• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    2010-2019年中國(guó)豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV) ORF5基因的遺傳進(jìn)化與重組分析

    2022-03-16 02:47:56覃新云劉桂秀呂其壯鄧家華覃婷龍金桃陳旭健

    覃新云 劉桂秀 呂其壯 鄧家華 覃婷 龍金桃 陳旭健

    關(guān)鍵詞: 豬繁殖與呼吸綜合征病毒;ORF5基因;遺傳進(jìn)化分析;重組分析

    中圖分類號(hào): S852.65 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼: A 文章編號(hào): 1000-4440(2022)01-0285-04

    Key words: porcine reproductive and respiratory syndrome virus;ORF5 gene;genetic evolutionary analysis;recombination analysis

    豬繁殖與呼吸綜合征(PRRS),俗稱“豬藍(lán)耳病”,是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)引起的一種急性、具有高度傳染性疾病,其主要臨床癥狀表現(xiàn)為持續(xù)高熱、母豬繁殖障礙以及仔豬呼吸困難和高死亡率[1-2]。PRRS最早發(fā)現(xiàn)于美國(guó)的北卡羅來(lái)納州,隨后世界各國(guó)陸續(xù)報(bào)道,中國(guó)于1996年首次報(bào)道該病。2006年出現(xiàn)了由高致病性PRRSV引起的“豬無(wú)名高熱癥”疫情的大面積暴發(fā)和流行,導(dǎo)致豬群高發(fā)病率及高死亡率,給養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失[3]。

    PRRSV是一種單股正鏈RNA病毒,其基因組長(zhǎng)度約14 500 bp,編碼區(qū)至少包括10個(gè)開放閱讀框(ORF)[4]。其中,ORF5基因可以編碼病毒的主要結(jié)構(gòu)蛋白GP5,該蛋白質(zhì)是一種糖基化囊膜蛋白質(zhì),也是PRRSV 誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生中和抗體的主要抗原[5]。研究結(jié)果證實(shí),GP5蛋白是PRRSV中最容易發(fā)生變異的蛋白質(zhì)之一,常被用作評(píng)價(jià)PRRSV病毒是否發(fā)生變異的主要依據(jù)之一,ORF5基因也因此成為序列分析的典型基因,可作為PRRSV基因分型的重要依據(jù),在PRRSV流行性株遺傳變異研究中發(fā)揮重要作用[6]。當(dāng)前在中國(guó)境內(nèi)的PRRSV可分為2個(gè)血清型,即PRRSV2 (以VR-2332毒株為代表)和PRRSV1 (以Lelystadvirus毒株為代表),其中PRRSV2又可分為5個(gè)基因亞型(lineage 1、lineage 3、lineage 5、lineage 8、lineage 9),lineage 1包含NADC30、JL580等毒株;lineage 3包含QYYZ、GM2等近年來(lái)在華南地區(qū)流行的低致病毒株;lineage 5包含PRRSV2代表毒株VR-2332;lineage 8包含以TJ、JXA1、TA-12等高致病毒株和以CH-1a等為代表的經(jīng)典毒株及2011年于新疆地區(qū)發(fā)現(xiàn)的lineage 9[7-11]。

    為研究中國(guó)近年來(lái)PRRSV流行毒株和變異特征,本研究從GenBank中隨機(jī)取回分離于中國(guó)2010-2019年的877株P(guān)RRSV的ORF5基因序列,并對(duì)其進(jìn)行遺傳進(jìn)化和重組分析,以期為監(jiān)測(cè)中國(guó)豬群中PRRSV的變異情況和防控PRRS提供參考。

    1 材料與方法

    1.1 PRRSV ORF5基因序列的收集

    從GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)中隨機(jī)取回877株2010-2019年分離于中國(guó)29個(gè)省、市和自治區(qū)的PRRSV的ORF5全基因序列作為分析樣本,同時(shí),收集24株各PRRSV基因亞型的代表毒株和22株鄰國(guó)毒株作為參考毒株。為了更好地呈現(xiàn)分析結(jié)果,在877株毒株中隨機(jī)選取98株代表毒株用于后續(xù)分析。

    1.2 PRRSV ORF5基因的系統(tǒng)發(fā)育分析

    采用Neighbour-joining (NJ)方法,參照文獻(xiàn)[12]進(jìn)行參數(shù)設(shè)置,利用軟件MEGA v.10.0.5繪制本研究獲得的877株P(guān)RRSV的ORF5基因序列與參考毒株ORF5基因序列的分子進(jìn)化樹,應(yīng)用徐錚等[13]提出的基因分型方法對(duì)毒株進(jìn)行類群劃分并分析其進(jìn)化關(guān)系及各基因亞型在中國(guó)的流行情況。

    1.3 PRRSV ORF5基因序列分析

    利用DNAstar中的MegAlign程序?qū)⑹占腛RF5基因序列與參考毒株的ORF5基因序列進(jìn)行核苷酸同源性分析,并對(duì)ORF5基因推導(dǎo)的氨基酸序列進(jìn)行對(duì)比分析,其中以PRRSV2代表毒株VR-2332為氨基酸序列比對(duì)時(shí)的標(biāo)準(zhǔn)毒株[6,8]。

    1.4 PRRSV ORF5基因的重組分析

    為研究所收集毒株之間的基因重組情況,利用軟件RDP4.0中的7種檢測(cè)算法[RDP (R)、MaxChi (M)、BootScan (B)、GeneConv (G)、3seq (T)、SiScan (S)和Chimaera (C)]對(duì)獲得的ORF5基因進(jìn)行重組分析,并參照文獻(xiàn)[14-15]中的判定依據(jù)對(duì)檢測(cè)出的重組事件進(jìn)行界定。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 PRRSV ORF5基因的核苷酸同源性比對(duì)及遺傳演化分析

    分析結(jié)果顯示,PRRSV ORF5基因序列的長(zhǎng)度為600 bp、603 bp和606 bp,核苷酸同源性為59.6%~100.0%,與國(guó)內(nèi)外46株參考毒株的ORF5基因同源性為59.4%~100.0%。ORF5基因進(jìn)化樹分析結(jié)果表明,877株P(guān)RRSV毒株中有15株為PRRSV1,862株為PRRSV2毒株。PRRSV2又可進(jìn)一步劃分為多個(gè)不同基因亞型,其中高致病性毒株(亞型1)有517株、經(jīng)典毒株(亞型2)有74株、廣東新變異毒株(亞型3)有62株、JXA-R疫苗樣毒株(亞型4)有29株、NADC30/NADC34樣毒株(亞型5)有115株以及分離于新疆地區(qū)的毒株(亞型9)有6株。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn),除上述6種已發(fā)表的基因亞型外,又出現(xiàn)幾個(gè)與之明顯不同的分支,將其分別命名為亞型6(32株)、亞型7(4株)、亞型8(23株)。

    2.2 不同基因亞型PRRSV GP5蛋白的氨基酸序列對(duì)比

    根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道,當(dāng)前PRRSV2 GP5蛋白中存在1個(gè)信號(hào)肽、2個(gè)高變區(qū)(HVR1和HVR2)、3個(gè)跨膜區(qū)(TM1、TM2和TM3)以及5個(gè)表位結(jié)構(gòu)(DE、NE、T1、T2、TM3),另有位于第13位和151位氨基酸位點(diǎn)的2個(gè)毒力相關(guān)位點(diǎn)[6,14-15]。本試驗(yàn)從PRRSV1和PRRSV2毒株1~5基因亞型中隨機(jī)選取代表毒株與本試驗(yàn)獲得的98株代表性分析毒株的GP5蛋白氨基酸序列進(jìn)行對(duì)比分析。結(jié)果表明,中國(guó)PRRSV GP5蛋白的氨基酸序列中普遍存在變異。相比于PRRSV2的代表毒株VR-2332、PRRSV1毒株和亞型7均在第33~34位氨基酸位點(diǎn)處插入2個(gè)氨基酸;相比于PRRSV1的代表毒株,亞型6和亞型7分別在第34位氨基酸位點(diǎn)、58位氨基酸位點(diǎn)處出現(xiàn)1個(gè)氨基酸缺失。而Genotype 1和Subgenotype 7毒株均在33~34位氨基酸位點(diǎn)處插入2個(gè)氨基酸,其余的突變主要表現(xiàn)為各氨基酸位點(diǎn)的點(diǎn)突變。

    2.3 PRRSV ORF5基因的重組分析

    重組分析共檢測(cè)到11個(gè)重組事件,其中,2個(gè)是明確的重組事件,9個(gè)是潛在的重組事件[16-18]。在明確的重組事件中,重組事件2的重組體是毒株MH422060(NCBI登錄號(hào):HLJ/HEB/2016/1031b),其主要親本是毒株KX815428(NCBI登錄號(hào):15SC3),次要親本是毒株MK450614(NCBI登錄號(hào):2018113Zhangshu6),重組區(qū)域大約發(fā)生在ORF5基因序列的270~570 bp。

    3 討論

    近年來(lái),中國(guó)陸續(xù)報(bào)道新的突變毒株,使得中國(guó)的PRRSV流行毒株更加多樣化,變異進(jìn)程加快,防控更加復(fù)雜化[16,19-21]。雖然中國(guó)已采取疫苗免疫的方法進(jìn)行防控,但高致病性毒株減毒活疫苗的無(wú)序使用造成減毒活疫苗病毒的大量傳播,使得PRRS仍然是嚴(yán)重危害中國(guó)養(yǎng)豬業(yè)的重要疫病之一[22]。通過(guò)對(duì)PRRSV基因組特征和遺傳進(jìn)化分析發(fā)現(xiàn),基于選擇壓力的變化和病毒自身進(jìn)化的需要,PRRSV不斷發(fā)生變異和重組,尤其是在NSP2和GP5? 2個(gè)最易變異的蛋白質(zhì)上面,這給PRRS的防治帶來(lái)了更大困難,因此PRRSV NSP2和ORF5基因也常被用作PRRSV各流行毒株間遺傳進(jìn)化分析的靶基因。

    通過(guò)對(duì)新鑒定亞型進(jìn)行地理區(qū)分分析,我們發(fā)現(xiàn)以KY373214、MF133296等為代表的新亞型6主要在廣西、河南、四川、山東等地被檢出;以KC527830、KX815419為代表的新亞型7主要在廣東、浙江等地被檢出;以MK291407、KP998415為代表的新亞型8主要在中國(guó)臺(tái)灣地區(qū)被檢出,且新亞型6與PRRSV1,新亞型7與lineage 3,新亞型8與lineage 1親緣關(guān)系較近,表明目前中國(guó)的 PRRSV呈現(xiàn)多基因亞型并存的局面,且基因亞型的種類有進(jìn)一步增多的趨勢(shì)。

    通過(guò)對(duì)PRRSV ORF5基因編碼蛋白質(zhì)的變異分析發(fā)現(xiàn),其存在多處點(diǎn)突變,個(gè)別基因型或基因亞型還存在堿基插入和缺失的情況,該情況可能導(dǎo)致已有的PRRSV疫苗免疫效果不佳或失敗,更可能導(dǎo)致新型變異毒株的出現(xiàn)。此外,與毒力有關(guān)的第13位和第151位氨基酸位點(diǎn)的比對(duì)結(jié)果顯示,這些毒力位點(diǎn)的突變有可能會(huì)導(dǎo)致PRRSV流行毒株毒力的改變,甚至?xí)霈F(xiàn)新的高致病性毒株。

    對(duì)PRRSV ORF5基因的重組分析結(jié)果表明,基于中國(guó)不同地區(qū)的877株P(guān)RRSV ORF5基因共檢測(cè)到11個(gè)可能的重組事件,但是根據(jù)Tomitaka等[18]和Li等 [16]的結(jié)果判斷原則,其中只有2個(gè)是明確的重組事件,雖然重組事件1中重組體MK689083(新亞型6)的主要親本尚不明確,但其次要親本MT036931卻是亞型4,即高致病性PRRSV減毒疫苗毒株或演化毒株。重組事件2中的重組毒株MH422060(亞型2,即經(jīng)典毒株)來(lái)源于KX815428(亞型5,即NADC30-like毒株)和MK450614(亞型1,即高致病性毒株)的重組,這與陳盛楠等[14]和Xie等[19]對(duì)中國(guó)部分地區(qū)PRRSV變異分析的結(jié)果一致,說(shuō)明中國(guó)PRRSV毒株間的重組頻頻發(fā)生是導(dǎo)致新的突變毒株出現(xiàn)的主要原因之一。特別值得注意的是,雖然利用RDP4軟件并未檢測(cè)到PRRSV1與PRRSV2毒株之間存在基因重組的情況,但通過(guò)氨基酸序列比對(duì)發(fā)現(xiàn),亞型7的第1~56個(gè)氨基酸與PRRSV2代表株高度同源,其第62~201個(gè)氨基酸卻又與PRRSV1代表株高度同源,提示亞型7可能來(lái)源于PRRSV1與PRRSV2毒株間的基因重組。眾所周知,基因重組可能會(huì)導(dǎo)致病毒的抗原表位發(fā)生變化,從而導(dǎo)致病毒發(fā)生變異,這既是病毒發(fā)生變異產(chǎn)生新的亞群的一種方式,也是疫苗特異性免疫失敗的一個(gè)重要原因[23]。對(duì)重組事件進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn),所收集877株P(guān)RRSV ORF5基因的重組情況主要分布在廣東、吉林、河南、浙江、江西、黑龍江、安徽等地,其中在河南檢出最多,其次是山東,提示將來(lái)這些地方的PRRSV防控應(yīng)以重組毒株為主。

    本研究基于877株中國(guó)2010-2019年 PRRSV ORF5基因序列對(duì)中國(guó)近年來(lái)PRRSV流行毒株的變異情況進(jìn)行了分析,本研究結(jié)果為進(jìn)一步研究中國(guó)PRRSV的遺傳演化,篩選新的疫苗候選株和開發(fā)新型疫苗防控PRRS具有重要意義。

    參考文獻(xiàn):

    [1] HAN J,ZHOU L,GE X N, et al. Pathogenesis and control of the Chinese highly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome viru[J].Veterinary Microbiology,2017,209:30-47.

    [2] 鄒偉斌,林梓棟,齊冬梅. 豬繁殖與呼吸綜合征病毒的控制策略研究進(jìn)展[J].中國(guó)獸醫(yī)雜志,2018,54(11):66-69.

    [3] 楊宗照,方維煥. 豬瘟合并豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)和豬圓環(huán)病毒2型(PCV2)感染[J].中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào),2006,26(3):240-242.

    [4] LUNNEY J K,F(xiàn)ANG Y,LADINIG A, et al. Porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV):pathogenesis and interaction with the immune system[J].Annual Review of Animal Biosciences,2016,4(1):129-154.

    [5] OSTROWSKI M,GALEOTA J A,JAR A M, et al. Identification of neutralizing and nonneutralizing epitopes in the porcine reproductive and respiratory syndrome virus GP5 ectodomain[J].J Virol,2002,76(13):4241-4250.

    [6] 袁為鋒,張帆帆,李龍顯,等. 2016-2017年江西地區(qū)豬繁殖與呼吸綜合征病毒分子流行病學(xué)調(diào)查及ORF5基因變異分析[J].中國(guó)畜牧獸醫(yī),2018,45(10):2831-2839.

    [7] WU Q W,LI Z L,ZHANG G Q, et al. Genetic diversity and phylogenetic analysis of porcine reproductive and respiratory syndrome virus in southern China from 2007 to 2014 [J].Journal of Veterinary Science,2017,18(3):317-326.

    [8] YU L Y,ZHAO P D,DONG J G, et al. Genetic characterization of 11 porcine reproductive and respiratory syndrome virus isolates in south China from 2014 to 2015[J].Virology Journal,2017,14(1):139.

    [9] GAO J C,XIONG J Y,YE C, et al. Genotypic and geographical distribution of porcine reproductive and respiratory syndrome viruses in mainland China in 1996-2016[J].Veterinary microbiology,2017,208(1):164-172.

    [10]SHI M,LAM T Y,HON C C, et al. Molecular epidemiology of PRRSV: a phylogenetic perspective[J].Virus Research,2010,154(1/2):7-17.

    [11]SHI M, LAM T, HON C, et al. Phylogeny-based evolutionary, demographical, and geographical dissection of north American Type 2 porcine reproductive and respiratory syndrome viruses[J].Journal of Virology,2010,84(17):8700-8711.

    [12]KUMAR S,STECHER G,TAMURA K. MEGA7: molecular evolutionary genetics analysis version 7.0 for bigger datasets[J].Molecular Biology and Evolution,2016,33(7):1870-1874.

    [13]徐 錚,周吉培,申翰欽,等. 2016-2017年廣東地區(qū)豬繁殖與呼吸綜合征病毒的分子檢測(cè)及NSP2、ORF5基因變異分析[J].中國(guó)獸醫(yī)雜志,2019,55(4):25-30,34.

    [14]陳盛楠,張海龍,謝 博,等. 2018年廣東部分地區(qū)豬繁殖與呼吸綜合征病毒流行毒株ORF5基因變異分析[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展,2020,41(1):50-56.

    [15]許秀瓊,查云峰,王福廣,等. 廣東省屠宰場(chǎng)豬群PRRSV感染狀況調(diào)查及基因測(cè)序分析[J].中國(guó)動(dòng)物檢疫,2020,37(9):40-45.

    [16]LI G R,HE W T,ZHU H N, et al. Origin, genetic diversity, and evolutionary dynamics of novel porcine circovirus 3[J]. Advanced Science,2018,5(9):1800275.

    [17]OHSHIMA K,TOMITAKA Y,WOOD J T,et al. Patterns of recombination in turnip mosaic virus genomic sequences indicate hotspots of recombination[J].Journal of General Virology,2007,88(1):298-315.

    [18]TOMITAKA Y,OHSHIMA K. A phylogeographical study of the turnip mosaic virus population in east Asia reveals an‘emergent’lineage in Japan[J].Molecular Ecology,2006,15(14):4437-4457.

    [19]XIE C Z,HA Z,NAN F L, et al. Characterization of porcine reproductive and respiratory syndrome virus (ORF5 RFLP 1-7-4 viruses) in northern China[J]. Microbial Pathogenesis,2020,140:103941.

    [20]孔 軍,朱國(guó)坡,康 斌,等.2019年四川省部分地區(qū)豬繁殖與呼吸綜合征病毒ORF5基因的遺傳變異分析[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué),2021,49(7):68-73.

    [21]江地科,尹清清,項(xiàng)明源,等. 檢測(cè)豬瘟病毒膠體金和量子點(diǎn)試紙條的初步研制[J].江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào),2020,36(1):116-121.

    [22]楊漢春,黃芳芳,郭 鑫,等. 豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV) BJ-4株全基因組序列測(cè)定與分析[J].農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào),2001,9(3):212 -218.

    [23]VLASOVA A N,MARTHALER D,WANG Q H,et al. Distinct characteristics and complex evolution of PEDV strains, north America, May 2013-February 2014[J].Emerging Infectious Diseases,2014,20(10):1620-1628.

    (責(zé)任編輯:陳海霞)

    1645501186218

    18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 亚洲综合色惰| 国内精品一区二区在线观看| .国产精品久久| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 亚洲精品色激情综合| 69av精品久久久久久| 99热6这里只有精品| 真实男女啪啪啪动态图| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 亚洲,欧美精品.| 毛片一级片免费看久久久久 | 桃色一区二区三区在线观看| 亚洲无线观看免费| 亚洲成人精品中文字幕电影| 成人午夜高清在线视频| 中文字幕免费在线视频6| 国产精品不卡视频一区二区 | 首页视频小说图片口味搜索| 搞女人的毛片| 精华霜和精华液先用哪个| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 午夜激情欧美在线| 真人做人爱边吃奶动态| 2021天堂中文幕一二区在线观| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 午夜精品在线福利| 最近最新中文字幕大全电影3| 成人国产综合亚洲| 亚洲激情在线av| 中亚洲国语对白在线视频| 精品日产1卡2卡| 成人永久免费在线观看视频| 搡老岳熟女国产| 在线观看美女被高潮喷水网站 | av在线蜜桃| 国产精品免费一区二区三区在线| 亚洲av免费高清在线观看| 十八禁国产超污无遮挡网站| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 精品久久国产蜜桃| 99久久精品国产亚洲精品| 免费av观看视频| 久久精品人妻少妇| 亚洲av电影在线进入| 国产美女午夜福利| 国产亚洲精品综合一区在线观看| 深夜a级毛片| 深爱激情五月婷婷| 欧美3d第一页| 国产精品一区二区三区四区免费观看 | 在现免费观看毛片| 成人欧美大片| 国产男靠女视频免费网站| 久久精品国产自在天天线| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 超碰av人人做人人爽久久| 国模一区二区三区四区视频| 亚洲在线观看片| 永久网站在线| 精品久久久久久久久av| 国产美女午夜福利| 在线播放无遮挡| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 欧美一区二区亚洲| 老司机福利观看| 亚洲欧美日韩东京热| 深夜a级毛片| 欧美成人性av电影在线观看| 精品人妻一区二区三区麻豆 | 老女人水多毛片| 国产老妇女一区| 亚洲激情在线av| 免费黄网站久久成人精品 | 一本久久中文字幕| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 欧美精品国产亚洲| 一级黄片播放器| 韩国av一区二区三区四区| 午夜影院日韩av| 超碰av人人做人人爽久久| 国产精品伦人一区二区| 又紧又爽又黄一区二区| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| bbb黄色大片| 99久久99久久久精品蜜桃| 国产男靠女视频免费网站| 日韩欧美免费精品| 日本在线视频免费播放| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 国产91精品成人一区二区三区| 日韩高清综合在线| 欧美最黄视频在线播放免费| 日本免费一区二区三区高清不卡| 一级毛片久久久久久久久女| 在线播放国产精品三级| 国产高潮美女av| 有码 亚洲区| 亚洲人成伊人成综合网2020| 少妇熟女aⅴ在线视频| eeuss影院久久| 亚洲国产精品成人综合色| 欧美高清性xxxxhd video| 国产精品98久久久久久宅男小说| 国产激情偷乱视频一区二区| 国产精品影院久久| 欧美激情在线99| 一级av片app| 日本熟妇午夜| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 夜夜夜夜夜久久久久| 国产成+人综合+亚洲专区| 色噜噜av男人的天堂激情| 毛片一级片免费看久久久久 | 高潮久久久久久久久久久不卡| 悠悠久久av| 成人特级av手机在线观看| 亚洲欧美激情综合另类| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 五月玫瑰六月丁香| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 国产精品99久久久久久久久| 亚洲激情在线av| 麻豆国产av国片精品| 亚洲中文日韩欧美视频| 久久99热这里只有精品18| 日本一二三区视频观看| 亚洲一区二区三区不卡视频| 国内揄拍国产精品人妻在线| 国产精品嫩草影院av在线观看 | 99国产精品一区二区三区| 精品国产三级普通话版| 亚洲国产色片| 亚洲最大成人中文| 亚洲av美国av| 99热这里只有是精品在线观看 | a在线观看视频网站| 亚洲在线观看片| 久久精品人妻少妇| а√天堂www在线а√下载| 日韩欧美在线二视频| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 有码 亚洲区| 首页视频小说图片口味搜索| 亚洲欧美日韩东京热| 久久99热这里只有精品18| 禁无遮挡网站| 少妇的逼水好多| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 欧美日韩乱码在线| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 午夜两性在线视频| 嫩草影院精品99| 中出人妻视频一区二区| 女同久久另类99精品国产91| av在线天堂中文字幕| 欧美高清性xxxxhd video| 欧美日韩黄片免| a级毛片免费高清观看在线播放| 麻豆av噜噜一区二区三区| 激情在线观看视频在线高清| 精品久久久久久久久av| 极品教师在线视频| 在线观看av片永久免费下载| 毛片一级片免费看久久久久 | 国产精品99久久久久久久久| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 91麻豆av在线| 中文资源天堂在线| 日本与韩国留学比较| 性插视频无遮挡在线免费观看| 国产高清三级在线| 久久国产乱子伦精品免费另类| 性插视频无遮挡在线免费观看| 天堂网av新在线| 午夜影院日韩av| 性色avwww在线观看| 少妇的逼水好多| 少妇被粗大猛烈的视频| 熟女人妻精品中文字幕| 波野结衣二区三区在线| 欧美一区二区国产精品久久精品| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 91久久精品电影网| 久久久精品欧美日韩精品| av女优亚洲男人天堂| 国产成+人综合+亚洲专区| 国产精品一及| 免费看日本二区| 全区人妻精品视频| 极品教师在线免费播放| 男女那种视频在线观看| 亚洲真实伦在线观看| а√天堂www在线а√下载| 精品人妻一区二区三区麻豆 | 在线国产一区二区在线| 高清日韩中文字幕在线| 国产单亲对白刺激| 日韩免费av在线播放| 两个人视频免费观看高清| 日韩大尺度精品在线看网址| 日本 av在线| 麻豆国产av国片精品| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 亚洲,欧美精品.| 美女高潮的动态| 国产精品亚洲一级av第二区| 欧美日韩乱码在线| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 免费av毛片视频| 国产成人av教育| 看十八女毛片水多多多| 国产精品精品国产色婷婷| 尤物成人国产欧美一区二区三区| av在线观看视频网站免费| 午夜福利在线观看吧| 久久久久久久久中文| 久久99热这里只有精品18| 99热6这里只有精品| 日本成人三级电影网站| 搡老妇女老女人老熟妇| 国产在线男女| 国产伦精品一区二区三区视频9| 嫩草影院入口| 大型黄色视频在线免费观看| 日本熟妇午夜| 欧美又色又爽又黄视频| 精品午夜福利在线看| 精品免费久久久久久久清纯| 成人性生交大片免费视频hd| 亚洲av成人精品一区久久| 又粗又爽又猛毛片免费看| 美女xxoo啪啪120秒动态图 | 特大巨黑吊av在线直播| 国产色爽女视频免费观看| 欧美乱色亚洲激情| 亚洲专区国产一区二区| 午夜影院日韩av| 国产精品爽爽va在线观看网站| 亚洲人成电影免费在线| 99热精品在线国产| 国产午夜福利久久久久久| 丰满人妻一区二区三区视频av| 嫁个100分男人电影在线观看| 一级黄片播放器| 在线观看舔阴道视频| 久久国产乱子伦精品免费另类| 国产黄色小视频在线观看| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 白带黄色成豆腐渣| 搡老岳熟女国产| 国产伦人伦偷精品视频| 精品日产1卡2卡| 国产精品98久久久久久宅男小说| 宅男免费午夜| 久久久国产成人免费| 赤兔流量卡办理| 精品国产三级普通话版| 女人被狂操c到高潮| 人妻夜夜爽99麻豆av| 久久久久久久精品吃奶| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 午夜福利免费观看在线| 啦啦啦韩国在线观看视频| 亚洲美女视频黄频| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 免费看a级黄色片| 毛片女人毛片| 全区人妻精品视频| 亚洲精品久久国产高清桃花| h日本视频在线播放| 偷拍熟女少妇极品色| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 色噜噜av男人的天堂激情| 免费在线观看亚洲国产| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 最后的刺客免费高清国语| 亚洲欧美日韩东京热| 国产一区二区在线av高清观看| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 少妇人妻一区二区三区视频| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 永久网站在线| 久久九九热精品免费| 欧美乱色亚洲激情| 免费看美女性在线毛片视频| 午夜免费男女啪啪视频观看 | 男女下面进入的视频免费午夜| 亚洲欧美激情综合另类| 日韩欧美国产一区二区入口| 精品人妻熟女av久视频| 欧美一区二区精品小视频在线| www.www免费av| 国产午夜精品论理片| 亚洲精品粉嫩美女一区| 成人美女网站在线观看视频| 他把我摸到了高潮在线观看| 特大巨黑吊av在线直播| 波野结衣二区三区在线| 国产av不卡久久| 久久久久久久久大av| 村上凉子中文字幕在线| 日本与韩国留学比较| 九色成人免费人妻av| 一级黄片播放器| 91在线观看av| 国产野战对白在线观看| 91久久精品国产一区二区成人| 美女高潮的动态| 亚洲av五月六月丁香网| 亚洲av.av天堂| 精品欧美国产一区二区三| 脱女人内裤的视频| 国产av在哪里看| 嫩草影院入口| 亚洲天堂国产精品一区在线| 亚洲成人久久性| 国产黄色小视频在线观看| 最近最新中文字幕大全电影3| 日韩欧美国产一区二区入口| 日日干狠狠操夜夜爽| 99久久成人亚洲精品观看| 国产伦一二天堂av在线观看| 久久人人爽人人爽人人片va | av专区在线播放| 免费av毛片视频| 亚洲人成网站在线播| 欧美日本亚洲视频在线播放| 一级黄片播放器| 国产爱豆传媒在线观看| 国产淫片久久久久久久久 | 欧美黑人巨大hd| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 国产欧美日韩精品一区二区| 国产一区二区在线av高清观看| 精品久久久久久久久久免费视频| 亚洲18禁久久av| 久久久久精品国产欧美久久久| 久久精品国产自在天天线| 国产亚洲欧美98| 神马国产精品三级电影在线观看| 精品熟女少妇八av免费久了| 日韩人妻高清精品专区| 久久久国产成人免费| 亚洲第一区二区三区不卡| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 91九色精品人成在线观看| 成年女人永久免费观看视频| 免费人成在线观看视频色| 亚洲av.av天堂| 精品99又大又爽又粗少妇毛片 | 狠狠狠狠99中文字幕| 成人永久免费在线观看视频| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 午夜日韩欧美国产| 亚洲最大成人av| 99热精品在线国产| 国产精品日韩av在线免费观看| 欧美一级a爱片免费观看看| 香蕉av资源在线| 又爽又黄a免费视频| 黄色女人牲交| 黄色丝袜av网址大全| 日本 av在线| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 男人舔女人下体高潮全视频| 内地一区二区视频在线| 少妇丰满av| 亚洲av不卡在线观看| 深夜a级毛片| 一级av片app| 亚洲精品日韩av片在线观看| 欧美丝袜亚洲另类 | 国产精品精品国产色婷婷| 国产亚洲精品综合一区在线观看| 欧美一区二区亚洲| 少妇熟女aⅴ在线视频| 欧美zozozo另类| 国内精品一区二区在线观看| 中亚洲国语对白在线视频| 在线观看66精品国产| 成人无遮挡网站| 免费av不卡在线播放| 午夜老司机福利剧场| 小说图片视频综合网站| 亚洲五月婷婷丁香| 色哟哟哟哟哟哟| 国产人妻一区二区三区在| 一进一出抽搐gif免费好疼| 日韩 亚洲 欧美在线| 神马国产精品三级电影在线观看| 女人被狂操c到高潮| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 国产单亲对白刺激| 搡女人真爽免费视频火全软件 | 性色avwww在线观看| 国产精品久久久久久久电影| 国产欧美日韩一区二区精品| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 一级av片app| 男女下面进入的视频免费午夜| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 丰满人妻一区二区三区视频av| av黄色大香蕉| 91麻豆精品激情在线观看国产| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 亚州av有码| 看免费av毛片| 俄罗斯特黄特色一大片| 亚洲片人在线观看| 亚洲人成网站高清观看| 色综合站精品国产| 国产精品不卡视频一区二区 | 中文亚洲av片在线观看爽| 男人和女人高潮做爰伦理| 两个人的视频大全免费| xxxwww97欧美| 久久精品久久久久久噜噜老黄 | 国产精品久久久久久久电影| 欧美乱妇无乱码| 午夜福利高清视频| 久久99热6这里只有精品| 婷婷色综合大香蕉| 日韩欧美国产在线观看| 亚洲精品粉嫩美女一区| 欧美乱色亚洲激情| 午夜福利在线观看吧| 国产午夜福利久久久久久| 日韩有码中文字幕| 亚洲美女黄片视频| 亚洲男人的天堂狠狠| 国产私拍福利视频在线观看| 国产探花在线观看一区二区| 中文字幕熟女人妻在线| 99久久九九国产精品国产免费| 亚洲精品久久国产高清桃花| 一进一出抽搐gif免费好疼| 久久久久性生活片| 国产真实伦视频高清在线观看 | 女同久久另类99精品国产91| 成人性生交大片免费视频hd| 亚洲国产精品sss在线观看| 日韩欧美在线二视频| 欧美黄色片欧美黄色片| 午夜视频国产福利| 精品免费久久久久久久清纯| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 久久午夜亚洲精品久久| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 最新在线观看一区二区三区| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 淫妇啪啪啪对白视频| 久久精品综合一区二区三区| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 国模一区二区三区四区视频| 日本免费一区二区三区高清不卡| 中出人妻视频一区二区| 丰满人妻一区二区三区视频av| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 亚洲性夜色夜夜综合| 激情在线观看视频在线高清| 一区二区三区免费毛片| 日本黄色视频三级网站网址| 很黄的视频免费| 午夜福利欧美成人| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 国产精品女同一区二区软件 | 搡女人真爽免费视频火全软件 | 亚洲人与动物交配视频| 中文字幕人成人乱码亚洲影| 亚洲在线观看片| 我要看日韩黄色一级片| 白带黄色成豆腐渣| 亚洲国产色片| 精华霜和精华液先用哪个| 观看免费一级毛片| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 亚洲色图av天堂| 一本一本综合久久| 久久国产乱子伦精品免费另类| www.熟女人妻精品国产| 久久精品综合一区二区三区| 国产毛片a区久久久久| 欧美黑人巨大hd| 国产精品98久久久久久宅男小说| 毛片一级片免费看久久久久 | 国产精品亚洲av一区麻豆| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 国产精华一区二区三区| 国产精品亚洲一级av第二区| 性插视频无遮挡在线免费观看| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| a级毛片免费高清观看在线播放| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 色综合亚洲欧美另类图片| 成人亚洲精品av一区二区| 国产av在哪里看| 成人性生交大片免费视频hd| 亚洲第一区二区三区不卡| 日韩高清综合在线| 网址你懂的国产日韩在线| 免费看美女性在线毛片视频| 国产精品人妻久久久久久| 久久精品综合一区二区三区| 日本一本二区三区精品| 国产私拍福利视频在线观看| 国产精品久久电影中文字幕| 亚洲美女黄片视频| 在线免费观看不下载黄p国产 | 一进一出抽搐gif免费好疼| 亚洲成av人片免费观看| 亚洲一区二区三区不卡视频| 欧美黑人欧美精品刺激| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 日本免费a在线| 一区二区三区激情视频| 国产69精品久久久久777片| 国产主播在线观看一区二区| 久久久久精品国产欧美久久久| 香蕉av资源在线| 成人精品一区二区免费| 亚洲精品影视一区二区三区av| 黄色日韩在线| 国模一区二区三区四区视频| 日韩欧美 国产精品| 亚洲av不卡在线观看| 欧美黑人欧美精品刺激| 免费看光身美女| 国产精品嫩草影院av在线观看 | 婷婷色综合大香蕉| 免费人成在线观看视频色| 成人午夜高清在线视频| ponron亚洲| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 亚州av有码| 少妇的逼水好多| 99久久无色码亚洲精品果冻| 久久精品人妻少妇| www.熟女人妻精品国产| 久久精品综合一区二区三区| 黄色日韩在线| 久久久久性生活片| 美女黄网站色视频| 特级一级黄色大片| 青草久久国产| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 国产 一区 欧美 日韩| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 夜夜夜夜夜久久久久| 97超视频在线观看视频| 伊人久久精品亚洲午夜| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 婷婷色综合大香蕉| 国产激情偷乱视频一区二区| 91久久精品国产一区二区成人| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 亚洲美女搞黄在线观看 | 深夜精品福利| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 1024手机看黄色片| av欧美777| 18+在线观看网站| 俺也久久电影网| 深夜a级毛片| 欧美最黄视频在线播放免费| 老鸭窝网址在线观看| 久久久久亚洲av毛片大全| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 偷拍熟女少妇极品色| 不卡一级毛片| 亚洲人成网站在线播| a级毛片a级免费在线| 在线天堂最新版资源| 亚洲一区高清亚洲精品| 久久精品影院6| 看十八女毛片水多多多| 老司机午夜十八禁免费视频| 色吧在线观看| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 欧美日韩福利视频一区二区| 国产高清激情床上av| 中文资源天堂在线| 日韩亚洲欧美综合| 国产高清激情床上av| 欧美日本视频| 久久性视频一级片| 精华霜和精华液先用哪个| a级一级毛片免费在线观看| 久久久久国内视频| 美女大奶头视频| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 欧美成人一区二区免费高清观看| 久久国产乱子伦精品免费另类| 日日夜夜操网爽| 18美女黄网站色大片免费观看| 国产男靠女视频免费网站| 国内精品久久久久精免费| 一个人观看的视频www高清免费观看| 午夜福利在线在线| 午夜精品一区二区三区免费看| 亚洲av熟女| av天堂在线播放| 免费观看精品视频网站| 一区二区三区免费毛片| 国产真实伦视频高清在线观看 | 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 国产在线精品亚洲第一网站| 免费人成视频x8x8入口观看| 日韩免费av在线播放| 观看免费一级毛片| 91久久精品国产一区二区成人| 精品人妻1区二区|