體外胚胎在科爾沁肉牛品種培育中的應(yīng)用

孫雁征 劉偉 于萬(wàn)超王云龍

（1，內(nèi)蒙古通遼市畜牧業(yè)發(fā)展中心 028000；2，內(nèi)蒙古科爾沁肉牛種業(yè)股份有限公司 028000）

通遼市的肉牛產(chǎn)業(yè)發(fā)展基礎(chǔ)好，是國(guó)家重要的優(yōu)質(zhì)肉牛生產(chǎn)基地，1990年成功培育出科爾沁牛，但隨著社會(huì)需求和肉牛產(chǎn)業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化發(fā)展，其兼用型特點(diǎn)卻成為制約產(chǎn)業(yè)發(fā)展的瓶頸，急需對(duì)其進(jìn)行突出肉用性能的新品種選育，實(shí)現(xiàn)肉牛品種本土化?，F(xiàn)在肉牛經(jīng)濟(jì)成為農(nóng)牧民增收的重要途徑，但在繁育技術(shù)方面一直采用自然交配、常溫人工授精及冷凍精液人工授精技術(shù)，充分利用優(yōu)秀種公牛的同時(shí)，也導(dǎo)致新的矛盾，制約了優(yōu)良種群的擴(kuò)群速度。究其原因，一是優(yōu)秀母牛數(shù)量有限，自然繁殖很慢；二是優(yōu)秀母牛資源不能充分利用。而體外胚胎生產(chǎn)和移植技術(shù)能解決上述兩個(gè)問(wèn)題[1]。

為開(kāi)展科爾沁肉牛品種培育盡快建立結(jié)構(gòu)合理、運(yùn)行高效且具有通遼特色自主培育品種的肉牛良種繁育體系和推廣體系，發(fā)展現(xiàn)代肉牛育種、制種、用種事業(yè)，推進(jìn)科爾沁肉牛品種培育進(jìn)程，現(xiàn)以內(nèi)蒙古科爾沁肉牛種業(yè)股份有限公司為依托，聯(lián)合牧區(qū)養(yǎng)殖單位，通過(guò)技術(shù)幫扶、政府扶持，運(yùn)用活體采卵、體外授精、體外培養(yǎng)等技術(shù)進(jìn)行工廠化胚胎生產(chǎn)，開(kāi)展胚胎移植，充分利用優(yōu)良母牛的遺傳繁殖潛力，發(fā)揮技術(shù)優(yōu)勢(shì)，提高繁殖效率，增加經(jīng)濟(jì)效益，完善繁育技術(shù)體系，加快優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)母牛群建設(shè)；提升科爾沁肉牛種源質(zhì)量并迅速擴(kuò)群，形成自主培育的高品質(zhì)肉用牛品種，為科爾沁肉牛產(chǎn)業(yè)提供充足的優(yōu)質(zhì)種源，加快育種進(jìn)程。

1 前期工作

1.1 成立技術(shù)團(tuán)隊(duì)，制定相關(guān)規(guī)程

供體牛選擇標(biāo)準(zhǔn)：橫交4代的科爾沁肉牛成年牛為供體牛選擇對(duì)象。體重1100kg左右、斷奶后持續(xù)10個(gè)月育肥平均日增重達(dá)到1300～1400g的公牛作為供體牛父本；體重550kg左右的母牛作為供體牛母本。

示范點(diǎn)選擇標(biāo)準(zhǔn)：合作養(yǎng)殖場(chǎng)提供可選受體牛數(shù)量70頭以上，有牛舍、牛欄、保定架等基本設(shè)施，有分圈飼養(yǎng)的條件。

受體牛選擇標(biāo)準(zhǔn)：空懷母牛，年齡1.5～8歲，體重350kg以上，經(jīng)產(chǎn)牛需要產(chǎn)后2個(gè)月以上，無(wú)繁殖系統(tǒng)疾病和傳染病，15d內(nèi)未做免疫或驅(qū)蟲(chóng)；膘情適中，可見(jiàn)3根肋骨最佳，沒(méi)有流產(chǎn)史和難產(chǎn)史。

受體牛飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)：在移植前6～8周注射VADE針劑；每日定時(shí)飼喂，先粗后精。粗料18kg/頭/d，精料1kg/頭/d，濃縮料和玉米面比例3:7；先喂后飲、自由飲水。在胚胎移植前和懷孕前期 （至少3個(gè)月以上）飼料中杜絕棉籽粕和酒糟。移植后45d對(duì)受體牛做妊娠檢查，確診未妊娠的牛進(jìn)行配種或其他處理。已妊娠的受體牛營(yíng)養(yǎng)要全面，禁止飼喂霉變和冰凍飼料，禁止飲冰水。妊娠受體牛在產(chǎn)前3個(gè)月補(bǔ)充足量的維生素，微量元素 （如硒、鋅等），適量限制能量攝入。產(chǎn)前1.5個(gè)月對(duì)發(fā)育過(guò)肥的母牛進(jìn)行限飼，減少受體牛能量的攝入量，既要保證胎兒的正常發(fā)育，又要防止難產(chǎn)[2]。

1.2 選擇供體牛和受體牛

在科爾沁肉牛種業(yè)公司培育出橫交4代科爾沁肉牛種用牛，經(jīng)篩選符合標(biāo)準(zhǔn)的種公牛作為供體父本，轉(zhuǎn)至通遼京緣種公牛站進(jìn)行凍精生產(chǎn)；符合標(biāo)準(zhǔn)的16頭種母牛為供體母牛。

在科左中旗保康鎮(zhèn)、寶龍山鎮(zhèn)、巴彥塔拉鎮(zhèn)、希伯花鎮(zhèn)、代力吉蘇木等地的8個(gè)實(shí)施示范點(diǎn)的575頭母牛為受體牛。詳情見(jiàn)表1。

表1 2019年胚胎移植項(xiàng)目組群情況

2 推廣方式

2.1 胚胎生產(chǎn)

核心技術(shù)主要包括活體采卵、體外成熟、體外受精、體外培養(yǎng)、胚胎冷凍。

采卵員采集供體牛卵泡，置于傳遞窗口恒溫試管架。實(shí)驗(yàn)室人員做好記錄生，在體視顯微鏡下?lián)斐鏊新涯讣?xì)胞，將可用卵移入成熟液，置于培養(yǎng)箱22h進(jìn)行體外成熟培養(yǎng)。成熟卵子見(jiàn)圖1。

圖1 成熟的卵子

成熟的卵細(xì)胞做體外受精7h后，置于透明質(zhì)酸酶中靜置1min去掉透明帶周?chē)亚鸺?xì)胞，移入培養(yǎng)液在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h。將異常分裂和未分裂的胚胎移除，加20μl培養(yǎng)液，三氣培養(yǎng)箱中低氧培養(yǎng)72h后，每滴再加20μl培養(yǎng)液，36h后 （見(jiàn)圖2），進(jìn)行胚胎冷凍[3]。

圖2 正常分裂的胚胎

將胚胎置于冷凍液中裝入0.25ml細(xì)管，放入冷凍儀，初始溫度為-6℃，以0.5℃/min的速度降溫至-35℃，冷凍程序完成[4]。

2.2 胚胎移植

2.2.1 同期發(fā)情

對(duì)示范點(diǎn)組群的575頭受體母牛進(jìn)行布病檢疫、體形、體重、生殖系統(tǒng)檢查，確定可做同期發(fā)情處理的受體牛。受體牛同期發(fā)情處理流程，參見(jiàn)表2。

表2 受體牛同期發(fā)情處理方案

2.2.2 胚胎移植

對(duì)受體牛進(jìn)行卵巢黃體檢查，將無(wú)黃體和黃體發(fā)育不好的母牛淘汰，對(duì)黃體發(fā)育合格的牛做胚胎移植。母牛尾根處用利多卡因 （3～5ml）進(jìn)行硬膜外腔麻醉，高錳酸鉀進(jìn)行外陰的清洗和消毒，胚胎細(xì)管裝入移植槍內(nèi)進(jìn)行移植。移植完畢后注射VAD5ml。詳細(xì)記錄胚胎信息。

在移植完后45d后用B超進(jìn)行直腸查孕。

記錄所產(chǎn)犢牛初生體尺體重、6、12、18月齡體尺體重等信息。

操作流程參見(jiàn)圖3。

圖3 技術(shù)流程圖

3 結(jié)果

3.1 胚胎生產(chǎn)情況

2019年2月26日～9月13日，對(duì)16頭優(yōu)秀科爾沁肉牛供體母牛進(jìn)行活體采卵，共采集98次，每次采8頭牛，成功培養(yǎng)體外胚胎3366枚，平均獲得胚胎4.29枚/頭次。

3.2 胚胎移植情況

自2019年6月25日起，組建8個(gè)胚胎移植示范點(diǎn)，組群575頭受體母牛進(jìn)行同期發(fā)情處理，524頭同期發(fā)情，同期率91.1%；胚胎移植417頭，移植率79.6%。2019年11月5日最后一批次孕檢，共計(jì)妊娠206頭，妊娠率49.4%；產(chǎn)犢180頭，產(chǎn)犢率87.4%；成活犢牛167頭，成活率92.8%。詳情見(jiàn)表3。

表3 示范點(diǎn)胚胎移植情況

4 結(jié)論

科爾沁肉牛品種培育應(yīng)用活體采卵、體外受精、胚胎移植技術(shù)自2019年2月生產(chǎn)胚胎起，至2020年9月，16頭科爾沁肉牛供體母牛獲得后代犢牛167頭，數(shù)量比自然配種、冷凍精液人工授精方式繁殖提高10倍以上，同時(shí)庫(kù)存冷凍胚胎2949枚。因此，通過(guò)體外胚胎生產(chǎn)、胚胎移植的方式繁殖優(yōu)秀科爾沁肉牛后裔，能充分發(fā)揮優(yōu)良個(gè)體繁殖潛力，成功實(shí)現(xiàn)快速擴(kuò)大核心群的目的，在品種培育、生產(chǎn)實(shí)踐中有推廣意義。