八桂止痛膏治療帶狀皰疹后遺神經(jīng)痛的網(wǎng)絡(luò)藥理學研究進展

成 潔，廖承成

(云南中醫(yī)藥大學第一臨床醫(yī)學院，云南 昆明 650500)

帶狀皰疹后遺神經(jīng)痛(postherpetic neuralgia，PHN)是帶狀皰疹最常見的并發(fā)癥，其發(fā)病率占帶狀皰疹患者的5%～30%[1]。目前臨床上常用的治療方法包括使用鈣離子通道調(diào)節(jié)劑、三環(huán)類抗抑郁藥、阿片類鎮(zhèn)痛藥、利多卡因等[2]。一線藥物如抗抑郁藥和抗驚厥藥臨床療效肯定，但由于其存在不良反應(yīng)，并不適用于所有的PHN患者，尤其是老年患者[3]。中醫(yī)治療PHN副作用小，療效及預(yù)后良好[4-5]。八桂止痛膏是劉復興教授治療各種皮膚疼痛癥如帶狀皰疹、PHN等的自擬方[6]，臨床應(yīng)用療效較好[7]。本文通過采用網(wǎng)絡(luò)藥理學方法[8]，篩選八桂止痛膏中治療PHN帶狀皰疹后遺神經(jīng)痛的有效成分，預(yù)測其作用靶點和作用機制，為臨床用藥提供依據(jù)。

1 八桂止痛膏的中醫(yī)認識

八桂止痛膏由桂枝、透骨草、三棱、莪術(shù)、八角楓、昆明山海棠、大黃組成。方中桂枝為君藥，性溫，味辛、甘，《長沙藥解》言桂枝“入肝家而行血分，走經(jīng)絡(luò)而達營郁……舒筋脈之急攣，利關(guān)節(jié)之壅阻，入肝膽而散遏抑，極止痛楚，通經(jīng)絡(luò)而開痹澀……”，說明桂枝能溫通經(jīng)脈、通利關(guān)節(jié)、止痛。大黃與透骨草同為臣藥，大黃味苦，氣大寒，《本草新編》云：“散堅聚，止疼痛，敗癰疽熱毒，消腫脹，俱各如神?！蓖腹遣菪詼?，味辛、甘，《滇南本草》言：“子，治痰火筋骨疼痛，泡酒用之良，其根、梗，洗風寒濕痹，筋骨疼痛，暖筋透骨，熬水洗之”，故透骨草能加強桂枝作用。三棱、莪術(shù)同為佐藥，三棱性平，味苦，莪術(shù)性溫，味微苦、辛。《醫(yī)學衷中參西錄》中對三棱、莪術(shù)解：“其行氣之力，又能治心腹疼痛，脅下脹疼，一切血凝氣滯之證?！?八角楓、昆明山海棠同為使藥，昆明山海棠味辛、苦，性微溫，具祛風除濕、解毒殺蟲、舒筋接骨等功效；八角楓散瘀止痛、舒筋活絡(luò)、祛風除濕。全方共奏通絡(luò)止痛、行氣活血之功。

2 八桂止痛膏活性成分及靶點

2.1 八桂止痛膏的活性成分及PHN相關(guān)靶點收集 將八桂止痛膏中的桂枝、透骨草、三棱、莪術(shù)、大黃輸入到TCMSP數(shù)據(jù)庫，以分子量小于<500，油水分配系數(shù)為1～4，藥物相似物≥0.18為標準[9]，篩選出八桂止痛膏中經(jīng)皮吸收的主要活性成分及靶點；在BATMAN-TCM數(shù)據(jù)庫補充檢索八角楓、昆明山海棠的活性成分和靶點，將檢索條件設(shè)置為“score cutoff≥20，P-value cutoff<0.05”。篩選結(jié)束后整合上述信息，并統(tǒng)一在UniProt數(shù)據(jù)庫將靶點名稱轉(zhuǎn)換為對應(yīng)的基因名稱。結(jié)果共收集八桂止痛膏藥物活性成分41種，其中桂枝5種、透骨草5種、三棱3種、莪術(shù)5種、大黃17種、八角楓1種、昆明山海棠5種，去重后得到活性成分共34種。篩選八桂止痛膏中化學成分的靶點，利用Excel合并去重后得到241個靶點。以“postherpetic neuralgia”為關(guān)鍵詞，分別在Drugbank、GeneCards、OMIM和TTD數(shù)據(jù)庫中檢索與PHN相關(guān)的靶點，利用Excel合并去重后，得到PHN相關(guān)靶點147個。

2.2 八桂止痛膏-PHN相關(guān)網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建與分析 將中藥、活性成分及靶點利用Excel制作文件，將數(shù)據(jù)輸入Cytoscape 3.9.1 軟件中，構(gòu)建“中藥-活性成分-靶點”網(wǎng)絡(luò)圖。該網(wǎng)絡(luò)圖共包含282個節(jié)點，525條相互作用關(guān)系，Degree排序居前10位的化合物(具體度值)為槲皮素(138)、山奈酚(54)、八角楓堿(43)、刺芒柄花素(32)、大黃素(30)、蘆薈大黃素(22)、香豆素343(19)、天竺葵素(14)、大黃素甲醚(12)、花旗松素(11)。將八桂止痛膏的241個中藥活性成分預(yù)測靶點與147個PHN相關(guān)靶點基因?qū)隫eeny 2.1.0在線工具，得到交集靶點26個，同時繪制韋恩圖。將得到的交集靶點上傳STRING數(shù)據(jù)庫，最后得到八桂止痛膏活性成分靶點和PHN靶點的蛋白質(zhì)互作(protein-protein interaction，PPI)網(wǎng)絡(luò)圖。導出該網(wǎng)絡(luò)的tsv文件，并將其導入Cytoscape 3.9.1 軟件中進行可視化分析，結(jié)果顯示圖中共有26個節(jié)點，節(jié)點形狀越大，顏色越鮮明，表示度值越大，度值越大則表明其在網(wǎng)絡(luò)中越關(guān)鍵，Degree排名前5位的靶點分別為TNF、PTGS2、NR3C1、ESR1、EGFR。

2.3 GO及KEGG富集分析結(jié)果 應(yīng)用Metascape數(shù)據(jù)庫對八桂止痛膏與PHN交集的26個靶點進行GO及KEGG富集分析，通過微生信在線作圖平臺對結(jié)果進行可視化網(wǎng)絡(luò)處理。26個交集靶點進行GO富集分析獲得條目433個，其中細胞組分28個，生物過程368個，分子功能37個。GO富集分析結(jié)果提示，Biological process分析主要包括調(diào)節(jié)管徑、細胞對有機化合物的反應(yīng)、對異種生物刺激的反應(yīng)、調(diào)節(jié)離子運輸、調(diào)節(jié)激素水平、G蛋白偶聯(lián)5-羥色胺受體信號通路、對雌二醇的反應(yīng)等；Cellular component分析主要包括膜筏、突觸膜、樹突、神經(jīng)元細胞體等；Molecular function分析主要包括G蛋白偶聯(lián)受體活性、腎上腺素能受體活性、血紅素結(jié)合、細胞因子活性、類固醇結(jié)合、鈉離子跨膜轉(zhuǎn)運蛋白活性等。KEGG富集分析獲得通路48條，主要涉及鈣信號通路、神經(jīng)活性配體-受體相互作用、唾液分泌、心肌細胞的腎上腺素信號傳導、cGMP-PKG信號通路、血管平滑肌收縮、化學致癌-受體激活、類固醇激素生物合成、T細胞受體信號通路等。

3 網(wǎng)絡(luò)藥理學結(jié)果分析

PHN發(fā)病機制尚未完全明確，可能與炎癥、神經(jīng)炎癥、外周及中樞機制、細胞免疫、大腦情緒調(diào)控及相關(guān)蛋白共同參與有關(guān)[10-11]。從“中藥-活性成分-靶點”網(wǎng)絡(luò)圖中可以知道，槲皮素、山奈酚、八角楓堿等可能是八桂止痛膏治療PHN的有效成分。槲皮素具有抗炎、抗腫瘤、抗氧化、抗菌、抗病毒等作用[12-13]，而調(diào)節(jié)炎癥是槲皮素最核心、最顯著的作用[14]。槲皮素是選擇性COX-2抑制劑，能促進小鼠脾淋巴細胞的增殖，又能抑制其T、B細胞的增殖，抑制T細胞分泌TNF-α、IL-6、TNF-γ，有良好的抗炎活性，且能調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)[15]。山奈酚是一種黃酮類化合物，其作用主要有抗炎、抗氧化、抗缺血損傷、抗抑郁、抗癡呆等[16]。山奈酚及其衍生物可顯著降低TNF-α、IL-6等炎癥相關(guān)因子的表達。八角楓堿具有鎮(zhèn)痛、抗炎、肌肉松弛等作用[17-18]。

PPI網(wǎng)絡(luò)圖提示TNF-α、前列素內(nèi)環(huán)氧化物合成酶 2(PTGS2)、糖皮質(zhì)激素受體基因(NR3C1)等可能是關(guān)鍵靶點基因。TNF-α具有參與免疫應(yīng)答、介導炎癥反應(yīng)等多重作用，當血清中TNF-α水平異常升高時，細胞免疫受抑制，導致皰疹病毒活化、擴散，引發(fā)疼痛[19]。細胞受刺激時，PTGS2通過影響花生四烯酸代謝產(chǎn)生前列腺素，引發(fā)疼痛和炎癥反應(yīng)。NR3C1參與炎癥反應(yīng)、細胞增殖和組織分化。有研究表明，NR3C1與抑郁癥、慢性疼痛等有關(guān)[20]。

GO富集分析發(fā)現(xiàn)，八桂止痛膏主要參與細胞對有機化合物的反應(yīng)、離子運輸、激素水平調(diào)節(jié)、對雌二醇的反應(yīng)等多個生物過程。KEGG富集分析結(jié)果表明，八桂止痛膏主要影響鈣信號通路、神經(jīng)活性配體-受體相互作用、心肌細胞的腎上腺素信號傳導、血管平滑肌收縮等。有研究表明，對于軀體感覺神經(jīng)系統(tǒng)病變或疾病引起的神經(jīng)性疼痛如三叉神經(jīng)痛、PHN等，主要治療方法包括服用作用于鈣通道、鈉通道和下行調(diào)節(jié)抑制途徑的藥物，表明鈣通道在PHN中起關(guān)鍵作用[21]。Qiu等[22]通過生物學信息分析發(fā)現(xiàn)，PHN主要參與神經(jīng)活性受體-配體相互作用、JAK-STAT信號和鈣通道活性等通路。此外，T細胞受體信號通路也值得關(guān)注。機體感染水痘-帶狀皰疹病毒后，輔助性T細胞活化和增殖作用明顯，炎性因子分泌量增加，會抑制機體抗病毒應(yīng)答機制，減弱細胞免疫反應(yīng)，降低CD8+、CD3+、CD4+等T細胞亞群水平[23]。Sutherland等[24]通過對PHN患者手術(shù)切除的神經(jīng)節(jié)中獲得的福爾馬林固定石蠟包埋切片進行分析，最后得出結(jié)論：帶狀皰疹后數(shù)年和PHN期間，T細胞在人神經(jīng)節(jié)中持續(xù)存在。PHN臨床治療關(guān)鍵是維持正常T細胞亞群水平[25]，這為臨床診治提供了參考方向。從富集結(jié)果來看，有一些通路可能是會被忽略的，如炎癥性腸病涉及通路等，但有研究發(fā)現(xiàn)，這些疾病之間存在一定的內(nèi)在聯(lián)系[26-27]，可為臨床研究PHN與哪些疾病之間存在聯(lián)系提供參考。對KEGG富集的48條通路研究時發(fā)現(xiàn)，IL-17信號通路、絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)信號通路參與其中。IL-17是T細胞誘導的炎癥反應(yīng)的早期啟動因子，可以通過促進釋放前炎性細胞因子來放大炎癥反應(yīng)，IL-17與受體結(jié)合后，可通過MAPK和核轉(zhuǎn)錄因子κB(NF-κB)途徑發(fā)揮其生物作用，這也為探究MAPK、NF-κB信號通路與PHN之間的聯(lián)系提供了思路。

4 八桂止痛膏的臨床應(yīng)用

八桂止痛膏有抗炎、抗病毒、止痛等功效，可主治各種皮膚痛癥及病毒性皮膚病、皮膚包塊等，如帶狀皰疹及PHN、皮膚軟組織挫傷、外傷腫脹及類風濕性關(guān)節(jié)炎等。但在使用時應(yīng)注重其加減變化，寒痛甚者可加草烏、川烏、威靈仙等，熱痛甚者可加冰片、生梔子、生大黃等，皮損肥厚者可加烏梅、蜈蚣等[6]。

5 小結(jié)與展望

八桂止痛膏中含有多種有效活性成分，可通過多靶點、多通路治療PHN，且大量文獻分析發(fā)現(xiàn)大多數(shù)靶點和PHN治療相關(guān)，為本課題前期實驗結(jié)果[28]和后續(xù)臨床開發(fā)提供了參考。在臨床應(yīng)用中，可結(jié)合八桂止痛膏的中藥配伍特點及網(wǎng)絡(luò)藥理學治療靶點，探索其更廣泛的適應(yīng)證，從而減輕疼痛，提高患者生活質(zhì)量。