河南煙草主要病毒發(fā)生種類及侵染類型分析

白靜科 何雷 吳彥輝 陳玉國 楊晉燕 牛龍龍 李成軍 李淑君

摘 ?要：為進一步明確河南煙區(qū)主要病毒種類及侵染類型，2020年從河南9個煙區(qū)分別采集疑似煙草普通花葉病毒（TMV）、黃瓜花葉病毒（CMV）、馬鈴薯Y病毒（PVY）和煙草蝕紋病毒（TEV）侵染的煙草樣本共407份，分別利用上述4種病毒的特異性引物進行單重RT-PCR病原檢測。檢測結果表明，河南煙區(qū)病毒病樣本的總檢出率為98.28%，其中，檢出率最高的是CMV為89.19%，其余依次為TMV 63.88%、PVY 28.99%和TEV 24.32%。侵染類型分為單一病毒侵染和復合病毒侵染，單一病毒侵染率為23.34%，該侵染類型中CMV所占比例最高，為16.71%;復合病毒侵染率為74.94%，復合病毒侵染類型中CMV+TMV所占比例最高，為36.86%，其次分別為CMV+TMV+PVY和CMV+TEV+PVY兩種侵染類型，侵染比例均是7.62%。因此，CMV是2020年河南煙區(qū)的優(yōu)勢病毒，田間侵染以復合病毒侵染為主，侵染類型主要有CMV+TMV、CMV+TMV+PVY及CMV+TEV+PVY。

關鍵詞：河南煙區(qū);病毒病;侵染類型

Abstract： To further clarify the main virus species and infection type in Henan Province， 407 samples were collected from nine tobacco-growing areas in Henan Province in 2020. The samples were suspicious of being infected by Tobacco mosaic virus （TMV）， Cucumber mosaic virus （CMV）， Potato virus Y （PVY） and Tobacco etch virus （TEV） respectively. Then four pairs of specific primers were used to detect viruses that infected tobacco samples by single RT-PCR. The results showed that the infection percentage of virus diseases in Henan tobacco-planting areas was 98.28%， in which CMV （89.19%） took the top spot followed by TMV （63.88%）， PVY （28.99%） and TEV （24.32%）. It also suggested that infection type included single infection and co-infection. What's more， single infection rate was 23.34%， in which CMV had the highest infection percentage with 16.71%. And co-infection percentage was 74.94% which was much higher than the single infection rate. Furthermore， there were three main co-infection types， including CMV+TMV with the highest infection percentage 36.86%， followed by CMV+TMV+PVY and CMV+TEV+PVY which both had an infection percentage of 7.62%. Therefore， CMV was the dominant virus in Henan Province in 2020. And the infection types were CMV+TMV， CMV+TMV+PVY and CMV+TEV+PVY， which indicated that co-infection types occurred seriously in tobacco field.

Keywords： Henan tobacco-growing area; virus disease; infection type

煙草是我國的重要經濟作物，煙草病毒病是危害煙草生長的主要病害，其造成的產量損失可達30%～50%，嚴重時甚至造成絕產。目前在中國煙草上報道的病毒超過25種，較常見的有煙草普通花葉病毒（TMV）、黃瓜花葉病毒（CMV）、馬鈴薯Y病毒（PVY）、煙草蝕紋病毒（TEV）和煙草脈帶花葉病毒（TVBMV）等[1-3]。長期以來，RT-PCR技術憑借其高靈敏度特點被廣泛應用于病毒檢測中，孔寶華等[4]、楊金廣等[5]、鄭軒等[6]、張俊祺等[7]、楊洋等[8]分別建立了幾種主要病毒的單重RT-PCR和多重RT-PCR檢測方法，為準確快速檢測煙草病毒病提供了技術保障。截止到目前，煙草病毒研究學者基于RT-PCR技術分別明確了廣西[5]、陜西[6]、云南[2，9]、湖南[10]、畢節(jié)[11]等地煙草病毒病的種類、分布及侵染情況。

河南煙區(qū)作為我國濃香型烤煙風格的重要產區(qū)，學者們對其煙草病毒病的關注度也較高，李淑君等[12]鑒定發(fā)現(xiàn)2000年許昌煙區(qū)病毒病主要有PVY、CMV、馬鈴薯X病毒（PVX）、TMV、煙草環(huán)斑病毒（TRSV）等;李義強等[13]報道河南地區(qū)2000—2002年主要病毒種類是PVY和CMV;青玲等[1]在2005—2008年間僅發(fā)現(xiàn)PVY單獨侵染河南煙草;羅朝鵬等[14]發(fā)現(xiàn)2010年侵染河南煙草的病毒以CMV和TMV為主;張全民等[15]調查發(fā)現(xiàn)2012年TMV、CMV是平頂山煙區(qū)的主要病毒，PVY、TEV在河南各地普遍發(fā)現(xiàn)并日趨嚴重;白靜科等[3]檢測發(fā)現(xiàn)2015—2017年河南煙區(qū)危害最為嚴重的病毒依次為TMV、CMV、TEV、PVY和TVBMV。

就同一煙區(qū)而言，不同年份引起煙草病毒病流行的優(yōu)勢毒原會發(fā)生變化[1]，目前對河南煙區(qū)病毒種類的研究也局限于ELISA方法，鑒于此，本研究選取前人研究發(fā)生較多的TMV、CMV、TEV和PVY 4種病毒，于2020年在河南煙區(qū)分別采集疑似該4種病毒侵染的樣本，利用單重RT-PCR技術對這4種病毒分別進行病原檢測，以期進一步明確近年來河南煙草主要病毒的發(fā)生種類及侵染類型，為病毒病的精準有效防治提供數(shù)據(jù)支持。

1 ?材料與方法

1.1 ?試驗材料

于2020年5—8月在河南省9個煙葉產區(qū)采集疑似TMV、CMV、TEV、PVY癥狀的樣本共407份，其中三門峽76份、洛陽60份、濟源10份、許昌80份、平頂山52份、漯河25份、駐馬店30份、南陽62份、信陽12份。樣本癥狀主要表現(xiàn)有植株矮化，葉片花葉、畸形、閃電紋，蝕刻斑，脈壞死等。所采集樣本為單株樣本，采集部位為植株上部幼嫩葉片，采集樣本放入紙袋中，液氮速凍后于?80 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 ?試驗方法

1.2.1 ?總RNA提取 ?采用Trizol法提取植物總RNA，取0.1 g煙葉樣本，使用Trizol（Thermo Fisher Scientific 公司）試劑提取總RNA，具體方法參照試劑說明書，以健康煙草葉片為陰性對照。用Eppendorf D30紫外分光光度計測定所得RNA的濃度，1%瓊脂糖凝膠電泳檢測RNA完整性。

1.2.2 ?cDNA第一鏈的合成反應 ?按照反轉錄試劑盒[PrimeScript RT Reagent Kit with gDNA Eraser（Perfect real-time），TaKaRa公司]說明書，去除基因組DNA后，RT-PCR合成cDNA，?20 ℃保存用于后續(xù)試驗。

1.2.3 ?PCR擴增和目的片段克隆 ?用于TMV、CMV、TEV、PVY擴增的特異性引物參考文獻[6]，具體見表1。PCR反應體系：cDNA產物2 μL，10 μmol/L上下游引物各0.5 μL，2×Taq PCR MasterMix II（天根生化科技有限公司）10 μL，用ddH?O補足至20 μL。反應條件為：94 ℃變性5 min，然后是94 ℃ 30 s，51 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s，共35個循環(huán)，最后在72 ℃延伸10 min。PCR產物經1%瓊脂糖凝膠電泳，EB染色，于紫外燈下觀察電泳結果并照相記錄。

1.2.4 ?PCR產物回收、測序與序列分析 ?將上述PCR產物分別在紫外透射儀上切下相應條帶，參照膠回收試劑盒（TaKaRa Mini BEST Agarose GEL DNA Extraction Kit，TaKaRa公司）說明書進行純化回收，回收后的PCR產物送至生工生物工程（上海）股份有限公司進行序列測定。測定序列在GenBank數(shù)據(jù)庫中進行Blast比較分析。

2 ?結 ?果

2.1 ?煙草總RNA提取質量檢測

用Trizol法提取煙草樣本總RNA，經1%瓊脂糖凝膠電泳后可見28 S和18 S兩條清晰的條帶，無DNA條帶，結果如圖1所示。提取樣本的OD260/OD280比值均在1.7～1.9，表明樣本組織中蛋白質和酚類物質基本去除。提取的RNA純度較理想，可用于后續(xù)研究。

2.2 ?煙草病毒RT-PCR擴增片段序列分析

TMV、CMV、PVY和TEV的反轉錄產物經PCR擴增后，結果顯示TMV擴增片段約為237 bp，CMV擴增片段約為273 bp，PVY擴增片段約為456 bp，TEV擴增片段約為347 bp，而健康煙草中均未檢測到4種病毒片段的存在（圖2）。此外，上述4種病毒的PCR產物克隆測序結果也表明，TMV、CMV、PVY和TEV的擴增產物大小分別為237、273、456和347 bp，片段大小與引物設計預期相符，獲得序列與Genebank中各病毒外殼蛋白基因序列比對結果表明，同源性均在98%以上，表明本研究中所用引物對煙草中TMV、CMV、PVY和TEV的檢測具有很高的特異性。

2.3 ?不同病毒種類侵染率及區(qū)域分布

表2結果顯示，4種煙草病毒在全省分布不均勻，檢出率最高的是CMV 89.19%，其余依次為TMV 63.88%、PVY 28.99%和TEV 24.32%。全省各煙區(qū)中，洛陽、漯河和南陽地區(qū)4種病毒檢出率順序與全省一致，均是CMV>TMV>PVY>TEV;許昌、駐馬店地區(qū)則是CMV>TMV>TEV>PVY;三門峽地區(qū)是CMV>PVY>TMV>TEV;信陽地區(qū)TMV與CMV檢出率相同，PVY與TEV檢出率相同;平頂山、濟源地區(qū)則是TMV>CMV，且全省只有濟源地區(qū)未檢測到TEV，其他地區(qū)均檢測到這4種病毒。因此，CMV是河南煙區(qū)的優(yōu)勢病毒，且全省不同煙區(qū)主要病毒種類及數(shù)量均存在差異。

2.4 ?單一病毒侵染和復合病毒侵染數(shù)量及分布

由表3可知，407份疑似病毒侵染的煙草葉片樣本分別經4種特異性引物擴增檢測后，7份未檢測到病毒，樣本病毒檢出率為98.28%。檢測到病毒的400份樣本中，有95份被單一病毒侵染，單一病毒侵染率為23.34%，其余305份樣本分別被多種病毒侵染，復合侵染率為74.94%，明顯高于單一病毒侵染率，由此可知，復合侵染現(xiàn)象在田間普遍發(fā)生。復合侵染病毒種類為2、3、4種不等，侵染比例分別為47.17%、22.36%、5.41%，顯然，隨著復合侵染病毒種類的增多，復合侵染比例逐漸降低。

全省單一病毒侵染類型中CMV所占比例最高，為16.71%（表3），可見CMV是河南煙區(qū)的優(yōu)勢病毒。單一病毒侵染種類與數(shù)量在全省9個地區(qū)中均有差異（圖3），許昌地區(qū)分別檢測到CMV、TMV、PVY和TEV等4種病毒的單一病毒侵染;洛陽、南陽、平頂山、信陽地區(qū)分別檢測到CMV和TMV兩種病毒的單一病毒侵染;三門峽地區(qū)分別檢測到CMV和PVY兩種病毒的單一病毒侵染;漯河地區(qū)分別檢測到CMV和TEV兩種病毒的單一病毒侵染;駐馬店地區(qū)僅檢測到CMV的單一病毒侵染;濟源地區(qū)僅檢測到TMV的單一病毒侵染;且全省除平頂山和濟源地區(qū)TMV所占比例最高外，其他產區(qū)均是CMV居最高。

所有復合病毒侵染類型中CMV+TMV所占比例最高（表3），為36.86%，其次分別為CMV+TMV+PVY和CMV+TEV+PVY，侵染比例均是7.62%。復合侵染類型與數(shù)量在產區(qū)間也表現(xiàn)不一（圖4），其中三門峽地區(qū)CMV+TEV+PVY復合侵染比例最高，而駐馬店則是CMV+TMV+TEV復合侵染居最多，其他地區(qū)CMV+TMV復合侵染比例最高。此外，TMV+PVY僅在洛陽地區(qū)檢測到，而TMV+TEV+PVY也只在許昌地區(qū)檢測到。復合侵染類型最多的地區(qū)是許昌，多達8種，濟源復合侵染類型最少，僅2種，其他產區(qū)復合侵染類型4～6種，由此可知，復合侵染現(xiàn)象在田間表現(xiàn)較復雜。

3 ?討 ?論

本研究通過RT-PCR方法對河南煙區(qū)4種主要病毒TMV、CMV、PVY和TEV進行檢測分析，結果發(fā)現(xiàn)河南煙區(qū)的優(yōu)勢病毒是CMV。這與之前報道的CMV是河南煙區(qū)優(yōu)勢病毒[13-14]結果一致，不同于2018年TMV是河南煙區(qū)病毒病優(yōu)勢種的研究結果[3]，顯然同一煙區(qū)不同年度間病毒病的優(yōu)勢種可能發(fā)生變化[16]，該結論同樣在云南[2]、湖南[10]、陜西[17]等煙區(qū)得到證實。由于TMV經機械傳播，煙草種植期間的農事操作和日常管理會影響TMV的發(fā)生，而CMV、TEV、PVY經蚜蟲非持久性傳播，蚜蟲發(fā)生時間、種群數(shù)量、環(huán)境因素等均可影響此類病毒的變化。優(yōu)勢病毒可能受到全球氣候變化、耕作制度變革、種植品種更替、日常農事操作及傳播介體的發(fā)生量等諸多因素的影響。

本研究結果表明河南煙區(qū)復合病毒侵染廣泛發(fā)生，復合病毒侵染率達74.94%。之前的研究表明，湖南[10]、云南[9]、陜西[17]、重慶[18]及全國部分煙區(qū)[1]復合病毒侵染率均達到60%以上，可知復合病毒侵染成為主要的危害方式，推測原因一是長期連作導致煙株養(yǎng)分吸收量持續(xù)降低，病蟲害發(fā)生加重[19];二是生產上種植品種單一，且缺少抗病品種，從而加重病害的復合侵染[20]，三是很多病毒可通過農事操作傳播，尤其是TMV極易接觸傳播，導致復合侵染加重。本研究表明河南煙區(qū)復合病毒侵染類型以CMV+TMV為主，該結果與之前酶聯(lián)免疫吸附法[3]檢測結果一致，同樣結果出現(xiàn)在重慶[18]及湖南[10]煙區(qū)。本研究還發(fā)現(xiàn)隨著復合侵染病毒種類的增多，復合侵染比例逐漸降低，時洪偉等[18]、李金嶺等[17]、佟愛仔等[2]的研究中也可得出同樣結論，但青玲等[1]的研究中5種病毒復合侵染率大于其他2種以上病毒復合侵染率，具體原因還有待分析。

本研究還發(fā)現(xiàn)河南不同煙區(qū)的優(yōu)勢病毒種類及主要侵染類型均存在差異，可能原因一是檢測結果會受到取樣時間及取樣地點的影響，二是不同地區(qū)間的種植品種、土壤類型、氣象因素、田間管理等因素的不同均可導致不同病毒病的發(fā)生[21-22]。此外，本研究還發(fā)現(xiàn)蚜傳病毒病CMV、TEV、PVY的發(fā)生總量明顯大于TMV病毒。因此，在生產過程中防治病毒病時，除因地制宜防治優(yōu)勢病毒及主要侵染類型外，還應兼顧其他病毒種類和復合侵染情況，更重要的是要突出治蟲防病，切斷病毒病傳播途徑。本研究尚有7份疑似這4種病毒侵染的樣本未檢測到病毒，表明這些樣品中可能含有其他未檢測的病毒種類，因此還需對該部分樣品進一步檢測。

4 ?結 ?論

結果表明，2020年河南煙區(qū)407份煙草病毒病樣本的病毒檢出率為98.28%，其中，CMV是優(yōu)勢病毒。侵染類型中單一病毒侵染率為23.34%，多種病毒復合侵染率為74.94%，復合病毒侵染率遠大于單一病毒侵染率，且隨著復合侵染病毒種類的增多，復合侵染比例逐漸降低。復合侵染類型主要有CMV+TMV、CMV+TMV+PVY及CMV+TEV+PVY侵染比例分別為36.86%、7.62%、7.62%。本研究同時明確了河南不同煙區(qū)的優(yōu)勢病毒種類及侵染類型，為當?shù)夭《静〉木珳史乐翁峁┝死碚撘罁?jù)。此外，本研究只檢測了TMV、CMV、PVY及TEV 4種病毒，尚有7份疑似表現(xiàn)病毒病癥狀的未檢出該4種病毒，應進一步驗證是否受到其他病毒侵染。

參考文獻

[1]青玲，牛顏冰，吳楚釗，等. 部分煙區(qū)煙草病毒病病原檢測及復合侵染分析[J]. 煙草科技，2009（12）：58-64.

QING L， NIU Y B， WU C Z， et al. Virus detection of tobacco viral disease and analysis of viruses mixed-infection in some tobacco growing areas[J]. Tobacco Science & Technology， 2009（12）： 58-64.

[2]佟愛仔，趙興能，孔寶華，等. 2011年云南煙草病毒病發(fā)生動態(tài)及復合侵染分析[J]. 植物病理學報，2013，43（1）：100-103.

TONG A Z， ZHAO X N， KONG B H， et al. Analysis of dynamic occurrence and complex infection of tobacco viruses in 2011 Yunnan[J]. Acta Phytopathology Sinica， 2013， 43（1）： 100-103.

[3]白靜科，李淑君，李成軍，等. 河南煙區(qū)煙草病毒病種類與分布[J]. 煙草科技，2018，51（10）：20-26.

BAI J K， LI S J， LI C J， et al. Species and distribution of tobacco virus diseases in Henan Province[J]. Tobacco Science & Technology， 2018， 51（10）： 20-26.

[4]孔寶華，蔡紅，陳海如，等. RT-PCR方法檢測煙草環(huán)斑病毒研究[J]. 云南農業(yè)大學學報，2001，16（1）：13-15.

KONG B H， CAI H， CHEN H R， et al. The study on detection tobacco ring-spot virus （TRSV） by RT-PCR[J]. Journal of Yunnan Agricultural University， 2001， 16（1）： 13-15.

[5]楊金廣，張帥，申莉莉，等. 煙草中TMV、CMV和PVY多重RT-PCR檢測體系的建立與應用[J]. 中國煙草學報，2010（4）：83-88.

YANG J G， ZHANG S， SHEN L L， et al. Establishment and application of multiple RT-PCR for detection of TMV， CMV and PVY in tobacco[J]. Acta Tabacaria Sinica， 2010（4）： 83-88.

[6]鄭軒，成巨龍，趙震，等. 五種煙草病毒 TMV、CMV、TEV、PVY及TVBMV的多重RT-PCR同步檢測[J]. 植物病理學報，2011，41（2）：146-153.

ZHENG X， CHENG J L， ZHAO Z， et al. Simultaneous detection of five viruses （TMV， CMV， TEV， PVY and TVBMV） infecting tobacco by multiplex RT-PCR[J]. Acta Phytopathologica Sinica， 2011， 41（2）： 146-153.

[7]張俊祺，楊軍，宋紀真，等. 檢測三種煙草病毒的一步法多重RT-PCR[J]. 煙草科技，2014（2）：81-85.

ZHANG J Q， YANG J， SONG J Z， et al. One-step multiplex RT-PCR for simultaneous detection of three viruses in tobacco[J]. Tobacco Science & Technology， 2014（2）： 81-85.

[8]楊洋，汪蝶，楊懿德，等. 煙草4種病毒的多重RT-PCR檢測方法構建[J]. 煙草科技，2020，53（9）：6-11.

YANG Y， WANG D， YANG Y D， et al. Simultaneous detection of four tobacco-infecting viruses by multiplex RT-PCR[J]. Tobacco Science & Technology， 2020， 53（9）： 6-11.

[9]佟愛仔，趙興能，孔寶華，等. 云南煙草蝕紋病毒與其他病毒復合侵染的多重RT-PCR檢測[J]. 云南農業(yè)大學學報，2013，28（3）：298-301.

TONG A Z， ZHAO X N， KONG B H， et al. Detection of TEV and other viruses co-infecting tobacco in Yunnan by multiplex RT-PCR[J]. Journal of Yunnan Agricultural University， 2013， 28（3）： 298-301.

[10]董鵬，朱三榮，蔡海林，等. 湖南煙草病毒病種類檢測與系統(tǒng)進化分析[J]. 中國煙草科學，2020，41（3）：58-64.

DONG P， ZHU S R， CAI H L， et al. Detection and phylogenetic analysis of tobacco viruses in Hunan Province[J]. Chinese Tobacco Science， 2020， 41（3）： 58-64.

[11]代園鳳，朱虹，張永至，等. 畢節(jié)市煙草3種主要病毒檢測及株系分析[J]. 西南大學學報（自然科學版），2020，42（9）：63-70.

DAI Y F， ZHU H， ZHANG Y Z， et al. Detection and strain analysis of 3 tobacco viruses in Bijie area[J]. Journal of Southwest University （Natural Science Edition）， 2020， 42（9）： 63-70.

[12]李淑君，王海濤，陳玉國，等. 2000年煙草病毒病大發(fā)生概況與原因分析[J]. 煙草科技，2001（1）：44-46.

LI S J， WANG H T， CHEN Y G， et al. Situation and cause analysis of tobacco viruses in 2000 year[J]. Tobacco Science & Technology， 2001 （1）： 44-46.

[13]李義強，王維超，劉建坤，等. 豫中煙區(qū)煙草病毒病種類鑒定及對策分析[J]. 中國煙草科學，2003（1）：40-42.

LI Y Q， WANG W C， LIU J K， et al. Identification of tobacco virus diseases in the middle of Henan Province[J]. Chinese Tobacco Science， 2003（1）： 40-42.

[14]羅朝鵬，楊軍，王燃，等. 我國煙區(qū)病毒病種類的血清學鑒定[J]. 煙草科技，2012（12）：72-77.

LUO Z P， YANG J， WANG R， et al. Serological identification of viruses infecting tobacco in major tobacco growing areas of China [J]. Tobacco Science & Technology， 2012 （12）： 72-77.

[15]張全民，張曉娟. 平頂山煙區(qū)有翅蚜遷飛動態(tài)及病毒病流行規(guī)律研究[J]. 河南農業(yè)，2014（1）：40-41.

ZHANG Q M， ZHANG X J. Study on the dynamics of the Myzuspersicae （Sulzer） and the epidemic of viruses in Pingdingshan tobacco areas[J]. Henan Agriculture， 2014 （1）： 40-41.

[16]江彤，李爽，陳偉，等. 安徽省煙草病毒種類的血清學鑒定[J]. 中國煙草科學，2009，30（5）：50-53.

JIANG T， LI S， CHEN W， et al. Serological identification of tobacco viruses derived from Anhui Province[J]. Chinese Tobacco Science， 2009， 30（5）： 50-53.

[17]李金嶺，羅晶，牛小義，等. 陜西省煙草主要病毒病種類及植物帶毒的檢測[J]. 西北農林科技大學學報（自然科學版），2013，41（1）：78-843.

LI J L， LUO J， NIU X Y， et al. Detection and analysis of main tobacco viruses and viruliferous plants in Shaanxi Province[J]. Journal of Northwest A&F University （Natural Science） 2013， 41（1）： 78-843.

[18]時洪偉，劉陳晨，李科，等. 重慶豐都煙區(qū)田間煙草病毒病及其Dot-ELISA檢測[J]. 中國煙草科學，2016，37（2）：11-15.

SHI H W， LIU C C， LI K， et al. Detection of field viral diseases on tobacco in Fengdu county of Chongqing with the Dot-ELISA technique[J]. Chinese Tobacco Science， 2016， 37（2）： 11-15.

[19]鄧陽春，黃建國. 長期連作對烤煙產量和土壤養(yǎng)分的影響[J]. 植物營養(yǎng)與肥料學報，2010，16（4）：840-845.

DENG Y C， HUANG J G. Effect of long continuous cropping on the yields of flue-cured tobacco and nutrients in soils[J]. Plant Nutrition and Fertilizer Science， 2010， 16（4）： 840-845.

[20]彭曙光. 我國煙草病毒病的發(fā)生及綜合防治研究進展[J]. 江西農業(yè)學報，2011，23（1）：115-117.

PENG S G. Research advance in occurrence and integrated control of tobacco virus diseases in China[J]. Acta Agriculturae Jiangxi， 2011， 23（1）： 115-117.

[21]代園鳳，龍友華，喻會平，等. 不同誘抗劑對煙草馬鈴薯Y病毒病和氣候斑點病的防效及植株性狀的影響[J]. 作物雜志，2015（6）：146-149.

DAI Y F， LONG Y H， YU H P， et al. Effects of different inducers on agronomic traits and the control of Potato Virus Y and weather fleck in tobacco[J]. Crops， 2015（6）： 146-149.

[22]張毅，李斌，張順，等. 攀枝花煙草病毒病檢測與防治對策[J]. 安徽農業(yè)科學，2014，42（25）：8600-8602.

ZHANG Y， LI B， ZHANG X， et al. Detection and prevention research of tobacco virus disease in Panzhihua[J]. Journal of Anhui Agricultural Sciences， 2014， 42（25）： 8600-8602.

2521501186387