丹紅化瘀口服液的二次開發(fā)研究

許 浚，張鐵軍*，王文倩，林 娟，李楚源*

·丹紅化瘀研究專欄·

丹紅化瘀口服液的二次開發(fā)研究

許 浚1, 2, 3，張鐵軍1, 2, 3*，王文倩1，林 娟4，李楚源4*

1. 天津藥物研究院，天津 300462 2. 天津藥物研究院 天津市中藥質量標志物重點實驗室，天津 300462 3. 天津藥物研究院 釋藥技術與藥代動力學國家重點實驗室，天津 300462 4. 廣州白云山和記黃埔中藥有限公司，廣東 廣州 510515

中藥大品種二次開發(fā)研究是中藥創(chuàng)新研究的重要內容，是繼承和發(fā)展中醫(yī)藥理論、突破制約中醫(yī)藥理論和中藥產業(yè)發(fā)展瓶頸的重要路徑。藥效物質基礎和作用機制研究是中藥大品種二次開發(fā)的核心內容。對丹紅化瘀口服液的藥效物質基礎和作用機制進行了系統(tǒng)總結，即通過對原料藥材、復方制劑以及口服后血中移行成分的系統(tǒng)辨識，闡釋丹紅化瘀口服液的主要化學物質組和潛在有效成分；進一步通過網絡藥理學預測分析和相關受體活性測試實驗，篩選和明確了其主要藥效物質基礎；通過與視網膜中央靜脈阻塞癥相關的整體動物模型、網絡藥理學分析、相關功能受體結合及酶學檢測研究，闡釋了丹紅化瘀口服液的作用機制，為該藥的臨床應用和質量控制提供科學依據。

丹紅化瘀口服液；二次開發(fā)；丹酚酸B；丹酚酸D；丹參素；迷迭香酸；原兒茶醛；阿魏酸；洋川芎內酯I；柚皮苷；檸檬苦素；羥基紅花黃色素A；柴胡皂苷a

丹紅化瘀口服液為治療視網膜中央靜脈阻塞的確有療效的中成藥，由丹參、當歸、川芎、桃仁、紅花、柴胡、枳殼7味藥材組成，具有活血化瘀、行氣通絡的功效，臨床用于治療氣滯血瘀引起的視物不清、突然不見癥及視網膜中央靜脈阻塞癥的吸收期見上述證候者，為《中國藥典》2020年版和《國家醫(yī)保目錄（2019版）》收載品種。雖然已有藥效及臨床研究證實丹紅化瘀口服液療效確切[1-5]，但其藥效物質基礎并不十分清楚，現行的質量標準僅規(guī)定了丹參中原兒茶醛的定量測定[6]，不能真正反映制劑質量與療效的關系，使得難以全面有效地控制其內在質量。

視網膜中央靜脈阻塞是由于各種原因引起的篩板附近或篩板以上部位的視網膜中央靜脈血流梗阻而導致的急性或亞急性視網膜血管性眼病。視網膜中央靜脈阻塞癥分為非缺血型和缺血型[7]。缺血型視網膜中央靜脈阻塞癥患者的視網膜發(fā)生大面積的缺血區(qū)，產生血管生長因子，進而形成新生血管，晚期出現黃斑囊樣水腫，新生血管性青光眼和玻璃體出血等并發(fā)癥，嚴重影響視功能。本課題組對丹紅化瘀口服液的原料藥材、復方制劑、口服入血成分及其代謝產物的化學物質組進行了系統(tǒng)地表征和辨識，進而通過整體動物模型、網絡藥理學以及受體結合及酶學檢測等方法，評價其有效性，闡釋作用機制，確定藥效物質基礎，為丹紅化瘀口服液的臨床推廣應用和指導臨床實踐提供了重要的理論和實驗依據。

1 化學物質組表征和辨識

中藥化學成分是中藥發(fā)揮功效作用的物質基礎，是反映中藥質量的客觀實質。不同于化學單體藥物，中藥材來源于生物有機體，往往需要經歷產地采收加工、飲片炮制、提取純化、濃縮干燥以及制劑成型等復雜的藥物制備過程，同時，藥物體內過程也具有多組分交互作用的特點。因此，中藥有效成分研究應著眼于中藥形成的全過程[8]。本課題組對丹紅化瘀口服液的原料藥材、復方制劑、口服入血成分及其代謝產物的化學物質組進行了系統(tǒng)地表征和辨識，明確了丹紅化瘀口服液的化學物質基礎及其傳遞規(guī)律[9]，為闡釋該藥的藥效物質基礎與作用機制，以及制訂科學的質量控制方法和質量控制體系提供了前提和依據。

1.1 原料藥材物質組

丹紅化瘀口服液由7味藥材組成，本課題組采用超高效液相色譜-飛行時間質譜聯(lián)用技術（UPLC/Q-TOF-MS）方法，分別對丹參Bge.、當歸(Oliv.) Diels、川芎Hort.、桃仁(L.) Batsch、紅花L.、柴胡DC.和枳殼L. 7味原料藥材化學物質組進行表征和辨識[9]。從丹參中共檢測鑒定出31個化學成分，包括19個酚酸類、12個二萜醌類成分；從當歸中共檢測鑒定出16個化學成分，包括12個苯酞類、4個有機酸類成分；從川芎中共檢測鑒定出26個化學成分，包括15個苯酞類、7個有機酸類、4個其他類成分；從桃仁中共檢測鑒定出3個氰苷類化學成分；從紅花中共檢測鑒定出16個黃酮類化學成分；從枳殼中共檢測鑒定出18個化學成分，包括14個黃酮類、2個香豆素類、1個檸檬苦素類和1個有機酸類成分；從柴胡中共檢測鑒定出24個化學成分，包括19個三萜皂苷類、3個有機酸類和2個黃酮類成分。

1.2 復方制劑物質組

運用UPLC/Q-TOF-MS方法，對丹紅化瘀口服液中主要化學成分進行表征和辨識，在丹紅化瘀口服液樣品中共鑒定得到55個化學成分，包括酚酸類16個、二萜醌類1個、有機酸類7個、苯酞類7個、香豆素類3個、黃酮類11個、三萜皂苷類4個、氰苷類2個、檸檬苦素類1個、其他成分3個[9]。

1.3 主要入血成分及其代謝產物

中藥復方制劑口服后，其有效物質首先吸收入血，再通過血液運輸到達疾病治療靶點發(fā)揮治療作用，因此，只有被吸收入血的化學成分或相關代謝物，才有機會在靶器官維持一定的濃度，才有可能被看作是潛在的生物活性成分。本課題組進一步采用血清藥物化學方法[9]，運用UPLC/Q-TOF-MS技術，對口服丹紅化瘀口服液后大鼠血漿中的吸收原型成分及其代謝產物進行辨識研究，通過建立給藥血漿中移行成分指紋圖譜，比對丹紅化瘀口服液制劑、大鼠給藥血漿及空白血漿樣品的色譜圖，篩選分析血中移行的原型藥物成分及代謝產物，結果在大鼠血漿中共鑒定得到37個丹紅化瘀口服液相關的外源性化合物，包括26個吸收原型藥物成分和11個代謝產物，它們可能是口服丹紅化瘀口服液潛在的活性成分。

1.4 藥材原有成分-制劑原型成分-血中效應成分的相關性分析

通過對丹紅化瘀口服液原料藥材、復方制劑、口服入血成分及其代謝產物的系統(tǒng)辨識，并將制劑中的成分與藥材中的成分進行比對歸屬，明確了質量屬性的傳遞過程。丹紅化瘀口服液中辨識出55個化學成分，其中來源于丹參18個、當歸和川芎16個、枳殼13個、桃仁2個、紅花2個及柴胡4個。在大鼠血漿中共鑒定得到37個與丹紅化瘀口服液相關的外源性化合物，包括26個原型藥物成分和11個代謝產物，主要來源于丹參、當歸、川芎和枳殼。

丹紅化瘀口服液及其入血成分與各味藥材歸屬分析見表1。

表1 丹紅化瘀口服液及其入血成分與各味藥材歸屬分析

Table 1 Analysis of Danhong Huayu Oral Liquid and its blood components and attribution of various herbs

原料藥材物質組復方制劑物質組主要入血成分及其代謝產物共有成分 藥材名成分數成分數峰號成分數峰號 丹參31185、6、7、10、19、21、23、26、27、29、31、32、36、37、39、41、42、54 66、7、10、23、27、54丹參素、原兒茶酸、原兒茶醛、丹酚酸D、迷迭香酸、新隱丹參酮 當歸16 711、17、33、35、45、47、55 711、17、33、35、45、47、55綠原酸、隱綠原酸、阿魏酸、3-丁基-3,6,7-三羥基-4,5,6,7-四氫苯酞、洋川芎內酯I、洋川芎內酯H、乙基香蘭素、洋川芎內酯F、洋川芎內酯G/K、6,7-環(huán)氧藁本內酯、藁本內酯 川芎26161、2、3、9、11、13、16、17、20、33、35、38、45、46、47、551111、13、20、38、46、17、33、35、45、47、55 桃仁 3 28、14 114苦杏仁苷 紅花16 212、15 115紅花黃色素A 枳殼18134、18、22、24、25、28、30、34、40、44、48、50、53 725、28、30、34、44、48、50柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、水合橙皮內酯、馬爾敏、檸檬苦素、蜜橘黃素 柴胡24 443、49、51、52

2 藥效物質基礎

基于成分-藥效相關性研究有多種研究模式和方法[10]。從方法論上可劃分為還原論的成分-靶點的“要素-要素”化學生物學的篩選方式和系統(tǒng)論的化學復雜體系-生命復雜體系的“系統(tǒng)-系統(tǒng)”的篩選模式[11]。相較于傳統(tǒng)藥物化學、藥理實驗篩選有效成分研究方法，利用中藥網絡藥理學技術與體外活性驗證實驗相結合的方法研究中藥的藥效成分、潛在作用靶點，突破了傳統(tǒng)研究的不足，更加快速靈活，準確率更高。丹紅化瘀口服液主要用于視網膜中央靜脈阻塞癥的治療，本課題組首先利用網絡藥理學方法[12]，選擇丹紅化瘀口服液中入血成分進行網絡藥理學研究，構建“成分-靶點-通路-藥理作用-疾病”網絡，預測其可能的活性成分及作用機制。在此基礎上，進一步選取與視網膜靜脈中央阻塞癥治療密切相關的G-蛋白偶聯(lián)受體和酶進行體外活性實驗[13]，篩選驗證丹紅化瘀口服液的主要活性成分，確定其藥效物質基礎。

2.1 基于網絡藥理學的活性成分及作用機制預測分析

本課題組前期實驗鑒定出丹紅化瘀口服液中55個化學成分[9]，并篩選出血中移行的26個原型藥物成分及11個代謝物，在此基礎上，進一步結合相關文獻挖掘、整理，選取丹紅化瘀口服液中21個入血成分（隱丹參酮、丹參酮IIA、丹酚酸D、丹參素、原兒茶醛、藁本內酯、洋川芎內酯I、川芎嗪、綠原酸、阿魏酸、苦杏仁苷、紅花黃色素A、槲皮素、柴胡皂苷A、丁香酚、柚皮苷、檸檬烯、芳樟醇、辛弗林、馬爾敏、檸檬苦素），通過TCMSP數據庫獲取其生物利用度，進一步借助TCMSP和CTD數據庫預測化合物的作用靶點，利用MAS 3.0生物分子功能軟件獲取相關通路，同時利用FUNRICH軟件對獲得的靶點通路進行基因本體功能富集分析，最后利用Cytoscape軟件構建網絡藥理圖。實驗表明，21個化合物可作用于104個蛋白靶點，涉及45條相關通路，其主要通過抗血栓形成、抑制新血管生成、舒張血管、抑制免疫炎癥反應等相關通路起治療視網膜靜脈中央阻塞癥的作用。其中，抗血栓形成的有效成分有槲皮素、丹參酮IIA、丹酚酸D、紅花黃色素A、川芎嗪；抑制新血管生成的有效成分有隱丹參酮、丹參酮IIA、川芎嗪、丹酚酸D、藁本內酯、洋川芎內酯、綠原酸、阿魏酸、苦杏仁苷；舒張血管的有效成分有隱丹參酮、丹參酮IIA、原兒茶醛、藁本內酯、阿魏酸、洋川芎內酯、槲皮素、丁香酚、檸檬烯；抑制免疫炎癥反應的有效成分有丹參素、丹參酮IIA、阿魏酸、綠原酸、槲皮素、苦杏仁苷、紅花黃色素A。

2.2 基于受體及酶活性檢測的藥效物質基礎驗證研究

根據化學物質組和網絡藥理學研究結果，丹紅化瘀口服液可能通過抑制血管內皮生長因子受體2（vascular endothelial growth factor receptor 2，VEGFR2）活性，降低視網膜血管通透性，從而抑制新生血管的形成，保護血-視網膜屏障；通過抑制磷酸二酯酶3A（phosphodiesterase 3A，PDE3A）的活性阻斷環(huán)磷酸腺苷（cyclic adenosine monophosphate，cAMP）的裂解，增高細胞內cAMP濃度，從而抑制血小板聚集，同時通過抑制凝血過程的關鍵酶凝血酶，減少不溶性纖維蛋白的生成，多途徑抑制血栓的形成。丹紅化瘀口服液一方面通過拮抗α1A腎上腺素受體（adrenergic receptor α1A，ADRA1A）舒張血管，同時通過作用于內皮素生成的限速酶內皮素轉化酶1（endothelin converting enzyme 1，ECE1），抑制由內皮素引起的血管強烈收縮，從2個途徑使血管舒張，從而減少血流阻力促進血液循環(huán)，改善病變部位血流動力學。因此，本部分選取與視網膜靜脈中央阻塞癥治療密切相關的受體和酶（VEGFR2、ADRA1A、PDE3A、凝血酶和ECE1）為研究載體，通過運用胞內鈣離子熒光檢測和酶抑制劑檢測技術對丹紅化瘀口服液中主要單體成分進行體外活性測試實驗，篩選驗證丹紅化瘀口服液的主要活性成分。

結果表明，丹酚酸D、丹酚酸B、丹參素、迷迭香酸、檸檬苦素對VEGFR2酪氨酸激酶有顯著抑制活性，是抑制新血管生成的主要有效成分；丹酚酸D、丹酚酸B、丹參素、迷迭香酸和柚皮苷對PDE3A有明顯的抑制活性，是抑制血小板聚集，發(fā)揮活血化瘀作用的主要有效成分；丹酚酸D、丹酚酸B、原兒茶醛、迷迭香酸、羥基紅花黃色素A、洋川芎內酯I、阿魏酸、柴胡皂苷a、柚皮苷和檸檬苦素對凝血酶有明顯的抑制活性，是抑制血栓形成的主要有效成分；丹酚酸D、丹酚酸B、丹參素、迷迭香酸、羥基紅花黃色素A對ECE1也具有顯著抑制活性，柴胡皂苷a對ADRA1A有顯著的抑制作用，是舒張血管的主要有效成分。

3 藥效作用及作用機制

丹紅化瘀口服液臨床上主要用于氣滯血瘀引起的視物模糊不清、突然不見癥和視網膜中央靜脈阻塞癥，對糖尿病視網膜病變、糖尿病腎病、糖尿病心肌病和糖尿病黃斑水腫亦具有治療作用?，F代藥理學研究表明，丹紅化瘀口服液對血栓和多種糖尿病并發(fā)癥具有明顯改善作用，這與其抗炎和抗氧化應激等活性密切相關[14-17]。本部分根據丹紅化瘀口服液的功能主治，進一步從活血化瘀、抗炎、抗VEGF、免疫調節(jié)等方面研究丹紅化瘀口服液治療視網膜中央靜脈阻塞癥的作用機制。通過整體動物-網絡藥理-受體實驗，循序漸進，逐級深入地探尋和闡釋丹紅化瘀口服液治療視網膜中央靜脈阻塞癥的作用機制。

3.1 對大鼠氣滯血瘀模型的影響及作用機制研究

中醫(yī)認為，視網膜中央靜脈阻塞癥主要因情志不舒、憂郁悲傷等致氣機郁滯、血行不暢、血瘀脈阻而溢于目[18]。血瘀的病理實質以微循環(huán)障礙致使病變組織由于缺血、缺氧產生營養(yǎng)代謝障礙等為主。因而，采用氣滯血瘀證大鼠模型，研究丹紅化瘀口服液對癥候病理狀態(tài)下眼結膜微循環(huán)的影響，從中醫(yī)藥“整體觀”和“證候理論”角度探索丹紅化瘀口服液“活血化瘀、行氣通絡”的作用機制[19]。實驗分為對照組、模型組及丹紅化瘀口服液低、中、高劑量（3.25、6.5、13 mL/kg）組和陽性對照組，每組10只，除對照組外，其余大鼠采用復合刺激因素使其達到氣滯血瘀狀態(tài)，造模同時給藥，每天給藥1次，連續(xù)給藥3周。

結果顯示，與模型組比較，丹紅化瘀口服液低劑量組微血管管徑顯著增大，血流速度顯著加快；中劑量組微血管交叉數顯著增多，血管管徑顯著增大，血流速度顯著加快；高劑量組鏡下血管計數顯著增加，血管交叉數顯著增多，血管管徑顯著增大，血液流速顯著加快。丹紅化瘀口服液中、高劑量組血栓烷B2（thromboxane B2，TXB2）/6-酮-前列腺素F1α（6-keto-prostaglandin F1α，6-keto-F1α）值顯著降低，血小板聚集率也明顯降低；高劑量組cAMP/環(huán)磷酸鳥苷（cyclic guanosine monophosphate，cGMP）值顯著降低；3個劑量組誘導型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase，iNOS）活性和一氧化氮（nitric oxide，NO）自由基含量顯著降低；中、高劑量組VEGF含量顯著降低。丹紅化瘀口服液3個劑量組眼結膜組織磷酸化環(huán)磷酸腺苷反應元件結合蛋白（phosphorylated cAMP response element binding protein，p-CREB）和iNOS的蛋白表達水平均有不同程度的降低。

結果表明，丹紅化瘀口服液具有良好的活血化瘀、行氣通絡作用，其行氣作用與減少氣滯應激產生的血清NO自由基，降低血清iNOS活性有關；其活血化瘀作用與降低血清TXB2含量、TXB2/6-keto-F1α值和血小板最大聚集率，減少VEGF含量有關。其抗VEGF作用對治療視網膜中央靜脈阻塞癥有非常積極的臨床意義，其機制可能與減少cAMP和p-CREB有關。

3.2 對大鼠視網膜缺血再灌注的保護作用及機制研究

視網膜缺血再灌注損傷在視網膜中央動脈阻塞癥的病理中起重要作用，常導致視網膜細胞死亡，對患者視功能造成不可逆損傷[20]。本部分采用視網膜缺血再灌注大鼠模型，闡述丹紅化瘀口服液對實驗性高眼壓致視網膜缺血再灌注誘發(fā)的視網膜損傷模型的保護作用及其機制[21]。實驗分為假手術組、模型組及丹紅化瘀口服液低、中、高劑量（3.25、6.50、13.00 mL/kg）組和陽性對照組，每組10只，每天給藥1次，連續(xù)給藥30 d。采用酶聯(lián)免疫吸附測定法檢測血清白細胞介素（interleukin，IL）-1β、IL-6、IL-10、腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）含量，比色法測定血清超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、過氧化氫酶（catalase，CAT）、谷胱甘肽過氧化物酶（glutathione peroxidase，GSH-Px）的活性和丙二醛（malondialdehyde，MDA）含量；免疫組化檢測視網膜缺氧誘導因子-1（hypoxia-inducible factor-1，HIF-1）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（cystein-asparate protease-3，Caspase-3）、VEGF和核因子-κB（nuclear factor-κB，NF-κB）p65蛋白表達情況；HE染色觀察視網膜組織結構變化。

實驗結果表明，模型組大鼠視網膜結構紊亂，神經節(jié)細胞層細胞減少，視網膜萎縮變?。坏ぜt化瘀口服液高、中、低劑量組均可改善視網膜組織結構及神經節(jié)細胞變性程度。酶聯(lián)免疫吸附測定法檢測顯示，與模型組比較，丹紅化瘀口服液低、中、高各劑量組均可明顯提高血清中SOD、GPX、IL-10水平，顯著提高血清中CAT活性，而高劑量組可顯著降低MDA水平，低、中、高劑量組均顯著降低IL-1β水平，中、高劑量組顯著降低IL-6、TNF-α水平。免疫組化檢測結果顯示，與模型組比較，丹紅化瘀口服液低、中、高劑量組均可顯著降低HIF-1、Caspase-3、VEGF和NF-κB p65的蛋白表達水平。

結果表明，丹紅化瘀口服液對視網膜缺血再灌注損傷具有防治作用，體現在抗缺血、抗氧化、抗炎、抗細胞損傷等方面，其抗炎作用與抑制炎癥通路蛋白NF-κB p65表達有關，抗細胞損傷作用與減少視網膜組織HIF-1、細胞凋亡關鍵蛋白酶Caspase-3表達有關。

3.3 基于網絡藥理學的作用機制研究

本部分在整體動物實驗研究基礎上，進一步采用網絡藥理學方法[12]，探究丹紅化瘀口服液治療視網膜靜脈中央阻塞癥的作用機制。選取丹紅化瘀口服液中的21個入血成分為研究對象，借助TCMSP和CTD數據庫預測化合物的作用靶點，利用MAS 3.0生物分子功能軟件獲取相關通路、通過FUNRICH軟件對獲得靶點進行基因本體（gene ontology，GO）功能富集分析，最后利用Cytoscape軟件構建網絡藥理圖。結果表明，丹紅化瘀口服液中槲皮素等化合物可作用于與血栓形成相關的蛋白如凝血因子Ⅹa、凝血因子VII（輔助促凝血酶原激酶）、凝血酶、血栓烷A合酶、前列腺素合酶、纖溶酶原激活物抑制劑1、組織型纖溶酶原激活物、尿激酶型纖溶酶原激活物等，抑制凝血過程和血小板活化及影響纖溶系統(tǒng)，從而減少血瘀發(fā)生。丹紅化瘀口服液中丹酚酸D等成分可作用于與血管生成有關的蛋白，如VEGFA、內皮生長因子受體（endothelial growth factor receptor，EGFR），參與調節(jié)VEGF信號通路等，抑制新生血管生成來抑制視網膜中央靜脈阻塞癥的病情發(fā)展。丹紅化瘀口服液中藁本內酯等成分可干預與血管平滑肌相關的蛋白，如ADRA1A、α1B腎上腺素受體、β2腎上腺素受體、電壓門控鉀通道亞族H-2蛋白、內皮素-1受體、ECE1、內皮型一氧化氮合酶、M3乙酰膽堿受體等，發(fā)揮舒張血管作用，以達到行氣以行血目的。丹紅化瘀口服液中丹參素等通過作用于與免疫、炎癥反應相關的蛋白和通路，如花生四烯酸5-脂氧合酶、前列腺素受體、T-淋巴細胞活化抗原CD86、γ干擾素、白IL-1B、IL-2、IL-6、IL-8、IL-10、白三烯A-4水解酶，調節(jié)絲裂原活化蛋白激酶信號傳導、花生四烯酸代謝、抗原的處理和表達等，干預花生四烯酸代謝等過程抑制炎癥因子釋放、促進免疫應答。

綜上，丹紅化瘀口服液通過作用于與凝血過程、新血管生成、血管舒張、免疫調節(jié)和炎癥反應等相關的靶點，起到活血化瘀、行氣通絡的功效從而發(fā)揮視網膜中央靜脈阻塞癥治療作用，具有多成分、多靶點、多通路的作用特點。

3.4 基于相關受體和酶的作用機制研究

在整體動物實驗和網絡藥理學研究基礎上，進一步選擇與視網膜中央靜脈阻塞癥治療相關的ADRA1A、VEGFR2、PDE3A、凝血酶以及ECE1為研究對象，通過運用胞內鈣離子熒光檢測和酶抑制劑檢測技術評價丹紅化瘀口服液及主要代表性單體成分給藥后對ADRA1A的拮抗作用以及對VEGFR2酪氨酸激酶、PDE3A、凝血酶和ECE1的抑制活性，從細胞分子水平進一步研究丹紅化瘀口服液的治療作用機制，闡明其作用的靶點。

結果表明，丹紅化瘀口服液分別稀釋100、1000倍對VEGFR2酪氨酸激酶都有顯著抑制活性[13]；丹紅化瘀口服液稀釋50、500倍對PDE3A、凝血酶、ECE1顯示出較強的抑制效果，且呈現濃度相關性；丹紅化瘀口服液稀釋50倍對ADRA1A有顯著的抑制作用，且呈現濃度相關性。故推測丹紅化瘀口服液可能通過抑制VEGFR2酪氨酸激酶活性，降低視網膜血管通透性，從而抑制新生血管的形成，保護血-視網膜屏障；另外，通過抑制PDE3A的活性阻斷cAMP的裂解，增高細胞內cAMP濃度，從而抑制血小板聚集，同時通過抑制凝血過程的關鍵酶凝血酶，減少不溶性纖維蛋白的生成，多途徑抑制血栓的形成；并且丹紅化瘀口服液一方面通過拮抗ADRA1A舒張血管，同時通過作用于內皮素生成的限速酶ECE1，抑制由內皮素引起的血管強烈收縮，從2個途徑使血管舒張，從而減少血流阻力促進血液循環(huán)，改善病變部位血流動力學。

4 結語

中藥大品種的二次開發(fā)研究是中藥現代化的重要內容，以確有療效的中藥大品種為載體進行系統(tǒng)研究，是繼承和發(fā)展中醫(yī)藥理論，突破制約中醫(yī)藥理論和中藥產業(yè)發(fā)展瓶頸的重要路徑。通過現代化學生物學模型方法，闡釋中醫(yī)藥針對疾病的治法原理、配伍理論和方劑的配伍規(guī)律，發(fā)展和完善中醫(yī)藥理論；通過二次開發(fā)研究，以現代科學方法、客觀指標和實驗證據闡明中藥復雜體系的藥效物質基礎和作用機制，發(fā)現和提煉中藥大品種的作用特點和比較優(yōu)勢，挖掘其臨床核心價值，指導臨床實踐，提高臨床療效；并建立科學、有效的質量控制方法，保證藥品的質量均一、穩(wěn)定、可控。本課題組近年來對疏風解毒膠囊[22]、元胡止痛滴丸[23]、六經頭痛片[24]、海馬補腎丸[25]等多個中藥大品種進行了系統(tǒng)的二次開發(fā)研究，建立了中藥大品種二次開發(fā)研究的模式和方法[26-28]。

本文對丹紅化瘀口服液進行了系統(tǒng)的藥效物質基礎和作用機制研究，通過從原料藥材-成方制劑-入血成分-網絡藥理學-體外活性篩選研究，發(fā)現丹紅化瘀口服液發(fā)揮治療作用的藥效物質基礎可能為丹參中的酚酸類成分（丹酚酸B、丹酚酸D、丹參素、迷迭香酸、原兒茶醛），川芎和當歸中的阿魏酸、洋川芎內酯I，枳殼中的柚皮苷和檸檬苦素，紅花中的羥基紅花黃色素A，柴胡中的柴胡皂苷a。通過整體動物-網絡藥理學-體外受體試驗研究，表明丹紅化瘀口服液具有抗血栓作用、抗炎、抗新生血管生成和擴張血管等作用，對視網膜中央靜脈阻塞癥具有改善作用，其機制可能與抑制ADRA1A、VEGFR2酪氨酸激酶、PDE3A、凝血酶和ECE1活性有關，具有多成分、多靶點、多途徑的特點，為丹紅化瘀口服液的臨床推廣應用和指導臨床實踐提供了重要的理論和實驗依據。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

[1] Zhang Z Y, Hu L Y, Chen W P,. Danhong Huayu Koufuye prevents deep vein thrombosis through anti-inflammation in rats [J]., 2016, 201(2): 340-347.

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Study of secondary development of Danhong Huayu Oral Liquid

XU Jun1, 2, 3, ZHANG Tie-jun1, 2, 3, WANG Wen-qian1, LIN Juan4, LI Chu-yuan4

1. Tianjin Institute of Pharmaceutical Research, Tianjin 300462, China 2. Tianjin Key Laboratory of Quality Marker of Traditional Chinese Medicine, Tianjin Institute of Pharmaceutical Research, Tianjin 300462, China 3. State Key Laboratory of Drug Delivery and Pharmacokinetics, Tianjin Institute of Pharmaceutical Research, Tianjin 300462, China 4. Guangzhou Baiyun Mountain and Hutchison Whampoa Co., Ltd., Guangzhou 510515, China

To study the secondary development of major Chinese materia medica (CMM) varieties is the important content of CMM innovation research, and it is also the important approach of inheriting and developing traditional Chinese medicine (TCM) theory and breaking the bottleneck restricting the development of TCM theory and CMM industry development. The study of pharmacodynamic material basis and mechanism is the core content of the secondary development of CMM. The study on the material basis and mechanism of Danhong Huayu Oral Liquid (丹紅化瘀口服液) was reviewed in this paper. The chemical components of Danhong Huayu Oral Liquid were elucidated by identification and characterization of herbs, Danhong Huayu Oral Liquid and components ingested into the blood. Through the network pharmacology prediction analysis and related receptor activity test experiment, the main pharmacodynamic material basis was screened and identified. The mechanism of Danhong Huayu Oral Liquid was explained by the studies of animal models, network pharmacology, and functional receptors related with central retinal vein occlusion, in order to provide a scientific basis for the clinical application and quality control of Danhong Huayu Oral Liquid.

Danhong Huayu Oral Liquid; secondary development; salvianolic acid B; salvianolic acid D; salvianic acid; rosmarinic acid; protocatechuic aldehyde; ferulic acid; senkyunolide I; naringin; limonin; hydroxysafflor yellow A; saikosaponin a

R285.5

A

0253 - 2670(2022)06 - 1609 - 07

10.7501/j.issn.0253-2670.2022.06.001

2021-10-08

國家自然科學基金重點項目（81830111）；中央引導地方科技發(fā)展專項資助項目（20ZYCGSN00200）

許 浚，研究員，主要從事中藥大品種二次開發(fā)及中藥質量研究。E-mail: xuj@tjipr.com

李楚源E-mail: 1226976234@qq.com

張鐵軍E-mail: zhangtj@tjipr.com

[責任編輯 崔艷麗]