上對(duì)該算法具有嚴(yán)格的保證[5-6]，估計(jì)精度和數(shù)值穩(wěn)定性都比較高。在對(duì)CKF算法深入研究的基礎(chǔ)上，有學(xué)者提出了降維CKF算法[6-7]，并將降維CKF成功應(yīng)用于工程實(shí)踐[7-8]。

2.3.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì) 熒光滴定數(shù)據(jù)采用主客體1∶1包結(jié)模型擬合公式（oneHost_oneGuest，oneHost_ oneGuest_oneCompetitor）擬合[7]，獲得主客體對(duì)鍵合常數(shù)（association constant，a）。a、線性關(guān)系、檢測限（LOD）的測定均重復(fù)3次試驗(yàn)。

3 結(jié)果

3.1 杯芳烴超分子熒光傳感體系的構(gòu)建

在超分子熒光傳感體系中，為了提高熒光靈敏度，降低干擾物的影響，選擇具有高熒光量子效率及與大環(huán)主體分子有強(qiáng)鍵合的染料作為指示劑，確保大環(huán)分子-染料主客體絡(luò)合時(shí)熒光強(qiáng)度發(fā)生顯著變化。基于IDA策略，分析物（競爭客體）與染料競爭大環(huán)主體的空腔，將染料從絡(luò)合物中置換出來，引起體系熒光強(qiáng)度增大或減小，從而實(shí)現(xiàn)分析物的傳感檢測[10]。

染料OX1具有較高的熒光量子效率，與大環(huán)主體SC4A絡(luò)合后自身熒光被淬滅，傳感體系熒光強(qiáng)度變化范圍寬，是杯芳烴超分子傳感體系的理想熒光指示劑[11]。而且，在Tyrode緩沖液中，OX1（1 μmol/L）熒光強(qiáng)度不受三甲胺（13 mmol/L）和血府逐瘀湯（0.50、0.25 mg/mL）的影響（圖1）。

圖1 在三甲胺 (13 mmol·L?1)或血府逐瘀湯(0.50、0.25 mg·mL?1) 條件下OX1 (1 μmol·L?1) 的熒光光譜(λex＝648 nm，λem＝660～800 nm)

血府逐瘀湯藥味多，化學(xué)成分復(fù)雜。為評(píng)價(jià)SC4A?OX1主客體對(duì)傳感體系對(duì)三甲胺檢測的識(shí)別選擇性，系統(tǒng)考察了在血府逐瘀湯樣品溶液（0.50、0.25 mg/mL）中SC4A對(duì)三甲胺的包結(jié)能力。

在Tyrode緩沖液中，將SC4A（0～2.45 mmol/L）逐步滴加到OX1（1 μmol/L）中，大環(huán)主體分子SC4A與指示劑OX1發(fā)生可逆結(jié)合，OX1的熒光信號(hào)被顯著淬滅，獲得一系列隨SC4A增加而熒光強(qiáng)度降低的熒光發(fā)射光譜（圖2-A）。將OX1熒光光譜最大發(fā)射波長處（668 nm）的熒光強(qiáng)度與SC4A的濃度采用主客體1∶1包結(jié)模型擬合公式（oneHost_ oneGuest）進(jìn)行擬合，獲得SC4A?OX1主客體對(duì)鍵合常數(shù)，即a＝（2.44±0.04）×103L/mol。

將三甲胺（0～12.48 mmol/L）逐步滴加到SC4A?OX1（0.4 mmol/L?1 μmol/L）主客體對(duì)溶液中，三甲胺與OX1競爭SC4A的空腔，將OX1從SC4A?OX1絡(luò)合物中置換出來，OX1恢復(fù)在溶液中的熒光信號(hào)，如圖2-B所示。將OX1熒光光譜最大發(fā)射波長處（668 nm）的熒光強(qiáng)度與三甲胺的濃度采用主客體1∶1競爭包結(jié)模型擬合公式（oneHost_ oneGuest_oneCompetitor）進(jìn)行擬合，得SC4A?三甲胺主客體對(duì)鍵合常數(shù)，即a＝（4.42±0.28）×103L/mol。

Tyrode緩沖液(A)、0.50 mg·mL?1血府逐瘀湯 (C)、0.25 mg·mL?1血府逐瘀湯(E) 中SC4A (0～2.45 mmol·L?1) 與OX1 (1 μmol·L?1)的熒光滴定光譜（插圖為OX1在λem＝668 nm的熒光強(qiáng)度與SC4A濃度的非線性擬合曲線）；Tyrode緩沖液(B)、0.50 mg·mL?1血府逐瘀湯(D)、0.25 mg·mL?1血府逐瘀湯(F) 中三甲胺 (0～12.48 mmol·L?1) 與SC4A?OX1 (0.4 mmol·L?1 ?1 μmol·L?1) 主客體對(duì)的熒光競爭滴定光譜（插圖為OX1在λem＝668 nm的熒光強(qiáng)度與三甲胺濃度的非線性擬合曲線）

結(jié)果表明，在Tyrode緩沖液、血府逐瘀湯（0.50、0.25 mg/mL）中測得SC4A?三甲胺主客體對(duì)鍵合常數(shù)基本一致，鍵合較強(qiáng)，即在高、低質(zhì)量濃度血府逐瘀湯中SC4A能夠選擇性識(shí)別三甲胺，實(shí)現(xiàn)三甲胺傳感檢測。

3.2 Tyrode緩沖液、血府逐瘀湯樣品溶液中三甲胺測定標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立

基于IDA策略，分析物與染料競爭大環(huán)分子主體的空腔，在一定濃度范圍內(nèi)隨著分析物濃度的增加，染料熒光強(qiáng)度呈線性增加，從而構(gòu)建分析物檢測的標(biāo)準(zhǔn)曲線。在Tyrode緩沖液中，SC4A?OX1（0.4 mmol/L?1 μmol/L）主客體對(duì)的熒光強(qiáng)度隨三甲胺（0～0.62 mmol/L）濃度增加呈線性增加，以三甲胺濃度和OX1熒光強(qiáng)度（em＝668 nm）變化的比值（/0，其中0和分別為未加入和加入三甲胺時(shí)OX1熒光信號(hào)強(qiáng)度值）進(jìn)行線性擬合，得線性方程，＝442.82＋1.008 7（2＝0.995 2），如圖3-A所示。根據(jù)3/slope法計(jì)算三甲胺的LOD[12-13]，計(jì)算得Tyrode緩沖液中三甲胺的LOD為（32.78±2.63）μmol/L。同理在0～0.62 mmol/L，0.50 mg/mL血府逐瘀湯樣品溶液（圖3-B）和0.25 mg/mL血府逐瘀湯樣品溶液（圖3-C）中建立了三甲胺檢測的標(biāo)準(zhǔn)曲線，LOD分別為（36.06±5.10）、（35.08±3.35）μmol/L。

圖3 在Tyrode緩沖液 (A)、0.50 mg·mL?1血府逐瘀湯樣品溶液(B)、0.25 mg·mL?1血府逐瘀湯樣品溶液(C) 中OX1熒光強(qiáng)度比值與三甲胺濃度的線性擬合方程

3.3 腸囊溶液中三甲胺的測定

本研究構(gòu)建了SC4A?OX1超分子主客體對(duì)傳感體系識(shí)別檢測三甲胺，探究血府逐瘀湯對(duì)三甲胺結(jié)腸吸收的影響。

將“2.3.1”項(xiàng)下各測試液進(jìn)行熒光檢測，三甲胺對(duì)照組、高劑量血府逐瘀湯對(duì)照組、低劑量血府逐瘀湯對(duì)照組、高劑量血府逐瘀湯測試組、低劑量血府逐瘀湯測試組所測的熒光強(qiáng)度分別記為對(duì)照、高對(duì)照、低對(duì)照、高測試、低測試。Tyrode緩沖液中SC4A?OX1（0.4 mmol/L?1 μmol/L）熒光強(qiáng)度值記為0。

將三甲胺對(duì)照組熒光變化值（對(duì)照/0）、高劑量血府逐瘀湯測試組熒光變化值（高測試/高對(duì)照）、低劑量血府逐瘀湯測試組熒光變化值（低測試/低對(duì)照）分別代入“3.2”項(xiàng)中Tyrode緩沖液、0.50 mg/mL血府逐瘀湯、0.25 mg/mL血府逐瘀湯中測得的標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算得測試溶液中三甲胺濃度（mmol/L），記為C（＝15、30、45、60、90、120 min）。因?yàn)闇y試樣品在測試時(shí)稀釋10倍，故各腸囊中三甲胺的濃度為10C。三甲胺結(jié)腸累積吸收量（）按照公式（1）[9]計(jì)算，三甲胺結(jié)腸單位面積累積吸收量（μg/cm2）按照公式（2）[9]計(jì)算。

平衡為平衡前腸囊中加入Tyrode緩沖液（1 mL）的體積，樣為每次取樣的體積（200 μL），C'為各取樣時(shí)間點(diǎn)腸囊中三甲胺的質(zhì)量濃度（mg/L），C'為第（＋1）時(shí)腸囊中三甲胺的質(zhì)量濃度（mg/L）；代表離體腸囊面積（cm2），為剪開腸囊后量取其長度和寬度的乘積

如圖4所示，腸囊離體培養(yǎng)15～120 min，與三甲胺對(duì)照組比較，5.0 mg/mL血府逐瘀湯測試組中三甲胺結(jié)腸單位面積累積吸收量明顯降低，且30、45、60、120 min時(shí)具有顯著性差異（＜0.05、0.01、0.001）；2.5 mg/mL血府逐瘀湯測試組中三甲胺結(jié)腸單位面積累積吸收量與對(duì)照組相比呈降低趨勢(shì)，但無顯著性差異。

與三甲胺對(duì)照組比較：*P＜0.05 **P＜0.01 ***P＜0.001

4 討論

近年來，超分子化學(xué)在生物、環(huán)境、醫(yī)藥等領(lǐng)域發(fā)揮重要作用[14]。超分子化學(xué)主要研究2種或2種以上的分子通過非共價(jià)弱相互作用力（如氫鍵、靜電作用、疏水作用等）結(jié)合形成的聚集體（超分子）[15]。環(huán)糊精、杯芳烴、葫蘆脲等大環(huán)主體分子是超分子化學(xué)重要組成部分。在超分子傳感領(lǐng)域中，IDA是由美國化學(xué)家Eric V. Anslyn教授研發(fā)的熒光傳感策略[16]，是基于指示劑（染料客體）、分析物（競爭客體）與大環(huán)主體的競爭性結(jié)合，導(dǎo)致測試體系熒光信號(hào)增敏（switch-on）或淬滅（switch-off），從而將微觀的分子識(shí)別行為轉(zhuǎn)化為宏觀的易于觀察的熒光信號(hào)，從而實(shí)現(xiàn)分析物的檢測。這種基于IDA策略的超分子傳感檢測不受限于分析物有無發(fā)色團(tuán)，無需同位素標(biāo)記，具有操作簡單、信號(hào)靈敏、檢測通量高等優(yōu)勢(shì)。本研究基于IDA策略，構(gòu)建了SC4A?OX1超分子主客體對(duì)傳感體系（圖5），以a為評(píng)價(jià)指標(biāo)，評(píng)價(jià)了Tyrode緩沖液、血府逐瘀湯中SC4A對(duì)三甲胺識(shí)別的選擇性，實(shí)現(xiàn)了三甲胺的靈敏檢測。

圖5 IDA示意圖

方劑通過干預(yù)免疫應(yīng)答、影響微生物酶代謝系統(tǒng)、調(diào)控腸道菌群，從而干預(yù)疾病[17]。膳食中的膽堿、甜菜堿及肉堿類物質(zhì)經(jīng)腸道菌群代謝產(chǎn)生三甲胺，在肝臟中經(jīng)FMO3氧化成心血管“危險(xiǎn)分子”TMAO，誘發(fā)心血管疾病。近年來，已有研究報(bào)道白藜蘆醇[18]、葫蘆巴堿[19]、黃連素[20]等中藥成分通過重塑腸道菌群，抑制膽堿向三甲胺轉(zhuǎn)化，減少三甲胺產(chǎn)生，降低體內(nèi)TMAO水平，從而降低心血管疾病風(fēng)險(xiǎn)。目前，關(guān)于血府逐瘀湯抗TMAO誘導(dǎo)的血栓性疾病研究主要聚焦于其入血成分調(diào)控的三甲胺-FMO3-TMAO通路，通過抑制FMO3活性，抑制TMA向TMAO的體內(nèi)轉(zhuǎn)化，減少TMAO生成，從而延緩或阻斷心血管疾病的發(fā)生與發(fā)展[11]。本研究采用離體外翻腸囊模型研究血府逐瘀湯對(duì)三甲胺結(jié)腸吸收的影響，結(jié)果表明，血府逐瘀湯可抑制結(jié)腸吸收三甲胺，為血府逐瘀湯調(diào)控與血栓形成相關(guān)的三甲胺-TMAO通路的作用提供了依據(jù)。

本研究基于IDA策略構(gòu)建了杯芳烴超分子傳感體系，實(shí)現(xiàn)了三甲胺的靈敏檢測，探究了血府逐瘀湯對(duì)三甲胺結(jié)腸吸收的影響。血府逐瘀湯能夠減少三甲胺結(jié)腸的吸收，為揭示血府逐瘀湯調(diào)控與血栓形成相關(guān)的三甲胺-TMAO通路的機(jī)制提供了科學(xué)依據(jù)。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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Effect of Xuefu Zhuyu Decoction on trimethylamine absorption based on supramolecular sensing technology

WANG Lu-yao, ZHANG Ya-ping, MU Qi-xuan, YU Hui-juan, WANG Yue-fei

State Key Laboratory of Component-based Chinese Medicine, Tianjin Key Laboratory of TCM Chemistry and Analysis, Tianjin University of Traditional Chinese Medicine, Tianjin 301617, China

To study the effect of Xuefu Zhuyu Decoction (血府逐瘀湯) on trimethylamine (TMA) absorption based on supramolecular sensing technology.The model of everted intestinal sac was used to explore the affection of Xuefu Zhuyu Decoction on colon absorption of TMA. Based on the indicator displacement assay, a supramolecular fluorescence sensing system was established for selective recognition of TMA, which was employed to evaluate the effect of Xuefu Zhuyu Decoction on colonic absorption of TMA.The established supramolecular sensing method can successfully detect TMA via molecular recognition of calixarene. Compared with control group, the cumulative absorption of TMA per unit area of colon in high-dose Xuefu Zhuyu Decoction (5.0 mg/mL) group was significantly decreased (< 0.05, 0.01, 0.001), and there was no significant difference in low-dose Xuefu Zhuyu Decoction (2.5 mg/mL) group.Xuefu Zhuyu Decoction can reduce colonic absorption of TMA, which provides the basis for the role of Xuefu Zhuyu Decoction in promoting blood circulation and removing blood stasis.

supramolecular sensing; Xuefu Zhuyu Decoction; indicator displacement assay; trimethylamine; everted intestinal sac

R285.5

A

0253 - 2670(2022)06 - 1783 - 07

10.7501/j.issn.0253-2670.2022.06.021

2021-11-12

國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（81873192）

王璐瑤（1997—），女，碩士，主要從事中藥藥效物質(zhì)及質(zhì)量控制研究。Tel: (022)59596366 E-mail: W1224967197@163.com

于卉娟（1988—），女，助理研究員，主要從事中藥藥效物質(zhì)及質(zhì)量控制研究。Tel: (022)59596366 E-mail: huijuanyu@tjutcm.edu.cn

[責(zé)任編輯 李亞楠]