八月瓜根際AM真菌資源調(diào)查

陶光耀，趙晨心，遲煥星

(貴州農(nóng)業(yè)職業(yè)學(xué)院，貴陽(yáng) 551400)

AM真菌是一種通過(guò)與植物根系產(chǎn)生互惠共生系統(tǒng)，彼此交換生長(zhǎng)發(fā)育所需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的一類內(nèi)生真菌[1]。在提高果樹抗逆性、抗病、提高果實(shí)品質(zhì)、促進(jìn)植株的生長(zhǎng)代謝以及改善植物對(duì)礦質(zhì)營(yíng)養(yǎng)的吸收具有顯著作用。AM真菌與桃樹[2]、梨樹[3]、葡萄[4]、藍(lán)莓[5-6]等20余種果樹均能產(chǎn)生叢枝結(jié)構(gòu)[7]。但八月瓜根際AM真菌的調(diào)查還未見報(bào)道。八月瓜是一種藥食兩用的木通科藤本植物，別稱木通子、八月札、八月炸、預(yù)知子、臘瓜、野香蕉等。在我國(guó)分布于云南、貴州、四川、湖北、江西和西藏東南部海拔600～2 600 m的山坡、山谷密林等地[8]。因其富含多種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)以及多酚、黃酮、抗衰老等成分，具有較高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，在藥用方面，其果皮、果實(shí)、葉、藤莖、根均可入藥[9]。本實(shí)驗(yàn)取樣于貴州百宜八月瓜種植基地的根際土壤，對(duì)AM真菌進(jìn)行分離，通過(guò)比較形態(tài)學(xué)方法進(jìn)行菌種鑒定，分析其AM真菌的多樣性，篩選優(yōu)勢(shì)種屬。旨在為后續(xù)研究八月瓜與AM真菌的共生系統(tǒng)提供參考。

1 材料與方法

1.1 土樣采集

2021年10月，在貴州百宜八月瓜種植基地(26°49′54″N，106°56′17″E)采集植株根際土壤14份，采集時(shí)去表面2 cm的腐殖土層，采距地表5～15 cm 土層中的根際土壤1.5 kg左右，裝入封口袋，土壤經(jīng)風(fēng)干之后放于4 ℃的冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 AM真菌孢子的分離和鑒定

每份風(fēng)干的土樣中取50 g，采用濕篩傾注-蔗糖離心法，分離AM真菌孢子，挑取具有代表性的成熟和幼齡孢子[10]。置于生物顯微鏡下觀察孢子的大小、顏色、形狀、孢子壁的層數(shù)、厚度，連孢菌絲的形狀，菌絲壁，連孔連通情況以及孢子表面有無(wú)紋飾或附著物、孢子內(nèi)含物以及在 Melzer’s 試劑和棉藍(lán)試劑染色中的反應(yīng)等特征[11]。依據(jù)Mycobank Database(http://www.mycobank.org/)、Schnck和perez編著的《Manual for the identification of VA mycorrhizal fungi》、INVAM 網(wǎng)(http://invam.wvu.edu/home)和波蘭農(nóng)業(yè)大學(xué)(http://www.zor.zut.edu.pl/)上提供的圖片和種屬描述，并參閱其他有關(guān)分類資料和近年來(lái)發(fā)表的新種，新記錄種，按照球囊菌門叢枝菌根真菌最新分類系統(tǒng)菌種名錄進(jìn)行分類[12]。

1.3 AM 真菌多樣性指標(biāo)測(cè)定方法

按上述孢子分離方法，每個(gè)土樣重復(fù)3次測(cè)定以下指標(biāo)：

孢子密度(SD):50 g風(fēng)干土樣中孢子的總數(shù)。

頻度(F):(AM真菌某屬或種出現(xiàn)次數(shù)/土樣數(shù))×100%。

相對(duì)多度(RA):該采樣點(diǎn)某種孢子數(shù)占該采樣點(diǎn)總孢子數(shù)的比例。

重要值(I):頻度和相對(duì)多度的平均值，I=(F+RA)/2。

等級(jí)(Dom)：將AM真菌優(yōu)勢(shì)度按重要值(I)劃分為4個(gè)等級(jí)(A、B、C、D)，A：I>60% 為優(yōu)勢(shì)屬(種)，B：40%

2 結(jié)果與分析

2.1 AM真菌種類鑒定

經(jīng)對(duì)八月瓜13份根際土樣AM真菌的分離，共鑒定得AM真菌7屬17種(見表1，圖1)。

表1 AM真菌物種

2.2 八月瓜AM真菌多樣性分析

貴州百宜八月瓜種植基地共鑒定出7屬17種AM真菌，通過(guò)對(duì)重要值的計(jì)算比較(表2、表3)，未出現(xiàn)I>60%等級(jí)為A的種屬，故此將重要值40%

表2 八月瓜根際AM真菌種多樣性指標(biāo)

表3 八月瓜根際AM真菌屬多樣性指標(biāo)

3 結(jié)果與討論

研究結(jié)果表明，通過(guò)對(duì)八月瓜根際土壤AM真菌的分離，鑒定出7屬17種。但在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)土壤中依然存有部分未知種，說(shuō)明八月瓜根際AM真菌資源豐富。在已鑒定出的品種中初步判定幼套近明球囊霉為優(yōu)勢(shì)菌種，該結(jié)果可作為后續(xù)繁育八月瓜共生菌株的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

注：1為柯氏無(wú)梗囊霉[14]；2為細(xì)凹無(wú)梗囊[13]；3為椒紅無(wú)梗囊霉[13]；4為大型無(wú)梗囊霉[14]；5為空洞無(wú)梗囊霉[13]； 6為幼套近明球囊霉[15]；7為近明球囊霉[16]；8為珠狀巨孢囊霉[13]；9為美麗盾巨孢囊霉[13]；10為多梗球囊霉[13]；11為卷曲球囊霉[13]；12為懸鉤子硬囊霉[13]；13為棒孢硬囊霉[13]；14為臺(tái)灣硬囊霉[13]；15為高山隔球囊[17]；16為叉狀隔球囊霉[18]；17為縮隔球囊霉[13]。圖1 AM真菌物種形態(tài)(此圖彩色版見封三)