市售甲氧芐啶快檢試劑盒絕對靈敏度的分析

葉雅真 駱和東

摘 要：為了解導致市售甲氧芐啶快檢試劑盒產(chǎn)品實際檢測靈敏度不夠的原因，本研究對檢出限符合要求且適用于動物源性食品中甲氧芐啶檢測的膠體金快檢產(chǎn)品進行絕對靈敏度研究。結(jié)果顯示，試劑盒的絕對靈敏度和實際檢測靈敏度不成正比。因此，有必要進行甲氧芐啶快檢方法研究，提高試劑盒產(chǎn)品實際檢測靈敏度，并進一步優(yōu)化試劑盒產(chǎn)品中膠體金標記的抗原抗體，提高產(chǎn)品對0.5倍檢測限和1倍檢測限的識別差異，以提高快檢準確度，確保試劑盒產(chǎn)品的快檢監(jiān)管效果。

關(guān)鍵詞：甲氧芐啶;膠體金免疫層析;食品安全快速檢測

Analysis of Absolute Sensitivity of Commercial Kits for Rapid Detection of Trimethoprim

YE Yazhen1， LUO Hedong1，2*

（1.Xiamen Institute for Food and Drug Quality Control， Xiamen 361012， China; 2.RayKol Group （Xiamen） Co.， Ltd.， Xiamen 361015， China）

Abstract： In order to master the reasons for the insufficient sensitivity of the commercial trimethoprim rapid test kit， a unifiable absolute sensitivity analysis was conducted on kits for rapid detection of trimethoprim in foods of animal origin. By researching the absolute sensitivity of kits and comparing the results with the evaluation results， it was found that the absolute sensitivity of kits were not directly proportional to the actual detection sensitivity. Therefore， it was necessary to study the rapid detection method of trimethoprim to improve the actual detection sensitivity of kits， and optimize the material of colloidal gold to deepen the distinguish between the half detection limit and the detection limit， as to improve the accuracy of rapid detection and ensure the rapid detection supervision effect of the kit products.

Keywords： trimethoprim; principle of colloidal gold immunochromatography; rapid detection for food safety

甲氧芐啶（Trimethoprim，TMP）是一種磺胺增效劑，常與磺胺類藥物或其他抗生素聯(lián)合使用，被廣泛用于畜、禽、魚等動物的疾病治療方面[1-6]。動物性食品中的甲氧芐啶藥物殘留危害人體健康。長期食用甲氧芐啶殘留超標的食品，可能會引起惡心、嘔吐等反應，還可能引起人體的過敏反應、毒性反應，產(chǎn)生抗藥性，引起“三致”（致畸、致癌和致突變）作用[7]。為有效開展甲氧芐啶殘留的監(jiān)管工作，確保食品安全，我國2002年開始對各種動物性食品中甲氧芐啶的最大殘留限量作出規(guī)定。動物源性食品中甲氧芐啶相關(guān)殘留限量標準已發(fā)布實施約20年，但對動物源性食品中甲氧芐啶殘留的監(jiān)控效果仍不理想。原因是食品檢測周期較長，市場監(jiān)管部門雖在食品上市時及時進行抽檢，并篩查出問題食品，但問題食品已流入市民的餐桌，無法達到應有的監(jiān)管效果[8-16]。

甲氧芐啶快檢試劑盒20 min內(nèi)就可出具快檢結(jié)果，為監(jiān)管部門對食品安全的監(jiān)管提供了便利的技術(shù)手段，能有效解決食用農(nóng)產(chǎn)品的監(jiān)管難題。但在對市售試劑盒產(chǎn)品的質(zhì)量評價中發(fā)現(xiàn)，目前市售甲氧芐啶試劑盒產(chǎn)品的檢測靈敏度均不符合監(jiān)管要求，各品牌產(chǎn)品都存在不同程度的漏檢風險。為了解導致市售甲氧芐啶快檢試劑盒產(chǎn)品實際檢測靈敏度低的原因，本研究對檢出限符合要求且適用于畜、禽、魚等動物源性食品中甲氧芐啶檢測的膠體金快檢產(chǎn)品進行絕對靈敏度研究，為動物源性食品中甲氧芐啶快速檢測方法的研究提供科學依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

甲醇中甲氧芐啶溶液標準物質(zhì)（BePure-26347YM，1 000 μg/mL，BePure）;乙腈（色譜純，德國MERCK）;磷酸氫二鈉（分析純，國藥）;磷酸二氫鉀（分析純，國藥）;甲氧芐啶快速檢測試劑盒從市場上購買。

1.2 儀器與設(shè)備

Milli-Q超純水處理系統(tǒng)（美國Millipore）;電子天平（德國Sartorius）;移液槍（德國Eppendorf）;pH計（瑞士METTLER TOLEDO）。

1.3 絕對靈敏度測試方案

在市場調(diào)研中，檢出限符合要求且適用于畜、禽、魚等動物源性食品中甲氧芐啶檢測的膠體金快檢產(chǎn)品有5種。根據(jù)《化學試劑 pH值測定通則》（GB/T 9724—2007）中4.2.4方法配制pH=7.0的磷酸鹽標準緩沖溶液。將甲氧芐啶乙腈標準儲備液

（1.0 μg/mL）用磷酸鹽標準緩沖溶液稀釋并配制成標準系列溶液。無需樣品前處理，以標準系列溶液作為待測液，按照各品牌試劑盒說明書進行檢測。比較檢測線（T線）與控制線（C線）顏色深淺，相鄰濃度間定性結(jié)果有差異時確定為該品牌試劑盒的絕對靈敏度。

2 結(jié)果與分析

為避免對企業(yè)造成影響，對試劑盒品牌進行編號表示，分別為A品牌、B品牌、C品牌、D品牌和E品牌。根據(jù)各品牌試劑盒說明書設(shè)定絕對靈敏度初步測試的標準系列溶液濃度梯度。

使用0 ng/mL、0.5 ng/mL、1.0 ng/mL、1.5 ng/mL和2.0 ng/mL濃度梯度對A、B品牌試劑盒進行初步測試，A、B品牌試劑盒的定性結(jié)果均為陰性、陽性、陽性、陽性和陽性，在0～0.5 ng/mL定性結(jié)果差異明顯。因此，再用0.1 ng/mL、0.2 ng/mL、

0.3 ng/mL和0.4 ng/mL濃度梯度對這2個品牌試劑盒進行試驗，A品牌試劑盒定性結(jié)果分別為弱陰性、陽性、陽性、陽性，在0.1～0.2 ng/mL定性結(jié)果有差異，該品牌試劑盒的絕對靈敏度為0.1～0.2 ng/mL;B品牌試劑盒定性結(jié)果分別為陰性、弱陰性、陽性和陽性，在0.2～0.3 ng/mL定性結(jié)果有差異，該品牌試劑盒的絕對靈敏度為0.2～0.3 ng/mL。

使用0 ng/mL、2.5 ng/mL、5.0 ng/mL、7.5 ng/mL和10.0 ng/mL濃度梯度對C、D品牌試劑盒進行初步測試，C、D品牌試劑盒的定性結(jié)果均分別為陰性、陽性、陽性、陽性和陽性，在0～2.5 ng/mL定性結(jié)果有明顯差異。因此，再用0.5 ng/mL、1.0 ng/mL、1.5 ng/mL和2.0 ng/mL濃度梯度進行試驗，C品牌試劑盒的定性結(jié)果分別為陰性、陰性、弱陽性和陽性，在1.0～1.5 ng/mL定性結(jié)果有差異，該品牌試劑盒的絕對靈敏度為1.0～1.5 ng/mL;D品牌試劑盒的定性結(jié)果分別為陽性、陽性、陽性和陽性，增加0.25 ng/mL濃度梯度試驗，其在0.25 ng/mL濃度梯度的定性結(jié)果為弱陰性，在0.25～0.5 ng/mL定性結(jié)果有差異，該品牌試劑盒的絕對靈敏度為0.25～0.5 ng/mL。

使用0 ng/mL、10 ng/mL、15 ng/mL、20 ng/mL和25 ng/mL濃度梯度對E品牌試劑盒進行測試，定性結(jié)果分別為陰性、陰性、弱陰性、弱陽性和陽性，在15～20 ng/mL定性結(jié)果有差異，該品牌試劑盒的絕對靈敏度為15～20 ng/mL。

以上各品牌試紙條的稀釋液各不相同，使用不同廠家配制的稀釋液可能有不同表現(xiàn)。由定性結(jié)果可知，各品牌試劑盒的絕對靈敏度均不相同，A、B和D品牌試劑盒的絕對靈敏度較高，在0～0.5 ng/mL，C品牌試劑盒絕對靈敏度在1.0～1.5 ng/mL，E品牌試劑盒絕對靈敏度較低，在15～20 ng/mL。通過和廠家聯(lián)系，各品牌所使用的原料金標抗原抗體各不相同，原料金標抗原抗體的差異導致了絕對靈敏度的差異。

3 結(jié)語

在對試劑盒產(chǎn)品的絕對靈敏度研究中，發(fā)現(xiàn)A品牌試劑盒產(chǎn)品的絕對靈敏度最高，與C品牌產(chǎn)品的絕對靈敏度相差近10倍。但在試劑盒質(zhì)量評價中，A品牌試劑盒的假陰性率為19.0%，是C品牌試劑盒產(chǎn)品假陰性率的2倍，評價結(jié)果顯示A品牌試劑盒產(chǎn)品實際檢測靈敏度不夠，漏檢率明顯高于C品牌試劑盒產(chǎn)品。

對比試劑盒質(zhì)量評價結(jié)果和絕對靈敏度研究結(jié)果，試劑盒的絕對靈敏度和實際檢測靈敏度不成正比，導致這種結(jié)果的原因可能在于樣品的前處理。由于目前還沒有發(fā)布動物源性食品中甲氧芐啶的快速檢測方法，5個品牌試劑盒產(chǎn)品的前處理試劑配方和前處理方法均不一樣，有的采用甲醇水溶液、有的采用三羥甲基氨基甲烷（Tris）溶液、有的采用磷酸鹽緩沖液等，導致各品牌試劑盒產(chǎn)品對甲氧芐啶的提取效率、基質(zhì)干擾不盡相同。

因此，有必要進行快檢方法研究，對樣品的前處理方法、測定過程、交叉反應情況等進行研究，對方法進行優(yōu)化，提高試劑盒產(chǎn)品實際檢測靈敏度，并進一步優(yōu)化產(chǎn)品膠體金標記的抗原抗體，以提高產(chǎn)品對0.5倍檢測限和1.0倍檢測限的識別差異，降低檢測假陽性風險，提高快檢準確度，確保試劑盒產(chǎn)品的快檢監(jiān)管效果。

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