角質(zhì)酶的異源表達(dá)和超聲輔助下降解PET塑料

婁文勇 吳有權(quán) 郭澤望 宗敏華

(華南理工大學(xué) 食品科學(xué)與工程學(xué)院，廣東 廣州 510640)

塑料是一種由碳和氫聚合而成的材料，不僅與我們的日常生活息息相關(guān)，而且廣泛應(yīng)用于工業(yè)上[1- 12]。據(jù)不完全統(tǒng)計，2018年全球塑料產(chǎn)量達(dá)到3.59億噸，平均每秒就賣出二十萬個塑料瓶，然而只有9%被重新回收利用[13]。其中，聚對苯二甲酸乙二醇酯(PET)是最重要的熱塑性塑料之一，相比于其他傳統(tǒng)材料(如木材、混凝土和金屬)，PET擁有許多顯著的優(yōu)勢，如不易斷裂，輕便，耐腐蝕等[14- 20]。然而，在PET需求日益增長的同時，也造成了固體廢棄物的堆積，PET占據(jù)了城市固體垃圾的很大一部分[21- 24]，一旦處理不當(dāng)，便會帶來一系列的健康和環(huán)境問題，比如地下水污染、溫室氣體排放、火災(zāi)和人體疾病等[25]。目前處理廢棄PET的主要方法有填埋、焚燒、再生造粒和熱解[26]，其中不論是填埋還是焚燒，都會對環(huán)境造成巨大的破壞[27]，而再生造粒和熱解等方法所需反應(yīng)條件苛刻，工藝成本高昂等[28- 29]。因此，尋找綠色的降解方法迫在眉睫！

近年來，利用生物法降解PET塑料引起了廣泛的關(guān)注，其實質(zhì)是利用酶降解塑料。生物降解法具有反應(yīng)條件相對溫和、環(huán)境綠色友好的優(yōu)點，降解后得到的產(chǎn)物能夠被回收利用，符合可持續(xù)發(fā)展的理念，被認(rèn)為是最理想的PET廢棄物處理方法。Yoshida等[30]從廢棄PET回收點的土樣中，分離到一株可消化分解PET的細(xì)菌——坂井艾德昂菌(Ideonellasakaiensis)。該菌首先分泌PET水解酶將PET降解成對苯二甲酸甲基- 2-羥乙酯(MHET)，再將MHET轉(zhuǎn)運入體內(nèi)，并在MHET水解酶的作用下最終降解為單體對苯二甲酸(TPA)和乙二醇(EG)。此后，又有多個性能不同的PET降解酶陸續(xù)被報道。其中，葉分支堆肥角質(zhì)酶(LCC)經(jīng)過兩步級聯(lián)催化，可以將PET直接降解為TPA和EG單體[31]，因此將LCC用于PET的生物降解具有很大潛能。

LCC(EC 3.1.1.74)屬于絲氨酸水解酶家族[32]，具有典型的絲氨酸-組氨酸-天冬氨酸催化三聯(lián)體[33- 37]，來源于不同細(xì)菌的角質(zhì)酶水解PET的活性大相徑庭，但是都很低[38]。超聲波是一種頻率為20～106 kHz的機(jī)械波，它可以加速某些化學(xué)反應(yīng)，如促進(jìn)化學(xué)物質(zhì)的水解效率。超聲廣泛應(yīng)用于輔助天然產(chǎn)物的提取[38]、脂質(zhì)的催化酯化和酯交換[39- 41]、食品加工[42]、以及生化工程/生物技術(shù)如生物廢水處理和生物修復(fù)[43- 45]。然而，應(yīng)用超聲波輔助生物降解PET的研究卻鮮見報道。在本項研究中，首次使用超聲波來輔助LCC生物降解PET，再優(yōu)化重要的反應(yīng)條件，如溫度、pH超聲功率和超聲時間，以期獲得最佳的催化效果。

1 材料和方法

1.1 菌株與質(zhì)粒

pET- 26b(+)-LCC由生工生物工程(上海)股份有限公司合成，大腸桿菌BL21(DE3)購自生工生物工程(上海)股份有限公司。

1.2 試劑材料

肉湯(LB)培養(yǎng)基原料及其他常規(guī)試劑均為分析純，乙腈、甲酸為色譜純，溴化鉀為光譜純，均購自廣州市叢源儀器有限公司；異丙基β-半乳糖苷(IPTG)、卡那霉素、苯二甲酸(TPA)，均購自上海阿拉丁生化科技股份有限公司；PET購自東莞市騰揚翔實業(yè)有限公司。

1.3 實驗設(shè)備

YY- 040HAL2型超聲波清洗機(jī)，上海允延儀器有限公司生產(chǎn)；T27型傅里葉變換紅外光譜及紅外顯微鏡，德國布魯克公司生產(chǎn)；EVO18型掃描電子顯微鏡，德國蔡司公司生產(chǎn)；UltiNate3000型高效液相色譜儀，美國Waters公司生產(chǎn)；TENSOR27型圓二色光譜，英國Applied Photophysics公司生產(chǎn)；SCIENTZ-IID型超聲細(xì)胞破碎儀，寧波新芝生物科技股份有限公司生產(chǎn)；Five Easy Plus型pH計，梅特勒-托利多儀器有限公司生產(chǎn)；Gel Doc TM XR+型凝膠成像系統(tǒng)，美國Bio-Rad公司生產(chǎn)；Mini-PROTEIN Tetra 1658003型垂直蛋白電泳槽、Bio-ScaleTMMini NuviaTMIMAC型Ni離子親和層析柱，美國Bio-Rad公司生產(chǎn)；UV- 2550型紫外可見光光度計，日本島津公司生產(chǎn)。

1.4 試驗方法

1.4.1 角質(zhì)酶LCC的誘導(dǎo)表達(dá)與純化

取2 μL重組質(zhì)粒，加入到100 μLEscherichiacoliBL21(DE3)感受態(tài)細(xì)胞中，輕柔混勻后冰浴30 min后，取出后置入42 ℃恒溫水浴90 s，然后立即冰浴5 min，再加入1 mL LB培養(yǎng)基，在搖床中振蕩復(fù)蘇培養(yǎng)1 h(37 ℃、180 r/min)。復(fù)蘇結(jié)束后，取100 μL涂布在含有卡那霉素(50 μg/mL)抗性的LB固體培養(yǎng)基中，37 ℃培養(yǎng)過夜，所得單菌落即為E.coliBL21(DE3)-pET- 26b(+)-LCC。挑取單菌落至含有卡那霉素(50 μg/mL)的LB中培養(yǎng)12 h，作為種子液。接種1%體積的種子液于含有卡那霉素(50μg/mL)的LB中，37 ℃、180 r/min擴(kuò)大培養(yǎng)至菌液D(600)在0.6～0.8，冷卻至室溫后，加入終濃度為0.2 mmol/L的IPTG，于16 ℃、160 r/min培養(yǎng)20 h進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)。角質(zhì)酶LCC的分離純化及鑒定參考文獻(xiàn)[46]和《分子克隆》[47]。

1.4.2 TPA的檢測與LCC酶活測定

使用高效液相色譜檢測TPA，色譜柱為Ec-lipse Plus-C18柱(5 μm，4.6×150 mm，Agilent)，柱溫30 ℃。流動相A為0.1%體積比的甲酸水溶液，B為純乙腈，流速為0.8 mL/min，采用梯度洗脫，95%A和5%B在15 min內(nèi)緩慢改變成54.5%A和45.5%B，紫外檢測波長為254 nm[48]。LCC酶活單位定義為：在特定的反應(yīng)條件下，每分鐘水解BHET產(chǎn)生相當(dāng)于1 μmol TPA，所需要的酶量為 1個活性單位(1 U)。

1.4.3 PET表面結(jié)構(gòu)分析

采用掃描電子顯微鏡(SEM)對不同超聲反應(yīng)條件下PET的表面性能的變化進(jìn)行微觀形貌觀察，電壓為10 kV，用高能電子束在PET表面掃描，產(chǎn)生不同信號，通過這些信號檢測PET表面形貌。

1.4.4 LCC的二級結(jié)構(gòu)檢測

配制1 mg/mL的LCC溶液，在不同功率超聲5 h后，采用圓二色光譜儀(CD)測定LCC在190～260 nm處的圓二色光譜，再用圓二色光譜分析軟件Pro-Data和CDNN來計算LCC的二級結(jié)構(gòu)含量；將超聲后的LCC樣品冷凍干燥，按質(zhì)量比1：10與光學(xué)純溴化鉀研磨混合壓片，采用傅里葉紅外光譜儀(FT-IR)測定LCC在400～4 000 cm-1處的紅外光譜，再用PeakFit v4.12計算LCC的二級結(jié)構(gòu)含量。

1.4.5 LCC動力學(xué)常數(shù)的測定方法

PET的單體對苯二甲酸二乙酯(BHET)被用作測量PET降解酶活性的替代品[48]。在5 mL螺口血清瓶中加入不同濃度(1、2、4、6、8、10、15、20 mmol/L)的BHET、終質(zhì)量濃度為0.02 mg/mL的酶液，再用100 mmol/L pH8.0 K2HPO4-KH2PO4的緩沖液補(bǔ)足至5 mL，65 ℃精確反應(yīng)10 min，沸水浴15 min終止反應(yīng)，用第1.4.2節(jié)的方法檢測TPA的濃度，用GraphPad Prism7來模擬出回歸方程，得出最大反應(yīng)速度Vmax和動力學(xué)參數(shù)Km，LCC的分子質(zhì)量為28.84 ku，再算出轉(zhuǎn)化數(shù)kcat。

1.4.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計處理

所有數(shù)據(jù)均重復(fù)測定3次，使用Excel2017和GraphPad Prism7處理數(shù)據(jù)和作圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 LCC的誘導(dǎo)表達(dá)和分離純化

將表達(dá)載體pET- 26b(+)-LCC轉(zhuǎn)化到菌株E.coliBL21(DE3)后，利用誘導(dǎo)劑IPTG進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)。LCC的表達(dá)量和活性不僅與表達(dá)載體、菌株相關(guān)，還與誘導(dǎo)表達(dá)條件密切相關(guān)。通過對單一因素設(shè)置系列梯度，來對誘導(dǎo)條件進(jìn)行優(yōu)化。IPTG濃度分別為0.05、0.10、0.20、0.30、0.40、0.50 mmol/L、誘導(dǎo)溫度分別為12、16、20、25、30 ℃、誘導(dǎo)時間分別為16、20、24、28 h。

2.1.1 誘導(dǎo)條件的優(yōu)化

不同IPTG濃度、誘導(dǎo)溫度、誘導(dǎo)時間都對LCC表達(dá)有所影響，IPTG濃度過低，LCC的表達(dá)量低，導(dǎo)致LCC的比活偏低；而IPTG對pET- 26b(+)來說具有一定毒性，濃度過高會抑制細(xì)胞生長，影響生物量的積累。相比于其他IPTG濃度組的重組LCC的相對活性，IPTG濃度為0.2 mmol/L條件下重組LCC的相對活性最高，因此，選擇IPTG濃度為0.2 mmol/L。誘導(dǎo)溫度過低，細(xì)胞的生長緩慢，生物量偏低，LCC的表達(dá)量相應(yīng)地也會降低；誘導(dǎo)溫度過高，細(xì)胞生長迅速，蛋白質(zhì)大量表達(dá)以至于部分LCC不能正確折疊而形成無活性的包涵體。相比于其他誘導(dǎo)溫度組的重組LCC的相對活性，誘導(dǎo)溫度為16 ℃條件下重組LCC的相對活性最高，因此，選擇誘導(dǎo)溫度為16 ℃。誘導(dǎo)時間過短，生物量和蛋白表達(dá)量都很低；誘導(dǎo)時間過長，培養(yǎng)基營養(yǎng)枯竭，有害物質(zhì)積累，細(xì)胞死亡，生物量和蛋白表達(dá)量因此而降低。相比于其他誘導(dǎo)時間組的重組LCC的相對活性，誘導(dǎo)時間為20 h條件下重組LCC的相對活性最高，因此，選擇誘導(dǎo)時間為20 h。

2.1.2 LCC的分離純化

由于LCC攜帶了6個組氨酸標(biāo)簽，所以使用Ni親和層析柱分離純化在最優(yōu)條件下誘導(dǎo)表達(dá)的LCC。SDS-PAGE電泳結(jié)果如圖1所示，在35和25 ku之間出現(xiàn)單一條帶，與理論值28.84 ku相符合。使用Brad-Ford試劑盒測定純化前后的蛋白濃度，再測定純化前后的酶活等，結(jié)果見表1。純化后的酶活為320.27 U/mg，酶活回收率為64.29%，純化倍數(shù)為5.13。

泳道M—預(yù)染蛋白Marker；泳道1—含空載體pET- 26b(+)的E.coli BL21(DE3)全蛋白；泳道2—含載體pET- 26b(+)的E.coli BL21(DE3)全蛋白；泳道3—經(jīng)蛋白純化儀純化后的LCC圖1 LCC純化的SDS-PAGE分析Fig.1 SDS-PAGE analysis of LCC during purificatuion

2.2 LCC的最適溫度和pH值

在生物催化反應(yīng)中，溫度是一個重要的參數(shù)，高溫或低溫環(huán)境下，都會影響LCC的活性和反應(yīng)效率。因此，確定最適反應(yīng)溫度顯得尤為重要。

在不同溫度下測定LCC的活性，如圖2(a)所示。在50～65 ℃之間，TPA濃度隨著溫度升高而升高，65 ℃時，LCC活性達(dá)到最高，隨著溫度進(jìn)一步升高，LCC活性降低甚至失活。此外，PET結(jié)晶度也會隨溫度升高而升高，而結(jié)晶度越高，PET被降解的效率就越低[49- 50]。70 ℃和75 ℃條件下，達(dá)到65 ℃時PET結(jié)晶度的兩倍分別需要15 h和5 h[31]。與溫度類似，較高和較低的pH都會影響LCC的活性，LCC在pH=8.0時具有最高活性(見圖2(b))。

表1 LCC的純化Table 1 Purification of LCC

(a)溫度

(b)pH值圖2 溫度和pH值對LCC活性的影響Fig.2 Effect of temperature and pH on the activity of LCC

2.3 超聲處理對LCC的影響

超聲波穿透能力極強(qiáng)、能量很大，在介質(zhì)中具有加熱功能、機(jī)械傳質(zhì)作用、空化作用。由超聲引起的空化現(xiàn)象會產(chǎn)生大量包含反應(yīng)液蒸氣的微氣泡，微氣泡在PET和反應(yīng)液之間的寬界面(大于200 μm)處不對稱塌陷，并以高速(大于100 m/s)向PET表面產(chǎn)生微射流[51]，而且微氣泡的瞬時破裂也會產(chǎn)生高達(dá)103MPa的強(qiáng)烈沖擊波[52]，反應(yīng)液朝著或遠(yuǎn)離微氣泡的劇烈運動形成的微對流可以加劇反應(yīng)液與PET之間的碰撞，從而促進(jìn)LCC對PET的解聚作用[53]。另一方面，由空化現(xiàn)象引起的LCC的結(jié)構(gòu)變化拓寬了LCC的底物通道。然而，超聲功率過高、時間過長，LCC的結(jié)構(gòu)進(jìn)一步改變，趨向于不合理構(gòu)象，導(dǎo)致LCC失活。與此同時，較高功率的超聲所產(chǎn)生的瞬間空化作用會形成大量的高能量自由基，其會攻擊LCC發(fā)生化學(xué)變化，影響LCC結(jié)構(gòu)，使LCC活性降低。不僅如此，高強(qiáng)度的微射流和沖擊波會破壞LCC結(jié)構(gòu)，甚至?xí)袻CC剪切成小碎片，而使其活性降低甚至失活，變得不利于PET的降解。

2.3.1 超聲功率和時間對LCC活性的影響

LCC在不同超聲功率和時間下的活性如圖3所示，在超聲功率為25 W時，超聲2.5～10.0 h都會加速PET的降解，其中超聲5.0 h效果最好，超聲7.5 h和10.0 h降解48 h后的效果還不如未經(jīng)超聲處理的。其原因可能是超聲時間過長，導(dǎo)致酶結(jié)構(gòu)被破壞，穩(wěn)定性受到影響；在超聲功率為150 W時，超聲對于LCC降解PET來說已經(jīng)是一個不利因素。分析所有數(shù)據(jù)后得到，LCC降解PET的最佳超聲輔助條件是超聲功率25 W、超聲時間5 h，降解24 h后，TPA質(zhì)量濃度從0.72 g/L提升到0.87 g/L。米氏常數(shù)只與LCC的性質(zhì)有關(guān)，而與濃度無關(guān)。因此，米氏常數(shù)的變化說明超聲波處理改變了LCC的結(jié)構(gòu)。LCC降解PET的動力學(xué)參數(shù)見表2。超聲功率為25 W時，最大反應(yīng)速度Vmax是未超聲的1.67倍，Km是未經(jīng)處理的0.85倍，說明超聲功率為25 W時，LCC與PET的親和力更高，降解效率有所提高，反應(yīng)更快。

(a)25 W

(b)50 W

(c)75 W

(d)100 W

(e)125 W

(f)150 W圖3 超聲功率和超聲時間對LCC活性的影響Fig.3 Effect of ultrasonic power and ultrasonic time on the activity of LCC

圖4 單獨超聲處理和共超聲處理對LCC降解PET的影響Fig.4 Effect of ultrasonic treatment alone and co-ultrasonic treatment on degradation of PET by LCC

2.3.2 單獨超聲處理和共超聲處理對LCC降解PET的影響

研究了單獨超聲處理和共超聲處理對LCC降解PET的影響，單獨超聲組是先在最佳超聲條件(25 W超聲5 h)下處理后再用于降解反應(yīng)，共超聲處理是在最佳超聲條件(25 W超聲5 h)下進(jìn)行降解反應(yīng)，結(jié)果如圖4所示。兩種處理方式的降解效率相近，說明單獨超聲處理和共超聲處理對LCC降解PET的影響相同。

2.4 PET的表面結(jié)構(gòu)

為進(jìn)一步說明超聲加速了LCC降解PET，利用SEM分析了超聲功率為25 W、超聲時間為5 h時的PET表面降解情況，結(jié)果如圖5所示。未經(jīng)任何處理的PET表面光滑無凹痕(見圖5(a))，超聲和未加LCC都不會改變PET的結(jié)構(gòu)(見圖5(b)

表2 LCC降解PET的動力學(xué)參數(shù)Table 2 Kinetics parameters for PET biodegradation by LCC

和5(c))。加入LCC但未經(jīng)超聲處理條件下降解5 h后，其表面出現(xiàn)明顯凹凸不平的裂痕、凹槽、顆粒感(見圖5(d))，而在25 W超聲輔助下，PET的表面破壞更加明顯，出現(xiàn)了更多的裂痕、凹槽和碎片化(見圖5(e)和5(f))。這說明相比于未超聲，25 W超聲加速了LCC對PET的降解。

(a)未經(jīng)任何處理

(b)緩沖液中未加酶也未超聲

(c)25 W超聲未加酶

(d)加酶未超聲

(e)25 W超聲加酶(100×)

(f)25 W超聲加酶(500×)圖5 不同處理條件下的PET表面掃描電鏡圖Fig.5 SEM photos of PET surface under different processing conditions

2.5 不同超聲功率對LCC二級結(jié)構(gòu)的影響

蛋白質(zhì)的二級結(jié)構(gòu)是指多肽鏈主鏈在空間中的規(guī)則折疊和纏繞，這取決于氨基酸殘基的非側(cè)鏈基團(tuán)之間的氫鍵[54]；LCC二級結(jié)構(gòu)的變化可以說明超聲輔助降解PET的原因。主要的蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)有α-螺旋、β-轉(zhuǎn)角、β-折疊和無規(guī)則卷曲，就支撐蛋白結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性而言，α-螺旋>β-轉(zhuǎn)角>β-折疊>無規(guī)則卷曲，但就功能而言，酶的活性中心通常是在無規(guī)則卷曲結(jié)構(gòu)中[55]。

2.5.1 圓二色光譜分析

采用CD來檢測和計算不同超聲功率超聲5 h后的二級結(jié)構(gòu)的差異，結(jié)果如圖6所示。與未經(jīng)處理的結(jié)果相比，超聲功率為25 W時，無規(guī)則卷曲結(jié)構(gòu)所占比例為45.4%，明顯高于未經(jīng)處理的34.2%，β-折疊結(jié)構(gòu)所占比例為23.3%，降低了35.6%，β-轉(zhuǎn)角結(jié)構(gòu)所占比例為14%，降低了15.5%，而α-螺旋結(jié)構(gòu)所占比例為17.3%，高于其他超聲處理組。結(jié)果說明，25 W超聲時，不僅會加速降解效率，而且對LCC的穩(wěn)定性影響較小。

(a)圓二色光譜

(b)二級結(jié)構(gòu)占比圖6 不同超聲功率處理后LCC的CD和二級結(jié)構(gòu)占比Fig.6 CD and the proportion of secondary structure of LCC after treatment with different ultrasonic power

2.5.2 傅里葉變換紅外光譜分析

采用FT-IR來檢測和計算不同超聲功率超聲5 h后的二級結(jié)構(gòu)的差異，在LCC的紅外光譜圖中，主要由LCC二級結(jié)構(gòu)的紅外吸收子峰疊加而形成的酰胺Ⅰ帶是LCC二級結(jié)構(gòu)變化的敏感區(qū)域。因此，選擇酰胺Ⅰ帶(1 600～1 700 cm-1)譜圖，使用PeakFit v4.12軟件，進(jìn)行基線校正、Savitsk-Golay函數(shù)平滑、高斯去卷積和多次二階導(dǎo)數(shù)擬合處理，不同超聲功率下超聲5 h后的LCC二級結(jié)構(gòu)定性定量信息如圖7所示。未經(jīng)處理時，無規(guī)則卷曲結(jié)構(gòu)所占比例為27.4%，低于所有超聲處理組，說明超聲處理后，LCC二級結(jié)構(gòu)逐漸轉(zhuǎn)向無序化；未經(jīng)超聲處理時，α-螺旋結(jié)構(gòu)所占比例為32.8%，β-折疊結(jié)構(gòu)所占比例為20.3%，都高于所有超聲處理組，說明超聲處理后，LCC二級結(jié)構(gòu)整體有從α-螺旋、β-折疊向無規(guī)則卷曲轉(zhuǎn)變的趨勢，進(jìn)而說明超聲會加速LCC降解PET，但其穩(wěn)定性會受到一定程度的影響。

(a)0 W

(b)25 W

(c)50 W

(d)75 W

(e)100 W

(f)125 W

(g)150 W

(h)二級結(jié)構(gòu)占比圖7 不同超聲功率處理后LCC的FT-IR譜圖和二級結(jié)構(gòu)占比Fig.7 FT-IR spectra and the proportion of secondary structure of LCC after treatment with different ultrasonic power

李冰等[56]研究了超聲對過氧化氫酶二級結(jié)構(gòu)的影響，研究結(jié)果顯示，超聲處理后過氧化氫酶的α-螺旋、β-折疊結(jié)構(gòu)均有下降，其中β-折疊結(jié)構(gòu)下降明顯，下降了12.3%；β-轉(zhuǎn)角、無規(guī)則卷曲結(jié)構(gòu)含量增加，過氧化氫酶的二級結(jié)構(gòu)整體呈現(xiàn)出由有序向無序變化的趨勢。本研究中，經(jīng)超聲處理后的LCC二級結(jié)構(gòu)由α-螺旋、β-折疊向無規(guī)則卷曲轉(zhuǎn)變；這說明經(jīng)過超聲作用后LCC的結(jié)構(gòu)變得更加無序，LCC的性質(zhì)也因此發(fā)生了相應(yīng)的變化。

3 結(jié)論

結(jié)果表明，超聲可以加速LCC降解PET，最佳反應(yīng)條件為65 ℃，pH=8.0，超聲功率為25 W，超聲時間5 h。在此超聲輔助條件下，降解24 h后PET的降解效率是未超聲的1.21倍，TPA質(zhì)量濃度從0.72 g/L增加到0.87 g/L，值得高度重視。

通過掃描電鏡證實了超聲對LCC降解PET的影響，相比于未經(jīng)處理，25 W超聲功率下超聲5 h確實可以加速PET的降解。此外，圓二色光譜和傅里葉變換紅外光譜檢測LCC二級結(jié)構(gòu)的變化可用于解釋超聲加速LCC降解PET的原因，即LCC二級結(jié)構(gòu)整體上從α-螺旋和β-折疊向無規(guī)則卷曲轉(zhuǎn)變，進(jìn)而造成其活性的變化。這為超聲加速降解提供了一定的理論依據(jù)，同時也可作為超聲輔助的其他酶促反應(yīng)的參考，也為白色污染的生物降解開創(chuàng)了新思路。