不同儲(chǔ)藏條件對黨參片質(zhì)量的影響

韓喜桃，唐雅楠，劉子琴，包麗媛，韓 舒，劉凱洋，王宏月，郭曉光，李衛(wèi)飛，杜 紅*，胡芳弟

不同儲(chǔ)藏條件對黨參片質(zhì)量的影響

韓喜桃1，唐雅楠1，劉子琴1，包麗媛1，韓 舒1，劉凱洋1，王宏月1，郭曉光2，李衛(wèi)飛3，杜 紅1*，胡芳弟4

1. 北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院，北京 102488 2. 天津森羅科技股份有限公司，天津 300000 3. 中國北京同仁堂（集團(tuán)）有限責(zé)任公司，北京 100062 4. 蘭州大學(xué)藥學(xué)院，甘肅 蘭州 730000

考察不同儲(chǔ)藏條件對黨參片質(zhì)量的影響。制備低（水分≤10%）、中（10%＜水分≤13%）、高（13%＜水分≤16%）3種不同水分的黨參片，于室溫、陰涼、冷藏、加速（高溫高濕）、低氧氣調(diào)養(yǎng)護(hù)條件下儲(chǔ)藏4個(gè)月，考察其外觀性狀、色度、水分、灰分、浸出物、總黃酮、總皂苷及總糖含量的變化，綜合評(píng)價(jià)不同儲(chǔ)藏條件對各水分黨參片質(zhì)量的影響。各水分黨參片在儲(chǔ)藏過程中，中、高水分（＞10%）黨參片在常溫儲(chǔ)藏中發(fā)生不同程度的蟲蛀，且高水分黨參片在常溫儲(chǔ)藏3、4個(gè)月時(shí)灰分不符合藥典規(guī)定，常溫儲(chǔ)藏的高水分黨參片在儲(chǔ)藏4個(gè)月時(shí)浸出物顯著下降。同時(shí)，常溫儲(chǔ)藏的各水分黨參片的總皂苷、總黃酮、總糖含量大多低于陰涼、冷藏及低氧氣調(diào)養(yǎng)護(hù)儲(chǔ)藏。黨參片儲(chǔ)藏過程中，蟲蛀程度與黨參片水分、儲(chǔ)藏溫度、濕度、氧含量有關(guān)，總皂苷含量與儲(chǔ)藏溫度、濕度、氧含量有關(guān)，總黃酮含量與氧含量有關(guān)，總糖含量與儲(chǔ)藏溫度、濕度有關(guān)，故在常氧條件下應(yīng)控制其儲(chǔ)藏溫度不高于20 ℃，黨參片水分低于10%；在低氧條件下，儲(chǔ)藏溫度、濕度、黨參片含水量相對不受限。且儲(chǔ)藏時(shí)儲(chǔ)藏溫度、濕度、氧含量、黨參片水分越低其儲(chǔ)藏效果越好。

黨參片；儲(chǔ)藏條件；質(zhì)量評(píng)價(jià)；色度；總黃酮；總皂苷；總糖

黨參為桔?？泣h參屬植物黨參(Franch.) Nannf.、素花黨參Nannf. var.(Nannf.) L. T. Shen或川黨參Oliv.的干燥根，具有健脾益肺、養(yǎng)血生津的功效，臨床用于治療食少倦怠、咳嗽虛喘、心悸氣短、津傷口渴等病癥[1]?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，黨參有保護(hù)神經(jīng)、調(diào)節(jié)血糖、增強(qiáng)機(jī)體免疫力、抗腫瘤、抗疲勞及抗?jié)兊榷喾N作用[2-7]。

黨參的功效組分如糖、皂苷、黃酮等物質(zhì)極易受溫度、濕度、氧氣等影響而發(fā)生分解[8-10]，從而嚴(yán)重影響到黨參片的臨床功效。并且黨參片在儲(chǔ)藏過程中，因其含有蛋白質(zhì)和糖等蛀蟲所需養(yǎng)分[11]，稍有不慎就被蟲蛀成洞孔，甚至蛀空，造成損失，有效成分減少從而降低了療效以至不能藥用，造成很大的經(jīng)濟(jì)損失[12]。而蟲蛀的發(fā)生與溫度、濕度、氧氣有關(guān)。文獻(xiàn)表明，溫度為22～32 ℃，飲片含水量10%～15%極易發(fā)生蟲蛀[13]。而在低氧條件下，防蟲效果顯著[14]。因此，防止蟲蛀大多都認(rèn)為要減少中藥本身含水量，降低溫度、濕度，需密封[15-16]。綜上，將儲(chǔ)藏條件的溫度、濕度、氧氣加以控制，可有效避免傳統(tǒng)散裝黨參片存在的有效成分散失、蟲蛀等問題。故本研究以非真空包裝的不同水分的黨參片為研究對象，在不同儲(chǔ)藏條件（常溫、陰涼、冷藏、加速、低氧氣調(diào)養(yǎng)護(hù)）下定期考察飲片的外觀性狀、色度、水分、浸出物、總灰分、總皂苷、總黃酮及總糖含量，通過考察儲(chǔ)藏條件對黨參片內(nèi)外質(zhì)量的影響，以期明確黨參片的儲(chǔ)藏效果與水分有無關(guān)聯(lián)性，為確定黨參的儲(chǔ)藏養(yǎng)護(hù)條件提供理論參考。

1 儀器與材料

1.1 儀器

CDZG-0.22WS-S高氣密恒濕柜，天津森羅科技股份有限公司；EPOCH酶標(biāo)儀，美國伯騰儀器有限公司；CM-5分光測色計(jì)，日本Konica Minolta公司；SX2-2.5-10A 箱式電阻爐，紹興市上虞道墟科析儀器廠；BT 125D電子分析天平，十萬分之一，Sartorius公司；FA1104B電子分析天平，萬分之一，上海越平科學(xué)儀器有限公司；HH-S6電熱恒溫水浴鍋，北京科偉永興儀器有限公司；DHG-9123A電熱鼓風(fēng)干燥箱、BPS-100CA恒溫恒濕箱，上海一恒科學(xué)儀器有限公司。

1.2 試劑

對照品蘆?。ㄅ?hào)Y24F11Y17051）、三七皂苷R1（批號(hào)G09D10Y104881）、葡萄糖（批號(hào)S08J6G1），質(zhì)量分?jǐn)?shù)均＞98%，購于上海源葉生物科技有限公司；乙醇、冰醋酸、高氯酸、濃硫酸、石油醚（60～90 ℃）為分析純；水為雙蒸水，其余試劑為分析級(jí)。

1.3 材料

黨參藥材購于甘肅，經(jīng)北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥鑒定系王晶娟教授鑒定為桔?？泣h參屬植物素花黨參Nannf. var.(Nannf.) L. T. Shen的干燥根。

2 方法與結(jié)果

2.1 不同水分黨參片的制備及不同儲(chǔ)藏條件處理

2.1.1 低水分黨參片 取凈制后黨參藥材，潤透，切厚片，于40 ℃烘12 h，檢測水分（烘干法），水分含量為8.27%。

2.1.2 中水分黨參片 取凈制后黨參藥材，潤透，切厚片，于40 ℃烘8 h，檢測水分（烘干法），水分含量為11.71%。

2.1.3 高水分黨參片 取凈制后黨參藥材，潤透，切厚片，于40 ℃烘2 h，檢測水分（烘干法），水分含量為14.65%。

2.1.4 不同儲(chǔ)藏條件處理 取上述不同水分的黨參片，用牛皮紙凝膜紙袋打包，于室溫、陰涼、冷藏、加速（高溫高濕）、低氧（氧氣濃度0.2%以下）氣調(diào)養(yǎng)護(hù)條件下儲(chǔ)藏4個(gè)月（表1），其中，常溫，學(xué)校常溫庫放置；陰涼，學(xué)校陰涼庫放置；冷藏，冷藏柜放置；加速（高溫高濕），恒溫恒濕箱放置；低氧氣調(diào)，高氣密恒濕柜放置。每月取樣觀察飲片外觀性狀及蟲蛀率，并分別測定各黨參片色度、水分、總灰分、浸出物、總黃酮、總皂苷、總糖的含量。

表1 儲(chǔ)藏條件信息

Table 1 Storage condition information

儲(chǔ)藏條件儲(chǔ)藏溫度/℃濕度/%氧氣 常溫23±320～70常氧 加速40±275±5常氧 陰涼15±330～70常氧 冷藏4±220～50常氧 低氧氣調(diào)養(yǎng)護(hù)21±335±7低氧

2.2 外觀性狀

取不同儲(chǔ)藏條件下的各黨參片，分別于每月取樣觀察飲片外觀性狀、蟲蛀情況，結(jié)果見表2。

蟲蛀率＝被蟲蛀的黨參片質(zhì)量/總黨參片質(zhì)量

結(jié)果表明，在常溫儲(chǔ)藏條件下，高水分黨參片儲(chǔ)藏1個(gè)月時(shí)出現(xiàn)蟲蛀現(xiàn)象；低水分和中水分黨參片儲(chǔ)藏2個(gè)月時(shí)出現(xiàn)蟲蛀現(xiàn)象；儲(chǔ)藏至4個(gè)月時(shí)，蟲蛀率為高水分黨參片（36%）＞中水分黨參片（3%）＞低水分黨參片（0）（圖1）?？梢姡貎?chǔ)藏條件的溫度、濕度、氧含量均利于蟲蛀的發(fā)生，且黨參片水含量越高，蟲蛀率越高，黨參片水含量是影響其蟲蛀率的主要因素。在加速儲(chǔ)藏條件下，各黨參片均無蟲蛀，推測是其溫度（40 ℃）不利于印度谷螟生長，這與魯玉杰等[17]的結(jié)論（35 ℃由于高溫不適導(dǎo)致卵無存活）一致；在陰涼、冷藏、低氧氣調(diào)儲(chǔ)藏條件下，無蟲蛀發(fā)生，說明低溫、低氧可抑制生蟲[18-19]。

表2 不同儲(chǔ)藏條件各水分黨參片性狀觀測結(jié)果

Table 2 Observation results of properties of CRP with different moisture under different storage conditions

樣品儲(chǔ)存時(shí)間/月常溫加速陰涼冷藏低氧氣調(diào) 低水分黨參片0外表皮呈黃灰色，橫切面皮部呈淡黃色，木質(zhì)部呈黃色，部分可見裂隙或放射狀紋理，質(zhì)地硬，有特殊香氣，味微甜 1無明顯變化橫切面顏色加深無明顯變化無明顯變化無明顯變化 2發(fā)現(xiàn)蛹橫切面顏色加深無明顯變化無明顯變化無明顯變化 3蟲蛀率0橫切面顏色加深無明顯變化無明顯變化無明顯變化 4蟲蛀率0橫切面顏色加深無明顯變化無明顯變化無明顯變化 中水分黨參片0外表皮呈黃灰色，橫切面皮部呈淡黃色，木質(zhì)部呈黃色，部分可見裂隙或放射狀紋理，質(zhì)地硬，有特殊香氣，味微甜 1無明顯變化橫切面顏色加深無明顯變化無明顯變化無明顯變化 2出現(xiàn)拉絲，蛹，幼蟲橫切面顏色加深無明顯變化無明顯變化無明顯變化 3蟲蛀率1.3%橫切面顏色加深無明顯變化無明顯變化無明顯變化 4蟲蛀率3%橫切面顏色加深無明顯變化無明顯變化無明顯變化 高水分黨參片0外表皮呈黃灰色，橫切面皮部呈淡黃棕色，木質(zhì)部呈深黃色，部分可見裂隙或放射狀紋理，質(zhì)地較硬，有濃郁的特殊香氣，味微甜 1出現(xiàn)拉絲，蛹，幼蟲橫切面顏色加深無明顯變化無明顯變化質(zhì)地變硬 2蟲蛀率13%橫切面顏色加深無明顯變化無明顯變化質(zhì)地變硬 3蟲蛀率23%橫切面顏色加深無明顯變化無明顯變化質(zhì)地變硬 4蟲蛀率36%橫切面顏色加深無明顯變化無明顯變化質(zhì)地變硬

2.3 顏色測定

2.3.1 供試品的制備 取各黨參片，粉碎，過2號(hào)篩，備用。

2.3.2 色度測量條件的確定 起止波長350～750 nm；色彩空間CIE，*、*、*；儀器測量口徑8 mm；視場選擇：10度視角；測量光源為D65；標(biāo)準(zhǔn)偏差Δ*ab≤0.04；數(shù)據(jù)處理軟件為Spectra Magic NX。

2.3.3 精密度考察 取低水分黨參片粉末，按“2.3.2”項(xiàng)下色度測定條件連續(xù)測量6次，記錄*、*、*，并計(jì)算*、*、*的RSD值分別為0.32%、0.81%、0.49%，表明色差儀精密度良好。

2.3.4 重復(fù)性考察 取低水分黨參片粉末6份，按照“2.3.2”項(xiàng)下色度測定條件進(jìn)行6份樣品顏色測定，記錄*、*、*值，并計(jì)算*、*、*的RSD值分別為0.26%、0.95%、0.71%，表明方法重復(fù)性良好。

圖1 常溫儲(chǔ)藏4個(gè)月各黨參片蟲蛀情況

2.3.5 穩(wěn)定性考察 取低水分黨參片粉末，分別于0、2、4、6、8、10、12 h，按照“2.3.2”項(xiàng)下色度測定條件進(jìn)行樣品顏色測定，記錄*、*、*值，并計(jì)算*、**的RSD值分別為0.20%、0.51%、0.29%，表明樣品在12 h內(nèi)色度值穩(wěn)定性良好。

2.3.6 黨參片色度值的測定 取各黨參片粉末，按“2.3.2”項(xiàng)下色度測量條件測量，分別記錄代表飲片粉末顏色的*、*、*，每份供試品重復(fù)3次，取平均值，并計(jì)算*、*、*的RSD值。

色差儀數(shù)據(jù)明度（*）代表亮度，*越大，亮度越大；*代表紅綠相，負(fù)值代表綠色，正值代表紅色；*代表黃藍(lán)相，負(fù)值代表藍(lán)色，正值代表黃色；為顏色的總色差，總色差值用公式＝(*2＋*2＋*2)1/2計(jì)算得出。

色差儀測定不同儲(chǔ)藏條件下各黨參片粉末色澤變化（圖2），可知各黨參片在加速條件下波動(dòng)性最大，表明高溫高濕對黨參片色澤影響大。在儲(chǔ)藏過程中，高水分黨參片色澤波動(dòng)性明顯大于低水分、中水分黨參片，表明高水分黨參片在儲(chǔ)藏中色澤更易受到影響。

圖2 不同儲(chǔ)藏條件下各黨參片的色澤變化

2.4 黨參水分、灰分、浸出物測定

參照《中國藥典》2020年版四部水分測定法（［通則0832］）[20]烘干法、灰分測定法（［通則2303］）[20]、浸出物測定法（［通則2201］）[20]項(xiàng)下的熱浸法測定各黨參片水分、灰分、浸出物。結(jié)果見表3和圖3。在不同的儲(chǔ)藏條件下，低水分黨參片水分隨時(shí)間變化較大，特別是在加速與陰涼儲(chǔ)藏條件中，因其易吸潮引起水分上升；中水分黨參片在儲(chǔ)藏過程中水分相對比較穩(wěn)定；高水分黨參片在低氧氣調(diào)儲(chǔ)藏中水分下降，可能為儲(chǔ)藏環(huán)境濕度低導(dǎo)致失水。高水分黨參片儲(chǔ)藏至3、4個(gè)月時(shí)，總灰分超標(biāo)；同時(shí)儲(chǔ)藏4個(gè)月后，高水分黨參片浸出物含量下降（＜0.01），推測與其發(fā)生蟲蛀及蟲蛀率有關(guān)。其余樣品均符合藥典規(guī)定。

2.5 黨參總皂苷類成分測定

2.5.1 對照品的制備 取三七皂苷R1對照品10.30 mg，加甲醇，超聲使之溶解，并用甲醇定容至50 mL量瓶中，搖勻，即得。

2.5.2 線性關(guān)系考察 精密量取三七皂苷R1對照品溶液0、0.1、0.2、0.4、0.8、1.0、1.2 mL至試管中，揮干，精密加入5%香草醛-冰醋酸溶液0.2 mL，高氯酸0.8 mL，搖勻后至60 ℃水浴30 min后，立即取出置冷水中冷卻，準(zhǔn)確加入冰醋酸5.0 mL，搖勻，放置30 min，在536 nm波長處測定其吸光度（）。以536 nm處的值為縱坐標(biāo)（），樣品質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（），得線性回歸方程＝14.554－0.005 9，＝0.999 6，結(jié)果表明三七皂苷R1在20.60～247.20 μg/mL與值具有良好的線性關(guān)系。

表3 不同儲(chǔ)藏條件下各黨參片的水分、灰分變化 (, n = 3)

Table 3 Color changes of CRP under different storage conditions (, n = 3)

樣品儲(chǔ)存時(shí)間/月水分/%灰分/% 常溫加速陰涼冷藏低氧氣調(diào)常溫加速陰涼冷藏低氧氣調(diào) 低水分08.27±0.054.45±0.13 黨參片19.34±0.1811.67±0.089.27±0.059.03±0.0810.01±0.094.43±0.104.55±0.074.53±0.094.51±0.064.56±0.03 29.23±0.111.65±0.0311.02±0.1410.07±0.310.51±0.014.49±0.484.59±0.524.59±0.274.48±0.104.60±0.06 310.33±0.1811.05±0.099.23±0.089.41±0.149.56±0.054.54±0.104.46±0.034.69±0.014.45±0.064.51±0.03 49.85±0.1311.46±0.059.57±0.049.4±0.039.71±0.094.56±0.114.57±0.154.69±0.084.53±0.034.65±0.09 中水分011.71±0.044.56±0.02 黨參片111.67±0.1712.13±0.0711.40±0.0311.07±0.0110.37±0.104.44±0.094.57±0.034.56±0.054.49±0.044.52±0.05 211.82±0.0611.73±0.0211.10±0.0812.49±0.0910.75±0.084.55±0.294.59±0.334.61±0.174.52±0.084.50±0.01 312.22±0.0411.63±0.1511.07±0.0411.42±0.129.74±0.084.69±0.104.63±0.084.70±0.174.57±0.074.55±0.04 412.14±0.1412.72±0.0811.13±0.0211.17±0.069.52±0.044.80±0.104.68±0.024.73±0.074.47±0.054.32±0.01 高水分014.65±0.164.75±0.05 黨參片114.51±0.2415.45±0.0914.90±0.0314.84±0.3113.31±0.054.86±0.084.87±0.064.81±0.124.49±0.054.52±0.02 215.39±0.0714.87±0.0914.46±0.0514.83±0.0214.15±0.124.93±0.054.88±0.244.79±0.504.55±0.044.64±0.01 315.78±0.1017.86±0.0414.41±0.0414.56±0.3612.78±0.155.11±1.364.81±0.144.77±0.094.72±0.034.84±0.06 414.92±0.1015.18±0.1515.62±0.0214.38±0.0811.37±0.075.30±0.174.84±0.204.81±0.054.73±0.024.48±0.08

圖3 不同儲(chǔ)藏條件下各水分黨參片浸出物變化

2.5.3 供試品溶液的制備 取黨參樣品粉末0.2 g，精密稱定，置100 mL錐形瓶中，加入石油醚（60～90 ℃）20 mL，超聲提取20 min，提取2次，濾過。濾渣中加入50%乙醇20 mL，超聲20 min，提取2次，合并濾液，加50%乙醇定容至50 mL，即得。

2.5.4 精密度試驗(yàn) 精密移取皂苷對照品溶液0.5 mL 6份，按“2.5.2”項(xiàng)下方法測定其值，并計(jì)算值的RSD值。RSD值為0.31%，表明儀器精密度良好。

2.5.5 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱取黨參片粉末0.2 g ,共6份，按“2.5.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.5.2”項(xiàng)下方法測定其值，并計(jì)算值的RSD值。RSD值為1.22%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.5.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密稱取黨參片粉末0.2 g ,按“2.5.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.5.2”項(xiàng)下方法于30 min、1 h、2 h、3 h、4 h、5 h、6 h時(shí)測定其值，并計(jì)算值的RSD值。RSD值為1.54%，表明6 h內(nèi)總皂苷穩(wěn)定性良好。

2.5.7 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取6份已測定含量的黨參片粉末0.2 g，按“2.5.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，分別加入一定量的對照品溶液制得樣品，按“2.5.2”項(xiàng)下方法測定其值，并計(jì)算其回收率與RSD值。加樣回收率為100.7%，RSD為1.36%。

2.5.8 黨參片總皂苷含量測定 取各黨參片按上述方法進(jìn)行測定，測定結(jié)果見圖4。各水分黨參片在儲(chǔ)藏4個(gè)月中，總皂苷含量呈先下降后上升的趨勢（圖4）。其中以加速變化率較大（低水分黨參片為?30.01%，中水分黨參片為?23.88%，高水分黨參片為?17.91%），低氧氣調(diào)最穩(wěn)定（低水分黨參片為3.60%，中水分黨參片為?1.67%，高水分黨參片為8.20%）。儲(chǔ)藏4個(gè)月后，低水分黨參片（圖4-A）總皂苷含量：冷藏＞低氧氣調(diào)、陰涼＞常溫＞加速（＜0.01）。中水分黨參片（圖4-B）：低氧氣調(diào)＞冷藏＞加速＞陰涼＞常溫（＜0.01)。高水分黨參片（圖4-C）：陰涼＞冷藏、低氧氣調(diào)＞加速＞常溫 （＜0.01)，冷藏、低氧氣調(diào)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異?？梢姡钥傇碥諡橹笜?biāo)時(shí)，各黨參片在低溫低濕低氧環(huán)境中儲(chǔ)藏效果較好，常溫儲(chǔ)藏效果較差。

2.6 黨參總黃酮類成分測定

2.6.1 對照品的制備 取干燥至恒定質(zhì)量的蘆丁對照品9.03 mg，加體積分?jǐn)?shù)為70%乙醇，超聲使之溶解，并用70%乙醇定容至50 mL量瓶中，搖勻，即得。

2.6.2 線性關(guān)系考察 將制備的蘆丁對照品溶液精密量取0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2 mL至量瓶中，分別加入5% NaNO2溶液1 mL，混勻并靜置6 min；加入10% Al(NO3)3溶液1 mL，混勻并放置5 min；再加入5% NaOH溶液10 mL，混勻；最后加入體積分?jǐn)?shù)為70%乙醇定容至25 mL，放置10 min，在510 nm處測定值。以510 nm處的值為縱坐標(biāo)（），樣品質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（），得線性回歸方程＝6.842 3＋0.000 7，＝0.999 4，結(jié)果表明蘆丁在36.12～216.72 μg/mL與值具有良好的線性關(guān)系。

圖4 低(A)、中(B)、高(C)水分黨參片在不同儲(chǔ)藏條件下總皂苷含量變化

2.6.3 供試品溶液的制備 精密稱取2.00 g黨參粉，按照料液比1∶20加入體積分?jǐn)?shù)為80%乙醇，超聲提取30 min，濾過，并獲得濾液。將濾液轉(zhuǎn)移到100 mL量瓶中定容，得供試品溶液。

2.6.4 精密度試驗(yàn) 精密移取蘆丁對照品溶液2 mL 6份，按“2.6.2”項(xiàng)下方法測定其值，并計(jì)算值的RSD值。RSD值為0.67%，表明儀器精密度良好。

2.6.5 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱取黨參片粉末2 g，共6份，按“2.6.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.6.2”項(xiàng)下方法測定其值，并計(jì)算值的RSD值。RSD值為1.48%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.6.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密稱取黨參片粉末2 g ,按“2.6.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.6.2”項(xiàng)下方法于0、30、60、90、120、150、180 min時(shí)測定其值，并計(jì)算值的RSD值。RSD值為1.38%，表明180 min內(nèi)總黃酮穩(wěn)定性良好。

2.6.7 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取6份已測定含量的黨參片粉末2 g，按“2.6.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，分別加入一定量的蘆丁對照品溶液制得樣品，按“2.6.2”項(xiàng)下方法測定其值，并計(jì)算其回收率與RSD值。加樣回收率為98.6%，RSD為2.14%。

2.6.8 黨參片總黃酮含量測定 取各黨參片按上述方法進(jìn)行測定，測定結(jié)果見圖5。各水分黨參片儲(chǔ)藏4個(gè)月，總黃酮含量變化趨勢趨于一致（圖5）。其中以低氧氣調(diào)儲(chǔ)藏條件下總黃酮含量最高。儲(chǔ)藏4個(gè)月后，低水分黨參片的總黃酮含量（圖5-A）：低氧氣調(diào)＞陰涼＞冷藏、加速、常溫（＜0.01），冷藏、加速＞常溫（＜0.05）。中水分黨參片（圖5-B）：低氧氣調(diào)、陰涼＞冷藏＞加速＞常溫（＜0.01），低氧氣調(diào)、陰涼無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。高水分黨參片（圖5-C）：低氧氣調(diào)＞加速＞陰涼、冷藏＞常溫（＜0.01），陰涼、冷藏?zé)o統(tǒng)計(jì)學(xué)差異?？梢?，以總黃酮為指標(biāo)時(shí)，各黨參片在低氧氣調(diào)環(huán)境中儲(chǔ)藏效果最好。

圖5 低(A)、中(B)、高(C)水分黨參片在不同儲(chǔ)藏條件下總黃酮含量變化

2.7 黨參總糖類成分測定

2.7.1 對照品的制備 取干燥至恒定質(zhì)量的葡萄糖對照品4.50 mg，加水溶解，并定容至5 mL量瓶中，搖勻，即得。

2.7.2 線性關(guān)系考察 精密量取葡萄糖對照品溶液0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL至試管中，加蒸餾水至2 mL，分別加入6%苯酚溶液1 mL，濃硫酸溶液5 mL，沸水浴20 min后，立即取出，置冷水中冷卻，搖勻，在490 nm波長處測定其值。以490 nm處的值為縱坐標(biāo)（），樣品質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（），得線性回歸方程＝31.748＋0.002 1，＝0.999 2，結(jié)果表明葡萄糖在0.09～0.90 mg/mL與值具有良好的線性關(guān)系。

2.7.3 供試品溶液的制備 取黨參片粉末0.2 g，精密稱定，置100 mL錐形瓶中，加入蒸餾水20 mL，回流1 h，提取2次，濾過，合并濾液后定容至50 mL，即得。

2.7.4 精密度試驗(yàn) 精密移取葡萄糖對照品溶液0.2 mL 6份，按“2.7.2”項(xiàng)下方法測定其值，并計(jì)算值的RSD值。RSD值為0.54%，表明儀器精密度良好。

2.7.5 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱取黨參片粉末0.2 g ,共6份，按“2.7.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.7.2”項(xiàng)下方法測定其值，并計(jì)算值的RSD值。RSD值為1.29%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.7.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密稱取黨參片粉末0.2 g ,按“2.7.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.7.2”項(xiàng)下方法于0、30、60、90、120、150、180 min時(shí)測定其值，并計(jì)算值的RSD值。RSD值為0.91%，表明180 min內(nèi)黨參總糖穩(wěn)定性良好。

2.7.7 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取6份已測定含量的黨參片粉末0.2 g，按“2.7.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，分別加入一定量的葡萄糖對照品溶液制得樣品，按“2.7.2”項(xiàng)下方法測定其值，并計(jì)算其回收率與RSD值。加樣回收率為99.5%，RSD為1.28%。

2.7.8 黨參片總糖含量測定 取各黨參片按上述方法進(jìn)行測定，測定結(jié)果見圖6。黨參片在儲(chǔ)藏4個(gè)月中，在加速儲(chǔ)藏條件中的各水分黨參片總糖含量波動(dòng)最大，最不穩(wěn)定，變化率最大（低水分黨參片為?22.55%，中水分黨參片為?22.16%，高水分黨參片為?21.78%），表明高溫高濕環(huán)境對黨參片總糖含量的影響大，而其它儲(chǔ)藏條件對各水分黨參片的總糖含量影響較小，變化趨勢相對平緩。儲(chǔ)藏4月后，低水分、中水分、高水分黨參片（圖6-A、B、C）的總糖含量：低氧氣調(diào)、陰涼、冷藏＞常溫＞加速（＜0.01），其中，低水分、高水分黨參片：低氧氣調(diào)、陰涼、冷藏?zé)o統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；中水分黨參片：低氧氣調(diào)＞陰涼、冷藏（＜0.01），陰涼、冷藏?zé)o統(tǒng)計(jì)學(xué)差異?？梢?，以總糖為指標(biāo)時(shí)，各黨參片在高溫高濕環(huán)境中儲(chǔ)藏效果最差，常溫次之，而低溫低濕低氧儲(chǔ)藏效果較好。

圖6 低(A)、中(B)、高(C)水分黨參片在不同儲(chǔ)藏條件下總糖含量變化

2.8 數(shù)據(jù)分析

2.8.1 飲片水分對黨參片儲(chǔ)藏效果的影響分析 在對各儲(chǔ)藏條件黨參片中各成分初步分析的基礎(chǔ)上，采用主成分分析（principal component analysis，PCA），進(jìn)一步分析各水分黨參片儲(chǔ)藏效果的異同。通過PCA（圖7）可知，低水分黨參片除加速外，其它儲(chǔ)藏條件聚集明顯，表明低水分黨參片比較穩(wěn)定，在常溫、陰涼、冷藏、低氧氣調(diào)儲(chǔ)藏條件下儲(chǔ)藏效果一致。而中水分、高水分黨參片的儲(chǔ)藏條件呈離散狀態(tài)，表明其在不同儲(chǔ)藏條件下儲(chǔ)藏效果差異較大。且在低氧氣調(diào)儲(chǔ)藏條件下低、中、高水分黨參片聚集明顯，表明飲片水分在其儲(chǔ)藏條件下影響不大。在常溫儲(chǔ)藏條件下，低、中、高水分黨參片最分散，表明飲片水分對其儲(chǔ)藏效果影響大。

2.8.2 儲(chǔ)藏條件對黨參片儲(chǔ)藏效果的影響分析 通過SPSS 24.0軟件對儲(chǔ)藏過程中各黨參片水分、灰分、浸出物、總皂苷、總黃酮、總糖含量及色度值指標(biāo)*、*、*、值與其儲(chǔ)藏溫度、濕度、氧氣含量進(jìn)行相關(guān)性分析（表4），結(jié)果表明黨參片的水分含量與其儲(chǔ)藏濕度成正相關(guān)（＜0.05），說明儲(chǔ)藏濕度較高時(shí)，黨參片就會(huì)吸水，含水量提高；儲(chǔ)藏濕度較低時(shí)，黨參片會(huì)失水，含水量降低，與本研究結(jié)果一致。黨參片的色度*、值與儲(chǔ)藏溫度、濕度成負(fù)相關(guān)（＜0.01），*、*值與其成正相關(guān) （＜0.01），說明儲(chǔ)藏溫度、濕度越高的黨參片其色澤越深。黨參片的總皂苷含量與儲(chǔ)藏溫度、濕度、氧含量成負(fù)相關(guān)（＜0.05），其中濕度影響較大，表明黨參片宜儲(chǔ)藏于低溫低濕低氧環(huán)境中。黨參片的總黃酮含量與儲(chǔ)藏氧含量成負(fù)相關(guān)（＜0.05），表明黨參片宜儲(chǔ)藏于低氧環(huán)境中。黨參片的總糖含量與儲(chǔ)藏溫度、濕度成負(fù)相關(guān)（＜0.01），表明黨參片宜儲(chǔ)藏于低溫低濕環(huán)境中。

3 討論

黨參儲(chǔ)藏過程容易發(fā)生蟲蛀，嚴(yán)重影響臨床用藥的有效性和安全性。而蟲蛀的發(fā)生與儲(chǔ)藏溫度、濕度、氧含量有關(guān)，與飲片水分有無關(guān)系暫無明確定論。吳曉毅等[21]認(rèn)為飲片蟲蛀與較低的含水量之間不存在必然的聯(lián)系，在其研究中供試品水分含量均低于10%，卻發(fā)生嚴(yán)重的蟲蛀現(xiàn)象；靳貴林等[22]認(rèn)為當(dāng)黨參含水量高于15%會(huì)發(fā)生嚴(yán)重的蟲蛀現(xiàn)象，低于13%能有效防止蟲蛀的發(fā)生。故本研究在符合藥典黨參片水分規(guī)定的前提下制備低、中、高不同水分的黨參片，比較其于常溫、陰涼、冷藏3個(gè)傳統(tǒng)儲(chǔ)藏條件與低氧氣調(diào)養(yǎng)護(hù)、加速（高溫高濕）環(huán)境的儲(chǔ)藏效果，探討飲片水分、儲(chǔ)藏條件對其儲(chǔ)藏效果的影響。

圖7 PCA得分圖

表4 儲(chǔ)藏過程中生黨參片各成分含量與其水分、儲(chǔ)藏條件的相關(guān)性分析

Table 4 Correlation analysis between the content of each component of CRP and its moisture and storage conditions during storage

指標(biāo)相關(guān)系數(shù) 溫度濕度氧氣 水分0.1920.307*0.242 總皂苷?0.330*?0.403**?0.303* 總黃酮0.114?0.161?0.289* 總糖?0.771**?0.705**?0.254 L*?0.503**?0.485**?0.207 a*0.691**0.617**0.219 b*0.532**0.463**0.163 E?0.469**?0.459**?0.200

“*”表示在0.05水平顯著相關(guān)，“**”表示在0.01水平極顯著相關(guān)

“*” means significant correlation at the 0.05 level, “**” means extremely significant correlation at the 0.01 level

研究發(fā)現(xiàn)，冷藏、陰涼、加速及低氧氣調(diào)儲(chǔ)藏條件下，黨參片未發(fā)生蟲蛀，而常溫條件下，黨參片發(fā)生蟲蛀。在發(fā)生蟲蛀的黨參片中，高水分黨參片最早出現(xiàn)蟲蛀，且蟲蛀程度與速度與黨參片水分呈正相關(guān)。低水分黨參在2月發(fā)現(xiàn)蛹后就再無變化，推測可能是外部侵染，而低水分黨參片無法提供其生長所必須的環(huán)境，致使其再無變化。黨參富含糖類，極易發(fā)生蟲蛀，會(huì)形成孔洞，產(chǎn)生蛀粉，有的完全蛀成粉狀，失去藥用價(jià)值。一方面藥材經(jīng)蟲蛀后，細(xì)胞及組織結(jié)構(gòu)疏松，害蟲入侵后遺留的糞便等固體物質(zhì)滲入到藥材當(dāng)中，使分子內(nèi)聚力減小，表面能降低而減少粉末的再結(jié)聚，因此其成分含量會(huì)發(fā)生變化[23]。另一方面，蛀蟲又傳播霉菌[24]，導(dǎo)致藥材發(fā)霉，嚴(yán)重的會(huì)引起真菌毒素中毒癥、降低機(jī)體免疫功能、中樞神經(jīng)系統(tǒng)的損害、甚至引起突變、導(dǎo)致畸形和致癌等嚴(yán)重的安全隱患[25-26]。黨參在加工過程中，為避免蟲蛀，常采用硫熏法，但可能會(huì)使有效成分下降，甚至危害健康。因此，儲(chǔ)藏過程中應(yīng)將黨參片干燥，降低其水分，儲(chǔ)藏于低溫、干燥、低氧環(huán)境中可避免蟲蛀發(fā)生。

目前，黨參在《中國藥典》2020年版里僅有性狀、鑒別項(xiàng)，未設(shè)定含量測定指標(biāo)?；邳h參化學(xué)成分特有性、化學(xué)成分有效性及可測性、體內(nèi)作用等綜合分析，將糖、總黃酮、總皂苷等成分作為黨參的藥效成分[27-29]，其成分含量的變化會(huì)直接影響其藥效。在儲(chǔ)藏過程中，各黨參片水分、灰分、浸出物會(huì)出現(xiàn)一定波動(dòng)，其中，水分與其儲(chǔ)藏濕度有關(guān)，灰分、浸出物與其蟲蛀率有關(guān)。對于黨參的活性成分如總皂苷、總黃酮、總糖含量，水分對其影響不大，儲(chǔ)藏條件則有較大影響。其中，儲(chǔ)藏溫度、濕度對總皂苷、總糖有影響，氧含量對總皂苷、總黃酮有影響。儲(chǔ)藏過程中，各黨參片的總皂苷、總黃酮、總糖的變化速率取決于各個(gè)成分的合成與降解速度，故導(dǎo)致其出現(xiàn)下降或上升的變化，這一變化與現(xiàn)有報(bào)道[30-32]相似。但總體而言，為保障其質(zhì)量穩(wěn)定性，應(yīng)將其儲(chǔ)藏于低溫低濕低氧環(huán)境中。

綜上，黨參儲(chǔ)藏過程中易受溫度、濕度、氧含量及飲片含水量的影響而導(dǎo)致變質(zhì)蟲蛀，為預(yù)防蟲蛀發(fā)生，在常氧條件下應(yīng)控制其儲(chǔ)藏溫度不高于20 ℃，黨參片水分低于10%；在低氧條件下，儲(chǔ)藏溫度、濕度、黨參片含水量相對不受限。且儲(chǔ)藏時(shí)儲(chǔ)藏溫度、濕度、氧含量、黨參片含水量越低其儲(chǔ)藏效果越好。但黨參片中各化學(xué)成分間的轉(zhuǎn)化存在著復(fù)雜的過程，其機(jī)制需要進(jìn)一步探討。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

[1] 中國藥典 [S]. 一部. 2020: 293.

[2] 馬競, 何文龍, 高重陽, 等. 黨參多糖介導(dǎo)Nrf2通路對缺氧缺血性腦損傷的抗氧化和神經(jīng)保護(hù)作用 [J]. 中國臨床解剖學(xué)雜志, 2019, 37(4): 403-408.

[3] Zhang Y D, Wang H L, Zhang L,.polysaccharide CLPS alleviates high fat/high sucrose diet-induced insulin resistance via anti-oxidative stress [J]., 2020, 145: 944-949.

[4] Deng X L, Fu Y J, Luo S,. Polysaccharide fromhas beneficial effects on the maintenance of T-cell balance in mice [J]., 2019, 112: 108682.

[5] 方志娥, 李艷艷, 楊雅淋, 等. 黨參總皂苷對人肝癌SMMC-7721細(xì)胞的抑制作用及其機(jī)制 [J]. 中國藥房, 2015, 26(10): 1356-1359.

[6] 尚堯, 李靖文. 黨參提取物抗運(yùn)動(dòng)性疲勞機(jī)制研究 [J]. 西南大學(xué)學(xué)報(bào): 自然科學(xué)版, 2018, 40(6): 9-14.

[7] 靳子明, 宋治榮, 竇霞. 黨參超微粉對胃潰瘍模型大鼠胃黏膜保護(hù)作用的研究 [J]. 中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué), 2017, 34(5): 659-661.

[8] 孟瑞麗, 肖淑賢, 王旭峰, 等. 不同儲(chǔ)藏方式對黨參化學(xué)成分影響及與氣溫因子相關(guān)性研究 [J]. 現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技, 2020(13): 216-218.

[9] 高石曼, 劉久石, 王敏, 等. 濕度對黨參藥材化學(xué)質(zhì)量穩(wěn)定性的影響 [J]. 中國現(xiàn)代中藥, 2020, 22(4): 596-602.

[10] 楊梓懿, 石繼連, 蔣孟良. 中藥飲片小包裝氣調(diào)養(yǎng)護(hù)對浸出物、揮發(fā)油含量的影響研究 [J]. 湖南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào), 2002(4): 18-20.

[11] 王榮祥, 許亮. 中藥標(biāo)本蟲蛀防治方法的研究 [J]. 遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào), 2008(4): 174-175.

[12] 梁曉原, 李其光, 李聰, 等. 不同養(yǎng)護(hù)技術(shù)養(yǎng)護(hù)黨參的對比研究 [J]. 云南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào), 1995(2):5-10.

[13] 盧萍紅. 中藥材蟲蛀霉變的原因分析與對策 [J]. 中國藥業(yè), 2010, 19(24): 68.

[14] 何媛麗. 氣調(diào)劑和臭氧處理對貯藏后黨參品質(zhì)的影響研究 [D]. 蘭州: 甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué), 2016.

[15] 李輝, 張?jiān)屏? 淺談防治中藥蟲蛀的方法 [J]. 黑龍江中醫(yī)藥, 2000(3): 54.

[16] 張萬福. 淺談中藥霉變、蟲蛀的防治 [J]. 中國醫(yī)院藥學(xué)雜志, 1986(11):39-40.

[17] 魯玉杰, 王小莉, 毛婷婷. 溫度和相對濕度對印度谷螟生長發(fā)育的影響 [J]. 河南工業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào): 自然科學(xué)版, 2008(5): 42-46.

[18] 丁雙. 中藥飲片質(zhì)量的影響因素及質(zhì)量控制研究 [J]. 中國中醫(yī)藥現(xiàn)代遠(yuǎn)程教育, 2018, 16(10): 46-47.

[19] 石建業(yè), 康彩琴, 董建文, 等. 中藥材養(yǎng)護(hù)貯藏氮?dú)鉂舛缺O(jiān)測和報(bào)警技術(shù)研究 [J]. 農(nóng)業(yè)科技與信息, 2020(4): 47-51.

[20] 中國藥典 [S]. 四部. 2020: 114.

[21] 吳曉毅, 巢志茂, 田怡, 等. 瓜蔞水分含量與印度谷螟為害的相關(guān)性研究 [J]. 中國中醫(yī)藥信息雜志, 2011, 18(10): 58-59.

[22] 靳貴林, 楊春艷, 達(dá)瓦, 等. 紋黨參多糖、水分含量與蟲蛀現(xiàn)象發(fā)生的研究 [J]. 西藏科技, 2020(8): 54-57.

[23] 王智磊, 伍清芳, 劉素娟, 等. GC-MS結(jié)合AMDIS及Kováts保留指數(shù)研究不同蟲蛀程度陳皮揮發(fā)性成分變化規(guī)律 [J]. 中華中醫(yī)藥雜志, 2018, 33(8): 3327-3331.

[24] 嚴(yán)鑄云, 何冬梅, 王海. 展望微生態(tài)理論和技術(shù)在中藥研究中的應(yīng)用 [J]. 中藥與臨床, 2017, 8(5): 18-22.

[25] 陳信云. 藥材霉菌萌發(fā)原因的分析與防治 [J]. 海峽藥學(xué), 2010, 22(7): 57-59.

[26] Campbell J F, Arthur F H, Mullen M A. Insect management in food processing facilities [J]., 2004, 48: 239-295.

[27] Li J K, Wang T, Zhu Z C,. Structure features and anti-gastric ulcer effects of inulin-type fructan CP-A from the roots of(Franch.) Nannf. [J]., 2017, 22(12): 2258.

[28] 方志娥, 李艷艷, 楊雅淋, 等. 黨參總皂苷對人肝癌SMMC-7721細(xì)胞的抑制作用及其機(jī)制 [J]. 中國藥房, 2015, 26(10): 1356-1359.

[29] 劉薇. 潞黨參中總黃酮的提取及含量測定 [J]. 質(zhì)量安全與檢驗(yàn)檢測, 2020, 30(5): 62-64.

[30] 史彥斌, 王玉萍, 李琰, 等. 不同養(yǎng)護(hù)方法對黨參養(yǎng)護(hù)效果的研究 [J]. 中藥材, 2014, 37(5): 781-784.

[31] 劉勇. 注射用血栓通質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)化研究 [D]. 武漢: 湖北中醫(yī)藥大學(xué), 2020.

[32] 高石曼. 黨參藥材的質(zhì)量評(píng)價(jià)及其免疫調(diào)節(jié)和造血改善的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究 [D]. 北京: 北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院, 2020.

Influence of different storage conditions on quality ofpieces

HAN Xi-tao1, TANG Ya-nan1, LIU Zi-qin1, BAO Li-yuan1, HAN Shu1, LIU Kai-yang1, WANG Hong-yue1, GUO Xiao-guang2, LI Wei-fei3, DU Hong1, HU Fang-di4

1. School of Chinese Materia Medica, Beijing University of Chinese Medicine, Beijing 102488, China 2. Tianjin CNRO Science-Technology Co., Ltd., Tianjin 300000, China 3. China Beijing Tongrentang (Group) Co., Ltd., Beijing 100062, China 4. School of Pharmacy, Lanzhou University, Lanzhou 730000, China

To investigate the effects of different storage conditions on the quality ofpieces (CRP).Three different moisture content kinds of CRP with low (≤ 10%), medium (10%—13%), and high (13%—16%) were prepared, store them for 4 months under room temperature, cool, refrigerated, accelerated (high temperature and high humidity), and low oxygen curing conditions, and examine their appearance properties, color, moisture, ash, extract, total flavonoids, total saponins and total sugar content of CRP with different moisture were investigated, and the effects of different storage conditions on the quality of CRP with different moisture content were comprehensively evaluated.During the storage process of various moisture CRP, medium-moisture and high-moisture CRP (> 10%) had different degrees of moth-eaten during storage at room temperature, and the ash content of high-moisture CRP did not meet the pharmacopoeia requirements when stored at room temperature for 3 and 4 months. The extract of the stored high-moisture CRP decreased significantly when stored at room temperature for 4 months. At the same time, the contents of total saponins, total flavonoids, and total sugars of each moisture CRP stored at room temperature are mostly lower than those stored in cool, refrigerated, and low-oxygen storage.During the storage of CRP, the degree of moth-eaten was related to the moisture, storage temperature, humidity, and oxygen content of CRP. Total saponins were related to storage temperature, humidity, and oxygen content. Total flavonoids were related to oxygen content, and total sugars were related to storage temperature. Humidity was related, so the storage temperature should not be higher than 20 ℃ under normal oxygen conditions, and the moisture content of CRP should be less than 10%; Under low oxygen conditions, the storage temperature, humidity, and moisture content of CRP should be relatively unrestricted. And the lower the storage temperature, humidity, oxygen content, and water content of CRP during storage, the better the storage effect.

pieces; storage conditions; quality evaluation; color; total flavonoids; total saponins; total sugar

R283.6

A

0253 - 2670(2021)03 - 0858 - 10

10.7501/j.issn.0253-2670.2021.03.027

2021-08-22

國家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目（N0.2018YFC1706303)

韓喜桃，女，碩士研究生，研究方向?yàn)橹兴庯嬈|(zhì)量研究。E-mail: shxt0813@163.com

杜 紅，女，博士，教授，博士生導(dǎo)師，研究方向?yàn)橹兴幣谥圃硌芯?。Tel: (010)53912125 E-mail: duhong@vip.163.com

[責(zé)任編輯 鄭禮勝]